CATALASA

(PRUEBA)
FRANCISCO SAAWI
DANIEL LEDEZMA
LUAN ROCHA
ANDREE ROMARICO
GERARDO CALLEROS
ISAAC REYES
DENISSE HERNANDEZ
MONSERRAT TREJO
 FUNDAMENTO

• Enzima presente en la mayoría de los microorganismos

que poseen citocromos.
• Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el
peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno gaseoso.
• El peróxido de hidrógeno es un residuo
del metabolismo celular
HEMOGLOBINA CATALASA
 REACTIVOS, MATERIALES Y MÉTODOS

REACTIVOS
• Peróxido de hidrógeno (3% de solución)

MATERIALES
• Placa de agar que contiene colonias bacterianas que han
demostrado ser gram positivo 24-48 hrs. de incubación.
• Portaobjetos de microscopio.
• Puntas de pipeta o bucle bacteriana o toothpics para
recoger una colonia bacteriana.
 MÉTODO DIRECTO
• Colocar una colonia de bacterias en el portaobjetos.

• Coloque una gota de peróxido de hidrógeno al 3% en un

portaobjetos de microscopio.

• Agitar la colonia bacteriana en el peróxido de hidrógeno.

• Realizar triadas.
 MÉTODO CON TUBO CAPILAR O DE FUNG Y
PETRISHKO

• Llenar un tubo capilar de 67 mm a una altura de 20 mm

con peróxido de hidrógeno al 3% por capilaridad.

• Tocar la colonia aislada que se desea estudiar con el

capilar lleno de h2o2 al 3%. observar si el capilar se llena
de burbujas en 10 segundos aproximadamente.
 MÉTODO DE TAYLOR Y ACHANZAR PARA PRUEBAS
DE CATALASA QUE DAN DUDOSAS.

• En un portaobjeto limpio y seco colocar una colonia

aislada, luego colocar una gota de h2o2 al 0,5% y cubrir
con un cubreobjetos. Observar si hay o no formación de
burbujas aprisionadas.
 USO EN INTERPRETACIÓN

La prueba de la catalasa hace que sea fácil

distinguir entre streptococcus y staphylococcus,
staphylococcus porque es catalasa positivo
y streptococcus son catalasa negativo, a continuación
unas imágenes que nos ayudaran a su entendimiento
visual.

Streptococcus Staphylococcus
INTERPRETACIÓN:
 LIMITACIONES Y RECOMENDACIONES

• No usar cultivos viejos para la prueba.

• Evitar tomar colonias a partir de cultivos en agar sangre, ya
que los eritrocitos contienen catalasa.
• El platino es capaz de reaccionar con el peróxido de
hidrógeno, originando un burbujeo.
• Conservar el reactivo de peróxido de hidrógeno protegido
de la luz y en refrigeración para evitar que se dañe.
• Realizar un control de calidad al reactivo de peróxido de
hidrógeno cada vez que se use.
• Tomar en cuenta que si se usa el h2o2 al 30% las reacciones
son más fuertes que las que se realizan con h2o2 al 3%.
 RECOMENDACIONES:

Para evaluar el buen funcionamiento del reactivo de

peróxido de hidrógeno use cepas controles recién
cultivadas, tales como staphylococcus aureus como
control positivo y cepas de streptococcus sp como control
negativo.
OXIDASA
(PRUEBA)
FRANCISCO SAAWI
DANIEL LEDEZMA
LUAN ROCHA
ANDREE ROMARICO
GERARDO CALLEROS
ISAAC REYES
DENISSE HERNANDEZ
MONSERRAT TREJO
 FUNDAMENTO
• La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de
un sistema citocromo-oxidasa

• Activa la oxidación del citocromo que es reducido

por el oxígeno molecular

• Produce agua o peróxido de hidrógeno según la

especie bacteriana.
 REACTIVOS, MATERIALES Y MÉTODOS

REACTIVOS:

• Reactivo de kovacs.
• Reactivo de gordon mcleod.
• Reactivo de nadi.
• Reactivo de carpenter, suhrland y morrison.
MATERIALES:

• Discos de oxidasa.
MÉTODO DE LA PLACA DIRECTA

• Se adicionan 2 o 3
gotas de cualquiera de
los reactivos antes
mencionados para este
fin directamente sobre
la o las colonia (s)
contenidas en una
placa de medio de
cultivo que no
contenga glucosa.
 MÉTODO INDIRECTO SOBRE PAPEL
• Cortar un trozo de papel de filtro (whatman n°1) a un
tamaño de 6 cm2 y se coloca dentro de una placa de
petri vacía.

• Adicionar 2 o 3 gotas del reactivo de oxidasa de kovacs en

el papel, tomar parte de la colonia que se quiere estudiar
con un asa de platino o palillo de madera y extenderla en
línea recta sobre el papel impregnado de reactivo.
Interpretar en un lapso de 5 a 10 segundos.

• Con las tiras preparadas con el reactivo carpenter, suhrland

y morrison se extiende una colonia sobre la tira seca. Una
misma tira sirve para probar varias cepas. interpretar en 10
seg.
 DISCOS (MÉTODO DIRECTO)

• Humedecer sutilmente los discos comerciales con

agua destilada estéril y sobreponer sobre la colonia a
estudiar. Se recomienda usar las placas a 35°c, si se
usan placas a temperatura ambiente o placas
refrigeradas la reacción es un poco más lenta.
interpretar el cambio de color entre 10 a 20 seg.
 DISCOS (MÉTODO INDIRECTO)

• Humedecer el disco como se describió

anteriormente.
• Colocarlo en una placa de petri vacía. Tomar
cantidad suficiente de la colonia a estudiar con
un asa de platino o palillo de madera y colocar
sobre el disco. interpretar el cambio de color
entre 10 a 20 seg.
 USO E INTERPRETACIÓN

• El género neisseria es positiva y acinetobacter negativa.

• Útil para diferenciar una bacteria perteneciente a la
familia enterobacteriaceae (todos oxidasa negativa)
de otros fermentadores, tales como el género
pasteurella, aeromonas, plesiomonas (oxidasa
positivos).
• El género vibrio y helicobacter también son oxidasa
positivos.
INTERPRETACIÓN:
 LIMITACIONES Y RECOMENDACIONES

LIMITACIONES:

• Los reactivos deben usarse recién preparados.

• Medios que contengan glucosa,falsamente negativos.
• Las cepas de bordetella pertussis pueden dar reacción
falsamente positivo.
• El uso de asas de metal (hierro) dan reacción
falsamente positiva.
• El haemophylus influenzae.
 RECOMENDACIONES:
• Reactivos son muy inestables.
• La forma de retardar la auto-oxidación del reactivo es
adicionar ácido ascórbico al 0,1% al momento de
preparar los reactivos.
• Reactivos son inestables se recomienda realizar un
control de calidad semanalmente.
• Una reacción positiva con el reactivo oxidasa de kovacs
entre 15 -60 seg se considera una reacción retardada y
después de pasar 60 segundos se debe considerar como
negativa.