Tinción Histológica

Técnica Histológica
 Fijación
 Deshidratación
 Aclaramiento
 Inclusión
 Corte
 Tinción
 Montaje
Tinción y Montaje
 Corte
 Desparafinado – Rehidratación
 Tinción
 Deshidratación
 Montaje
 Cubreobjetos: funciones
 Protección del tejido
 ↓ refracción de luz polarizada
 Colorantes
 ¿Por qué colorear una
muestra?
Los diversos elementos de
los tejidos poseen
prácticamente el mismo
índice de refracción, lo que
hace que el reconocimiento
de distintas estructuras sea
una tarea difícil.
Definición de Colorante
 Un colorante es un cuerpo coloreado que puede
comunicar su color a otro cuerpo.

 La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos

de ejercer una absorción selectiva sobre la luz.

 Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color

porque trasmite por transparencia o por difusión las
radiaciones complementarias de las que él absorbe.
Tipos de Colorantes
 Colorantes que diferencian los componentes
ácidos y básicos de la célula.

 Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos de la matriz
extracelular.

 Sales metálicas que se precipitan en los tejidos

y forman depósitos de metales en ellos.
Tipos de Coloraciones
 Directas: se producen por inmersión en el baño
colorante.

 Indirectas: en este tipo de coloración, el

colorante no puede actuar directamente, el
objeto a colorear debe ser tratado de antemano
por otra sustancia que lo prepare para admitir el
colorante, esta se llama mordiente.
 Fundamentos Químicos de la
Coloración
 Clasificación colorantes según afinidad:

 Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante

activo es una base coloreada que se combina con los
ácidos nucleicos.

 Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente

activo es un ácido coloreado que se combina con el
citoplasma.

 Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son

coloreadas.
 Colorantes básicos
ANILINA+ Cl-

 Los colorantes básicos reaccionan con los

GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes
texturales, que son los grupos fosfato de los
ácidos nucleicos (ADN y RNA),

 los grupos SULFATO de los

glucosaminoglucanos y los GRUPOS
CARBOXILO de las proteínas.

 La reacción de estos grupos varía según el pH.

 Colorantes ácidos
Na+ ANILINA-

 Los colorantes ácidos se unen primariamente a

los componentes texturales por medio de enlaces
electrostáticos de manera similar pero opuesta a
la de los colorantes básicos.

 Las anilinas ácidas reaccionan con grupos

catiónicos, como los grupos amino ionizados de
las proteínas.
 Entonces:
 Elementos que se tiñan
 Elementos que se tiñan con con colorantes ácidos (ej.
colorantes básicos (ej. Eosina) son acidófilos:
Hematoxilina) son
basófilos:  La mayor parte del
citoplasma no especializado.
 Filamentos Citoplasmáticos.
 La Heterocromatina y los
Nucleolos por los grupos  Fibras extracelulares. Todos
Fosfato ionizados. estos debidos a grupos
Amino ionizados.
 Ergatoplasma por grupos
Fosfato ionizados.
 Matriz del Cartílago por
grupos Sulfato ionizados
Metacromasia
 Fenómeno por el cual un colorante cambia de color
tras reaccionar con un componente textural.
 Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de
POLIANIONES, la molécula del colorante se
polimeriza entre si y sus propiedades de absorción
son diferentes de las propiedades de las moléculas
individuales.

Cromótropos: Glucosaminoglucanos
sulfatados, nucleoproteínas, cartílago,
gránulos de los mastocitos. El cristal
violeta también genera metacromasia
al teñir amiloide
Azul de Toluidina tiñe gránulos mastocito púrpura
Tinción (coloración) de cortes

 Diferentes
componentes
celulares y tisulares
poseen diferentes
afinidades tintoriales.
Tinción (coloración) de cortes
 Hematoxilina-Eosina
Técnica de tinción más usada.
 Hematoxilina:
 Colorante natural.
 Propiedades similares a las anilinas
básicas.
 Tiñe todas las estructuras celulares,
pero principalmente el núcleo
(Histonas).

 Eosina:
 Colorante ácido.
 Acción es la de una anilina ácida.
 Tiñe ppalmente citoplasma celular.
Cortes de piel
Tinción
Hematoxilina-Eosina
Técnica de Tinción H/E
 Tinción con hematoxilina.

 Lavado con abundante agua.

 Aplicar Borato de Potasio.

 Cambia el color generado por la hematoxilina del

morado al azul.

 Aumenta el contraste de color.

Técnica Tinción H/E II
 Diferenciación:
 Eliminación selectiva del exceso de colorante.

 Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido.

 Resalta núcleos.

 Azuleamiento:
 La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso

 Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de

litio al 1% en agua.

