UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIA QUÍMICAS

Tema :VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN
DE FÓSFORO POR ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA-VISIBLE
ANALISIS INSTRUMENTAL I

 Ingrid Cedeño Ríos

 Daniela Del Pezo

TEMAS A DISCUTIR
 BIBLIOGRAFIA
 OBJETIVOS
 INTRODUCCION
 MATERIALES Y METODOS
 RESULTADOS Y DISCUSION
 CONCLUSIONES
 RECOMENDACIONES
OBJETIVOS

 Validar un método para la determinación

espectrofotométrica de fósforo y demostrar la
aplicabilidad del método en bebidas de cola.
 Determinación de fósforo mediante
espectrofotometría UV-visible
BIBLIOGRAFIA
AUTOR :MARÍA GUADALUPE CÁÑEZ CARRASCO

Puesto, categoría y Profesor de tiempo

nivel: completo, Titular B

Antigüedad en la 30 años, 06 meses

Unison:

Reconocimientos: Perfil Deseable PRODEP

Correo electrónico: guadalupe.canez@unison.mx

Ubicación: Edificio 5A planta baja

FORMACIÓN ACADÉMICA:
Licenciatura “Químico Biólogo Especialidad Tecnología de Alimentos”.
 Universidad de Sonora
1987
Maestría  “Maestro en Ciencias con Especialidad en Nutrición y Alimentos”.
Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo A.C.
1997

INVESTIGACIÓN:
Cuerpo académico Biomedicina, Química y Nutrición

Líneas de investigación Ciencias Químicas Básicas

Proyectos ¾     Elaboración de Helados Artesanales Suplementados con Aminoácidos Ramificados

(BCAA), Electrolitos Y Aislado de Proteína de Suero.
¾     Elaboración y Caracterización Química de Tres Dulces a Base de Pulpa de
Tamarindo (Tamarindus indica), Carne de Res, Nopal (Opuntia focus indica), Flor y
Residuos de Jamaica (Ibiscus sabdariffa) como Fuente de Proteína y Fibra”.
Proyecto Externo
¾     Validación y Estimación de la Incertidumbre de un Método Analítico a Microescala
para Titulación Ácido-Base. Proyecto Interno.
¾     Desarrollo y Caracterización Química de una Botana Horneada a Base de Carne de
Res y Camote (Ipomoea Batatas). Proyecto Externo.
INTRODUCCIÓN

La validación analítica de Entre los parámetros

1.

2.
los métodos de análisis es analíticos más utilizados se UV-visible, se empleó el método
uno de los elementos encuentran: exactitud, del azul de molibdeno con ácido
básicos en sistemas de sesgo, precisión, linealidad, ascórbico, cuyo fundamento
calidad. La validación trata repetibilidad, límite de
consiste en adicionar molibdato de
de disminuir o controlar los detección y de
factores que llevan a la cuantificación, sensibilidad, amonio en presencia de fosfatos y
imprecisión o inexactitud de entre otros. De tal manera este compuesto se reduce a un
un dato obtenido, a través que el objetivo del presente complejo azul soluble
de la realización de un trabajo fue validar un (fosfomolibdato de amonio)
trabajo analítico dentro de método para la
unos parámetros definidos determinación
generando una mayor espectrofotométrica de
fiabilidad y aceptación de fósforo y demostrar la
los datos, al estar en aplicabilidad del método en
proporción con la calidad bebidas de cola. Para la
del proceso de obtención de determinación de fósforo
los mismos (Castineira, mediante
2009). espectrofotometría ,
Materiales y métodos
El tiempo de
Se pesaron 0.1919 g Esta disolución es A partir de esta incubación fue de 45
de KH2 PO4 , equivalente disolución se minutos a 50ºC. Las
secado previamente estequiométricament prepararon las concentraciones de
a 105˚C/1 h, disuelto e a la concentración disoluciones de trabajo trabajo para cada
teórica de 100 mgL-1 de 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, parámetro a evaluar
en agua desionizada, se corrieron por
de P2 O5 de la 1.2, 1.6, 2.0, 4.0, 8.0 y
aforando a 1 L disolución madre. quintuplicado cada
12.0 mgL-1 de P2 O5 .
una.

La absorbancia de la Se midieron 5 mL de Para la preparación

absorbancia de la esta disolución, se le de la muestra de coca
Se realizaron cinco
muestra se agregaron 20 mL de cola, se midió 1 mL
corridas con cinco
determinaron en un disolución reductora de refresco
repeticiones cada (molibdato de amonio
espectrofotómetro desgasificado y se
una, obteniéndose 2.52 x 10-3 M) y se
marca AQUAMATE aforó a 50 mL con
25 lecturas. aforó a 50 mL con
ThermoSpectronic agua desionizada
agua desionizada.
Tipo Helios a 660 nm
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Parámetros Analíticos de Calidad para la Validación del Método
EXACTITUD

Como se puede apreciar, los valores para el porcentaje de

recuperación se encuentran dentro del rango 100 ± 15%
considerado como aceptable (IUPAC, 2014; CENAM-ema, 2008a),
ya que los valores fluctuaron entre 93.16 y 107.88, con un
promedio global de 99.12% de recuperación.

