ENZIMAS

Substncias orgnicas de geradas no interior da clula

aceleram reaes sistemas biolgicos. qumicas

estrutura
que

complexa
em

ocorrem

Podem ser encontradas em clulas animais ou de plantas, bem como em microorganismos.

 Quimicamente, so protenas globulares constitudas de longas cadeias de aminocidos unidas por ligaes peptdicas

20 aminocidos comumente encontrados nas protenas:

Cadeia com menos de 50 AA peptdeos.

Protenas maiores

cadeias

ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL

Podem ter 4 tipos de estrutura Estrutura primria:

- mais simples e mais importante, pois dele deriva todo o arranjo espacial da molcula - somente a seqncia dos aminocidos, sem se preocupar com a orientao espacial

 Estrutura secundria
- rotao das ligaes entre os carbonos dos aminocidos de seus grupamentos amina e carboxila.

Alfa-hlice:

- forma mais comum; - hlice em espiral - as cadeias laterais dos se distribuem para fora da hlice; - ponte H.

Folha beta pregueada.

ou

folha

- arranjados em paralelo ou no sentido anti-paralelo.

 Estrutura terciria - resulta do enrolamento da hlice ou da folha pregueada, - estabilizada por pontes de hidrognio e pontes de enxofre,
tm seqncias de aminocidos diferentes, refletindo estruturas e funes diferentes,
- Foras fracas, podem ser facilmente quebradas desnaturao

 Estrutura quaternria - possuem duas ou mais cadeias polipeptdicas. - a estrutura tridimensional destas a estrutura quaternria. - Ex: hemoglobina - sua estrutura formada por quatro cadeias polipeptdicas

Estreita relao entre a estrutura da enzima e sua funo:

so altamente especficas
somente certos substratos sofrem sua ao e unicamente um tipo de reao ocorre, sem reaes colaterais ou produtos derivados, se sua estrutura mudar no catalisa mais aquele substrato

Como isso ocorre?

O substrato liga-se enzima atravs do stio ativo, local onde ocorrer a reao catalisada pela enzima.

STIO ATIVO resduos de aminocidos capazes de interagir com o substrato e formao do produto. Estes resduos denominam-se grupos catalticos

Asp

Ser His

Representao esquemtica da estrutura tridimensional da lipase de Pseudomonas cepacia.

Teoria da chave-fechadura proposta por Emil Fischer

O stio ativo possui uma conformao cujos grupos ligantes R dos aminocidos esto corretamente posicionados, e sua conformao complementar a estrutura do substrato

Modelo do Koshland

encaixe

induzido,

proposto

por

o stio ativo uma regio flexvel cuja forma pode ser induzida para alojar compostos estruturalmente semelhantes.

Vantagens de utiliz-las como catalisadores: aumentam de vrias ordens de grandeza a velocidade das reaes,

as reaes ocorrem em condies suaves de temperatura, presso, e em meio de pH e concentrao salina praticamente constantes,
so altamente especficas e capazes de diferenciar estereoismeros de certos compostos, sem formar subprodutos, tm capacidade de regular processos, como aceleram a velocidade da reao sem alterar o equilbrio termodinmico, elas podem catalisar um grande nmero de reaes.

Unio Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular (UIBBM) classificadas em seis grandes grupos, de acordo com o tipo de reao envolvida Cada enzima descrita recebe um nmero de classificao, conhecido por E.C., que composto por 4 dgitos: 1. Classe 2. Sub-classe dentro da classe 3. grupos qumicos especficos que participam da reao. 4. a enzima, propriamente dita

Classificao das Enzimas - UIBBM

Classe
1 Oxidoredutases

Tipo de Reao Transferncia de eltrons ou remoo de hidrognio

Subclasse Hidrogenases, oxidases, peroxidases, etc

2 Transferases

Reaes de transferncia de
grupos

Transaldolases,
transcetolases, etc Estearases, lipases , peptidases, fosfatases, etc

3 Hidrolases

Reaes de hidr lise

4 Liases

Reaes de adio de grupos a dupla ligao ou formao de duplas ligaes por

Descarboxilases, cetocidoliases, hidroliases, pectato liase

remoo de grupos
5 Isomerases

Transferncia de grupos dentro da molc ula para produzir ismeros

Racemases, epimerases, oxirredutases, mutase, etc

6 Ligases

Formao e clivagem de ligaes C-O, C -S, C -C e C N e steres de fosfato

Exemplo: Pectato Liase EC 4.2.2.2

EC 4.2.2.2
liase Pectato liase carbono-oxignio liase ativa em polissacardeos

COFATORES ENZIMTICOS E COENZIMAS

Cofatores: um ou mais ons inorgnicos que podem ser necessrios para a funo de uma enzima. no esto ligados permanentemente molcula da enzima mas, na ausncia deles, a enzima inativa.

Coenzimas:
compostos orgnicos, quase sempre derivados de vitaminas, a frao protica de uma enzima, na ausncia do seu cofator, chamada de apoenzima. enzima + Cofator, chamamos de holoenzima.

