INVESTIGADORES:

SELMA RIBEIRO DE PAVIA LICINIO FONTOURA DE ALMEIDE

JOSE LUIS MAZZEI

MARIA AUXILIADORA COELHO KAPLAN

EXPOSITORES: Asurza Parra Jorge Luis

Atauje Alexandra
Landeo Mesa Ruddy Lucia

Rivera Diaz Flor Jackeline

EL PERFIL QUIMICO DE P. SCANDENS (NATIVO) Y P. AURICULATA (CULTIVADA) SE OBTUVO MEDIANTE HPLC (CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION) FASE NORMAL Y FASE REVERSA CON DETECTOR DE ARREGLO DE DIODOS.

OBJETIVO

ENCONTRAR SIMILARES PATRONES METABOLICOS EN TALLOS Y HOJAS DE DICHAS ESPECIES VEGETALES.

PLUMBAGO AURICULATA LAM

FAMILIA TAXONOMICA
REINO : PLANTAE DIVISION:MAGNOLIOPHYTA CLASE : MAGNOLIOPSIDA ORDEN :CARYOPHYLLALES FAMILIA:PLUMBAGINACEAE GENERO:PLUMBAGO ESPECIE :PLUMBAGO AURICULATA NOMBRE BINOMIAL:PLUMBAGO AURICULATA LAM

PLUMBAGO AURICULATA LAM

El gnero Plumbago comprende 10 especies de las partes ms clidas del mundo. Hay 5 especies en Sudfrica.

Sinnimos : Plumbago capensis Thunb. Nombre comn en castellano : Azulina. Celestina. Embeleso. Jazmn azul. Jazmn celeste. Jazmn del Cabo. Jazmn del cielo. Jazminero azul. Malacara. Plumbago. Distribucin general : frica poca de floracin : Julio. Agosto. Septiembre. Octubre. Noviembre. Diciembre. Formas vitales :Fanerfito. Hbitat : Cultivada en los jardines.

Plumbago se utiliza tradicionalmente para tratar : las verrugas, huesos rotos , Heridas. Se toma como un tabaco para dolores de cabeza y un emtico para disipar malos sueos. Un palo de la planta se coloca en la paja de chozas para conjurar los relmpagos.

TIPOS DE COMPUESTOS CON ACTIVIDAD PLAGUICIDA

Las antiecdisonas son aquellas que interfieren alguna de las fases del proceso de la muda en los insectos. Por ejemplo: La azadiractina,producida por la especie Azadirachta indica (rbol del Nim) de la familia Meliaceae y la plumbagina y la naftoquinona, sintetizadas por el arbusto Plumbago capensis de la familia Plumbaginaceae. Floracin y fructificacin, con un marcado incremento de los mismos durante los meses de agosto y septiembre.

PLUMBAGINA

Plumbago scandens L.
FAMILIA TAXONOMICA REINO : PLANTAE DIVISION:MAGNOLIOPHYTA CLASE : MAGNOLIOPSIDA ORDEN :CARYOPHYLLALES FAMILIA:PLUMBAGINACEAE GENERO:PLUMBAGO ESPECIE :PLUMBAGO SCANDENS L

CARACTERISTICAS
Plumbago scandens es un subarbusto con flores blancas bastante extendidas en Brasil, encontrndose a lo largo de la costa. Es una especie nativa que se encuentra en una vegetacin tpica de "restinga", que se caracteriza por la alta intensidad luminosa, el suelo arenoso y la restriccin de agua.

Usos:
son atribuidos a preparados obtenidos a partir de races, tales como anestsico local y depurativas. Tambin se usa como infusin o decoccin para reducir la inflamacin de las articulaciones Entre los compuestos aislados, la plumbagina naftoquinona.

PLUMBAGINA NAFTOQUINONA
Merece atencin por la descripcin de numerosas actividades farmacolgicas: antimicrobiano anti tumoral tripanocidas antipaldico entre otros. Este naftoquinona se encuentra principalmente en las races de varias especies del gnero Plumbago

PORQUE SE CONCENTRAN LOS METABOLITOS SECUNDARIOS MAS EN LAS RAICES Y EN LAS HOJAS?
Los compuestos orgnicos constituyen el alimento de la clula y los componentes estructurales de la pared y el protoplasma, adems de otros compuestos especiales, tales como las hormonas, pigmentos y enzimas. Dependiendo de la etapa fisiolgica de plantas, estos compuestos muestran cambios en su contenido. , las races siempre estn expuestas a microorganismos del suelo distintos, que pueden explicar la acumulacin de compuestos de defensa tales como la plumbagina naftoquinona. Puede funcionar en la defensa qumica de la planta contra patgenos. Durante el desarrollo floral, la planta puede ser ms susceptible al ataque de microorganismos, una vez que su metabolismo puede estar involucrado en la transicin del pice caulinar vegetativo en un pice reproductiva En la planta, dependiendo de la etapa, pueden variar, y este hecho influye en la produccin de sustancias qumicas. El aumento en el contenido de compuestos de defensa tales como naphthoquinonas durante el desarrollo floral puede proteger la planta durante un perodo sensible.