Si se considera el promedio global de 99.12 % de

recuperación como valor aceptable de la exactitud, se
tendría otro rango más estrecho para avalar la exactitud
del método de acuerdo a nuevos criterios establecidos
recientemente por la ema (2008a), en donde se establece
un rango de aceptabilidad de 100 ± 2% de recuperación
 PRECISIÓN

La precisión es una medida de la En este estudio, la precisión se evaluó

dispersión de los datos en torno a un
valor o el grado de concordancia
entre mediciones replicadas de la
misma cantidad, y puede expresarse
como rango, desviación estándar,
porcentaje del coeficiente de
variación o la varianza.
mediante el %CV el cual se calculó a partir
de la Ec., tal y como se puede apreciar en
la Tabla 1, los resultados para este
parámetro no rebasan el valor de 1.54, por
lo cual, la precisión para este método
analítico se considera aceptable, ya que
para métodos instrumentales debe ser
menor del 2% (Christian, 2009; Harvey,
2002).
La precisión se evaluó mediante el
cálculo del porcen- taje del
coeficiente de variación (%CV) y el
criterio de acepta- ción para métodos
instrumentales es ≤ 2% de CV
(Christian, 2009; Harvey, 2002).
 LINEALIDAD
En este estudio, la linealidad se evaluó mediante el
coeficiente de correlación de Pearson (R) a través
de las ecs. (5-6) y el coeficiente de determinación
(R2 ) a través de las ecs. (4-6)

R indica el grado de asociación entre dos variables (en

este caso absorbancia y concentración) y R2 , indica qué
tan bueno es el modelo de regresión utilizado.

Los criterios de aceptación para ambos parámetros son

que R y R2 deben ser mayores que 0.995
SENSIBILIDAD

 En la Tabla 3 se correlacionan los

datos mencionados y se muestra
el valor de la m (sensibilidad) =
0.170 ± 0.038 mgL-1 P2 O5 . El
valor de sensibilidad obtenido a
partir de la Ec. (7) debe permitir
una adecuada discriminación de
los valores de concentración en
base a la lectura.
 LIMITE DE
LIMITE DE DETECCION
CUANTIFICACION

El resultado obtenido para el LD de El resultado obtenido para LC a

acuerdo al procedimiento partir de la Ec. (9), siguiendo el
recomendado por la NMX-CH-152- procedimiento establecido fue de
IMNC-2005, fue de 0.18 mgL-1 de P2 0.58 mgL-1 de P2 O5 . Este
O5 utilizando un método resultado es similar al reportado
espectrofotométrico UV-VIS. Este por López (2009) quién obtuvo un
valor obtenido para el LD, fue LC de 0.7678 mgL-1 para métodos
estimado a partir de la Ec. espectrofotométricos para la
cuantificación de fósforo en suelos
utilizados para cultivo del café.
Por su parte García et al.
 Aplicabilidad del Método

Se obtuvo la linealidad de
Para confirmar la La absorbancia
la curva de calibración en
validación del método promedio (0.1598) de
un rango de 1.2 a 8.0 mgL-
analítico utilizado, se las lecturas de las
1 de P2O5. Con los datos
procedió a evaluar la
obtenidos y aplicando muestras analizadas se
aplicabilidad del método
mínimos cuadrados se llegó interpoló en la curva de
para cuantificar la
a la ecuación Y = 0.1314X – calibración para obtener
concentración de fósforo
0.0917, con un coeficiente la concentración de
en una bebida de cola
de correlación (R) de P2O5 (0.5183 mgL-1)
(coca cola®).
0.9992.
 Aplicabilidad del Método
Finalmente, la comunidad
Citan que el contenido analítica internacional ha La validación de un
de fósforo en coca establecido las principales método analítico se
especificaciones y requisitos refiere a su evaluación
cola® fue de 215 mgL- operativos de un laboratorio
1 con un % CV = 1.78. cuantitativa y tiene
de pruebas por medio de la
Por otro lado, Murphy Norma Internacional ISO/IEC
como objetivo
(1983) reportó un 17025:2005 “Requisitos proporcionar
contenido de H3PO4 generales para la información fiable,
de 5.06 ± 0.09 competencia de los exacta y de fácil
laboratorios de ensayo y interpretación sobre el
x10-3 M en refrescos calibración”, esta norma objeto de análisis
de cola, lo que especifica claramente la (Gomara et al., 2004;
equivale a 156.86 necesidad de la validación de Sabido et al., 2010;
mgL-1 los métodos analíticos como Severiche-Sierra y
de P, utilizando el un requisito indispensable
antes de realizar una
González-García,
mismo método 2012).
medición analítica
 UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIA QUÍMICAS
Tema :
DETERMINACIÓN DE CROMO HEXAVALENTE EN DESCARGAS DE
AGUAS RESIDUALES DE UNA CURTIEMBRE, UBICADA EN EL SECTOR
DE IZAMBA, AMBATO EN LA PROVINCIA DE TUNGURAHUA,
MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
INTEGRANTES
 Fátima Santana San Lucas
 María José Cabezas
 OBJETIVOS

