CITOLOGIA Y ANATOMIA PATOLOGICA

-FERNANDEZ RIQUELME NATAL -VERA RODDRIGUEZ MARIBEL -GOMEZ HERRERA JUNIOR

CITODIAGNOSTICO
El citodiagnstico, tambin llamado examen citolgico o simplemente citologa, es el diagnstico morfolgico basado en los caracteres microscpicos de clulas y componentes extracelulares, desprendidos de los rganos espontneamente u obtenidos por procedimientos que, en general, son menos invasivos que la biopsia.

Objetivos del Citodiagnstico

1) Colaboracin en el diagnstico y tipificacin de neoplasias malignas 2) Diagnstico especfico de algunas lesiones benignas, por ejemplo: tumores benignos, hiperplasias, etc 3) Eleccin de pacientes que deben ser estudiados ms profundamente en grupos de alto riesgo para un tipo especfico de cncer. 4) En hematologa, examen cualitativo y cuantitativo de los elementos figurados de la sangre perifrica (hemograma) y de la mdula sea (mielograma).

Mtodos de Obtencin de la Muestra

Muestra de mucosa crvico-vaginal, por raspado con esptula de madera. Este es el examen citolgico ms usado. Se aplica en programas de deteccin de cncer del cuello uterino, examinando mujeres asintomticas ("examen de Papanicolaou"). Muestra de lquido de una serosa aspirado con aguja, en caso de derrame (acumulacin anormal de lquido) peritoneal, pleural o pericrdico.

Se utiliza para el diagnstico diferencial entre inflamacin y tumor maligno. Los tumores malignos generalmente son metstasis de carcinoma en la serosa. Muestra de esputo, espontneo o inducido, o de lavado broncoalveolar.
Se utiliza para detectar carcinoma bronquial o bien infecciones especficas en pacientes inmunodeprimidos Muestra de orina obtenida por miccin espontnea. Se usa como mtodo complementario para el dianstico de cncer de la vejiga, en particular el tipo plano, o para el control despus del tratamiento.

Citologa por aspiracin con aguja fina

Se introduce en la lesin una aguja ms fina que las empleadas para biopsia. Se pueden distinguir dos tipos de muestras por puncin aspirativa con aguja fina: a) Puncin directa de lesiones superficiales palpables.

Generalmente la practica un mdico en el consultorio con una aguja fina corriente. Se usa frecuentemente en casos de quistes y ndulos mamarios o tiroideos, para el diagnstico diferencial entre lesin benigna y cncer. b) Puncin de lesiones profundas no palpables, dirigida por imgenes.
Es realizada por mdico radilogo en paciente hospitalizado, utilizando agujas finas largas, de diseos especiales. La puncin se practica bajo control de imgenes ecogrficas o de tomografa computada.

Preparacin y Examen de la Muestra

El material obtenido por raspado, cepillado o puncin aspirativa se extiende sobre un portaobjeto en forma de una delgada capa y se fija inmediatamente en alcohol de 96. Los lquidos (orina, ascitis, material de lavado) se fijan con un volumen igual de alcohol de 50%; a continuacin se centrifugan. Parte del sedimento se extiende sobre un portaobjeto. Los frotis o extendidos as preparados se colorean con el mtodo de Papanicolaou o con hematoxilina-eosina. En hematologa los frotis se secan al aire y se tien el mtodo de May-Grnwald- Giemsa y se examinan al microscopio.En los laboratorios que procesan muchos exmenes, un citotecnlogo hace un examen preliminar y marca las zonas del extendido que contienen clulas sospechosas (screening) Se recomienda incluir en parafina los grumos de material o sedimento sobrantes, para hacer cortes histolgicos que completan el examen citolgico ("blocks celulares").

