Reacciones químicas

Enzimología :Cinética enzimática

Papel Clínico
Reacciones químicas
Reacción de primer orden. Su velocidad es directamente
proporcional a la concentración del reactivo.
A B
La reacción inversa de B a A es muy pequeña. El equilibrio
está desplazado a formar B
La Velocidad de la reacción (V) como formación de
producto B o desaparición de sustrato A
V= d(B)/dt = -d(A)/dt= k1(A)
Conforme se consume A la velocidad de reacción se reduce
Velocidad de una reacción de primer orden
Reacciones químicas

Reacciones de segundo orden: Se produce

siempre que dos moléculas deban entrar en
contacto para formar productos.
2A k2
B V = d(B)/dt = k2(A)2

La Velocidad es proporcional a la segunda

potencia de la concentración de sustratos, ya que
sólo se produce cuando colisionan dos moléculas
¿Que determina la velocidad de una reacción?
Barrera de energía libre, estado activado o de transición.
Un ejemplo es la transformación de un anillo
de piranosa de forma bote a silla...
La energía libre estándar de activación....

Es la energía libre adicional que han de

alcanzar las moléculas para llegar al estado de
transición.
Si la necesidad de energía es alta, sólo una
pequeña fracción tendrá energía suficiente
para superarla.
Una vez que se alcanza la activación la
transición puede llevarse a cabo para cualquier
lado dependiendo de la concentración.
 Qué es una enzima?
Es un tipo de proteína que actúa como catalizador de
reacciones químicas.
Incrementa la velocidad de reacción sin cambiar el punto
de equilibrio.
Como catalizador:
Es específico para cada reacción. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
Tiene gran poder catalítico, transformando hasta 103 a
104 moléculas por segundo.
Está sujeto a diversos mecanismos de regulación de
modo tal que no genere más producto que el necesario.
¿qué hace un catalizador?
Reduce la barrera de energía para una reacción por
lo que más moléculas alcanzan la energía de
transición. No tiene efecto sobre la posición de
equilibrio
¿Como lo hace?
Forzando la molécula a
un estado intermediario
que se parece al de
transición pero de menor
energía.
Puede reunir dos
moléculas reactivas en
la orientación adecuada,
aumentando su
reactividad
Orienta partes de la
molécula de forma
adecuada para alcanzar
la transición.
Modelos de actividad enzimática....

Enzima y sustrato se unen a través de un sitio activo. Este

es una hendidura en la proteína, rodeada de cadenas
laterales de aminoácidos que se unen al sustrato y de otras
cadenas laterales que intervienen en la catálisis. El ajuste
es muy estrecho por lo que explica la especificidad.
Modelo cerradura-llave: explica la especificidad, pero no
la catálisis. Emil Fischer
Modelo de ajuste inducido.la enzima no acepta
simplemente el sustrato, sino que exige que este se
distorsione a algo cercano al estado de transición.
 Actividad enzimática
Es la forma de medida de una enzima.
La ecuación general de las reacciones enzimáticas es:

E + S + Cof1 ⇔ ES ⇒ E + P + Cof 2
Donde la enzima se une al sustrato para generar un producto. Algunas
veces con el auxilio de un cofactor que se modifica durante la
reacción.
La actividad enzimática se mide por la reacción catalítica bajo la
forma de desaparición del sustrato por unidad de tiempo.
También por formación de producto o modificación del cofactor.
Unidades: katal = moles de sustrato/segundo.
Unid. Internacionales: umol/minuto.
1 U= 16,7 nkat.
Modificaciones de componentes de la reacción enzimática
 Actividad catalítica
Las enzimas aceleran la velocidad de reacción por las
siguientes razones:
La unión de sustrato y enzima incrementa la
concentración efectiva de sustrato en las inmediaciones
del sitio activo. Hay también un cambio
conformacional que orienta al sustrato.
La unión enzima sustrato tiene un nivel más alto de
energía y las modificaciones de longitud y ángulo del
sustrato asemejan a la forma del estado transitorio.
Algunos de los residuos del sitio activo, participan de
la reacción donando y aceptando protones.
Algunos residuos catalíticos tienen grupos que ayudan
a romper enlaces covalentes.
 Clasificación de enzimas

