PRUEBAS DE MONITOREO Y SEGUIMIENTO EN GESTANTES Y NIÑOS

CON VIH, NIÑOS EXPUESTOS AL VIH

TÉCNICA DE PAPEL FILTRO, FORMATOS DE USO Y FLUJO DE ENVÍO

Laboratorio de Referencia Nacional VTS-VIH/SIDA

Instituto Nacional de Salud

http://www.portal.ins.gob.pe/es/cnsp
Pruebas de diagnóstico y monitoreo de VIH
PRUEBAS DE TAMIZAJE
 ELISA, CLIA, ELFA
 Inmunocromatografía (pruebas rápidas)
PRUEBAS CONFIRMATORIAS
 Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
 Inmunoensayo en línea (LIA)
 PCR HIV ADN Proviral (niños menores de 18 meses)
PRUEBAS DE MONITOREO
 Recuento de linfocitos T (citometría de flujo, citometros portátiles)
 Determinación de la carga viral de VIH (PCR tiempo real)
 Genotipificacion para la evaluación de la resistencia a los ARV
 Tropismo viral
 Recuento de linfocitos T por citometría de flujo

Citometro de flujo FACSCount Citometro de flujo FACSCanto II

 TRANSFERENCIA TECNOLOGICA DE TECNICAS RECUENTO DE LINFOCITOS
T CD4 Y CARGA VIRAL VIH-1 PORTATIL: 2017-2018

Citometro portátil FACS Presto

CITOMETRIA PORTATIL
 Equipos pequeños.
 Funciona con batería recargable
 Cartuchos descartables de un solo uso.
 Almacenamiento de cartuchos hasta 31º C.
Citometro portátil PIMA
 Reporta conteo absoluto de linfocitos T CD4 *

* FACS Presto reporta además: % linfocitos T CD4 y Hb.

PROYECCION DE TRANSFERENCIA TECNOLOGICA A ESTABLECIMIENTOS DE SALUD CON DIFICIL ACCESO

 TRANSFERENCIA TECNOLOGICA DE
RECUENTO DE LINFOCITOS CD4CD8CD3

LRR Loreto
LRR Piura LRR Amazonas

LRR Lambayeque LRR San Martín

LRR La Libertad

LRR Lima Región .

LR Lima Metropolitana . . LRR Junín
LRN INS
LRR Callao

LR Ica
. Citometro de 4 colores
LRR Arequipa
Citometro de 2 colores
Moquegua
Citometro portátil
LRR Tacna
 CONDICIONES PARA ENVÍO Y RECEPCIÓN DE LAS MUESTRAS
DE RECUENTO DE LINFOCITOS T CD4

• Muestra: Sangre total obtenida por punción venosa en tubo al

vacío de 4 ml, con anticoagulante EDTA.
• Conservación: temperatura ambiente.
• Tiempo máximo desde la obtención de la muestra hasta la
recepción en el laboratorio: 48 horas.
• Características del rotulo de la muestra: nombre completo del
paciente.
 CARGA VIRAL VIH-1 por PCR en
tiempo real
• La tecnología del PCR en tiempo real incorpora la capacidad de
medir directamente y/o cuantificar una reacción mientras
simultáneamente ocurre la amplificación.

• Amplificación y detección simultáneas

 PCR convencional y PCR en Tiempo Real: Evolución del proceso

PCR 7 horas
a
Convencional 2 días

Extracción del Detección

ADN Amplificación

PCR en
1 hora
Tiempo Real a
1.5 horas
Extracción del
ADN

Amplificación y Detección
 CARGA VIRAL VIH

M200 COBAS 6800

 TRANSFERENCIA TECNOLOGICA DE CARGA VIRAL VIH-1 POR PCR TIEMPO REAL
EQUIPO PORTATIL -2017- 2018

CARGA VIRAL PORTATIL

CARGA VIRAL PORTÁTIL

 Muestra: 1- 1.2 ml de plasma (EDTA).
 Reactivo: cartucho descartable.
 Límite de cuantificación: 40 a 10 000 000 copias/ml.
 Validado para todas las muestras de los subtipos A, B, C, D,
AE, F, G, H, AB, AG, J y K del grupo M y de los grupos N y O.
 Tiempo de resultado: 90 minutos.
 Peso: 6 kg aprox.