 Para muestras de mucosa crvico-vaginal, por raspado con esptula de madera, se utiliza la coloracin de Papanicolau

COLORACIN DE PAPANICOLAOU
El Mtodo de Tincin segn Papanicolaou es de gran nobleza y ha tolerado infinidad de variaciones resultantes en productos de buena calidad, aptos para la observacin microscpica minuciosa que requiere la citologa. Es un mtodo de coloracin muy refinado, cientficamente probado y comprobado que requiere en su frmula original una gran cantidad de pasos y da un producto de absoluta sutileza de colores y transparencia.

 Mtodo Original de Coloracin de Papanicolaou: 1. Alcohol etlico 96 15 Seg. 2. Alcohol etlico 70 15 Seg. 3. Alcohol etlico 50 15 Seg. 4. Agua Destilada 15 Seg. 5. Hematoxilina de Harris 6 Min. 6. Agua destilada 10 inmersiones. 7. Sol cido clorhdrico 0,5% 1 - 2 inmersiones rpidas. 8. Agua destilada 15 Seg. 9. Sol Amonaco 1,5% en ol 70 La extensin vira al azul. 10. Alcohol etlico 50 15 Seg. 11. Alcohol etlico 70 15 Seg. 12. Alcohol etlico 96 15 Seg. 13. O G 6 (orange) 2 Min. 14. Alcohol etlico 96 10 inmersiones. 15. Alcohol etlico 96 10 inmersiones. 16. EA 50 (36) Eosina amarillenta) 3 Min. (Usar EA 65 para orinas y esputos) 17. Alcohol etlico 96 (10 inmersiones) 18. Alcohol etlico 100 (10 inmersiones) 19. Xilol (10 inmersiones) 20. Montaje: Con Blsamo de Canad y cubrir con cubreobjetos de vidrio de la medida adecuada para cobertura total de la muestra.

COLORANTES
Hematoxilina de Harris Es un colorante nuclear; tie la membrana nuclear y la cromatina de color azul oscuro a rojizo purpreo y el nucleolo de color rojo, rosado o naranja. Con otras soluciones de Hematoxilina se puede obtener resultados similares. Se obtiene buenos resultados cuando se ajustan bien los tiempos de coloracin. La ventaja de la Hematoxilina de Harris es que resulta fcil de preparar y envejece (madura) con rapidez por lo cual se puede utilizar en 24 horas. Hematoxilina 5gr. Aluminio de amonio 100gr. Agua destilada 1.000ml xido de mercurio 2,5gr

 ORANGE G (OG6) El orange G y la solucin EA (eosina amarillenta) se utilizan para teir los citoplasmas. Ambas son soluciones alcohlicas y el alcohol hace ms transparentes a los citoplasmas. Tien por saturacin. Solucin madre Es una solucin alcohlica al 95% para el colorante Orange G. El Orange G se presenta en polvo y no se diluye inicialmente en alcohol. Se prepara primero una solucin acuosa y luego se diluye. Se prepara una solucin al 10% de Orange G en agua destilada y se remueve hasta que se disuelva el polvo. Conservar en lugar fro y oscuro. Solucin acuosa o madre 50ml Alcohol etlico 96 950ml cido fosfotungstco 0,15gr Conservar tapado en lugar fresco y oscuro.

 EA 36 Solucin acuosa Verde claro S T 2% amarillento Marrn Bismarck y al 10% Almacenar en lugar fro y oscuro 24 a 48 horas. Para preparar Solucin EA 36: Solucin reserva Verde claro S T al 0,1% 450ml Solucin reserva marrn Bismarck al 0,5% 100ml Solucin de Eosina al 0,5% 450ml cido fosfotngstico 2gr Solucin saturada de carbonato de litio 10 gotas Mezclar bien tapar y almacenarlo en frasco oscuro. Filtrar antes de utilizar. Conservacin de lquidos

PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS
LIQUIDO CEFALORAQUIDEO 1. Procesar en el laboratorio inmediatamente, de lo contrario, almacenarlo a temperatura ambiente (mximo 24 h). 2. Centrifugar todas las muestras >1 ml (1500 g / 15 min) y realizar los siguientes pasos en cabina de flujo laminar. 3. Dejar 1 ml de LCR junto con el sedimento y depositar el resto de sobrenadante en otro tubo estril (para una posterior deteccin de antgenos). 4. Resuspender cuidadosamente el sedimento con la ayuda de un vrtex. 5. Dispensar una gota del sedimento sobre un portaobjetos para su examen microscpico directo: Tinta china y/o fresco

 6. Inocular el resto del sedimento en 2 tubos de SDA. 7. Incubar un tubo a 35 C y otro a temperatura ambiente (30 das). 8. Si se sospecha meningitis por C. neoformans, realizar la deteccin de Ag criptoccico en el sobrenadante 9. Vigilar los cultivos cada 48 h. 10.Si se detectase crecimiento fngico, proceder a la identificacin del microorganismo y al estudio de su sensibilidad

Recuento de clulas
Se realiza sin incluir el lquido. Nmero normal de linfocitos en un adulto: 0 a 5 por l. En los nios, vara segn la edad, disminuyendo al aumentar sta; el nmero es ms elevado durante el primer ao de vida. El recuento del nmero de leucocitos debe realizarse de forma paralela a la determinacin de las protenas en el LCR. No se recomiendan los contadores electrnicos, porque cuentan todo tipo de clulas, entre ellas, por ejemplo, los macrfagos y las clulas tumorales, lo que produce un desajuste con la realidad dependiendo del tipo de clulas que contenga el lquido.

Recuento diferencial
Se ha descrito numerosos mtodos para concentrar las clulas, entre ellos: los de centrifugacin, sedimentacin y filtracin. La centrifugacin tiene la ventaja de que es un mtodo de rutina de laboratorio y no precisa equipos especiales. Hay que tener en cuenta que la centrifugacin siempre produce, por efecto mecnico, un dao celular. Las clulas que estn en el centro del frotis suelen ser ms pequeas, con menos citoplasma y ncleo ms denso, que las que se sitan en zonas perifricas. La filtracin consigue conservar las clulas en buen estado, pero tiene el inconveniente de que se requiere gran cantidad de tiempo para su realizacin. Algunos mtodos de sedimentacin proporcionan unos frotis adecuados, pero tienen el inconveniente de que se necesita mucho tiempo para el procesamiento y, por otra parte, la ditesis no suele ser ntida ni limpia.

 Frmula Se realiza sobre un frotis teido mediante tcnicas de rutina. Valores normales Linfocitos: 60%. Monocitos: 30%. Polimorfonucleares: 2%. Otro tipo de clulas son infrecuentes en condiciones normales.

OTROS LQUIDOS ORGNICOS (PLEURAL, PERITONEAL, PERICRDICO, SINOVIAL)

1. Procesar en el laboratorio inmediatamente, de lo contrario, almacenarlo a temperatura ambiente (mximo 24 h). 2. Centrifugar todas las muestras >1 ml (1.500 g / 15 min) y realizar los siguientes pasos en cabina de flujo laminar. 3. Dejar 1 ml de lquido junto con el sedimento y depositar el resto del sobrenadante en otro tubo estril. 4. Resuspender cuidadosamente el sedimento (aspirndolo y expulsndolo con una pipeta o con la ayuda de un vrtex).

 5. Dispensar una gota del sedimento resuspendido sobre un portaobjetos para su examen microscpico directo: KOH, blanco de calcofor 6. Inocular el resto del sedimento en 2 tubos de SDA. 7. I n c u b a r u n t u b o a 3 5 C y o t r o a temperatura ambiente (30 das). 8. Vigilar los cultivos cada 48 h. 9. Si se detectase crecimiento fngico, proceder a la identificacin del microorganismo y al estudio de su sensibilidad