PLUMBAGO AURICULATA

PLUMBAGO SCANDENS

PARTE EXPERIMENTAL
Material botnico

Hojas, tallos y races de Plumbago scandens L

Hojas, tallos y races de Plumbago auriculata Lam

 Extraccin
Tallos y hojas
Muestra (Tallos y hojas de
ambas especies)

Lavado

Desinfectado

Secado
Extraccin por Maceracin con Metanol en mesa giratoria.

Triturado

Mesa giratoria modelo Shaker Bigger Bill con una velocidad de 50 rpm, a temperatura ambiente.

Races
Muestra (Races de
ambas especies)

Lavado

Desinfectado

Secado

Extraccin en soxhlet con cloroformo.

Triturado

Los extractos de cloroformo de las races fueron obtenidos por extraccin en Soxhlet durante 30 h.

El disolvente se elimin en un evaporador rotativo Bchi R114 a una temperatura de 40 C, equipado con controlador de vaco y bao de enfriamiento.

EQUIPO:

HPLC shimadzu Class-LC10

EQUIPADO CON DOS BOMBAS LC10AT

detector de espectro UV/VIS por una matriz de fotodiodos SPDM10A

INYECTOR Rheodyne 7725i, con volumen de inyeccin (Loop) de 20 uL

Columnas: Shim-Pack CLC-SIL 250x4.6 mm Shim-Pack CLC-ODS 259X4.6 mm Pre-Columnas: Shim-Pack CLC-G-SIL 10x4.0 mm Shim-Pack CLC-G-ODS 10X4.0 mm

Anlisis de naftoquinonas por HPLC en fase inversa

Anlisis de flavonoides con HPLC en fase inversa

Columna: Shim-Pack CLC-ODS 259x4.6 mm Pre-columna: Shim-Pack CLC-G-ODS 10x4.0 mm Fase estacionaria : C-18 o RP-18 (Si-(CH2)17-CH3); flujo 1ml/min Fase movil: Acetonitrilo agua 10:90 v/v Ambas fases con acido trifluoroacetico a 0.05 %

Deteccin mediante escaneo de rango: 200 nm a 400 nm Durante seguimiento de 3 longitudes de onda: 220 nm, nm 260 y 340 nm.

RESULTADOS. Se realizo realiz con gradiente de composicin de la fase mvil en vista rica produccin de flavonoides ricos en ambas especies. Se comprueba la presencia de estos flavonoides en los espectros de absorcin UV/VIS entre el rango de 200 400 nm

Seales cromatogrficas en anlisis de extractos metanlicos de Plumbago auriculata y P. scandens

Orientina

Vitexina-2-O-rhamnosideo

C27H30O14

Quercitrina

Epigenina 7-O-glucosideo

Vitexina

Acido Clorogenico

Anlisis de naftoquinonas por HPLC en fase normal

Se realizo usando el modo de elusin isocrtica. Naftoquinona plumbagina se aisl por mtodos clsicos fitoqumicas y se caracterizo por mtodos espectromtricos

Fue el primer tipo de HPLC, separaba analitos basndose en la polaridad.

Utiliza una fase estacionaria polar y una fase mvil apolar

HPLC Cromatografa de fase normal

La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de retencin de los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo de retencin

La fuerza de absorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la interaccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en comparacin a la fase mvil) aumenta el tiempo de retencin.

Composicin de la fase mvil

REGIMEN ISOCRATICO La composicin de la fase mvil permanece constante a lo largo de todo el cromatograma.

REGIMEN DE GRADIENTE La composicin de la fase mvil cambia a lo largo de la cromatografa y se emplea para separar mezclas muy complejas

QUINONAS
Son muy abundantes en la naturaleza, en el reino vegetal Coloracin desde amarillo plido hasta negro Se encuentra frecuentemente en la corteza o la raz , y en algunos casos en las hojas Pueden clasificarse en benzoquinonas, naftoquinonas o antraquinonas

PLUMBAGO SCANDENS

NAFTOQUINONAS
Son pigmentos naturales, que tienen como caracterstica estructural poseer dos grupos carbonilo en las posiciones 1,4 y se presentan con grupos hidroxilo y/o metilo como sustituyentes Se han aislado de plantas, hongos, bacterias, e inclusive de animales. Sin embargo, se encuentran en mayor proporcin en plantas superiores de determinadas familias de Angiospermas como: Ebenaceae, Droseraceae, Bignoniaceae, Verbenaceae, Plumbaginaceae

