Enzimas

Enzimas
Generalidades de las enzimas Aplicacin de las enzimas y clulas inmovilizadas

Nomenclatura

Mtodos de inmovilizacin

Produccin Origen Inmovilizacin de enzimas

Generalidades de las enzimas

Las enzimas son molculas de naturaleza proteicaquecatalizanreacciones bioqumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles; una enzima hace que una reaccin qumica que es energticamente posible, pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas

Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud. Este hecho asegura que la enzima no participa en reacciones equivocadas. La enzima misma no se ve afectada por la reaccin. Cuando los productos se liberan, la enzima vuelve a unirse con un nuevo sustrato.

Las enzimas estn formadas de carbono (C),Hidrgeno(H),oxigeno(O ), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero siempre con peso molecular bastante elevado y comn propiedades catlicas especificas. Como todos loscatalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo laenerga de activacin(G) de una

Las enzimas son generalmente protenas globulares que pueden presentar tamaos muy variables, desde 62aminocidoscomo en el caso del monmerode la4oxalocrotonato tautomerasa, hasta los 2.500 presentes en lasintasa de cidos grasos. Las actividades de las enzimas vienen determinadas por su estructura tridimensional, la cual

La regin que contiene los residuos encargados de catalizar la reaccin es denominadacentro activo. Las enzimas tambin pueden contener sitios con la capacidad de unircofactores, necesarios a veces en el proceso decatlisis, o de unir pequeas molculas, como los sustratos o productos (directos o indirectos) de la reaccin catalizada. Estas uniones de la enzima con sus propios sustratos o productos

La mayora de las enzimas, al igual que el resto de las protenas, pueden ser desnaturalizadas si se ven sometidas a agentes desnaturalizantescomo elcalor, lospHsextremos o ciertos compuestos como elSDS. Estos agentes destruyen la estructura terciaria de las protenas de forma reversible o irreversible, dependiendo de la enzima y de la

Las enzimas suelen ser muy especficas tanto del tipo de reaccin que catalizan como delsustratoinvolucrado en la reaccin. La forma, la carga y las caractersticashidroflicas/hidrof bicasde las enzimas y los sustratos son los responsables de dicha especificidad. Las enzimas tambin pueden mostrar un elevado grado deestereoespecificidad,regiose

Algunas de estas enzimas que muestran una elevada especificidad y precisin en su actividad son aquellas involucrados en lareplicacinyexpresindelg enoma. Estas enzimas tienen eficientes sistemas de comprobacin y correccin de errores, como en el caso de laADN polimerasa, que cataliza una reaccin de replicacin en un

La dinmica interna de las enzimas est relacionada con sus mecanismos de catlisis. La dinmica interna se define como el movimiento de diferentes partes de la estructura de la enzima, desde residuos individuales deaminocidos, hasta grupos de aminocidos o incluso undominio proteicoentero. Estos movimientos se producen a diferentes escalas de tiempo que van desde femtosegundoshastasegundos.

Nomenclatura y clasificacin de las enzimas

Muchas enzimas han sido designadas aadiendo el sufijo -asa al nombre del sustrato. Otras enzimas han recibido su nombre en funcin del tipo de reaccin que catalizan. Incluso algunas se conocen de hace mucho tiempo y mantienen su nombre. No obstante, existe una clasificacin sistemtica de las enzimas que las divide en 6 grandes grupos, cada uno de los

1: Oxido-reductasas (reacciones de oxido-reduccin) 2: Transferasas (transfieren grupos funcionales) 3: Hidrolasas (reacciones de hidrlisis), 4: Liasas (reacciones de adicin a los dobles enlaces) 5: Isomerasas (reacciones de isomerizacin) 6: Ligasas (formacin de enlaces

As, por ejemplo, la enzima alcohol deshidrogenasa (EC,1.1.1.1), es una oxidoreductasa (1.), que cataliza la oxidacin de etanol (1.1.) a acetaldehdo, utilizando NAD+(1.1.1.) como aceptor de electrones y por

Produccin de enzimas

Los procesos de produccin de enzimas microbianas se realizan mediante cultivos aerbicos. En general las enzimas se producen en pequeas cantidades durante la fase de crecimiento activo, pero se acumulan en grandes cantidades en la fase estacionaria del crecimiento. Las enzimas induciblese producen slo cuando en el medio se

Las enzimas microbianas que se producen en mayor cantidad son proteasas, utilizadas como aditivos en los detergentes para lavar ropa. Muchas de estas enzimas son producidas a partir de bacterias alcalfilas, especialmente de Bacillus licheniforme. Estas enzimas tienen pH ptimo entre 9 y 10, as permanecen

Amilasas, se producen mediante fermentacin y se utilizan en la conversin de cereales en el producto final llamado jarabe de cereales rico en fructosa. Alfa amilasa provoca ataque inicial al polmero, acortando la cadena y reduciendo la viscosidad del polmero, clarificante. Glucoamilasa produce monmeros de glucosa, sacarificante.

Invertasa se produce a partir del cultivo de Saccharomycescerevisiae, se utiliza para impedir la cristalizacin de azcares, pues convierte sacarosa en azcares ms solubles. Tambin se inyecta en el interior de los caramelos. Pectinasas, producidas por cepas de Aspergillus, se utiliza para licuar jugos de frutas. Renina, producida por cepas de

Origen

Enzimas de origen animal

Las enzimas obtenidas a partir de tejidos de animales, por lo general, se preparan de animales recin sacrificados. Inmediatamente despus del sacrificio, se quitan los tejidos y se congelan para evitar la degradacin bioqumica y de sulfuracin. Se remueven los tejidos extraos, particularmente cuerpos grasosos, y a continuacin

En algunos casos la preparacin resultante se pasa tambin por un mezclador para obtener un pur fino. Varios tejidos animales se usan como fuente de enzimas, incluyendo el pncreas, bazo, hgado y varias porciones del tracto intestinal. Por supuesto, la extraccin de la enzima va acompaada por varios pasos de purificacin.