Clase de enzima Tipo de reacción catalizada

Reacciones que transfieren electrones de un sustrato
Oxidoreductasas a otro.Óxido reducción
Transfieren un grupo funcional de una molécula a otra.
Transferasas Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Rompen enlaces entre carbonos u otras moléculas
Hidrolasas con la adición de una molécula de agua.
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
Liasas molécula de agua.
Transforman un isómero en otro transfiriendo un grupo
Isomerasas funcional de una posición a otra.
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
Ligasas moléculas con gasto de energía.
Clasificación de enzimas: oxido
reductasas

AH2 + B A + BH2
Clasificación de enzimas:
transferasas

A-B + C A + C-B
Clasificación de enzimas: hidrolasas

A-B + H2O AH + B-OH

glucosa +
lactosa + agua
galactosa
Clasificación de enzimas: liasas,
ligasas

A-B A+B

A+B+ A-B +
XTP XDP + Pi
Clasificación de enzimas: isomerasas
 Especificidad y sitio activo

Las reacciones se inician

cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
El sitio activo es una porción sustrato
espacial de la enzima creada enzima
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de amino-
ácidos específicos. Estos
pueden no estar en
secuencia, pero los dobleces
de la proteína enzimática los
aproximan.
Existen: residuos de captura
y residuos de catálisis. productos
enzima
 Localización enzimática
Las enzimas ejercen su
Na/K ATPasa función predominantemente
membrana en el interior celular. Mas
Retículo endoplasma aún lo hacen en determinado
Glucosa 6 fosfatasa organelo de la célula.
Las enzimas que se en-
cuentran en el plasma o lí-
quidos diversos corresponden
a aquellas que se están eli-
minando y muy pocas como
la LCAT (Lecitina colesterol
acil transferasa), LLP (Lipasa
lipoproteica), ejercen su
función a nivel plasmático.
Alfa manosidasa
Catalasa Succinato deshidro-
Complejo Golgi
Peroxisoma genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria
Factores que modifican la reacción
enzimática

La velocidad de una reacción mediada por

enzimas está influenciada por:

Temperatura del medio

El pH del medio
Concentración de la enzima
Concentración del sustrato
 Temperatura

No existe actividad enzimática a -273°C

o cero absoluto.
A partir de esa temperatura los incre-
mentos provocan mayor actividad enzi-
mática. La que se expresa como coefi-

actividad
ciente de temperatura o Q10. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10°C de
aumento de temperatura.
En términos generales Q10 = 2, es decir
que por cada 10°C de temperatura la
velocidad se dobla.
Existe una temperatura óptima tras la cual
los aumentos provocan desnaturalización
de la proteína enzimática y pérdida de la 0 70
actividad. temperatura
Cada enzima tiene un pH
óptimo de trabajo, el cuál es pH
variable. Las enzimas intra-
celulares trabajan entre 5 y 9 ,
las enzimas digestivas pueden
trabajar en pH diferentes.

actividad
Los extremos de pH afectan la
ionización de los centros
activos (-COO- (glutamico,
aspartico) NH3+ (arginina,
lisina,histidina) SH (Cisteina,
metionina)).

0 14
pH

X −H
Enzima Y −H ⇒ Enzima X
Y −H ⇒ Enzima X
Y
pH ácido (inac) pH óptimo (activo) pH alcalino (inac)
 Concentración de la enzima y
constante de equilibrio
La concentración de la enzima incrementa la velocidad de la
reacción, pero no modifica la constante de equilibrio.
Así, si la reacción se produce en ausencia de la enzima...
K1
S⇔P
K −1
La constante de equilibrio será: K1 ( P)
Keq = =
K − 1 (S )
Y, si la reacción se produce en presencia de la enzima...
K1
Enz + S ⇔ Enz + P
K −1

La constante de equilibrio será:

