ELECTROFORESIS

Mtodo de separacin de protenas en disolucin cuando se las somete a un campo elctrico estacionario Al cerrar el interruptor aparece un campo elctrico. Las protenas estn cargadas y aparece una fuerza elctrica que las hace moverse. Debido a la diferente masa, unas protenas se desplazan ms que otras.

ELECTROFORESIS (II)
Al aplicar un campo elctrico aparece sobre las protenas una fuerza elctrica

F qE
Las molculas del disolvente, polarizadas o ionizadas, apantallan parte de la carga de la protena (ATMSFERA INICA) Carga aparente

q'

q 1 A T R

Carga real
12
Fuerza inica de la disolucin

Constante que depende de la Temperatura

Radio efectivo de la protena

ELECTROFORESIS (III)
La fuerza elctrica es algo menor:

F qE
Velocidad lmite

F q' E

Adems de la fuerza elctrica aparece una fuerza viscosa, que se opone al movimiento y hace que se alcance una velocidad lmite:

v Limite
Coeficiente de friccin molecular

q' E
Direccin del movimiento
Fuerza viscosa

ELECTROFORESIS (IV)
El coeficiente de friccin molecular es:
Radio efectivo de la MICELA

6 R'

Viscosidad del fluido

La capacidad de la MICELA para moverse se representa por la MOVILIDAD ELECTROFORTICA, u:

v Limite q' u E

ELECTROFORESIS (V)
La capacidad de la MICELA para moverse se representa por la MOVILIDAD ELECTROFORTICA, u:

v Limite q' u E
Depende de: q': Carga aparente que a su vez depende del tamao de la protena, de la T y de la fuerza inica factor de forma de la protena: 6TR' Depende de N coeficiente de viscosidad del medio: L

ELECTROFORESIS (VI)
Tipos y aplicaciones

Electroforesis libre o de Frontera Separacin e identificacin de las protenas de una mezcla Medida de la concentracin de las distintas protenas de la mezcla Determinar la movilidad electrofortica de una protena Electroforesis de zona Las mismas que la electroforesis libre Extraccin de protenas de una mezcla

ELECTROFORESIS (VII)
Electroforesis libre o de Frontera Aparato de Tiselius (I) +
ELECTRODOS

DISOLUCIN TAMPN

Frontera entre la disolucin de protenas y la disolucin tampn

TUBO DE ELECTROFORESIS El sistema se encuentra a T constante para evitar corrientes de conveccin

ELECTROFORESIS (VIII)
Electroforesis libre o de Frontera Aparato de Tiselius (II) +

ELECTROFORESIS (IX)
Electroforesis libre o de Frontera Aparato de Tiselius (III)
Eleccin cuidadosa del medio en el que disolvemos las protenas pH: Condiciona la ionizacin de las protenas (movilidad) Disolucin tampn: Para mantener el pH constante y conocer con precisin la fuerza inica de la disolucin D.D.P utilizada: Debe ser lo mayor posible, pero sin que la cantidad de calor liberada (Efecto Joule) altere las protenas

ELECTROFORESIS (X)
Electroforesis libre o de Frontera
Anlisis cualitativo de una mezcla
El diagrama electrofortico consta de una serie de picos, cada uno de los cuales corresponde a una movilidad diferente. Comparando con patrones podemos identificar las distintas protenas presentes en la mezcla.

ELECTROFORESIS (XI
Electroforesis libre o de Frontera
Anlisis cuantitativo de una mezcla
Diagrama electrofortico: Gradiente de concentracin frente a posicin El rea bajo un pico respecto al rea total da la concentracin de dicha protena

ELECTROFORESIS (XII)
Electroforesis libre o de Frontera
Medida de la movilidad electrofortica (Disolucin con 1 protena)
Se realizan dos diagramas electroforticos separados un intervalo de tiempo. Clculo de la velocidad lmite Clculo elctrico del campo

ELECTROFORESIS (XIII)
Electroforesis de zona
La migracin de las protenas se realiza sobre un medio rgido (papel o gel), lo que permite separarlas en zonas bien diferenciadas, pudiendo ser extraidas por elucin.

Permite trabajar con cantidades pequeas Permite separar compuestos ionizables de masa molecular pequea: aminocidos, nucletidos,...

ELECTROFORESIS (XIV)
Electroforesis de zona

ELECTROFORESIS (XV)
Electroforesis de zona Tipos
Electroforesis sobre papel: el medio rgido es un papel de filtro empapado en la disolucin tampn sobre el que se coloca la disolucin de protenas. Electroforesis sobre gel: el medio rgido es un gel (almidon, acetato,...) sobre el que se coloca la disolucin de protenas.

ELECTROFORESIS (XVI)
Electroforesis de zona

ELECTROFORESIS (XVII)
Electroforesis de zona
Bao trmico

Tiras de gel

Fuente de alimentacin

Electrodos

ELECTROFORESIS (XVIII)
Informacin ms avanzada: http://webpages.ull.es/users/fcorzo/electroforesis/indice.htm Curso de Doctorado de la Univ. De la Laguna http://iqb.fcien.edu.uy/pdf/electroferosis.pdf Notas sobre electroforesis http://www.amershambiosciences.com Empresa de productos para laboratorio

ELECTROFORESIS
Mtodo de separacin de protenas en disolucin cuando se las somete a un campo elctrico estacionario