IMOBILIZAO DE ENZIMAS

As enzimas quando imobilizadas: retm sua configurao estrutural devido as ligaes de hidrognio que ocorrem na superfcie do material

dificuldade de vibrao

Aumento da estabilidade trmica.

O principal interesse em imobilizar uma enzima obter um biocatalisador com atividade e estabilidade que no sejam afetadas durante o processo.

Vantagens da imobilizao: aumenta a estabilidade das enzimas, baixo custo, facilita a separao e recuperao das enzimas, reutilizao, possibilitando operaes contnuas.

Tipos de Suporte materiais inertes com pouca ou nenhuma interferncia no comportamento cintico da enzima.

O suporte para ser efetivo na imobilizao deve:

- deixar a enzima acessvel aos substratos, - manter a atividade por um longo perodo - possibilitar a regenerao do sistema suporte/enzima ao final do processo, sem que ocorra a perda da atividade enzimtica.

Exemplos de suportes inertes

Mtodos de Imobilizao de Enzimas

Enzima Ligaes cruzadas Hexametilenodiamina e glutaraldedo Confinamento em microcpsula Gelatina, quitosana, alginato carragenana com cloreto de clcio ou potssio Ligaes em suportes Adsoro fsica: lcool polivinlico (PVA), xantana, quitosana, galactomanana, poli-oxido de etileno (PEO), poli(cido acrlico) (Carbopol), nylon 6. Adsoro covalente: slica, alumina, celulose, poli(etilenoglicol) (PEG), metoxi(polietilenoglicol)-pnitrofenil carbonato. Adsoro inica: resinas de troca inica: DEAEsefadex, carboximetilcelulose, Dowex 66, duolite 568N) Confinamento em matriz Polmeros naturais: gel de agar, caseinato de sdio

Orgonogis de microemulso leo-gua, aerogis de slica.

Solvente orgnico gua + enzima Sistema bifsico

Atividade Enzimtica

Atividade biolgica capacidade que as enzimas possuem de reagir com determinados constituintes das clulas

ir depender da estrutura da protena

As medidas de [ ] em m/V, no tem aplicao para solues enzimticas O que importa no a massa, mas a atividade

Conserva a massa protica Protenas desnaturadas Sem atividade cataltica

 Dosagem: atravs da medida de sua atividade Avaliada pela velocidade da reao que a enzima catalisa ([S] ou [P])

uma amostra da soluo contendo a enzima incubada com [ ] de substratos (Vmx.)

Produto mol/mL

velocidade constante velocidade decresce

Tempo (min.)

Atividade medida da velocidade de reao em condio inicial (velocidade constante)

A velocidade da reao medida e expressa em Unidades (U).

1 U a quantidade de enzima capaz de formar 1mol de produto por minuto em condies timas

Mtodos para a determinao da atividade de enzimas: Conhecimento prvio da faixa de [ ] enzimtica que permite obter uma variao linear da [P] (ou [S]) com o tempo. Mtodos para avaliar as [ ] das espcies:
Muito diretos: - Espectrofotometria, - Titulometria... Menos diretos: - Medida da Viscosidade.

Exemplo: Determinar a atividade de pectinase (quebra a pectina):

1mL/L 0,1 mL

Pectinase

0,1 mL soluo enzima + 0,9 mL: soluo de pectina +

2mL DNS
Total = 4mL

Aps 5 min dosa-se produto: 0,476 mol/mL 0,476 mol/mL em 5 min 0,0952 mol/min A = 0,0952 4mL 1000 = 380,8 mol mL-1min-1 A = 380,8 U/mL

A velocidade das reaes enzimticas varia com diversos fatores: pH substrato concentrao de enzima temperatura.

 Influncia do pH

Valor de pH timo = atividade mxima;

Velocidade da reao : pH afasta do timo;

Influncia do pH: dos grupos dissociveis;

Um equilbrio qumico de um cido fraco pode ser escrito como: HA A- + H+ As concentraes de HA e de A- dependem do pH pH HA A- pH timo

concentrao hidrogeninica (H+) que leva a molcula de enzima conformao ideal para exercer seu papel cataltico

pH timo: determinado a partir de uma curva do efeito do pH na atividade enzimtica

muitas enzimas apresentam uma curva indicando que no existe um nico valor de pH timo, mas uma faixa de pH timo (6,0 a 8,5). 6 > pH > 8,5 = inativao irreversvel.

 Influncia da temperatura T velocidade de reao = energia cintica; K funo crescente da T Lei de Arrhenius
k k0 e
RT

 T muito elevadas = desnaturao da enzima Rompidas as pontes de hidrognio alteraes estruturas = nova conformao; T desnaturao pouco acima da T tima.

Note que quanto maior a temperatura de, mais rpido o processo de desnaturao trmica.

 Efeito da concentrao do substrato na velocidade da reao

Cintica Enzimtica