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Spiraeosid aus Blten der Spierstaude 159

2.49 Isolierung von Spiraeosid aus Blten der Spierstaude


Prinzip: Gepulverte Spierblumen {Filipendula ulmaria (L.) MAXIM) werden zur Extraktion der lipophilen Begleitstoffe kontinuierlich mit Dichlormethan extrahiert. Aus dem Drogenrckstand wird Spiraeosid neben anderen lipophilen Begleitstoffen durch kontinuierliche Extraktion mit Methanol ausgezogen. Die Abtrennung von Spiraeosid aus dem eingeengten Extrakt erfolgt durch Sulenchromatographie. Gehalt: 1,2%. Strukturformel

Spiraeosid (Quercetin-4'--D-glucosid) C 2 1 H 2 0 O 1 2 , MG 464,4; Smp: 209-211 C (aus verd. Aceton), [a]J7 = - 6 9 (in Methanol)

Chemikalien Spiraeae flos, pulv. (300), 50 g Dichlormethan, 1500 cm3 Methanol, 1000 cm3 Aceton, 50 cm3 Kieselgel zur SC (0,063-0,2 mm), 150 g Seesand, 80 g DC-Schicht, Kieselgel F254, 20 x 20 cm Aktivkohle, 1 g Rutin, 5 mg (Vergleich) Allgemeine G e r t e Rotationsverdampfer DC-Grundausrstung Wrmeplatte Vakuumexsikkator Heizpilz, 500 cm3 Durchfhrung

Gerte 1 Extraktionsapparatur nach Soxhlet, 250 cm3 mit 500 cm3-Rundkolben Rundkolben, NS 29, 250 cm3 (1), 100 cm3 (1) Becherglser, 250 cm3 (2), 100 cm3 (2), 50 cm3 (2) 1 Mrser, 0 6 cm mit Pistill 1 Trichter, 0 6 cm 1 Kristallisierschale, 0 8 cm 1 Glasfiltertrichter, 0 5 cm mit pass. Guko zu Saugrohr, 25 cm3 1 Chromatographiesule, / = 120 cm, 0\ = 2 cm Reagenzien Naturstoff-Reagenz (= Diphenylboryloxyethylamin, Reag. Nr. 12) Anisaldehyd-Schwefelsure (Reag. Nr. 3)

a) Extrakt: 50 g Spiraeae flos, pulv. (300) werden in einer 250 cm3-Soxhlet-Extraktionsapparatur mit 400 cm3 Dichlormethan 8 h extrahiert. Der Extrakt (= DC-Lsung a) wird verworfen. Der Drogenrckstand wird an der Luft getrocknet und danach in der gleichen SoxhletExtraktionsapparatur mit 400 cm3 Methanol 8 h extrahiert. Der methanolische Extrakt (= DC-Lsung b) wird am Rotationsverdampfer weitgehend eingeengt bis zur beginnenden Ausfllung (ca. 10 g sirupser Extrakt). b) Sulenchromatographie Allgemeine Durchfhrung: Siehe S. 11: Sulenchromatographische Trennungen. Chromatographiesule: l = 120 cm, 0{ = 2 cm Stationre Phase: Kieselgel zur SC (0,063-0,2 mm), 150 g. Elutionsmittel: Dichlormethan-Methanol (80 + 20), 1200 cm3. Dichlormethan-Methanol (70 + 30), 500 cm3. Aufgabemenge: Der sirupartige Extrakt (a) wird mit ca. 50 g Seesand in einer Kristallisierschale verrieben und die Mischung auf dem Wasserbad zur Trockne eingedampft. Diese Mischung wird in einem Mrser verrieben und die pulvrige Masse wird auf die Kieselgelschicht in der Chromatographiesule derart aufgegeben, da sie vom berstehenden Elutionsmittel stets sofort befeuchtet wird.

