Espectroscopia de Resonancia Magntica Nuclear

Por: Q.F. Manuel A. Valle Campos

Introduccin

La espectroscopia de resonancia magntica nuclear (RMN) es una tcnica empleada principalmente en la elucidacin de estructuras moleculares, aunque tambin se puede emplear con fines cuantitativos. Algunos ncleos atmicos sometidos a un campo magntico externo absorben radiacin electromagntica en la regin de las frecuencias de radio o radiofrecuencias. Como la frecuencia exacta de esta absorcin depende del entorno de estos ncleos, se puede emplear para determinar la estructura de la molcula en donde se encuentran stos. Para que se pueda emplear la tcnica los ncleos deben tener un momento magntico distinto de cero. Esta condicin no la cumplen los ncleos con nmero msico y nmero atmico par (como el 12C, 16O, 32S). Los ncleos ms importantes en qumica orgnica son: 1H, 13C, 31P, 19F y 15N. Otros ncleos importantes: 7Li, 11B, 27Al, 29Si, 77Se, 117Sn, 195Pt, 199Hg, 203Tl, 205Tl, 207Pb

Entonces el fenmeno de RMN consiste en la absorcin de energa de radiacin electromagntica por parte de ncleos que tienen un momento Magntico La absorcin ocurre a frecuencias caractersticas que dependen del tipo de ncleo (1H, 13C, 31P, etc) y del entorno molecular en que se encuentra. El fenmeno solo se manifiesta en presencia de un campo magntico que diferencia en trminos de energa a las posibles orientaciones del momento magntico nuclear. Las cantidades de energa involucradas son extremadamente pequeas y solo son medibles cuando el campo magntico es muy intenso. La radiacin electromagntica utilizada corresponde a las ondas de radio.

Historia

La primera deteccin de Resonancia Magntica Nuclear debida a la formacin de una diferencia en las energas de ciertos ncleos en presencia de un campo magntico fue reportada por Bloch (para el agua lquida) y Purcell (para la cera de parafina) en 1946. La aplicacin qumica de la RMN fue descubierta a principios de los cincuenta, al observarse que la frecuencia de resonancia de un ncleo dependa fuertemente de su entorno qumico (chemical shift). A partir de los aos setenta, el desarrollo de nuevas tcnicas y mayores campos magnticos (que incrementan tanto la sensibilidad como la resolucin de las seales) permitieron estudiar molculas cada vez ms grandes. El advenimiento de la RMN multidimensional y el uso del marcaje 13C y 15N marc el inicio de la RMN biolgica.

Teoras

Se puede utilizar tanto la mecnica clsica como la mecnica cuantica para explicar el fenmeno RMN. Mecnica Clsica.- Proporciona una descripcin fsica clara del proceso de absorcin y de la forma como medirlo; considera el comportamiento de un cuerpo magntico que no esta en rotacin, como una aguja de brjula, en un campo magntico externo, cuando un imn gira rpidamente alrededor de la muestra se va ha conseguir que la fuerza aplicada sobre el eje de rotacin del analito se mueva en una trayectoria circular o Precesa alrededor del vector que representa al campo magntico aplicado.

Este movimiento similar al de un giroscopio cuando se desplaza de la vertical por la aplicacin de una fuerza lateral da origen a la velocidad angular la misma que se convertir en la frecuencia de precesin conocida como Frecuencia de Larmor la misma que es idntica a la frecuencia de la radiacin absorbida deducida de la mecnica cuantica. Mecnica Cuntica.- Proporciona una relacin entre las frecuencias de absorcin y los estados de energa de los ncleos en donde para explicar las propiedades de ciertos ncleos es necesario reconocer la propiedad de espn.

Protn girando.
Un protn girando genera un campo magntico, conocido como su momento magntico. Este campo magntico (B) se asemeja al de una barra magntica pequea.

Un nmero impar de protones en el ncleo crea un espn nuclear. El espn nuclear genera un pequeo campo magntico denominado momento magntico. La visualizacin del momento magntico como un minsculo imn ayudar a comprender mejor lo que est ocurriendo en el nivel atmico.

Campo magntico externo.

Un campo magntico externo (B0) ejerce una fuerza sobre una pequea barra magntica, girndola para que se alinee con el campo externo. La disposicin de la barra magntica alineada en el sentido del campo externo tiene energa ms baja que cuando se alinea en sentido contrario al campo B0.

