las causas mas frecuentes de las mutaciones se dan durante la replicación del DNA, por la colocacion de bases incorrectas

. También hay errores de inserciones delecciones y ruptura de enlaces en una hebra o varias

 La demostración del origen de las mutaciones es el

grado de error que presentan las enzimas naturales, las dna polimerasas (de los mamiferos ), cuando se sintetiza DNA in vitro en ciertas condiciones . En los mamiferos las 5 principales clases de DNA polimerasas son δ, ε, β, α, γ.las polimerasas δ y α intervienen en la replicacion del genoma delos mamiferos , mientras que las ε y β estan vinculadas con procesos especiales de reparacion del DNA y la polimerasa γ se asocia con el proceso de replicacion del DNA mitocondrial

En ciertas condiciones las polimerasas α y β no poseen la actividad correctora (exonucleasa) , por la presencia inhibidora de una subunidad especifica . Por eso introducen un error . Las altas tasas de error in vitro indican la existencia de correctores in vivo

 La lectura de prueba que realizan las polimerasas

reduce la tasa de errores. Este mecanismo consiste en la eliminacion de los nucleotidos incorrectos inmediatamente despues de que se agreguen al DNA en crecimiento durante la replicacion La recombinacion en el DNA es un mecanismo para salvar interrupciones en la replicacion

Algunas enfermedades geneticas se deben a la expansion de de repeticiones de tres nucleotidos
 Hay presencia de secuencias de DNA con tendencia

producir errores en el transcurso dela replicacion

Enfermedad de Huntington
 transtorno neurologico autosomico dominante, gen

mutado expresa proteina huntingtina q se expresa en el cerebro y contiene residuos de poliglutamina  Las disposiciones repetidas tienden a alargarse de una generacion a la siguiente “anticipacion”

Las bases se pueden lesionar por agentes alquilantes, agentes oxidantes y la luz
 Agentes quimicos que causan la alteracin de las bases

luego de la replicacion del DNA  Mutagenos  especies de oxigeno reactivas como el radical hidroxilo  Ejm guanina al reaccionar con agua produce 8oxoguanidina el cual se va a emparejar con adenina

 Desaminacion
 Es cuando la adenina se modifica a hipoxantina y se

empareja con citosina  Alquilacion  la radiacion ultravioleta de la luz solar y la radiacion electromagnetica alta de los rayos x son mutagenos

Tipos de lesiones
Daño espontáneo

A) Desaminaciones

A) B) Depurinación

Daño producido por agentes externos
A) Daño producido por radiación UV

B) Daño por alquilación

+

Benzopireno

Guanina

Benzopireno-guanina

Sistemas de Reparación DNA

O-6-metilguanina

REPARACIÓN POR ESCISIÓN
Son aquellos mecanismos de reparación en los que se elimina la zona en la que se encuentra la lesión. Hay dos tipos de mecanismos de reparación por escisión

REPARACION POR ESCISION DE BASE (BER)
 Reparacion

de bases no habituales (Uracilo, hipoxantina, xantina),Bases alquiladas, Dimeros de pirimidinas en algunos otros organismos.  DNA glucosilasas, cortan enlace N-glucosilo; dejando sitios AP o abásicos. Uracilo DNA glucosilasa. Bacterias presentan 1 solo tipo. En el hombre 4 tipos: UNG (más abundante), hSMUG1, TDG y MBD4.

Pasos del BER
 Uracilo DNA glucosilasa, rompe el uracilo producto

de la desaminacion de C.  AP endonucleasa, corta cadena que contiene sitio AP.  El DNA es reemplazado por DNA polimerasa I  El espacio vacío es sellado por DNA ligasa

REPARACION POR ESCISION DE NUCLEOTIDO (NER)
 Lesiones del DNA que producen importantes cambios

estructurales, como dímeros de Pirimidina.  Este mecanismo de reparacion es la principal via de muchos tipos de lesiones de ADN. Como los dímeros de Timina, fotoproducto 6-4, benzopireno-guanina (por efecto al humo del cigarrillo).