Clulas y tejidos vegetales

Por muchos aos se han hecho preparaciones rudimentarias de enzimas vegetales. Sin embargo, la extraccin de enzimas a partir de plantas es a menudo difcil y requiere equipo pesado para macerar y moler el material tpicamente fibroso. Los sistemas de molienda comunes por lo general son insuficientes, excepto en los casos donde la fuente de

Clulas microbianas
La mayora de las enzimas microbianas usadas comercialmente son extracelulares, eso es, se producen en el interior de las clulas y luego se excretan o difunden en el medio de cultivo, del cual pueden ser operados. Esto reduce el problema que se presenta a menudo con plantas y,

Inmovilizaci n de enzimas

La inmovilizacin de enzimas es un proceso en el que se confina o localiza a la enzima en una regin definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad cataltica y que pueden ser reutilizadas repetidamente

Ventajas de la inmovilizacin

1. El aumento de la estabilidad de la enzima; 2. La posible reutilizacin del derivado, por lo que disminuyen los costes del proceso. 3. La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y control, adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada.

Inconvenientes

1. La alteracin de la conformacin de la enzima respecto de su estado nativo. 2. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden existir distintas fracciones de protenas inmovilizadas con un diferente nmero de uniones al soporte. 3. Siempre suele haber una prdida de actividad de la enzima durante la movilizacin. 4. El biocatalizador es ms caro que la

Mtodos de inmovilizacin

Los mtodos de inmovilizacin se suelen clasificar en dos grandes categoras: 1)Retencin fsica 2) Unin qumica

Aplicacin de las enzimas y clulas inmovilizadas

1. Aplicaciones analticas: biosensores 2. Aplicaciones mdicas: tratamientos con enzimas inmovilizadas 3. Aplicaciones industriales: en la industria qumica, farmacutica, alimentaria y de tratamiento de residuos.

Aplicaciones analticas: biosensores

Aplicaciones mdicas

Existen muchas enfermedades causadas por una alteracin o carencia de una determinada enzima. Tambin hay enzimas con actividad antitumoral, cicatrizante y con otras acciones teraputicas.

Aplicaciones industriales

Farmacutica

Alimentaria

Tratamientos de aguas residuales

Recientemente, se ha desarrollado un mtodo para la reduccin de nitratos a nitritos en aguas residuales que emplea enzimas inmovilizadas. El benceno es otro compuesto muy txico que puede ser degradado mediante clulas de Pseudomonas putida atrapadas en geles de poliacrilamida

Inmovilizacin de bacterias y levaduras para realizar un proceso biotecnolgico.

La inmovilizacin de microorganismos ha sido estudiada durante las ltimas dcadas como la solucin y el mejoramiento de sistemas de tratamiento de aguas, suelos y aires contaminados.

La inmovilizacin de diferentes microorganismos en diversos soportes que van desde los biodegradables como residuos orgnicos o agroindustriales, hasta aquellos de difcil o nula degradacin como plsticos y fibras de vidrio han permitido el inters y el desarrollo de nuevas tecnologas debido a algunas ventajas que presentan como son: Concentracin de biomasa. Actividad metablica Resistencia a la toxicidad

Tcnicas de inmovilizacin de moos

Inmovilizacin pasiva Inmovilizacin activa

Inmovilizacin pasiva

Algunos microorganismos de forma natural tienden a formar aglomerados o unirse a superficies y crecer en ellas. Esta interaccin con superficies puede darse por la presencia de estructuras celulares como la cpsula y las fimbrias en el caso de las bacterias, y en el caso de los hongos sus propias hifas.

Formacin de biopelculas

Inmovilizacin activa

Dentro de las tcnicas de inmovilizacin activa, o inmovilizacin artificial pueden distinguirse el ataque qumico, atrapamiento en geles de polmeros naturales o sintticos, y el uso de agentes floculantes.

Los agentes floculantes se usaron inicialmente con el fin de sedimentar partculas suspendidas, evitando as el uso de tcnicas como la centrifugacin.

El atrapamiento en una matriz porosa consiste en la inmovilizacin de clulas dentro de una matriz, la cual impide la difusin de las clulas en el medio, pero permite el paso de metabolitos y nutrientes.

El procedimiento general para el atrapamiento de las molculas en gotas de polmeros, consiste es suspender el microorganismo a inmovilizar en una solucin lquida que contiene los monmeros de la macromolcula.

Origen

El nombre de enzima ("en la levadura") no se emple hasta 1877, pero mucho antes ya se sospechaba que ciertos catalizadores biolgicos intervenan en muchos procesos.

En 1850, Louis Pasteur concluy que la fermentacin de azcar en alcohol por levaduras estaba catalizada por lo que llam fermentos, que l consideraba inseparable de las clulas de levadura vivas

En 1897, Bchner, consigui extraer las enzimas que catalizaban la fermentacin alcohlica de las clulas de levadura (zimasa), terminando as con la teora vitalista.

No obstante hubo que esperar hasta 1926, cuando Sumner consigui purificar y cristalizar por primera vez una enzima, la ureasa, para demostrar su naturaleza proteica.

En la actualidad se conocen ms de 2000 enzimas diferentes, muchas de las cuales se han aislado en forma pura. Se utilizan potentes tcnicas de purificacin y secuenciacin, tcnicas de difraccin de rayos X, RMN, etc., para conocer sus enveles estructurales, y tcnicas de mutagnesis dirigida para conocer ms sobre su funcionalidad y sus mecanismos de actuacin.