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HIBRIDACION
DE ACIDOS NUCLEICOS
DOCENTE: Mara Soledad Depix UST
1. Fuerza inica
50%
Tm oC = 2 x no(A + T) + 4 x n(G + C)
Qu
es la Tm?
Tm = temperatura de melting o de separacin de las hebras. La Tm es una medida de la estabilidad de los hbridos definida como la temperatura a la cual 50% de los hbridos se encuentran formados y 50% permanecen disociados.
50% 5 - - - - - - - - - - -3 3 - - - - - - - - - - 5
50%
HIBRIDACION
Nmero de pares GC v/s pares AT Grado de complementariedad Largo de las hebras Concentracin de sal en la solucin Temperatura Concentracin de formamida
Temperatura
Grado de complementariedad
menor estabilidad
divalentes (Mg++) Las cargas negativas de los grupos fosfato se repelen unas a otras. Los iones positivos en solucin reducen la repulsin electrosttica entre las hebras.
pH
Probablemente forma enlaces de H con los cidos nucleicos. Desestabiliza la formacin de hbridos
SOUTHERN BLOT
Figure 8-38 (part 1 of 4) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 2 of 4) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 3 of 4) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 4 of 4) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
FISH
Grupos Indicadores