 DETERMINAR CROMO HEXAVALENTE EN LA DESCARGA LÍQUIDA

FINAL DEL PROCESO DE CURTICIÓN DE UNA EMPRESA, UBICADA EN
EL SECTOR IZAMBA, AMBATO EN LA PROVINCIA DE TUNGURAHUA
 APLICAR EL MÉTODO DE ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN
ATÓMICA, CON EL FIN DE OBTENER INFORMACIÓN SOBRE EL
GRADO DE CONTAMINACIÓN DE LOS EFLUENTES GENERADOS.
 INTRODUCCIÓN
La industria del cuero es una de las principales
actividades económicas de la provincia de
Tungurahua; en donde, según la cámara de calzado
de Tungurahua, se procesa el 90% del cuero y el 67%
del calzado a escala nacional, y existen registradas
alrededor de 50 curtiembres. Así mismo, esta
provincia es considerada una de las más productivas
del país, según el ministerio de agricultura tiene
aproximadamente 45000 hectáreas cultivables. Sin
embargo, las comunidades aledañas a los ríos
Ambato y pachanlica, se ven afectadas debido al
depósito de las aguas servidas, descarga de desechos
de curtiembre y de empresas que fabrican ropa,
papel, alimentos, etc.
Estudios realizados por el instituto nacional de riego
2002 demuestran que el agua de los ríos mencionados
anteriormente
Contiene bacterias coliformes fecales, cromo,
plomo, manganeso, hierro, plaguicidas, grasas y
otros productos que pueden ocasionar graves
consecuencias a la salud de la población, de los
animales y el agro. Por este motivo, y en
consideración a la industria del cuero como una de
las principales fuentes de contaminación, es
importante el control de sus descargas líquidas. El
proceso de curtiembre consiste en transformar la
piel del ganado en el cuero comercial, a través de un
proceso de fijación del agente curtidor como el
cromo sobre la piel, para que las características del
cuero: blandura, estructura compacta, resistencia a
la abrasión, resistencia a la tracción, elasticidad,
etc., sean las adecuadas
 Materiales y métodos

Preparación de la muestra
► La separación del cromo (vi) se realiza mediante lo siguientes pasos:
► Se diluye la muestra debido a la presencia de sulfatos que son una interferencia. Se diluye la
muestra debido a la presencia de sulfatos que son una interferencia..
► Se transfiere una porción de 50 ml de la muestra filtrada a un vaso de precipitación de 100 ml
y se ajusta el ph a 3.5 ± 0.3
► Mediante la adición de ácido acético al 10 % gota a gota. Se pipetea una alícuota de 10 ml de
la muestra ajustada a ph 3.5 en un tubo de centrífuga.
► Se agregan 3 ml de la solución de nitrato de plomo. Posteriormente se tapa el tubo, se mezcla
y deja reposar durante 3 min. D
► Después de la formación de cromato de plomo, se adiciona 1 ml de ácido acético glacial para
mantener al cr (iii) en solución. Se tapa y se mezcla.
 Materiales y métodos

► Se centrifuga y lentamente se aumenta la velocidad a 2000 rpm durante

un período de 5 min. luego se mantiene la centrifugación a 2000 rpm
durante 10 min
► se retira el tubo de centrífuga y se elimina el sobrenadante mediante una
pipeta Pasteur conectada a una bomba de vacío
► Al precipitado se añaden 2 ml de ácido nítrico concentrado, 2 ml de
peróxido de hidrógeno al 30 % y 1 ml de nitrato de calcio en solución.
► Se tapa el tubo y se mezcla para disgregar el precipitado y solubilizar el
cromato de plomo. se trasvasa a un balón volumétrico de 10 ml y se
afora; para ser analizada por espectrofotometría de absorción atómica
► Se trata en igual forma el material de referencia certificado, las
fortificaciones y las soluciones estándares de dicromato de potasio, así
como también el blanco.
 MATERIALES Y MÉTODOS
Curva de calibración
Se construye la curva de calibración con las siguientes concentraciones:
0.2, 0.4, 1, 2 y 3 mg/l. los estándares de cromo se prepararán a partir
de una solución de 1000 mg/l inorganic ventures ®.
Condiciones instrumentales del equipo de Absorción Atómica
En la tabla 1, se muestran las condiciones instrumentales que se
utilizaron. Tabla 1. Condiciones instrumentales del equipo de absorción
atómica
 MATERIALES Y MÉTODOS

