CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que son catalizadas por las enzimas. El estudio de la cintica de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo cataltico, su papel en el metabolismo, cmo es controlada su actividad en la clula y cmo puede ser inhibida su actividad por frmacos o venenos o potenciada por otro tipo de molculas.

ENZIMAS

Las enzimas en biologa sirven para acelerar los procesos. Son sustancias de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas siempre que sea termodinmicamente posible.

En estas reacciones, las molculas sobre las que acta la enzima en el comienzo del proceso son llamadas sustratos, y estas los convierten en diferentes molculas, los productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran en tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas.

PROPIEDADES DE LAS
ENZIMAS
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN De 106 to 1012 veces vs sin enzima. An ms rpido que los catalizadores qumicos. CONDICIONES DE REACCIN Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal CAPACIDAD DE REGULACIN Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN Interaccin estereoespecfica con el sustrato No hay productos colaterales

Las enzimas son protenas con la capacidad de manipular otras molculas, denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al centro cataltico de la enzima que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie de pasos denominados mecanismo enzimtico. Algunas enzimas pueden unir varios sustratos diferentes y liberar diversos productos, como es el caso de las proteasas al romper una protena en dos polipptidos.

El conocimiento adquirido acerca de la estructura de las enzimas ha sido de gran ayuda en la visualizacin e interpretacin de los datos cinticos. Por ejemplo, la estructura puede sugerir cmo permanecen unidos sustrato y producto durante la catlisis, qu cambios conformacionales ocurren durante la reaccin, o incluso el papel en particular de determinados residuos aminocidos en el mecanismo cataltico.

La reaccin catalizada por una enzima utiliza la misma cantidad de sustrato y genera la misma cantidad de producto que una reaccin no catalizada. Al igual que ocurre en otros tipos de catlisis, las enzimas no alteran en absoluto el equilibrio de la reaccin entre sustrato y producto. Sin embargo, al contrario que las reacciones qumicas, las enzimas se saturan. Esto significa que a mayor cantidad de sustrato, mayor nmero de centros catalticos estarn ocupados, lo que incrementar la eficiencia de la reaccin, hasta el momento en que todos los sitios posibles estn ocupados. En ese momento se habr alcanzado el punto de saturacin de la enzima y, aunque se aada ms sustrato, no aumentar ms la eficiencia.

Las dos propiedades cinticas ms importantes de una enzima son: el tiempo que tarda en saturarse con un sustrato en particular y la mxima velocidad de reaccin que pueda alcanzar. El conocimiento de estas propiedades hace posible hipotetizar acerca del comportamiento de una enzima en el ambiente celular y predecir cmo responder frente a un cambio de esas condiciones

FACTORES FSICO-QUMICOS QUE PUEDEN

MODIFICAR LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Temperatura: las enzimas son sensibles a la temperatura pudiendo verse modificada su actividad por este factor. Los rangos de temperaturas ptimos pueden llegar a variar sustancialmente de unas enzimas a otras. pH: el rango de pH ptimo tambin es muy variable entre diferentes enzimas. Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta ver modificada su carga elctrica al aceptar o donar protones, lo que modificar la estructura de los aminocidos y por tanto la actividad enzimtica. Concentracin salina: al igual que en los casos anteriormente mencionados, la concentracin de sales del medio es crucial para una ptima actividad enzimtica.

MODELOS ENZIMTICOS

Se consideran dos tipos de modelos para el estudio de Enzimas: -Modelo de llave-cerradura: la Enzima y el sustrato se complementan de forma anloga como una llave y la cerradura, es decir que se unen como piezas de rompecabezas.

Modelo de ajuste Inducido: la forma del sitio activo no es compatible con la forma del sustrato, pero una vez presente este, su composicin molecular cambia adaptndose al sustrato y realizando la catalizacin.

CINTICA DE MICHAELIS-MENTEN

Como las reacciones catalizadas por enzimas son saturables, la velocidad de catlisis no muestra un comportamiento lineal en una grfica al aumentar la concentracin de sustrato. Si la velocidad inicial de la reaccin se mide a una determinada concentracin de sustrato [S], la velocidad de la reaccin [V] aumenta linealmente con el aumento del [S]. Sin embargo, cuando aumentamos la [S], la enzima se satura de sustrato y alcanza su velocidad mxima (Vmax), que no sobrepasar en ningn caso, independientemente de la [S].

Mecanismo de unin de nico sustrato para una reaccin enzimtica. k1, k-1 y k2 son las constantes cinticas para cada una de las etapas de la reaccin.

