Importante en la medicina y la industria Separacin de las molculas biolgicas

Segn

Carga Neta Alta sensibilidad, poder de resolucin Peso Molecular Estructura Tridimensional y versatilidad

Criterio importante de pureza Permite conocer y precisar cuadros patolgicos

Movimiento Desplazamiento Migracin

Partculas Elctricamente Cargadas (Soluto)

Atraccin/Repulsin en un campo elctrico

Una mezcla de molculas cargadas se coloca en un campo elctrico Atraccin hacia el electrodo que posee su carga opuesta

Molculas cargadas positivamente Ctodo

Molculas cargadas negativamente nodo

Carga Velocidad de migracin del in

Magnitud del campo elctrico Coeficiente de friccin

Movilidad electrofortica

Constante tabulada en Tablas

Fuerzas Adicionales

Migracin no Homognea

Polmero soluble de alto PM

Reduce la anchura del frente

Dificulta el movimiento de solutos

Fuerza Elctrica Viscosidad del medio Fuerza Friccional Radio Inico

VOLTAJE ALTO Genera un excesivo calor, y si el calor se acumula, se puede hacer hervir a la solucin e incluso descomponer el gel y/o los solutos

VOLTAJE BAJO pobre separacin, por causa de la difusin por tiempo muy prolongado de la corrida electrofortica

Voltaje

La velocidad de avance es directamente proporcional al voltaje

Resistencia

La movilidad de las molculas es inversamente proporcional a la resistencia

Intensidad de Corriente

Se relaciona con la distancia recorrida por las molculas

Si no se controla la temperatura, la muestra se desnaturaliza El calor es directamente proporcional a V y R

El paso de la corriente elctrica produce calor

Contracationes libres hidratados migran hacia el ctodo Grupos cargados del soporte se ionizan en soluciones tampn

Movimiento relativo del solvente respecto al soporte slido Transporte de las molculas NEUTRAS hacia el ctodo

Fuerza inica del tampn Nivel adecuado

Garantizar: solubilidad (muestra) y capacidad amortiguado ra

La movilidad de las partculas cargadas es inversamente proporcional a la raz cuadrada de la fuerza inica

FUERZA INICA BAJA La velocidad de migracin aumenta reducindose la difusin. La zona de separacin es ms ancha y se aumenta la resolucin.

FUERZA INICA ALTA Incremento del desprendimiento de calor y la evaporacin.

Soporte Slido: Polmeros en forma de gel

Celulosa Almidn Poliacrilamida Agarosa Agarato de celulosa

Alto poder resolutivo Son los ms usuales y tiles para separar mezclas complejas

Solucin Electroltica

Gel

Muestra

Fuente de poder

Ctodo

Cubeta nodo

Geles:
Transparentes Insolubles en agua No inicos

Permite una buena visualizacin de las bandas durante un tiempo prolongado

Fcil y rpida preparacin

Sustancia Qumicamente inerte

Propiedades Uniformes y Estabilidad Mecnica

Variando la concentracin de polmeros, se puede modificar de manera controlada en el tamao del poro

Gradiente Creciente de Concentracin Gradiente Decreciente en el Tamao del Poro Criterios de Separacin :
Carga Neta y Tamao Molecular

Matriz de fibras polimricas en un medio lquido Retarda el paso de molculas grandes (20000 nuclotidos)

Se pueden separar cationes, aniones, protenas, macromolculas y sustancias no cargadas en forma simultnea Permite obtener espectros caractersticos de la separacin

Fuente de poder de alto voltaje (20 a 30 KV) Capilar de slica fundida de 75 100 cm de largo, 25 75 m de dimetro interno y 100 200 m de dimetro externo refrigerado por aire Electrodos de platino Carrousel de muestras/buffers

Desplazamiento de las molculas en un gradiente de pH

Molculas en regiones de pH menores a su pI migran hacia el ctodo Molculas en regiones de pH mayores a su pI migran hacia el nodo La molcula se detiene cuando el pH del medio coincida con su pI

Direccin 1: Isoelectroenfoque

Direccin 2: Electroforesis en poliacrilamida

Separa fragmentos de ADN en funcin de su tamao

Se busca un fragmento especfico dentro del patrn

Se puede resolver un homicidio o determinar distancias evolutivas