Keq = K1
K −1 = ( Enz )( P )
( Enz )( S ) = (P)
(S )
Cinética química: cinética enzimática
Las reacciones químicas son:
De primer orden si son dependientes de la concentración de
sustrato
De orden cero si son independientes de la concentración de
sustrato
La cinética enzimática estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas, manteniendo
condiciones óptimas en la mayoría de factores: pH
temp, tiempo, concent.de enzima, conc. De sustrato etc
Cinética enzimática.....
 Concentración del sustrato
Si se aumenta la concentración
del sustrato, manteniendo cons-
tante las demás variables, la Vmax
velocidad inicial de reacción (Vi)
aumenta hasta un valor máximo
(Vmax) el que se estabiliza. Vmax/2
Se dice bajo estas condiciones
que la enzima está saturada con
el sustrato. Esto se produce de
Km.
acuerdo a la afinidad enzima S
sustrato.
Primer Orden
orden cero
Leonor Michelis y Maud Menten (1913)
 Ecuación de Michaelis Menten

La relación entre velocidad de reacción y concentración de sustrato

se describe en la fórmula:

v= Vmax[ S ]
Km +[ S ]
Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos
están llenos de sustrato. Toda la enzima está bajo la forma de [ES] y la
Km se define como concentración de sustrato a Vmax/2
Vmax: es un índice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando
todos los sitios activos están saturados, y es proporcional a la
concentración de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad.
Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato.
Una baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de
Km son unidades de concentración.
Km: expresión de afinidad

Vmax

Vmax/2

Km. Km Glucoquinasa
(hígado)
S
Hexoquinasa
(cerebro)
 La aplicación de la ecuación de
Michaelis Menten se basa en...

K1 K3
E + S ⇔ ES ⇔ E + P
K2 K4

La concentración de sustrato es tan grande con respecto a la de

enzima, que la formación de ES no altera significativamente la
concentración de sustrato.
Al inicio de la reacción la concentración del producto es tan
insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser
ignorada.
La velocidad de transformación de ES en E+P(k3) es el factor
limitante de la reacción.
La formación de ES es rápida y reversible y es igual a la
velocidad de desaparición de ES.
Reacciones de multisustrato
Captación indistinta..Cada sustrato será captado en
su momento, generalmente uno es preferente:

Hexoquinasa, glucosa? Galactosa?

Reacciones de multisustrato
Captación ordenada de sustratos… para unir
un sustrato debe unirse otro primero

Reacciones de oxidorreducción co-

catalizadas por NAD
Reacciones de multisustrato
Mecanismo ping-pong … cuando existe una secuencia
catalítica. La enzima se modifica por persistencia de un
fragmento del primer sustrato.

Enzimas proteolíticas
 Gráfica de Lineweaver Burk
La gráfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
Se usa la inversa de la ecua- 1/v
ción de Michaelis Menten.
1 km 1 1
= . +
v Vmax [ S ] Vmax
Cuando 1/v se grafica frente a 1/Vmax
1/s se obtiene una recta,
donde la pendiente es
Km/Vmax. -1/Km 1/[S]
La intersección en el eje de y
es igual a 1/Vmax y la del eje
de x es igual a 1/Km.
 Inhibidores competitivos
Estructuras semejantes al sustrato que compiten con él por el mismo
centro activo.
Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentración del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.
La Vmax no cambia, pero si el Km porque se
necesita más sustrato.
1/V

v inhibidor

1/Vmax

-1/Km 1/[S]
[S]
Inhibidores competitivos
 Inhibidores no competitivos
Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio indepen-
diente de la enzima.
Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiem-
po. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentración del
sustrato.
No tiene efecto sobre la Km pero sí sobre la Vmax.

1/V

V
inhibidor
1/Vmax

[S] -1/Km 1/[S]