PROYECCION DE TRANSFERENCIA TECNOLOGICA A ESTABLECIMIENTOS DE SALUD CON DIFICIL ACCESO

 TRANSFERENCIA TECNOLOGICA DE
CARGA VIRAL VIH-1 - PROYECCIÓN 2016-2018

LRR LRR Loreto

Amazonas .
.
LRR Piura .

.
LRR San Martín
LRR Lambayeque .
.
LRR La Libertad LRR Ucayali
.

.
LR Lima Metropolitana
.
LRN INS
.
LRR Callao
. . Procesa CV a nivel nacional
LRR Ica
. CV en proyección

. CV portátil en proyección
 Genotipificacion de VIH

Método Basado en el Protocolo de Stanford

Análisis de secuencias
 CONDICIONES PARA ENVÍO Y RECEPCIÓN DE LAS MUESTRAS
DE CARGA VIRAL, GENOTIPIFICACIÓN Y PCR ADN PROVIRAL

• Muestra:
Carga viral y Genotipificacion : - Sangre total en tubo al vacío de 6 ml, con
anticoagulante EDTA ó
- 2 crioviales de 2ml, con plasma.
PCR: Sangre total en tubo al vacío de 4 ml, con anticoagulante EDTA.
• Conservación: - tubos con sangre: temperatura ambiente.
criovial con plasma: congelación.
• Tiempo máximo desde la obtención de la muestra hasta la recepción en el
laboratorio INS: 24 horas.
• Características de rotulación de las muestras: Nombre completo del paciente.
 CONDICIONES PARA ENVÍO Y RECEPCIÓN DE LAS
MUESTRAS DE CARGA VIRAL, GENOTIPIFICACIÓN Y PCR
MINISTERIO DE SALUD
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA

ORDEN DE LABORATORIO DE PRUEBAS DE MONITOREO PARA CD4 Y CV EN VIH

Nombre completo del paciente:

DIRESA/GERESA Fecha de
EE.SS. DNI Fecha de Solicitud
Nacimiento
/ / / /
GESTANTE SEMANA DE GESTACION HSH TS ADOLESCENTE
PPL NIÑO INDIGENA AMAZONICO PG TRANS

Recuento de linfocitos CD4/CD8 por citometría de flujo ( )

Prueba solicitada
Determinación de carga viral para VIH ( )

Paciente recién diagnosticado VIH ( )

Motivo de solicitud Seguimiento y Evaluación para inicio de TARV ( )

Control periódico con TARV ( )

HORA Y FECHA DE OBTENCION MUESTRA___________________ FECHA DE ENVIO DE MUESTRA______________

__________________________________________
FIRMA AUTORIZADA
INDICACIONES
Muestra: sangre total (tubo con EDTA) 6 mL para carga viral, 4 mL para CD4. Temperatura de transporte : Ambiente (no cadena de frio)
Nota: Enviar Ficha de Notificación de caso de infección por VIH y SIDA según NTS N° 115-MINSA/DGE V.01
 INSTRUCCIONES PARA GENOTIPIFICACIÓN O PRUEBAS DE
RESISTENCIA A ARV
Para ello deberá seguir los siguientes pasos:
1. Hacer enlace en la siguiente dirección:
https://www.netlab.ins.gob.pe/solicitud%20netlab.pdf. 
2. Imprimir y llenar a mano. 
3. Colocar en un espacio en blanco de la ficha: “Solicito acceso a la solicitud electrónica
de Genotipificacion”
4. Solicitar la firma y sello del jefe inmediato.
5. Escanear y enviar electrónicamente a través de la web:
https://www.netlab.ins.gob.pe/FrmSolicitudUsuario.aspx 

En el caso de tratarse de más de un profesional dentro de la misma institución enviar su

solicitud escrita por conducto regular.
 DIFICULTADES PARA LA DESCENTRALIZACION
DE LAS PRUEBAS DE MONITOREO

 Laboratorios con espacio reducido para instalación de equipos.