MODELO DE MECANISMO PARA LA CINTICA

Para el producto: Para el complejo ES La conc. de la enz. total (1) (2) (3)

La asuncin de Michaelis y Menten

Se asume un equilibrio rpido entre E y S para formar E.S Reemplazando (3) en (4) y despejando [ES] (4)

(5)

Sustituyendo (5) en (1), se obtiene: Donde vm representa la mxima velocidad

(6)

La hiptesis del pseudo estado estable:

De la ec. (2) se obtiene: Sustituyendo (3) en (7) (7) (8)

Despejando para [ES]

(9)

(9) En (1)

(10)

(11)

haciendo d[P]/dt = v, se obtiene:

(12)

Los valores de Km y Vm se determinan a partir de datos experimentales

REPRESENTACIN DE LA ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN

La grfica de Lineweaver-Burke o del doble recproco muestra el significado de los puntos de corte entre la recta y los ejes de coordenadas, y el gradiente de la velocidad. Tomando el inverso de la ec. (12), y graficando se obtiene:

GRFICA DE EADIE-HOFSTEE
LA ECUACIN

(12), SE ARREGLA DE LA MANERA SIGUIENTE:

Graficando se obiene Vm y Km

Grfica de Hanes-Woolf
Arreglando la ec. (12), se obtiene:

Graficando, se obtiene Vm y Km

Km de algunas enzimas
ENZIMA Catalasa Hexoquinasa SUSTRATO H2O2 ATP D-Glucosa D-Fructosa Anhidrasa carbnica Quimotripsina HCO3 Km (mM) 25.0 0.4 0.05 1.5 9.0 108.0 2.5 4.0 5.0

Gliciltirosinilglicina N-Benzoiltirosinamida

F-Galactosidasa Treonina deshidrogenasa

D-Lactosa L-Treonina

LA KM ES UN PARMETRO DE ACTIVIDAD ENZIMTICA

La KM es inversamente proporcional con la actividad de la enzima. Valor de KM grande, baja actividad Valor de KM pequeo, alta actividad

Enzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =

Hexocinasa
ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa

2 Rutas Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E A + B + E EAB C +D

Doble desplazamiento o ping-pong

The image cannot be displayed. Your computer may not have enough memory to open the image, or the image may have been corrupted. Restart your computer, and then open the file again. If the red x still appears, you may have to delete the image and then insert it again.

Determinacin Cuantitativa de la Cintica Enzimtica 1. La reaccin global 2. Procedimiento analtico para determinar elS que desaparece o el P que aparece 3. S la E requiere Cofactores (ines o coenzimas) 4. La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o sea la KM del S. 5. El pH ptimo 6. Un intervalo de temperatura en la que la E es estable y muestra actividad elevada.

INHIBICIN EN REACCIONES ENZIMTICAS

A las molculas diferentes del sustrato pueden unirse al enzima reduciendo total o parcialmente su actividad cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores.
Algunos antibiticos, medicamentos quimioteraputicos, insecticidas y herbicidas son sustancias que interfieren en el funcionamiento de enzimas especficas. En las clulas naturalmente se producen inhibiciones de enzimas lo que se conoce como biorregulacin.

Los inhibidores pueden unirse reversible o irreversiblemente a las enzimas. Los inhibidores irreversibles se unen covalentemente a residuos aminoacdicos de la enzima impidiendo su accin. Este es el efecto de Hg+2, Pb+2 , los gases neurotxicos y los compuestos arsenicales. Los inhibidores reversibles se unen a la enzima por el mismo tipo de interacciones que se producen entre las enzimas y los sustratos y dentro de ellos se encuentran los inhibidores competitivos y no competitivos.

Inhibidor Irreversible
Inhibicin Permanente
Unin irreversible por medio de enlaces covalentes. Modificaciones qumicas de los gps. catalticos. Modificada la enzima, est siempre inhibida. Para distinguirlo de los reversible se someten a dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es permanente.

INHIBICIN COMPETITIVA

Cuando un inhibidor competitivo (I comp) y un sustrato S estn en presencia de una enzima, compiten entre s por ocupar el sitio activo de la misma. El inhibidor competitivo tiene generalmente una estructura similar a la del sustrato por lo que tiene posibilidad de formar un complejo E Icomp que no permite formar el complejo ES. El complejo E Icomp no da productos y disminuye el nmero de molculas de E libres en condiciones de interaccionar con el S. La unin del inhibidor competitivo a la E es reversible y por eso se puede aumentar el nmero de molculas de E libre aumentando la [S].

Cuando el efecto de una sustancia inhibidora no se puede revertir aumentando la [S], el inhibidor es no competitivo. Este compuesto se une a un sitio distinto al sitio activo y por eso puede formarse el complejo enzima-sustratoinhibidor (EIS) que no da productos. De hecho, la presencia del inhibidor acta como si disminuyera la [E] presente y por eso nunca se llega a la Vmx por ms que se aumente la [S]. Las molculas de E libre que estn en condiciones de actuar y dar producto, se comportan como si no hubiera inhibidor y por eso el Km de la reaccin no vara.