Pasos del NER
 Excinucleasa. Enzima multimerica que hidroliza 2

enlaces fosfodiester. En Bacterias escinde de 12- 13 nucleotidos. En humanos de 27-29 nucleotidos.  ABC excinucleasa. 3 subunidades (UvrA, UvrB y UvrC).  DNA polimerasa I.  DNA ligasa

NER en Bacterias

Los pacientes de xeroderma pigmentosa (XP). son extremadamente sensibles a la luz solar (sufren quemaduras abundantes en su piel, desarrollan melanomas, Tienen mutaciones en genes implicados en vías de NER Hay 7 genes implicados: XP (A – G). En dímeros de timina, la XP A reconoce dicha lesión, entonces se introduce una helicasa TFII y se va abriendo el DNA en la zona adyacente a la lesión. XP G y XP F van cortando y eliminando la zona de la lesión. Se libera el oligo (23-24 nts) y RFC coloca la pinza PCNA para que la DNA polimerasa ε rellene el hueco y la ligasa selle el nick (en esencia es lo mismo que ocurre en E. coli).

Sistemas eucarióticos responsables del mecanismo de reparación por escisión de nucleótidos (NER)

REPARACION DE APAREAMIENTOS INCORRECTOS (MMR)
 Los errores que comete la DNA polimerasa dan lugar a

desapareamientos de bases, así si a una G por error se le enfrenta una A, aunque son bases normales, no lo es su apareamiento, (mismatch: bases desapareadas). En condiciones normales la actividad exonucleasa asociada a la polimerasa evita los desapareamientos, pero si no lo hace hay que eliminarlo antes de que la banda se replique, ya que si no, la mutación quedaría fijada

 En E. coli existe un grupo de genes llamados Mut,

implicados en la eliminacin de estos desapareamientos (si hay mutantes en estos genes Mut se produce una tasa de mutación más elevada de lo normal).  El sistema de E. coli usa un reparisoma formado por las siguientes proteínas:

Modelo para las primeras etapas de reparación de apareamientos incorrectos
•Discriminacion de hecbra por

metilacion de A , por la Metilasa Dam. En secuencias 5´ GATC. •Mut S y Mut L forman complejo en el apareamiento incorrecto. •La cadena es pasada a través de este complejo hasta encontrar a la MutH. •La Mut H quien corta la hebra no metilada, en la secuencia G (del GATC en el lado 5´)

Finalización de la reparación de apareamientos incorrectos

REPARACION PROPENSA AL ERROR
Reparación por síntesis de translesión “trans lesion synthesis” (TLS) ¿Qué ocurre si la DNA pol de replicación encuentra una lesión, dímero de T o un sitio AP, que no ha sido reparada?

Actúa un mecanismo de seguridad que permite que la maquinaria de replicación se salte “by –pass” estos sitios de lesión

Este sistema es muy propenso a cometer errores, pero evita que un cromosoma se replique de manera incompleta

Polimerasas de translesión: DNA polimerasas

E. Coli

• Sintetizan DNA a través del sitio de la lesión

• Son dependientes de molde
• Incorporan nucleótidos de una manera independiente de apareamiento de bases, por eso cometen errores con frecuencia

Causas de rotura de doble hebra
• Radiaciones ionizantes (rayos g, rayos X) • Especies de oxígeno reactivas • Quimioterápicos (bleomicina)

Síndrome de Bloom  Enanismo
 Fotosensiblidad cutánea
 Predisposición a múltiples neoplasisas:

carcionomas, leucemias y linfomas.  Múltiples alteraciones cromosómicas  Se debe a una mutación del gen BS (c. 15q26.1)

Ataxia Telangiectasia
 Se debe a una mutación en el gen ATM (C. 11Q22.3).  Telanglectasias.