 Personal insuficiente y con múltiples funciones.
 Rotación de personal.
 Falta de presupuesto para la sostenibilidad de la compra de reactivos.
 Falta de presupuesto para mantenimiento correctivo.
TÉCNICA DE PAPEL FILTRO

FORMATOS DE USO Y FLUJO DE ENVÍO

IMPLEMENTACIÓN DEL DIAGNÓSTCO DE VIH EN NIÑOS EXPUESTOS EN MUESTRAS DE SANGRE SECA

FINALIDAD
 
Contribuir con la optimización de las intervenciones dirigidas a eliminar la transmisión
materno infantil del VIH a nivel nacional para la toma de decisiones con oportunidad y
efectividad.

OBJETIVO GENERAL
 
Fortalecer la capacidad y calidad de los servicios de salud para la detección temprana,
atención y tratamiento oportuna del VIH en niños y niñas expuestos a la infección de VIH .
ACTIVIDADES:

1. Verificación del diagnóstico de PCR ADN pro viral VIH-1 a partir de muestras de sangre seca.
• Elaboración de protocolo
• Límite de detección.
• Sensibilidad y especificidad.
• Reproducibilidad.
• Informe de verificación

2.Capacitación al personal de salud en la obtención y manejo de muestras de sangre seca en papel filtro.
• Elaboración de guías y/o material para capacitación
• Organizar talleres de capacitación en la obtención y manejo de muestras en niños expuestos al VIH.
• Evaluación e informes de capacitación
3. Evaluación y verificación del diagnóstico de PCR ADN Proviral VIH-1 a partir de muestras de sangre seca en
campo.
• Elaboración de protocolo
• Selección de establecimientos para evaluación y verificación del diagnóstico de PCR ADN pro viral
VIH-1 a partir de muestras de sangre seca:
Costa: 2 EE.SS.
Sierra: 2 EE.SS.
Selva: 2 EE.SS.
• Informe de Implementación.

4. Implementación del diagnóstico de PCR ADN Proviral VIH-1 a partir de muestras de sangre seca a nivel
nacional.
 PCR VIH ADN PROVIRAL

Muestra:
1 tubo de 4 ml. con sangre total obtenida con EDTA

Sangre seca en papel

Almacenamiento:
Conservación a temperatura ambiente

Transporte:
Temperatura ambiente
 PCR

OBTENCIÓN DE MUESTRA DE SANGRE Y ADN

Amplificación del ADN Proviral

Materiales:  Mandil.
Antes de iniciar la obtención de la  Algodón
muestra se debe contar con el material  Lancetas retractiles
necesario de bioseguridad (EPP) y  Alcohol
material para la obtención de muestras:  Curitas (venditas)
 Caja o bolsa de bioseguridad
 Papel filtro (tarjeta Whatman 903)
 Bolsa de plástico autosellable
 Desecantes

 Guantes
 FICHAS PARA
PCR ADN PROVIRAL
PARA VIH-1
 FORMULARIO FOR-CNSP-346

ORDEN DE LABORATORIO DE PRUEBAS PCR PARA EL DIAGNÓSTICO DE VIH-1 Edición N° 01

NIÑOS EXPUESTOS AL VIH

Fecha de Solicitud
DIRESA/GERESA EE.SS.
(dd/mm/aaaa)

/ /

Nombre completo de la madre:

DNI de la Madre:

Nombre completo del niño expuesto:

DNI del Niño expuesto:

