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Tema: DEFECTOS VISULES Y CORRECCIÓN

Docente: Lic. Avendaño

Escuela Profesional
MEDICINA HUMANA
MATERIALES Y MÉTODOS
Veintiún pacientes de 10 familias no relacionadas
(Figura6)
Recibieron diagnósticos clínicos de MCD por parte de
tres médicos que utilizaron la biomicroscopia con
lámpara de hendidura en el Primer Hospital Afiliado de
la Universidad de Medicina de Harbin.

En este estudio también se analizó la

tomografía de coherencia óptica corneal.

• seleccionaron de 50 individuos sin discapacidad visual

El diagnóstico en cinco familias de pacientes fue MCD tipo I

CHST6 análisis
El ADN genómico se aisló de leucocitos de sangre periférica mediante técnicas estándar.

Tres pares de cebadores. Se utilizaron para amplificar la región del marco de lectura abierto de
CHST6.

Cada reacción de PCR se realizó como una mezcla de:

Reacción que consiste en ADN genómico y de la polimerasa de ADN Premezcla.

Las reacciones de amplificación se realizaron bajo las siguientes condiciones

• 5 min de desnaturalización a 98 ° C seguido de 35 ciclos de desnaturalización a 98 ° C durante

10 segundos.
• Recocido durante 15 segundos a 55 ° C (para la regiónde codificación central)
• Extensión a 72 ° C durante 45 segundos
• Y una etapa de extensión adicional a 72 ° C durante 7 min.
Microscopía histológica y electrónica de
transmisión de tejidos corneales y queratocitos.

El análisis histológico se realizó en secciones de 4 μm de grosor de botones de córnea

incrustados en parafina de 5 pacientes con MCD no relacionados que se sometieron a una
queratoplastia.

Se utilizaron:
• Hematoxilina y eosina
• Acido periódico de (PAS) y
• Azul de Alcian para teñir los tejidos corneales para el análisis de microscopía óptica.

Además, se prepararon queratocitos y tejidos corneales para un corte fino.

Brevemente, la muestra se fijó con glutaraldehído durante 2 h, se enjuagó con 3 cambios de

solución salina tamponada con fosfato durante 2 h.

Después de lavarse, la muestra se deshidrató en una serie graduada de etanol y se incrustó

en resina epoxi (agar de baja viscosidad),
Cultivo de queratocitos primarios.

Los queratocitos primarios se adquirieron de donantes de tipo salvaje

del Banco de Ojos de la Provincia de Heilongjiang y de pacientes con
MCD

Después de la queratoplastia penetrante o lamelar. Las córneas se

lavaron 3 veces, 15 minutos por vez.

El epitelio corneal, el endotelio,la esclerótica y la conjuntiva se

eliminaron por completo.

Un cuarto de los tejidos de la córnea se cultivaron en placas de cultivo

de suero que contenía penicilina y sulfato de estreptomicina

Los queratocitos primarios se subcultivaron con influencia en medios

que contenían tripsina Y EDTA.