Se observa el mismo efecto cuando un protn se sita en un campo magntico externo, el protn se alinear con o en contra del campo

Los ncleos con espn tienen un momento angular p. La componente observable mxima de este momento angular esta cuantizada y debe ser un mltiplo entero o semientero de h/2 donde h es la constante de Planck, el nmero mximo de componentes de espn o valores de p depende de su nmero cuntico de espn I. donde un ncleo tendr 2I + 1 estados discretos por lo que la componente angular de estos estados en cualquier direccin tendr valores de I, I 1, , -I, cuando no hay un campo externo, los diferentes estados tienen energas idnticas.

Los ncleos que tienen mayor utilizacin actualmente en RMN son aquellos que tienen estado de espn I = +1/2 o I = - que corresponden a los compuestos 1H, 13 C, 19F y 31P. La interrelacin entre el espn nuclear y el momento magntico conduce a una serie de estados cuanticos magnticos m similares a los del espn. De forma que los ncleos considerados tendrn estados magnticos m = +1/2 y m = -1/2. los que son medibles ya que al ponerse en contacto con una frecuencia de la radiacin electromagntica estarn en capacidad de absorber o emitir radiacin producto de una transicin electrnica. Esta frecuencia de la transicin magntica es proporcional a la intensidad del campo aplicado el mismo que se genera por el movimiento de los imanes.

Apantallamiento en protones
Los protones en distintos entornos qumicos estn apantallados en distintas cantidades. El protn hidroxilo no est tan apantallado como los protones metilo, por lo que el protn hidroxilo absorbe a un campo ms bajo que los protones metilo. Decimos que el protn est algo desapantallado por la presencia de tomos de oxgeno electronegativos.

Cuando los protones se encuentran en distintos entornos de la molcula y la molcula est expuesta a una frecuencia constante, los protones absorbern la radiacin a distintas intensidades del campo magntico. La RMN variar el campo magntico y representar un grfico de la absorcin de energa como funcin de la intensidad del campo magntico.

Apantallamiento (Continuacin)
Los protones de metilo ms apantallados aparecen hacia la derecha del espectro (campo ms alto); el protn hidroxilo menos apantallado aparece hacia la izquierda (campo ms bajo).

En un espectro RMN el campo magntico aumenta desde la izquierda hacia la derecha. Las seales del lado de la derecha estn en la parte ms alta del espectro y las de la izquierda estn en la parte ms baja. Los protones apantallado aparecen en la parte alta.

Escala delta () RMN.

Utilizacin de la escala con espectrmetros de 60 y 300 MHz. El desplazamiento del TMS se define como 0. La escala aumenta de derecha a izquierda (hacia el campo ms bajo). Cada unidad se diferencia 1 ppm del TMS: 60 Hz a 60 MHz y 300 Hz a 300 MHz.

El desplazamiento qumico de los protones se mide en partes pos milln (ppm), independientemente del campo y la frecuencia del instrumento utilizado. Cuanto ms altas son las frecuencias del espectrmetro, ms detallado es el espectro

Espectro de RMN del metanol

Los protones metilo absorben a = 3.4 ppm y los protones hidroxilo absorben a = 4.8 ppm.

Los tres protones metilo son equivalentes, por lo que producirn slo una seal.

Valores de algunos desplazamientos qumicos

Los alcanos absorben en el campo alto (hacia la derecha) del espectro. Los carbonos hbridos sp2 absorben hacia la izquierda de los alcanos as como los haluros de alquilo. Los protones de benceno se pueden encontrar centrados alrededor de 7.2 ppm (campo bajo). Los cidos carboxlicos y los aldehdos estn aproximadamente entre 9-12 ppm.

Tipos de RMN

Espectroscopia de Onda Continua.-Desde sus comienzos hasta finales de los 60, la espectroscopia de RMN utiliz una tcnica conocida como espectroscopia de onda continua (CW). La manera de registrar un espectro de RMN en el modo de CW era, bien mantener constante el campo magntico e ir haciendo un barrido de frecuencias con un campo oscilante, o bien, lo que era usado ms a menudo, se mantena constante la frecuencia del campo oscilante, y se iba variando la intensidad del campo magntico para encontrar las transiciones (picos del espectro). En la RMN de CW las seales del espectro se registran como seales en resonancia. La espectroscopia CW est limitada por su baja sensibilidad, ya que cada seal se registra una sola vez por cada barrido y la tcnica de resonancia magntica nuclear ya es de por s no demasiado sensible; esto quiere decir que la tcnica sufre de una baja relacin seal-ruido. Afortunadamente, en RMN es posible mejorar la relacin seal-ruido mediante el promediado de seal.