 Predisposición al cáncer.
 Acompañado de la diabetes mellitus.  Incurable y presistente.

Anemia de Fanconi  Pequeña estatura, defectos en
huesos (hiper- hipo pigmentación de la piel),hipersensibilidad al oxígeno.  Leucemias, tumores cutáneos.  Alteración del sistema nervioso central.

Xerodermarecesiva. pigmentoso (XP) Enfermedad genética
  Defecto

el proceso de reparación por escisión de nucleótidos(NER).  Los pacientes no puede remover segmentos de DNA dañados por la radiación ultravioleta.  Ocasiona la aparición de un gran número de manchas pigmentadas de color oscuro.  Riesgo elevado de desarrollar cánceres de piel letales y desfigurantes.

en

Xeroderma pigmentosoel(XP)  Descrito, por primera vez, en 1863 por dermatólogo
húngaro Moritz K. Kaposi. Algunos años más tarde pasó a denominarlo xeroderma pigmentosum, al describir 6 nuevos casos en donde destacó la pigmentación asociada a la atrofia.  En 1932, De Sanctis y Cacchione, observaron la existencia de anomalías neurológicas asociadas al cuadro de XP  En 1968, Cleaver estableció el origen molecular del XP, al comprobar la existencia de una anomalía en los procesos de reparación del ADN en cultivos de fibroblastos de pacientes con XP irradiados con luz ultravioleta.

Pruebas diagnósticas más habituales para la detección de XP
 Hipersensibilidad celular a la radiación ultravioleta.- Exposición de

un cultivo de células a una dosis de radiación ultravioleta. Esta técnica se ha llevado a cabo utilizando fibroblastos de la piel.  Síntesis no planificada de ADN (unscheduled DNA synthesis, UDS).- mide la acción combinada de endonucleasa, exonucleasa y polimerasa del sistema de reparación de nucleótidos por escisión. Las células son irradiadas con radiación ultravioleta y posteriormente incubadas en un medio que contiene timidina marcada radiactivamente.  Reactivación celular en el huésped.- se utiliza un plásmido no replicativo que contenga un gen cuya correcta expresión sea fácil de detectar . El plásmido, irradiado y dañado con radiación ultravioleta, se transfecta en la célula humana cuya capacidad de reparación se pretende determinar.

Síndrome de Cockayne(CS)
 Con patrón de herencia autosómico

recesivo.  fue nombrado por Edward Cockayne, médico británico quien en 1933 lo describió por primera vez.  Personas afectadas tienen una sensibilidad a la luz solar, baja estatura, alteraciones del desarrollo y envejecimiento prematuro.  Su causa son las mutaciones en los genes ERCC6 ERCC8.

Tipos de Síndrome de Cockayne
 El tipo I.- Es el clásico, el feto tiene un crecimiento normal

que se ve saboteado por anormalidades en los primeros dos años de vida, tales como el deterioro de la visión, el oído y el sistema nervioso central y periférico. Esta degeneración progresiva conduce hacia la muerte, sea en la primer o segunda década de vida.
 El tipo II.- También llamado connatal, tiene una esperanza

de vida hasta los siete años.
 El tipo III.- Es menos frecuente todavía, de aparición tardía

y más suave que los anteriores.

 Transtorno autosómico recesivo.

 Caracterizado por una deficiencia de azufre,

Tricotiodistrofia (TTD)

cabellos quebradizos, etc.  La mayoria de los pacientes con ticrotiodistrofia tiene un defecto en XPD (ERCC2). Algunos presentan mutaciones en XPB(ERCC3) y TTDA(TBF5), genes que son componentes del factor de transcripción TFIH que regula tanto la reparación del DNA como su transcripción.  La tricotiodistrofia fotosensitiva puede ser causada por la mutación de por lo menos 2 genes separados: PROTEÍNA ERCC2 y ERCC3.  La tricotiodistrofia no-fotosensitiva es causada por la mutación en el gen TTDN1.

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