Selective enrichment, isolation and molecular detection of Salinibacter and related extremely halophilic Bacteria from hypersaline environments

Rahel Elevi Bardavid, Danny Ionescu, Aharon Oren, Fred A. Rainey, Becky J. Hollen, Danielle R. Bagaley, Alanna;M. Small and Christopher McKay

ANTECEDENTES
Pozas de cristalizacin salinas e hipersalinas
Color rojo
Alga (Dunaliella) Arqueas (Halobacteriales) Bacteria (hipersalinas) 5-25% (FISH)
Salinibacter ruber Flabobacterium/Cytophaga Aerbico Halfilo obligado (200-300 g/l NaCl) Color rojo Salinixantina (carotenoide acil-glucosilado C40)

OBJETIVOS
Establecer un mtodo fiable para el enriquecimiento y aislamiento de Salinibacter y bacterias haloflicas extremas relacionadas con el gnero
Basadas en diferencia de sensibilidad antibitica Obtener nuevas cepas del gnero Obtener informacin de su abundancia

Confirmar su presencia en las pozas de cristalizacin salinas e hipersalinas

MATERIAL Y MTODO
ZONAS DE MUESTREO
MUESTRAS PROCESOS RECUENTO Y AISLAMIENTO EN PLACA MICROSCOPIA EILAT - ISRAEL BADWATER VALLE DE LA MUERTE California - USA COSTRAS DE EVAPORACIN

SALMUERAS

Puro
Medio R2A-20 Suplementado

Bacitracina (40 mg/l) Anisomicina (25-50 mg/l)

C. Neubauer

Dunaliella sp Salinibacter Espectofot. (etanol:acetona, 1:1)

C. Petroff-Hausser
BIOQUMICA Ext. y caract. de pigmentos Anlisis de cidos grasos Primer Dendograma Filogentico

GC-MS (cidos grasos-metil ester)

27F (5`-AGAGTTTGATCCTGGCT-CAG-3)

FILOGENIA

1390R(5-CG-GTGTGTRCAAGGCCC-3)

RESULTADOS

Fig. 1 Phase contrast micrographs of Salinibacter ruber M31 (a), and isolates RE-1 (b), RE-2 (c), and BW-1(d). The bars represent 20 lm

CONCLUSIONES
La metodologa sugerida para el enriquecimiento selectivo y el aislamiento de microorganismos tipo Salinibacter, provee de un confiable mtodo de obtencin de estos organismos a partir de diferentes ambientes hipersalinos
La diversidad de bacterias del grupo Salinibacter en los ambientes hipersalinos trabajados se manifiesta morfolgica, fisiolgica y genticamente
Hay una gran diversidad dentro del grupo Salinibacter que es generalmente representado por una sola especie El anlisis filogentico mostr que las secuencias de 16S rRNA recuperadas de las costras de evaporacin de Badwater estn dentro del campo de irradiacin del gnero Salinibacter pero representan nuevos y distintos linajes Las secuencias de genes 16S rRNA de las cepas BW-1 y BW-6 (que son idnticas) son similares a las secuencias del clon recuperado de las costras de evaporacin en un 92 a 96%.

La aplicacin del mtodo descrito, en una amplia variedad de ambientes con alta concentracin de sal podr aumentar nuestro conocimiento de la diversidad de representantes haloflicos extremos del dominio Bacteria y la biodiversidad de los ambientes hipersalinos

COMENTARIO