ELISA

Enzyme-Liked Immunosorbent Assay

Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas

Denilson Zubiate Alvarado

 Primero Recordemos lo siguiente.

• ANTÍGENO (Ag): Molécula exógena, que se encuentra en la

superficie de un agente patógeno, y que al entrar en contacto con
el organismo, induce la producción de una respuesta del Sistema
Inmune específica (formación de Acs)
• ANTICUERPO (Ac): Proteína producida como respuesta a una
sustancia “extraña” (Ag) y que tiene la capacidad de combinarse
con él (complejo Ag-Ac).
 ¿Qué es un INMUNOENSAYO?

• Es una prueba que usan complejos antígeno:anticuerpo (también

denominados inmunocomplejos) para medir la presencia de un
analito¹ específico en una muestra.
• “Inmuno” se refiere a una respuesta inmunológica que hace que el cuerpo
genere anticuerpos, y “ensayo” se refiere a una prueba.
Analito es todo lo
Entonces, un inmunoensayo es una prueba que utiliza inmunocomplejos que se mide en
cuando hay una unión Ag-Ac. una prueba de
laboratorio
Introduccion

El método ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs marcados con una
enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad
tanto inmunológica como enzimática
Tipos
ELISA no competitivo: Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que
está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo Ag-
Ac, y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato
desarrollando color.

1. Directo: Detectan Ag
2. Indirecto: Detectan Ac

ELISA competitivo: El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un

número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una
muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el
conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra.
 Primero es el ELISA
directo, seguido del
Pasos Generales indirecto

1. Tapizado del pocillo con el Ag o Ac.

2. Adición de la muestra problema con la mezcla de Ags o Acs.
3. Unión del Ag o Ac específico al Ag o Ac tapizado en el pocillo. Pasos
Generales
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de Ag o Ac no unido.
5. Adición del Ac secundario marcado con la enzima.
6. Unión del Ac secundario al Ag o Ac.
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida.
8. Adición del sustrato.
9. Unión del sustrato a la enzima.
10.Coloración.
 ELISA Directo

1. Consta de las siguientes etapas:

2. Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Acs específicos.

3. Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados
deficientemente o no fijados.
4. Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el
complejo quedará solubilizado.
5. Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado.
6. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.

7. Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado

ELISA Indirecto
 LECTURA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Una de las grandes ventajas de la técnica ELISA es la posible automatización

de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatización se puede
conseguir con un simple colorímetro o espectrofotómetro de cubeta o con
sofisticados equipos de lectura automática de microplacas.

Los resultados finales de la lectura colorimétrica se reflejan numéricamente

mediante valores de absorbancia o densidad óptica que se obtendrán a la
longitud de onda más adecuada para la coloración final alcanzada
 APLICACIONES CLÍNICAS:
• Enfermedades producidas por parásitos
• Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosomas
• Enfermedades producidas por Micoplasmas
• Enfermedades producidas por bacterias
• Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonelas
• Enfermedades producidas por virus
• Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica