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VIRUS

La palabra virus viene del latn que significa fluido venenoso En la antigua China, antes de nuestra era, ocurrieron los primeros intentos para proteger a los individuos contra la viruela. Prctica conocida como variolacin que consiste en la inoculacin de individuos sanos con fluidos obtenidos de las vesculas eruptivas de las personas afectadas por casos de viruela. En 1721, Lady Montagu, Turqua introdujo la variolacin en Gran Bretaa. En 1798, Edward Jenner, la inoculacin con el virus de la vacuna (fluidos obtenidos de las lesiones de la viuela bovina), era capaz de prevenir la viruela en humanos. Finales del siglo XIX surgimiento del concepto de virus como entidad filtrable. En 1892, Iwanowski en Rusia, filtr el jugo de las hojas de la planta del tabaco afectada por la enfermedad del mosaico del tabaco con un filtro de Chamberland y observ que el filtrado produca la enfermedad en hojas sanas. Consider al agente infeccioso como una bacteria muy pequea. En l899, Beijerinck en Holanda, debido a que el microorganismo se difunda en una placa de gel agar pens que se trataba de algn material soluble y le llam contagium vivum fluidum.

El primer microorganismo filtrable aislado de animales fue el virus de la fiebre aftosa descubierto por Loffler y Fronsh en 1898.

Siglos XVII y XVIII ocurrieron en Europa severas epidemias de viruela.

Varicela

Sarampin

En 1901 Reed y Carroll aislaron el virus de la fiebre amarilla. En 1904 Borrel descubri el virus de la fiebre aviar. Mejores tcnicas, se descubrieron virus de humano, animales y plantas. Cultivo de virus en cajas petri con clulas durante varios das Tincin para poner de manifiesto las clulas vivas, mientras que las muertas (a causa de la infeccin viral) permanecen incoloras y se manifiestan como placas desteidas. Twort en 1915 y DHerrelle en 1917 descubrieron el bacterifago En 1925 Parker y Nye lograron reproducir el virus de la vacuna en cultivos de tejidos En 1931 Woodruff y Goodpasture demostraron que los embriones de pollo eran tiles para cultivar virus. Burnet primera edad de oro de la virologa.

En 1933 Elfrod invent un mtodo para graduar el tamao de poro de las membranas de colodin, pudo lograr determinar las dimensiones de un virus.

En 1939 fotografiaron un virus usando tcnicas de microscopia electrnica, (ME).

Un avance importante fue el desarrollo del mtodo para cultivar clulas en monocapa realizado por Dulbecco y Vogt en 1952. Burnet segunda edad de oro de la virologa. Cultivos microccos bacterianos observaron que despus de incubaciones prolongadas mostraban la ausencia de bacterias y la presencia de minsculos granos cristalinos.. una gota de este filtrado es capaz de causar lisis en un nuevo cultivo.

Virus Fiebre aftosa.

Animales de pezua partida (vesculas)

Flavivirus

Fiebre amarilla

Twort en 1915 , DHerrelle en 1917

Otro avance importante fue el descubrimiento de los antibiticos en 1940 y 1950 ya que los cultivos de virus siempre estaban contaminados con bacterias y hongos y era difcil estudiarlos.

La gentica de los virus se inici con el aislamiento del ARN en su forma activa del virus del mosaico del tabaco realizado en 1956 por Gierer y Schramm. Esto demostr que la informacin gentica de un virus est codificada en cidos nucleicos, que ya haban demostrado Hersey y Chase en 1952 para el bacteriofago.

Una caracterstica bsica de los virus es su incapacidad de desarrollarse fuera de una clula viva, no puede cultivarse en medios artificiales.

Un virus slo se reproduce en clulas vivas y para multiplicarlo se deben infectar animales, susceptibles, embriones de pollo o cultivos de clulas y tejidos.

Concepto de vida
Caractersticas que definen la presencia de vida:
Movimiento Temperatura Cicatrizacin Crecimiento Reproduccin

Poseer informacin gentica (informacin para producir protenas estructurales y funcionales de la clula.

1960, Reinos:
Monera (procariotes) Protista (organismos eucariotes unicelulares) Fungi Plantae Animalia

Similitud presencia de la unidad estructural funcional denominada clula, capaz de asimilar y expulsar gran variedad de sustancias para mantener su integridad y reproducirse

Virus Def.:

Genes empaquetados en complejos proteicos, capaces de infectar clulas y que slo dentro de ellas pueden reproducirse.
Una partcula reproducirse. viral (virn) no puede

Los virus estn constituidos por el mismo material que las clulas, ya que es de ellas de donde se forman

Virin (extracelular), no parece un ser vivo, ms bien equivaldra a un complejo de protena y c. Nucleico derivado de la clula pero sin vida propia. En el momento que el virus entra en contacto con la clula susceptible parece cobrar vida y se comporta como un parsito, para vivir a sus expensas, toma el control:
Sntesis de protenas Produccin de cidos nuclicos

1. Histricamente representan un problema grave para la salud.


En 1918 una pandemia de gripe (influenza) mat a ms de 30 millones de personas. Casos recientes de enfermedades altamente contagiosas:
SIDA, virus hemorrgicos (Marburg y bola), SARS (sndrome respiratorio agudo) Resurgimiento de sarampin, dengue o influenza.

En 1999 epidemia en Europa por virus de la influenza ocasion la hospitalizacin de miles de personas y la muerte de varias decenas. Dos aos antes, en Hong Kong se tuvieron que sacrificar case diez millones de pollos por influenza aviar

2. El surgimiento y resurgimiento de virus se debe en parte a su bajo nivel de complejidad, pequeos cambios en su informacin gentica ocasiona grandes cambios en su estructura y funcionamiento general, que les permite evadir la respuesta inmune de los organismos. Esta variabilidad se convierta en una herramienta muy til en el estudio de la evolucin a nivel molecular. 3. Evolucin de la virologa llevo a que los virus se utilizaran como los primeros modelos para el estudio del funcionamiento del genoma. 4. Colaboran en el mantenimiento del equilibrio ecolgico, ya que no slo producen la disminucin de poblaciones animales o vegetales en un determinado hbitat, sirven como mediadores en el intercambio gentico entre individuos de una misma o diferentes especies

CONCEPTOS BSICOS

Bacteriofago: un virus que infecta cluls procariticas

Virin: partcula vrica completa; cido nucleico rodeado de una cpside proteica y en algunos casos de otro material adicional.
Virus temperado: virus cuyo genoma es capaz de replicarse con el hospedador sin causar muerte celular en un estado denominado lisogenia.

Virus virulento: un virus que lisa o mata la clula hospedera tras la infeccin; un virus no temperado.

Priones: Protenas

FORMA Y TAMAO DE LOS VIRUS


El tamao y la forma fue definida con el microscopio electrnico en 1939, ya que el microscopio de luz slo era capaz de detectar bacterias que tuvieran mas de 0.25 mm y los virus son ms pequeos.

ARQUITECTURA DE LOS VIRUS


Virus Envueltos: poseen una envoltura externa que contiene lpidos proveniente de las membranas celulares Virus no envueltos: tienden a ser ms resistentes al calor y a detergentes Los virus contienen protenas estructurales; se encuentran formando parte del virin, Protenas no estructurales; son las protenas necesarias para la replicacin viral, no forman parte del virin. Hay protenas que se encuentran formando parte de la cubierta del virin la cual se llama Cpside y stas protenas se autoensamblan y forman lo que se llama Capsomero. Las funciones que poseen la cpside son: facilitar la entrada del virus a la clula hospedera y proteger el cido nucleico. Al complejo de protenas protectoras y al cido nucleico viral se le llama Nucleocpside. Las cuales hacen que los virus se dividan en 2 grupos de acuerdo a la simetra de la nucleocpside.

ESTRUCTURA DE LA PARTICULA VIRAL


Subunidad: cadena polipeptidica plegada Unidad estructural (protmero, unidad asimtrica)

unidad formada por una o ms subunidades que formarn la


nucleocpside o la cpside. Cpside (cubierta)

estructura proteica que rodea al genoma


Nucleocpside (core) proteinas -cido nucleico ensamblado dentro del virin.

Envoltura (membrana viral)


capa lipdica derivada de la clula hospedadora Virin partcula viral infecciosa

ESTRUCTURA DE LOS VIRUS


1. 2. 3. 4. Helicoidal Icosadricos Con envoltura Complejos

Simetra helicoidal: las protenas de la cpside estn arregladas en forma de escalera y el material gentico es el relleno de esa escalera. La cpside helicoidal est contenida dentro de una envoltura lipoproteca que proviene de las membranas de las clulas.

Virus del mosaico del tabaco 25 X 300 nm

SIMETRIA HELICOIDAL

Simetra icosahdrica: (cbica), es poliedro regular con 20 caras que son triangulares equilteros y 12 vrtices. Los capsmeros pueden tener varios polipptidos .

SIMETRIA ICOSAEDRICA Poliovirus

Plegamiento de las protenas que forman una cara del icosaedro

ADENOVIRUS
Simetria icosadrica

Envoltura
Es una estructura membranosa flexible Generalmente proceden de membranas nucleares o plasmticas de la clula husped; por tanto, sus lpidos e hidratos de carbono son constituyentes normales del hesped.

Estructura interna ovoide o rectangular. DNA bicatenario

Otros virus con estructura compleja son los bacterifagos

SIMETRIA COMPLEJA: Virus Vaccinia

Algunos bacterifagos pueden ser ms complejos que los poxvirus. Fagos T2, T4, T6 que infectan a E. coli Cabeza que asemeja un icosaedro irregular y contiene genoma de DNA. La cola est formada por un collar que la une a la cabeza. Otros fagos (T1,T5 y lambda) vaina que carecen de placa basal y terminan en fibras del tallo rudimentarias.
Cabeza

Vaina Fibras del tallo

CONFORMACIN DE GENOMAS

Los genomas virales pueden tener varias conformaciones:


pueden ser de doble cadena como las formas de vida superior pueden ser de cadena sencilla pueden ser lineales, circulares (Fagos y Papiloma), continuos o segmentados pueden ser de ARN o ADN

TAMAO DE GENOMAS VIRALES 1. El tamao puede variar enormemente, las clulas humanas tienen ms de 60,000 genes; las bacterias como E. coli tienen 4000 genes; el virus ms grande (Poxvirus) tiene 200 genes y el virus ms pequeo slo 3 4 genes.

2. En general los virus de ARN tienen genomas ms pequeos y codifican para pocas protenas en comparacin con los virus de ADN.
3. Los genomas de ARN ms frgiles que los de ADN y sta caracterstica limita su tamao.

CLASIFICACIN DE LOS VIRUS


Comit Internacional de Taxonoma de Virus Se toman en cuenta varios criterios principales: 1. El tipo de cido nucleico (ADN o ARN) 2. El nmero de cadenas de cido nucleico y su construccin fsica (nica, Doble, lineal, circular, circular con ruptura (hepatitis B) y segmentado) 3. Polaridad del genoma (ARN positivo o ARN negativo) 4. La simetra de la nucleocpside 5. Presencia o ausencia de una envoltura lipdica

A partir de estos criterios los virus estn agrupados en: 3 rdenes ( virales) Mononegavirales 56 familias (viridae) Paramixoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae 9 subfamilias (virinae) Chorodopoxvirinae 233 gneros (virus) 1550 especies (virus)

NOMENCLATURA DE VIRUS
Algunos virus son llamados de acuerdo al tipo de enfermedad que causan (poxvirus y herpesvirus). Otros nombres de familias estn basados en acrnimos, ejemplo papovavirus (papiloma= polioma, agente vacuolizante) y picornavirus (pico,pequeo, arn; cido ribonucleico). Otros virus estn basados en caractersticas morfolgicas del virin (coronavirus, los cuales tienen un halo o corona de espculas), ejemplo Coxsakie y Marburg.

Algunos son llamados como sus descubridores (Virus de Epstein Barr).


Segn el origen de hallazgo

CULTIVOS Y ENSAYO DE LOS VIRUS


Los tejidos de animales normales (piel, rin, hgado) o embriones completos son usados como tejidos celulares primarios. Las clulas de los tejidos son preparadas para cultivo, y lo que se hace es ponerles proteasas que destruyen las protenas en las uniones que interconectan a las clulas. Despus las clulas se colocan en placas para tratar de hacer una monocapa. Los medios de cultivos que usan las clulas son muy complejos y algunos incluyen aminocidos y vitaminas, sales y glucosa, tambin es necesario aadir factores de crecimiento y stos se encuentran en los sueros sanguneos. Muchos estudios se han hecho en cultivos primarios de clulas epiteliales, en general, las superficies externa e interna de tejidos y rganos estn cubiertas por una capa de clulas epiteliales llamada epitelio.

Estas clulas estn altamente diferenciadas, por ejemplo, clulas de rin, hgado, pncreas, intestino, cervix, etc.

Los cultivos primarios, son cultivos que no duran mucho tiempo ya que slo son tiles para poco pases celulares y posteriormente se mueren. Uno de los avances ms importantes en la virologa ha sido el descubrimiento de cultivos de clulas inmortalizadas (cultivo secundario). Las clulas de dichos cultivos han sufrido algn dao gentico, como las clulas tumorales y les ha dado la capacidad de replicarse indefinidamente. Los cambios genticos que sufren las clulas y que les permite crecer indefinidamente se conoce como TRANSFORMACIN ONCOGNICA y a las clulas se les llama clulas Transformadas y los cultivos derivados de estas clulas se les llama lnea celular. La capacidad de las clulas de ser transformadas vara dependiendo de la especie animal de las cuales se origina. Por ejemplo, las clulas de pollo normales rara vez se transforman y mueren unos pocos pases despus.

En humanos, slo las clulas tumorales crecen indefinidamente. Por ejemplo, las clulas He-La fueron la primer lnea celular humano que fue crecida en cultivo. Esta lnea celular fue originalmente obtenida en 1952 de un tumor maligno (carcinoma) de cervix uterino.

A diferencia de las lneas celulares humanas y de pollo, los cultivos de clulas adherentes embrinicas de roedores, rutinariamente dan origen a lneas celulares.

Las clulas de roedores son sembradas en placas y crecen bien; despus de cierto nmero de pases pierden su crecimiento potencial y el cultivo se ve en crisis; en este perodo la mayora de las clulas se mueren y las pocas clulas vivas originan variantes espontneamente y el cultivo vuelve a estar vivo pero con clulas ya transformadas. .

CULTIVO DE CLULAS

USO DE ANIMALES DE LABORATORIO, EMBRIONES DE POLLO, CULTIVOS CELULARES Y CULTIVOS DE TEJIDOS.

El uso de stas herramientas es necesario para el aislamiento e identificacin de virus, conservacin de cultivos y para produccin de vacunas. Los animales son los hospederos ms complejos, ya que estructuralmente estn integrados por tejidos y rganos muy especializados. El embrin de pollo como los animales, posee tejidos y rganos muy diferenciados, pero proporciona sistemas muy reproducibles para el estudio de los virus.

Los cultivos celulares acercan todava ms a las manifestaciones de la infeccin vrica al nivel celular, la caracterstica fundamental y nica del cultivo de clulas es su aplicacin al estudio analtico de los mecanismos biolgicos.

CULTIVO DE VIRUS EN ANIMALES

La inoculacin en animales susceptibles fue el primer procedimiento usado para el cultivo de virus.
Este mtodo ha sustituido al cultivo de tejidos y al cultivo de embriones de pollo, tiene la ventaja de que permite estudios clnicos, sintomatolgicos de la enfermedad. Los animales tambin se emplean para la produccin de sueros antivircos y adems pueden ayudar al diagnstico.

Para elegir a los animales del laboratorio debe tenerse en cuenta: Especie Edad Gentica Estado nutricional
Los animales deben tratarse con humanidad y dignidad
deben de estar en departamentos ventilados, cmodos e higinicos

alimentarlos con raciones adecuadas


aislar a los animales infectados de los sanos el personales debe tomar precauciones para no contagiarse evitar lesionar a los animales anestesiarlos antes de inocular por va cerebral.