 Eosina
 Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y
colágeno y fibras musculares rosado pálido.
Cubre-objeto
 Una vez teñido el
tejido debe ser
protegido con un
cubre-objeto.
 Deshidratar
 Medio de montaje
Limpieza de láminas
Análisis de placas

TÉCNICAS ESPECIALES DIAGNÓSTICO

±10% biopsias 80-90% bp
Tinciones
Especiales
Tinciones para Amiloide

H/E Rojo Congo

(cortes ±30 m)
Tinciones para Amiloide

Birrefringencia
 c

Bacterias

c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen

rojas
a
d

a y b Gram positivos:
tinción azul d FITE: bacilos ácido resistentes
se tiñen rojo
Bacterias II

Ambas placas con tinción Ziehl Neelsen

Bacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante
Calcio

Von Kossa-Azul Toluidina

Von Kossa: depósitos de calcio

Se tiñen café oscuro-negro
 Colágeno I: proteína extracelular,
predominante en dermis, función estructural

bb
a e
a y b Picrosirius: Colágeno I
color amarillo-rojizo
e Van Gieson: colágeno I rojo

c d

c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

Colágeno III: o fibras de Reticulina, en
dermis perineural, perivascular

Impregnación con Nitrato de Plata:

fibras de reticulina se tiñen negras
Eosinófilos

Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

Fibras elásticas

HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa:

fibras de coloración pardo oscura
Fibrina

ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro

También PAS
Hemosiderina

a Gránulos de Hemosiderina sin teñir, de colora

a ción amarillo-café birrefringentes

b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul

b
 b

Hongos

b
b PAS para Criptococo (rojo)

a Mucicarmin para teñir Criptococo:

hongos de coloración azul-violácea

c Tinción de PAS evidenciando

Blastomicosis cc
 Hongos II c Tinción de Gomori para Criptococo

c
a

a PAS esporas fungicas

b PAS Coccidiomicosis
en ambas, hongos se tiñen
rojos

b
 Lípidos sólo en tj fijado
en formalina + cortes
por congelación

b bSudan III: adipocitos rojos

a Sudan IV: adipocitos anaranjados

c
c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos
Mastocitos

ambas, Tinción con Azul de Toluidina:

gránulos de Mastocitos azul-púrpura
(metacromasia)
Mastocitos

ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de los

Mastocitos son teñidos púrpura
 Melanina

ambas, Tinción de Fontana Masson

pigmento melánico se tiñe negro
Principales
colorantes
 Tricrómico de Masson

 Principal Uso: Colágeno.

 Tiñe:
 Colágeno Verde.
 Núcleo, músculo y nervios
 Rojo oscuro.
 Citoplasma  amarillo
 Van Gieson

 Principal Uso: Tejido

Fibroso

 Tiñe:
 Colágeno  rojo.
 Núcleo  azul negro
 Músculos, nervios 
amarillos
 (+Verhoeff) fibras
elásticas  negro
 Fontana Masson

 Principal Uso: Melanina

 Tiñe:
 Melanina  Negro.
 Plata Metenamina

 Principales Usos: Hongos y

Cuerpos de Donovan

 Tiñe:
 Paredes micóticas 
Negros.
 Cuerpos de Donovan  negro
 PAS

 Principales Usos:
Glucógeno, MPS neutros y
Hongos, Membrana basal.

 Tiñe:
 Glucógeno  Diastasa lábil.
 MPS neutros y Paredes
micóticas  Diastasa
resistentes.
 Reacción positiva para
glucógeno y polisacáridos
neutros.

+ DIASTASA

 Reacción positiva sólo para

polisacáridos neutros.
Azul alcián

 Principal Uso:
Mucopolisacáridos
ácidos

 Tiñe
 Mucopolisacáridos
ácidos (mucina)
Azul.
Azul de toluidina

 Principal Uso:
Mucopolisacáridos
ácidos

 Tiñe
 Mucopolisacáridos
ácidos  Purpura
metacrómico.
Giemsa

 Principales usos: Gránulos

mastocitarios, MPS ácidos,
eosinófilos, leishmanias,
médula ósea

 Tiñe:
 Gránulos mastocitarios,
Mucopolisacaridos ácidos 
Púrpura.

 Eosinófilos, leishmanias 
Rojo.
Eosinófilos en mucosa gástrica
Ferrocianuro de Potasio de Perls.

 Principal Uso:
Hemosiderina

 Tiñe:
 Hemosiderina  Azul
Rojo Congo
 Principal Uso:
Amiloide.

 Tiñe
 Sustancia amiloide 
Roja con luz, Verde
con luz polarizada
Von Kossa

 Principal Uso: Calcio

 Tiñe:
 Calcio  Negro.
Naftol AS-D cloroacetato esterasa

 Principal Uso:
Mastocitos y
Neutrófilos

 Tiñe:
 Gránulos de
mastocitos y
neutrófilos Rojo
Orceína ácida de
Pinkus/Giemsa

 Principal Uso: Fibras

elásticas.

 Tiñe:
 Fibraselásticas 
Pardo oscuro.
Histopatología es como la espada del augurio
hacen ver más allá de lo evidente
Thundercats
 HEMATOXILINA EOSINA
Colorante ÁCIDO (predomina
Actúa como un colorante
densidad de carga negativa),
BÁSICO que se asocia y tiñe
que se asocia y colorea
componentes ÁCIDOS de la
estructuras catiónicas
célula como estructuras
(componentes BASICOS) del
aniónicas
citoplasma y matriz extracelular
(que posean fosfatos, sulfatos
y/o carboxilos ionizados)
- Filamentos citoplasmáticos.
- Heterocromatina y nucléolos - Componentes membranosos
- ARN ribosomal, intracelulares.
- Matriz extracelular (por los - Fibras extracelulares (por sus
sulfatos de los GAGs). aminoácidos básicos
Color: azul o violeta ionizados).
Color: rosado