Procedimiento Digestión de muestras

►Transferir 50 ml de muestra homogénea a un Erlenmeyer de 125 ml y adicionar 2.5 ml de
HNO3 concentrado.
►Añadir de tres a cuatro núcleos de ebullición y cubrir con un vidrio de reloj para minimizar
la contaminación.
►Digestar cuidadosamente en la plancha de calentamiento. Evaporar hasta alcanzar de 10 a
15 ml aproximadamente. la muestra debe tener una ligera coloración amarilla y
transparente. Evitar que la muestra alcance ebullición y se seque durante la digestión.
►Una vez terminada la digestión, lavar las paredes del vaso con agua destilada y filtrar si es
necesario. transferir el filtrado a un balón aforado de 50 ml y enjuagar el vaso de
precipitación con dos porciones de 5 ml de agua destilada y agregar al balón, aforar con
agua destilada. Efectuar la lectura de las muestras y registrar la absorbancia y
concentración.
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Según el texto unificado de legislación

ambiental secundario (tulas) en su libro vi,
correspondiente a la norma de calidad
ambiental y de descargas de efluentes,
establece que el límite máximo permisible es
de 0.5 mg/l para cromo (vi). Los desechos de
curtiembre contienen una variedad de
constituyentes en cantidades significativas, de
acuerdo con la materia prima, proceso y
producto final, por lo cual las concentraciones
de los contaminantes presentes dependen en
gran medida de la eficiencia del proceso. La
determinación de cromo (vi) se realiza con el
empleo de curvas de calibración.
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Las curvas de calibración tienen un

coeficiente de correlación (r2) = 0.999;
con lo cual se puede confirmar que se
está trabajando con rango lineal y en
óptimas condiciones. Para asegurar que
las curvas de calibración y los resultados
son confiables, se realizaron lecturas de
material de referencia certificado
“chromium total” nist como una medida
de control de calidad como se muestra en
la tabla 2
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Después de haber realizado el análisis de material de
referencia certificado para cada una de las curvas de
calibración, se observa que los datos obtenidos están
dentro del rango de aceptación establecidos en la
certificación que es de 0.219 a 0.287 mg/l. con las
curvas de calibración y la lectura del material de
referencia se confirma la estabilidad de equipo y
que los resultados son confiables. los límites de
detección y de cuantificación, se determinaron a
través del cálculo de la desviación estándar de 10
lecturas de los blancos. El límite de detección
corresponde a casi 3 veces la desviación estándar
antes calculada; mientras que el límite de
cuantificación corresponde a 10 veces dicha
desviación. En la tabla 3, se encuentran los valores
del límite de detección y de cuantificación.
 CONCLUSIÓN

Se validó el método analítico del azul de molibdeno para la cuantificación de

fósforo a partir de P2O5 mediante los parámetros analíticos de exactitud,
sesgo, precisión, linealidad, sensibilidad, límite de detección y límite de
cuantificación. La aplicabilidad del método se realizó cuantificando el
contenido de fósforo en bebidas de cola (113.15 ± 0.10 mgL-1) y los
resultados son aceptables y comparables a los obtenidos por otros
investigadores que utilizan otras metodologías con el mismo fin.
 CONCLUSIÓN
Una vez culminada la determinación de cromo (vi) en la descarga de aguas
residuales del proceso de curtido, mediante espectrofotometría de absorción
atómica, se concluye: la técnica espectrofotométrica de absorción atómica es
confiable para la determinación de cromo (vi), ya que los resultados de la lectura
del material de referencia están dentro de los límites de aceptación establecidos
en la certificación que es de 0.360 a 0.522 mg/l, con un promedio de 92.3 % de
recuperación. Las concentraciones de cromo (vi) van de 52.3 a 392.9 mg/l,
sobrepasan el límite permitido según la normativa (tulas) que es de 0.5 mg/l. La
concentración de cromo (vi) que en promedio es de 160 mg/l es mínima en
relación con la cantidad de cromo total en el baño que es de 40000 mg/l y la
concentración encontrada en la descarga de 3988 mg/l. Se tiene una eficiencia del
curtido de aproximadamente el 90% lo cual indica la optimización de los
parámetros de curtido y en general un buen manejo de recursos y procedimientos
durante todo el proceso