PROPIEDADES DE NAFTOQUINONAS
Adems de sus propiedades como colorantes las naftoquinonas naturales presentan actividades biolgicas importantes Tintreas Antibacterianos Agentes antiparasitarios Antifngicos

Anticancergenos

Naftoquinona plumbagina
(2-metil-5-hidroxi-1,4-naftoquinona) Se encuentra en las hojas, corteza y races de especies de gneros como Plumbago (Plumbaginaceae) Se ha descrito el uso de Plumbago zeylanica en el tratamiento del dolor reumtico, en donde la plumbagina se muestra como la responsable de tal efecto Otras actividades de la plumbagina son como antiespasmdica, antibacteriana, antifngica antiparasitaria y anticancergena

Cromatograma tpico a 267mm de extractos clorofrmicos de races de Plumbago scandens (a) y de Plumbago auriculata (b) en fase mvil ciclohexano,cloroformo, isopropanol (50,50,1 v/v) con elusin isocrtica

Seales cromatogrfica en anlisis de extractos metanlicos de hojas y tallos y extractos clorofrmicos de races de Plumbago auriculata y P. scandens

Se han caracterizado nueve quinonas , como plumbagina naftoquinona se encuentra en los tallos y las races de ambas especies El anlisis por HPLC en fase normal, demuestra de nuevo la mayor produccin de metabolitos en P. auriculata, confirmando lo que ya se haba encontrado en el anlisis por HPLC en fase inversa El plumbagina se caracteriz en HPLC en fase normal, mostrando un tiempo de retencin de aproximadamente 4 minutos La presencia de quinonas se observ en todos los rganos de las plantas en estudio. En P. auriculata predomino quinonas en los tallos P. scandens el mayor nmero de sustancias metablicas de esta clase se caracteriza en las hojas Naftoquinona plumbagina se caracteriz como el producto principal producido en las races de P auriculata y P. scandens, que representan aproximadamente 12% a 20% del extracto crudo.

Su identificacin se realizo mediante comparacin con el estndar espectromtrico.

CONCLUSIONES
Los perfiles cromatogrficos de hojas, tallos y races de las especies Plumbago auriculata y P. scandens fueron caracterizados por HPLC en fase normal y fase inversa para estudios de normalizacin qumica de estas especies, determinando principalmente flavonides y naftoquinonas.

 La especie Plumbago auriculata mostr una mayor representacin de las clases qumicas analizadas, y una mayor produccin metablica. Con la identificacin de la presencia de cuatro flavonides, un cido o derivado fenlico y plumbagina naftoquinona. Este estudio reafirma los datos ya obtenidos en estudios anteriores de quimiosistemtica de orden Plumbaginales. La plumbagina naftoquinona, presente en grandes cantidades en las races de ambas especies, puede indicar una desviacin metablica para su produccin, que debe cumplir un papel muy importante en estas especies.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Olga Lock de Ugaz . Investigacin Fitoquimica:Mtodos en el estudio de productos naturales pp. 182-195. Editorial PUCP. I.Katime , O. Katime . Cromatografa lquida de alta eficacia Fuente : http://es.wikipedia.org/w/index.php?oldid=39444406 Lpez L, Lluvia Itzel; Leyva, Elisa; Garca de la Cruz . Las naftoquinonas: ms que pigmentos naturales . Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 42, nm. 1, enero-marzo, 2011 pp.6-17. Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.. Mara Emilia Carretero Accame. Compuesto fenlicos: Quinonas. Revista Panorama Actual Med 2000; 24 (236): 778-782

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Dahlgren, R. M. T.; Bot. J. Linn. Soc. 1980, 80, 91. Joly, A. B.; Botnica: Introduo Taxonomia Vegetal, Companhia Editora Nacional: So Paulo, 1977, p. 542. Lima, O. G. de; D'Albuquerque, I. L.; Maciel, G. M.; Maciel, M. C. N.; Rev. Inst. Antibiot. 1968, 8, 95.

Gupta, M. M.; Verma, R. K.; Uniyal, G. C.; Jain, S. P.; J. Chromatogr. 1993, 637, 209

PAGINAS WEB:
hppt:// issuu.com/kathycharrimacassi/docs/hplc#download Hppt://www.upct.es/~minaeees/fundamentos_analisis_cromatografico.pdf hppt://www.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_por_cromato grafia_1.pdf hppt://dspace.ubu.es:8080/trabajosacademicos/bitstream/10259.1/64/1/Mart%C3% ADnez_Santamar%C3%ADa.pdf