TINCION DE GIEMSA

Mtodo habitual para el examen de frotis sanguneo Capaz de distinguir distintas estructuras celulares segn su afinidad por colorantes Bsicos Acidos o Mezcla de los dos

Compuesta por dos colorantes Basico Azul de metileno Nucleo Colorante metacromatico Azul estructuras prpura y no de azul

Acido Eosina Citoplasma Se unen a las protenas bsicas Rosado

color rosodo

La gama del pH debe estar entre 6.4 y 6.9.

Zonas con un alto contenido de ADN Permite la tincin diferencial de Eritrocitos Linfocitos Monocitos Granulos: Neutrofilos, eosinofilos, basofilos. Trombocitos

Concretamente de uniones A-T. Ncleo celular Cromosomas durante la mitosis Incluso el ADN mitocondrial

Eritrocito Plaquetas

Rosado
Azul

Linfocito
Monocito Granulocito Neutrofilo

Nucleo azul violeta citoplas azul

Nucleo azul violeta, citoplasma azul claro. Nucleo azul obscuro, citoplasma rosa palido, granulos tono rosado a azul claro Nucleo azul, citoplasma rosa palido, granulos rojo ladrillo Nucleo purpura o azul obscuro, granulos azul obscuro negro Rosado Azul
Linfocitos

Plaquetas

Granulocito Eosinofilo Granulocito Basofilo Citoplasma Nucleo

G. Basofilo

G. eosinofilo

G. neutrofilo

Monocito

Tincion Cristal violeta

Es una tincion monocromatica Tie el nucleo de color azul oscuro y el citoplasma de azul claro VENTAJAS No tiene los problemas de precipitacin como la de Giemsa. fcil de usar y puede ser reutilizado. fcil de lavar fondo claro DESVENTAJAS No es tan buena como la de Giemsa para la observacin morfolgica.

facilita el conteo automatizado de colonias

tcnicas de inmunofluorescencia

Fundamento
La fluorescencia es una forma de luminiscencia entendindose sta ltima como la emisin de la luz que se produce a partir de una fuente de energa no trmica y bajo el efecto de una excitacin.

Tipos de tcnicas de inmunofluorescencia

En la tcnica de inmunofluorescencia directa se utiliza un anticuerpo especfico frente al antgeno que se desea detectar. Dicho anticuerpo est ligado a un fluorocromo. En las tcnicas de inmunofluorescencia de tipo indirecto se emplea en un primer paso el anticuerpoespecfico no marcado y en una segunda fase un anticuerpo marcado con el correspondientefluorocromo que reacciona de forma especfica con el anticuerpo primario

Dobles tinciones en inmunofluorescencia

La determinacin de dos antgenos diferentes pude hacerse de forma simultnea o secuencial. En el primer paso se incuba el tejido con una mezcla de dos anticuerpos especficos frente a los antgenos que se quiere determinar, los anticuerpos irn marcados con fluorocromos distintos. En la tcnica secuencial se incuba en primer lugar con uno de los anticuerpos marcado con un fluorocromo y se fotografan los campos ms significativos. A continuacin se elimina la positividad destruyendo los grupos fluorescentes mediante la aplicacin de luz ultravioleta, una vez comprobado que la destruccin es completa se elimina el cubreobjetos introduciendo la preparacin en una solucin tamponada y se incuba con un segundo anticuerpo marcado con fluorocromo.

TECNICAS INMUNOHISTOQUMICAS

 Los mtodos inmunohistoquimicos consisten en la identificacin de un constituyente celular o tisular mediante la interaccion especifica antgeno/anticuerpo. Para visualizar el lugar donde se produce la reaccin antgeno/ anticuerpo es preciso emplear un trazador o marcador. La inmunohistoqumica es una tcnica esencial en el diagnstico anatomopatolgico de las enfermedades, fundamentalmente de las neoplsicas.

TINCIN INMUNOCITOQUMICA

Tcnica para la localizacin de molculas en los tejidos mediante el empleo de anticuerpos. marcado con sustancias fluorescentes desventaja no son marcajes permanentes puesto que la luz emitida por la molcula fluorescente se desvanece con el tiempo.

Secciones procesadas con anticuerpos unidos a enzimas pueden deshidratarse, montarse y mantenerse permanentemente para su observacin. Las enzimas habituales que se unen a las inmunoglobulinas son la peroxidasa y la fosfatasa alcalina.

Estas enzimas aportan visibilidad a los anticuerpos, pueden convertir determinados sustratos solubles en productos insolubles y coloreados.
La seal aparece all donde est la enzima, que es donde se ha unido la inmunoglubulina.

Mtodos de marcaje para detectar los anticuerpos primarios unidos especficamente a una molcula del tejido.

 La conjugacin directa de un marcador (enzima) con la inmunoglobulina se denomina mtodo de deteccin directa. Hoy en da se suele emplear el mtodo de deteccin indirecta, que consiste en colocar una serie de intermediarios entre la inmunoglobulina y la molcula marcadora. Inicialmente se us el mtodo indirecto denominado peroxidasa-antiperoxidasa (PAP), pero actualmente es ms frecuente usar el mtodo del complejo avidina-biotinaperoxidasa (ABC). El mtodo indirecto permite una mayor versatilidad de la tcnica y mayor intensidad de seal frente a una misma cantidad de antgeno.

 Inmunocitoqumica con deteccin indirecta y enzimtica. La seccin se obtiene de tejido previamente fijado. Inmediantemante despus se incuban en una solucin de bloqueo que satura los posibles sitios de unin inespecfica, gracias a una alta concentracin de protena como la albmina de suero bovino. Tras cada paso de unin de anticuerpos o del complejo avidinabiotina-peroxidasa se procede a lavar los cortes en una solucin tamponada de fosfato (tampn fosfato), en la que tambin van disueltos los anticuerpos. La reaccin de la peroxidasa convierte unos sustratos, la diaminobencidina y el perxido de hidrgeno, en un producto insoluble y coloreado visible con el microscopio ptico.