Inhibición
no competitiva
 Inhibidores irreversibles

Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminoácido de

la enzima, para formar un complejo estable permanentemente
inactivado.
Se les llama también substratos suicidas.
Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.
Efecto clínico de los Inhibidores
Droga Uso terapéutico Enzima afectada Tipo de inhibidor
Lovastatina Hipercolesterolemia HMGCoA reductasa Competitiva
5-fluouracil Cáncer Timidilato sintetasa Irreversible
Metrotexate Cáncer Dihidrofolato reductasa Competitiva
Alopurinol Gota Xantino oxidasa Irreversible
Cumadin Anticoagulante Glutamil carboxilasa Competitiva
Aspirina Antiinflamatorio Ciclooxigenasa Irreversible
Captopril Hipertensión art. Enz.convert.angiotensina Competitiva
Coenzimas: co sustratos?
Muchas enzimas necesitan de otros
pequeños compuestos para facilitar las
reacciones.
Enzima + coenzima = holoenzima
Las vitaminas del complejo B son
precursoras de vitaminas
Coenzimas.. ejemplos
Papel Clínico de las Enzimas
Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
líquidos biológicos con cierta frecuencia.
Todas las enzimas plasmáticas, las del LCR, del L.
Ascítico o Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentración –actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destrucción hepática o eliminación renal.
Únicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lípidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulación ejercen su actividad en el plasma o
suero.
 Elevación enzimática en el
plasma...
La actividad enzimática en el plasma y otros líquidos biológicos
se produce por:
Necrosis: destrucción celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
Sobre producción: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
Menor eliminación: no se elimina normalmente
-obstrucción biliar-.
Incremento de células inflamatorias: en líquidos como
Pleural y Ascítico los exudados se acompañan de aumento de
actividad enzimática.
 Origen de las enzimas
en el plasma

Enzimas Ejemplos
Protrombina, plasminógeno,ceruloplasmina,
Específicas del plasma Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa

Secretadas Amilasas, fosfatasa prostática, pepsinógeno

Láctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
Del metabolismo celular alanina transferasa.
 Enzimas de uso diagnóstico

Enzima Uso diagnóstico

Fosfatasa ácida Cancer de próstata
GOT Fosfatasa alcalina Enf. hepática y osea
GPT Amilasa Enf. pancreática
GLDH Aspartato amino transferasa Enf. hepática y cardiaca
SDH Alanina amino transferasa Enf. hepática
CPK Creatino fosfo quinasa Enf. muscular y cardiaca
LDH Dehidrogenasa láctica Infarto de miocardio
 Papel de las enzimas en la
medicina
Establecer un diagnóstico, CPK
como en el caso de las
TGO
enzimas del infarto de
miocardio (CPK y LDH).
Valorar la magnitud de la
lesión
Monitorizar la mejoría del LDH
paciente.
Mostrar la repetición del
fenómeno (reinfarto) 2 4 6 8 10
Días después del infarto de
Miocardio.
 Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma función pero difieren en su estructura
química y propiedades cinéticas.
Las formas isoenzimáticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
Generalmente son estructuras oligoméricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dímeros o tetrámeros- .
100%
%
90%
80% Isoenzimas LDH
70%
60% LDH1
50%
40% LDH2
30% LDH3
20% LDH4
10%
0% LDH5
Eritrocitos
Pulmones
Miocardio
Riñón

Músculo
Hígado

Bazo
Dehidrogenasa láctica
Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa láctica Isoenzima SubunidadesTejido predominante
(LDH). Cada una es un oli- LDH1 HHHH corazón
gómero con cuatro protó- LDH2 HHHM corazón
LDH3 HHMM riñón, pulmón
meros de los tipos H y M y
LDH4 HMMM hígado
tiene un PM de 34 000. LDH5 MMMM hígado
Los protómeros se combi-
nan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia. normal
El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos. infarto
 Creatino fosfokinasa
Isoenzima Subunidades Tejido predominante
CK1 BB Cerebro
Ck2 MB Músculo cardiaco
CK3 MM Músculo esquelético

Existen tres isoenzimas de (+)

la creatino fosfokinasa. CK1

Cada una es un dímero CK2

formado por la combina- CK3

ción de protómeros M y B.
Cada dímero representa a
un tejido en particular. (-)
 Tipos de
especificidad enzimática

Modelo de molde rígido Modelo de molde inducido

En este modelo el sitio Aquí el sitio activo es más
activo tiene una estruc- flexible, se le llama de ma-
tura rígida, se le llama no y guante.
de llave y cerradura. Cuando el sustrato se acerca
Es complementaria del a la enzima se producen
sustrato. cambios conformacionales
Explica la especificidad que llevan a una exacta u-
de sustrato aún a nivel nión entre ambos.
de isómeros (estructu- Modelo que explica mejor
ras casi idénticas).
la especificidad de sustrato.
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