El hospedero natural es ideal para la multiplicacin de los virus, pero esto no puede hacerse en la prctica con el hombre o los animales grandes, ya que existen algunos inconvenientes: 1. El costo de los animales 2. La limitacin del espacio disponible para jaulas y material 3. La infeccin cruzada entre animales 4. La posible infeccin humana 5. La inmunidad producida por infecciones inaparente anterior a la inoculacin del virus que investigamos.

Anlsis de Virus

Clasificacin de Bacterifagos
Dependen de la morfologa del fago y de las caractersticas de su cido nucleico (DNA o RNA). La mayora de los bacterifagos tiene DNA bicatenario.

Gpos. Morfolgicos:

1. Fagos icosahdricos sin cola 2. Virus con cola contrctiles 3. Virus con colas no contrctiles 4. Fagos filamentosos

La relacin que existe entre las bacterias y los fagos que las infectan puede ser de 2 tipo: Relacin de tipo ltico Relacin de tipo lisognica

Ciclo Ltico
Es el ciclo vital de un fago que culmina con el estallido de la clula husped y la liberacin de viriones Fagos virulentos

Experimento de multiplicacin en un solo paso.


Para conocer el no. de fagos que se pueden multiplicar en un tiempo determinado por cada clula infectada.

1939, Delbruck y Ellis . Inicio de investigacin moderna de bacterifagos.


Seguir los acontecimientos que durante la multiplicacin de fagos. La multiplicacin est sincronizada.

la

tienen

Cultivo E.coli

Bacterifagos

Unin a clulas husped Para que las partculas liberadas durante la lsis no infecten inmediatamente otras clulas.

Dilucin del cultivo

Se determina a diversos intervalos el nmero de fagos liberados


Fago T2 infecta a E. coli 37C / 30 minutos 100 viriones por clula Recuento de calvas

Fases del ciclo Ltico


Adsorcin

Inyeccin

Lisis

Maduracin

Multiplicacin vegetativa

1. Adsorcin
No unin sobre la superficie de la clula husped al azar, se fijan a receptores especficos. Receptores: lipopolisacridos y protenas de la pared, c. Teicoicos, flagelos y pili. La adsorcin del fago est relacionada con diversas estructuras del tallo

Parece que la unin se debe a interacciones electrostticas y se ve influida por el pH y la presencia de iones como Mg 2+ y Ca 2+

12 anillos 24 anillos

Acoplamiento

Fijacin

Contraccin Penetracin
Inyeccin

Sntesis de los c. Nucleicos y protenas del fago


mRNA temprano, antes de que se sintetice el DNA del fago.
Dirigen sntesis de factores proteicos y enzimas necesarias para tomar el control del husped y fabricar c. Nucleicos virales. Algunos degradan el DNA husped, detienen expresin gnica y sirven como materia prima (nucletidos) para sntesis viral.

mRNA Tardo. Ensamblaje de virones


Se produce tras la replicacin del DNA Dirige la sntesis de 3 protenas: Protenas estructurales del fago Protenas que ayudan al ensamblaje Protenas que participan en la lsis celular y liberacin de fagos

Sntesis de los c. Nucleicos y protenas del fago

0 min

3 min Sntesis mRNA temprano, Degradacin del DNA husped

5 min. Sntesis mRNA tardo

Inyeccin Adsorcin

Fases del ciclo

Lisis bacteriana

Bacterfagos atemperados y lisogenia


Muchos fagos DNA son capaces de establecer una relacin otro tipo con su husped: Tras la absorcin y penetracin, el genoma viral no se hace con el control del husped, ni lo destruye, ni lo multiplica inmediatamente. El genoma viral permanece en el interior de la clula y se replica con el genoma bacteriano se genera un clon de clulas infectadas que puede producir fagos y lisarse en ciertas circunstancias Esta relacin se conoce como lisogenia.

