THE PRO-APOPTOTIC ROLE OF THE

REGULATORY FEEDBACK LOOP

BETWEEN MIR-124 AND PKM1/HNF4Α
IN COLORECTAL CANCER CELLS
Yan Sun 1,†, Xiaoping Zhao 2,†, Man Luo 1 , Yuhong Zhou 3 ,
Weiying Ren 1 , Kefen Wu 1 , Xi Li 1 , Jiping Shen 1 and Yu
Hu 1,*
Antecede
ntes
Expresión de miR-
124

Durke
y

Zhang et al.,
2013
Antecedentes
Microarray de microRNAs

• miRNAS asociados a un mal pronóstico de

CCR

• Análisis in sillico de este grupo: miR-124,

miR-137 y miR-340

• Este grupo tiene como objetivo proteínas

del splicing alternativo de PKM (PTB1 /
hnRNAPA1 / hnRNAPA2)

Sun et al.,2012
Piruvato
cinasa
(A) mRNA levels of PTB1, hnRNAP1 or hnRNAP2 were analyzed in cells with indicated treatment. Expression LNA
value was calculated with the ΔΔCT method.(B) Immunoblotting of miRNA stably expressing HCT116 cells with
PTB1, hnRNAPA1, hnRNAPA2 and β-tublin antibodies.
Actividad relativa de
luciferasa
 Nueva
model of miR-124, miR-137 and miR-340 regulating CRC cell growth
Vía de la
apoptosis
¿Porcual mecanismo
miR-124 regula la
apoptosis?

Las caspasas iniciadoras 8 y 9,

Boland et al., 2013.Ce
procesan las formas inactivas de
Death Disv.4(7)
las caspasas efectoras 3 y 7,
activándolas
¿Cual es el efecto de
miR-124 en la
apoptosis?

Anexina V (MMP)

Figura 1. miR-124 regula la

apoptosis en células de cáncer
 ¿La apoptosis inducida por miR-124 depende del nivel
de PKM?

Figura 2. La apoptosis inducida por miR-124 depende del gen PKM 

Antecedente

Figura 3. PKM1 regula la

expresión de miR-124 a través
de HNF4α
¿PKM1/HNF4α y miR-124 regulan la
apoptosis?

Figura 4. PKM1 / HNF4α regula la apoptosis a través de miR-124

Conclusio
nes
• miR-124 activa la vía de apoptosis mitocondrial regulando el splicing
alternativo de PKM. 

• PKM1 aumenta la transcripción de miR-124 promoviendo la unión de

HNF4α a la región promotora de miR-124.

• Regulación positiva PKM1/ HNF4α/ miR-124 previene la tumorigénesis de

CRC al inducir apoptosis.

• Por el contrario la pérdida de miR-124 aumenta la expresión de PKM2 y

disminuye la expresión de PKM1 y apoptosis
 Sistema de clasificación para el
cáncer colorrectal

Dukes A: Invasión dentro pero no a través de la pared intestinal 

Dukes B: Invasión a través de la pared intestinal que penetra en la capa muscular pero no afecta a los
ganglios linfáticos 
Dukes C: afecta a los ganglios linfáticos 
Dukes D: metástasis generalizadas Volver
LNA (LOCKED NUCLEIC
ACID)
 Nucleótidos de RNA modificado con
un puente extra que conecta el
oxígeno 2' con el carbono 4’.

 Secuecias con estos nucleótidos

presentan mayor sensibilidad y
especificidad a su cadena
complementaria

 Discrimina entre un solo nucleótido

en familias de miRNAS

Volver
Pentosa con un puente adicional que une el
Oxígeno 2' con el Carbono 4'
 Luciferasa

Volver
Estructura del plásmido pEZXMT05-Rad51c-3´UTR y funcionamiento del ensayo
de luciferasa cuando se cotransfecta o no con el miR-222 maduro (sintético) Martinez-Pacheco et al.,2015
 Anexina
V

La anexina V es una proteína recombinante que se une específicamente a residuos de Volver

fosfatidilserina, los cuales se encuentran expuestos en la cara externa de la membrana
plasmática de células que están en apoptóticas, en células normales la Fostatidilserina se
encuentra en la cara interna de la membrana
Potencial de membrana
mitocondrial (ΔψM)
Sondas JC-1

• Detectan (ΔψM)
• Cargadas (+)
• Cambian rojo a verde con la disminución potencial de
la membrana.
• Células sanas = elevado(ΔψM), JC-1 se forma
complejos de color rojo.
• Células apoptóticas o no saludables = bajo (ΔψM), JC-
1 permanece en la forma monomérica, color verde
• Apoptosis temprana

Se mide por
• Citometría de flujo
• Microscopía de fluorescencia

Volver
HNF4α

Volver
Antecedente

 El análisis ChIP mostró que HNF4α se une fuertemente (15 a 25 veces
de enriquecimiento) al promotor miR-124 en células HepG2 y SNU-449

Volver
Hatziapostolou et al.,
2011Cell, 147(6): 1233–1247