Fecha de Nacimiento del Niño

Sexo: M F
expuesto (dd/mm/aaaa)

Fecha de Obtención de Muestra

Sangre Total N° de Prueba Observación
Tipo de (dd/mm/aaaa)
Muestra
Técnica Papel filtro 1° PCR DNA / /
2° PCR DNA / /
3° PCR DNA * / /

HORA Y FECHA DE OBTENCION MUESTRA___________________ FECHA DE ENVIO DE MUESTRA______________

__________________________________________
FIRMA AUTORIZADA

INDICACIONES Muestra: sangre total (tubo con EDTA) 4 mL. Temperatura de transporte : Ambiente (no cadena de frio)
Muestras de sangre impregnadas en papel deben ser conservadas y enviadas a temperatura ambiente
* En casos especiales
Nota: Enviar Ficha de Investigación epidemiológica de caso de gestante con VIH y el niño nacido expuesto al VIH, según NTS N°115-MINSA/DGE V.01
 TÉCNICA DE OBTENCIÓN DE SANGRE DE TALÓN DE PIE

Materiales para obtención de muestras y 2. Limpiar el área con un algodón con alcohol
1. Identificar la zona de punción en el talón de pie esperar a que el alcohol seque.
de Bioseguridad

4. Eliminar la primera gota de sangre 5. Impregnar la sangre en cada circulo de 6. Secar las muestras a temperatura
3. Realizar punción en el talón con un algodón seco y volver a la tarjeta previamente rotulada con los ambiente de 3 a 4 horas
presionar el talón para formar una datos del niño (nombres, DNI y fecha de
nueva gota obtención de muestra)
 TÉCNICA DE OBTENCIÓN DE SANGRE DE PULPEJO DE DEDO

2. Limpiar el área con un algodón con alcohol 3. Abrir la lanceta girando el protector de la 4. Colocar la lanceta sobre el área a
1. Escoger el dedo a trabajar esperar a que el alcohol seque. punta en 180° realizar la punción en el dedo

5. Presionar hacia abajo la lanceta contra 6. Descartar la primera gota con un algodón seco y 7. Rotular previamente la tarjeta, no tocar la zona del papel donde se impregnará
el dedo presionar nuevamente el dedo para que se vuelva a (círculos) y dejar secar al ambiente por lo menos 4 horas.
No retire la lanceta hasta oír clic formar una nueva gota
 VALIDACIÓN DE MUESTRAS

1. Muestra valida 2. Cantidad de muestra no es 3. La muestra exhibe anillos de suero.

suficiente para la prueba

5. Muestra sobre saturada 6. Muestra aparentemente diluida

4. La muestra no secó antes del envío desteñida o contaminada

7. La muestra aparenta estar 8. La muestra aparenta tener 9. Ausencia de muestra de sangre

rayada o desgastada coágulos o capas sucesivas.
 EMBALAJE DE MUESTRAS PARA ENVÍO

1. Asegurarse del rotulado correcto de tarjeta

con los datos del niño (nombres, DNI y fecha y 2. Asegurarse del buen llenado de 3. Colocar desecantes en bolsa con
hora de obtención de muestra ficha y solicitud de laboratorio cierre hermético

4. Colocar la tarjeta con la muestra de 5. Asegurarse que el sellado de la 6. Colocar las bolsas selladas y las fichas
sangre seca a la bolsa con bolsa esté correctamente en un sobre manila para el envío al
desecantes laboratorio
ESTABLECIMIENTO DE OBTENCION DE MUESTRA

Las muestras deben ser

enviadas a temperatura
ambiente

LABORATORIO DE REFERENCIA REGIONAL

LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL INS

(LRN VIH)
 EQUIPO LABORATORIO VIH

Instituto Nacional de Salud

Av. Defensores del Morro 2268,Chorrillos
Teléfono: 4711111, anexo 1544
correo: soledadromeror@ins.gob.pe, fancarbus@gmail.com