CITOPATOLOGA DEL ESPUTO

Procesado de la muestra: Hacer la identificacin y registro Examen macroscpico: cantidad, aspecto: consistencia, color, olor, Adjetivos para descripcin: con burbujas/ amarillos con mal olor/ mucosos/ purulentos/ hemoptoicos/ blanquecinos/ gelatinoso/ mucopurulentos/ Extensin Fijacin Tincin Citologa normal de esputos:
Clulas epiteliales Clulas sanguneas (no epiteliales) Material no celular Contaminantes

ANATOMIA PATOLOGICA
La anatoma patolgica es la especialidad mdica que se encarga del estudio de las lesiones y alteraciones celulares de los tejidos y rganos, de sus consecuencias estructurales y funcionales, y por tanto de su repercusin en el organismo. Su moderno fundador es Giovanni Battista Morgagni de Forl

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS PARA ANATOMA PATOLGICA

Obtencin y procesamiento de muestras tisulares. 1. Realizar la biopsia aplicando las mximas medidas de asepsia. 2. Introducir el tejido biopsiado en un recipiente estril con tapn de rosca y enviar inmediatamente al laboratorio de Microbiologa. 3. Si la muestra es pequea, aadir varias gotas de solucin salina estril para mantener la humedad. 4. Trocear la muestra en pequeos pedazos con la ayuda de un bistur estril.

 5. Realizar varias improntas de la muestra sobre un portaobjetos para su examen microscpico directo: blanco de calcoflor, KOH, tincin de plata metenamina 6. Inocular la muestra troceada en dos tubos de SDA, sumergiendo ligeramente la misma en la superficie del agar. 7. Incubar un tubo a 35 C y otro a temperatura ambiente (30 das). 8. Vigilar los cultivos cada 48 h. 9. Si se detectase crecimiento fngico, proceder a la identificacin del microorganismo y al estudio de su sensibilidad

PASOS
Obtencin del tejido Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas: Biopsia Autopsia Fijacin En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem. Unos de los fijadores mas usado es el Formol al 10% (Formaldehido) formol Inclusin Se debe lavar el tejido para quitar exceso de fijador, luego se deshidrata y se pasa por un lquido intermediario que es miscible con la parafina. Infiltracin En este paso la muestra se coloca en parafina liquida, de manera que se impregne con ella. Inclusin Aqu se forman bloques de parafina y dentro de estos bloques estn las muestras a estudiar. Se deja enfriar para que adquiera dureza.

 Tallado Previo al corte, se debe tallar el bloque para el obtener secciones adecuadas en el micrtomo. El micrtomo es un instrumento que permite obtener cortes muy delgados de muestra (5m).micrtomo Corte Los cortes se obtienen seriados, uno tras otro, obteniendo una cinta. Luego se echan a un bao de flotacin para que se estiren y se rescatan con un portaobjetos, que luego se calienta para evaporar el agua y que los cortes queden adheridos. Tincin Las placas se tien con la tcnica de hematoxilina/eosina u otra especial. La muestra debe desparafinarse y pasar por una serie de soluciones. Finalmente, las muestras se deshidratan y se montan para ser vistas al microscopio. Observacin. El patlogo observa la muestra al microscopio y consigna el diagnstico.

 Los objetivos del examen microscpico son: Describir exactamente el tipo de material remitido para el estudio, por eso la pieza se pesa, mide, describe lesiones que contiene, morfologa, aspecto, coloracin y en casos de piezas quirrgicas, sus relaciones con estructuras vecinas. seleccionar las reas donde se har el estudio microscpico, a esto se le llama tallado o muestreo del material y lo hace generalmente el patlogo ayudado por el tcnico.

Principios generales de la fijacin.

Los principios generales: No existe un mtodo universal de fijacin, por lo que un agente fijador para un tejido no tiene porque ser adecuado para otro. No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, porque fijacin no equivale a conservacin tisular. Un defecto en la fijacin nunca puede ser corregido. Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con grandes defectos de fijacin.

GRACIAS POR SU ATENCION