Espectroscopia de RMN de pulsos y Transformada de Fourier.- Es la que se utiliza en los espectrmetros actuales. Uno de los pioneros en este campo es Richard R. Ernst, que la desarroll a partir del ao 1966 y por la que fue galardonado con el Premio Nobel de Qumica en 1991. FT-NMR permite disminuir drsticamente el tiempo que requiere adquirir una acumulacin (scan) del espectro completo de RMN. En vez de realizar un barrido lento de la frecuencia, una en cada instante, esta tcnica explora simultnea e instantneamente todo un rango de frecuencias. Dos desarrollos tcnicos fueron fundamentales para poder hacer realidad la tcnica FT-NMR: ordenadores capaces de llevar a cabo las operaciones matemticas necesarias para pasar desde el dominio de tiempo al de la frecuencia, es decir, para obtener el espectro; y el conocimiento sobre cmo poder excitar simultneamente todo un rango de frecuencias. La FT-NMR funciona con la muestra (espines nucleares) sometida a un campo magntico externo constante. Se irradia la muestra con un pulso electromagntico de muy corta duracin en la regin de las radiofrecuencias. La forma que suele usarse para este pulso es rectangular, es decir, la intensidad de la radiofrecuencia oscila entre un mximo y un mnimo que es constante mientras dura el pulso.

Acoplamiento espn-espn
La mayora de los ejemplo de acoplamiento espn-espn implican el acoplamiento entre protones que estn separados por tres enlaces, por lo que estn unidas a los tomos de carbono adyacentes.

El acoplamiento es uno de los fenmenos ms observados cuando los hidrgenos se unen a los tomos de carbono adyacentes. El acoplamiento espn-espn entre los tomos de carbono germinales se puede producir si los hidrgenos tienen distintos entornos (no equivalentes).

Acoplamiento espn-espn.
En la mayora de los casos de acoplamiento espn-espn implican acoplamiento entre protones que estn separados por tres enlaces, por que estn enlazados a tomos de carbono adyacentes.

Cuando los hidrgenos constan de cuatro enlaces o ms, el acoplamiento espn-espn no se suele observar. Cuando realmente tiene lugar, se denomina "acoplamiento de gran rango".

Desplazamientos qumicos ms frecuentes en el espectro de RMN de protn.

Los protones directamente enlazados a los carbonilos estn muy desapantallados y sus seales se encontrarn en el campo bajo del espectro. Las seales de los protones vinlicos se pueden encontrar centradas alrededor de 5 - 6 ppm, mientras que los protones aromticos estn en el campo ms bajo a aproximadamente 7.0 ppm.

Informacin que se puede obtener de un espectro RMN del Protn

Nmero de seales: relacionada con el nmero de 1H diferentes de la muestra Frecuencia de las seales () : relacionada con el entorno molecular del ncleo. rea de las seales (integral): relacionada con la cantidad de cada tipo de 1H. Multiplicidad de cada seal: relacionada con el nmero de 1H vecinos de cada tipo. Constantes de acoplamiento (J): brinda informacin estereoqumica. Intercambio de 1H : indica la presencia de cierto tipo de grupos funcionales (-COOH, -OH, -NH2)

Instrumentacin en Resonancia Magntica Nuclear

Un espectrmetro de RMN consta de las siguientes partes fundamentales: Un imn que genere un campo magntico estable, el cual puede ser de una intensidad variable, definiendo la frecuencia de resonancia de cada ncleo. Generalmente se identifica cada espectrmetro por la frecuencia de resonancia del protn, as en un imn de 7.046 Tesla, los ncleos de 1H resuenan a 300 MHz, y por tanto sera un espectrmetro de 300 MHz. Por el momento el imn de mayor campo magntico del mundo lo ha instalado Bruker en la Universidad de ciencia y tecnologa Rey Abdullah en Arabia Saudita, de 950 MHz (22.3 Tesla).1 Una sonda, que se sita dentro del imn, en la que se introduce la muestra y que consta de las bobinas responsables de emitir y recibir las radiofrecuencias (RF). El nmero de bobinas y su disposicin determinan el tipo y las aplicaciones de cada sonda. Una consola en la que se generan los pulsos de RF y se controla el resto de la parte electrnica del espectrmetro Un ordenador que sirve de interfaz con el espectrmetro y con el que se analiza toda la informacin obtenida.

Aplicaciones

La RMN del protn se utiliza en la identificacin y la elucidacin estructural de molculas organicas, organometalicas y bioqumicas.

Elucidacin Estructural.-Productos Naturales. Sntesis Orgnica

Estudio de procesos dinmicos.- Cintica de Reacciones. Procesos de Equilibrio Diseo de Drogas.-Relacin estructura - actividad Medicina .-Diagnstico por Imgenes Control de Calidad.-Anlisis de orgen de alimentos. Falsificacin de patentes