Los fagos que pueden establecer una relacin lisognica se conocen como fagos atemperados. La forma latente del genoma viral que permanece en el interior de la clula sin destruirla se conoce como profago (puede estar integrado o de forma independiente al genoma bacteriano). Induccin, proceso por el que se inicia la multiplicacin de fagos atemperados; este proceso conduce a la destruccin (ciclo ltico)

El ciclo lisognico es uno de los varios tipos de ciclos en los que la clula husped no es destruida , pero un sitio en el cromosoma es ocupado por el virus y utilizado para la replicacin de los genes virales. La infeccin viral propiamente dicha entra en una fase de latencia durante este proceso

Virus en Clulas Eucariotas

Cambio en estructura de la cpside

Fusin

Endocitosis: Vesculas cubiertas

1. Decapsidacin
2. DNA transcrito por una RNA pol 3. (se forman RNAm para sntesis de protenas para sntesis de DNA viral) 4. DNA se circulariza 5. Replicacin en el ncleo de DNA viral

6. La sntesis de DNA husped se lentifica

Se incorpora a la membrana protenas codif. Por virus

La nucelocpside se libera al tiempo que se forma la envoltura por gemacin de la membrana

Fil. Actina colaboran en la liberacin de viriones (muchos virus alteran los microfilamentos de actina del citoesq. De la celula husped, estos filamentos tambin pueden propulsar el virus a travs de la membrana plasmtica y no hay dao a la clula)

Son dif. los mecanismos (desnudos vs. Envoltura).


Desnudos por lsis de cel. Husped, mientras que la formacin de envolturas y liberacin son procesos recurrentes.

Infecciones citocidas y dao celular


Se conocen 7 posibles mecanismos de dao a la clula husped

Consideraciones:
El cultivo de virus en un hospedador requiere, con frecuencia de pases sucesivos, llamados a veces ciegos o de fe, hasta que aparecen los primeros sntomas de la infeccin. La adaptacin del virus puede ir acompaada de una modificacin de las caractersticas de los virus, incluso perder su patogenicidad en el hospedero natural. Algunos virus son propensos a la variacin cuando se inoculan en nuevos hospederos. Las variantes virales generalmente son irreversibles aunque vuelvan a inocularse en el hospedero natural.

No inoculado con fagos

Inoculado (se observan placas lticas)

Clulas no inoculadas

Clulas inoculadas con paramixovirus

Experimentos de Hershey y Chase (1952)


Importantes para entender que la nica parte del fago que se transfiere a la clula hesped es su material genmico

Baltimore

Virus del mosaico del Tabaco

CONCEPTOS BSICOS
Bacteriofago: un virus que infecta cluls procariticas Retrovirus: un virus cuyo ARN genmico tiene como intermediarios ADN en su ciclo replicativo Transcripcin inversa: proceso de copiar la informacin codificada en ARN y pasarla a ADN. Virin: partcula vrica completa; cido nucleico rodeado de una cpside proteica y en algunos casos de otro material adicional. Virus temperado: virus cuyo genoma es capaz de replicarse con el hospedador sin causar muerte celular en un estado denominado lisogenia. Virus virulento: un virus que lisa o mata la clula hospedera tras la infeccin; un virus no temperado. Viroides: secuencias de RNA que se replican dentro de la clula Virusoides: secuencias de RNA Priones: Protenas

Esta lnea celular fue originalmente obtenida en 1952 de un tomor maligno (carcinoma) de crevix uterino.

A diferencia de las lneas celulares humanas y de pollo, los cultivos de clulas adherentes embrinicas de roedores, rutinariamente dan origen a lneas celulares.

Las clulas de roedores son sembradas en placas y crecen bien; despus de cierto nmero de pases pierden su crecimiento potencial y el cultivo se ve en crisis; en este perodo la mayora de las clulas se mueren y las pocas clulas vivas originan variantes espontneamente y el cultivo vuelve a estar vivo pero con clulas ya transformadas. Todas las clulas (lneas celulares de roedores y clulas provenientes de tumores), a menudo tienen cromosomas anormales y el nmero de sus cromosomas es ms grande que el de clulas normales de las que se originaron. A stas clulas se les llama Aneuploides (tienen un nmero inapropiado de cromosomas) y son por lo tanto mutantes.