160 Kennzeichnung von Naturstoffen Tropfgeschwindigkeit: 2-3 Tropfen/s. Fraktionen: 15 cm 3 . Nach Einengen der Spiraeosid-haltigen Fraktionen zur Trockne fllt Spiraeosid als gelbe, amorphe, pulvrige Masse an. Das noch wenig Begleitsubstanzen enthaltende Produkt wird in der vierfachen Menge von 75proz. (V/V) Aceton gelst, mit einer Spatelspitze Aktivkohle versetzt, kurz auf dem Wasserbad aufgekocht und abfiltriert. Beim Einengen im Vakuumexsikkator scheiden sich gelbe Kristalle aus, die ber einen Glasfiltertrichter abgesaugt werden. Falls keine Auskristallisation erfolgt, wird die Lsung erneut zur Trockne eingeengt und mit gerade so viel eines Gemisches aus 5 Volumenteilen Dichlormethan und 1 Volumteil Methanol versetzt, bis beim Erhitzen auf dem Wasserbad eine klare Lsung entsteht. Diese Lsung wird wiederum mit einer Spatelspitze Aktivkohle versetzt, kurz auf dem Wasserbad aufgekocht und filtriert. Beim Abkhlen im Khlschrank scheidet sich Spiraeosid amorph aus. Ausbeute: 200-300 mg. Zeitdauer: 3-4 Tage. c) Dnnschicht-Chromatographie I. Standardmethode: Ja. IL Schicht: Kieselgel F254. III. Fliemittel: Essigsureethylester-Ameisensure-Wasser (65 + 15 + 20), KS, 10 cm. ZV. Nachweis: Nach Abdampfen des Fliemittels auf der Wrmeplatte: a) UV254: Fluoreszenzmindernde Zonen markieren. b) UV365: Fluoreszierende Zonen markieren. c) Besprhen mit Naturstoffreagenz ( = Diphenylboryloxyethylamin, Reg. Nr. 12) und anschlieend im langwelligen UV-Licht auswerten. (Spiraeosid mit mittleren Rf-Bereich des Chromatogramms zeigt eine deutliche gelbgrne Fluoreszenz. Die im unteren Drittel des Chromatogramms liegende Vergleichssubstanz Rutin zeigt eine orangefarbene Fluoreszenz). Oder d) Anisaldehyd-Schwefelsure (Reag. Nr. 3), 5-10 min, 110 C. V. Untersuchungslsung a) 10 mm 3 des eingeengten Extrakts (a) ( = DC-Lsung b) werden in 0,1 cm 3 Methanol gelst, davon trgt man 5 mm 3 punktfrmig auf. b) Ab Fraktion 20 trgt man von jeder 3. Fraktion 5-10 mm 3 punktfrmig auf. VI. Vergleichslsung: 5 mg Rutin werden in 1,0 cm 3 Methanol gelst, davon trgt man 2 mm 3 punktfrmig auf. Auswertung 1. Abschlieende Dnnschicht-Chromatographie DC-Bedingungen: L, IL, III., IV. und VI. wie bei c) V. Untersuchungslsung: Bandfrmige Auftragung (20 x 3 mm): a) Spiraeae flos-Extrakt: 0,5 g Spiraeae flos pulv. (300) werden mit 5 cm 3 Methanol kurz auf dem Wasserbad aufgekocht und danach filtriert. Vom Filtrat trgt man 10 mm 3 auf. b) DC-Lsung a: 10 mm 3 . c) DC-Lsung b : Verdnnung 1:10 (vgl. c, V, a) 10 mm 3 . d) Isoliertes Spiraeosid: 5 mg werden in 1,0 cm 3 Methanol gelst, davon 10 mm 3 . VZ. Vergleichslsung: Siehe c, VZ: 10 mm 3 werden bandfrmig (20 x 3 mm) aufgetragen. 2. Das IR-Spektrum des isolierten Spiraeosids ist aufzunehmen, mit dem abgebildeten Spektrum und den wiedergegebenen Daten zu vergleichen.

Strvchnin und Brucin aus Strychnos-Samen 161

3500

3000

2500

200

18

16

14" Welten zahl cm -1

IR-Spektrum von Spiraeosid (2 mg/200 mg Kaliumbromid).


Wellenzahl cm" 3540-3100 2930-2890 1657 1619 1598, 1556, 1520-1505 1430 Zuordnung alkohol. und phenol. OH ^CH2 ^C =O trisubst. olef. Doppelbind, (konj.) Aromat ^ C H 2 , Aromat und prim. Alkohol phenol. OH trisub. olef. Doppelbindung phenol. OH alkohol. und phenol. OH alkohol. OH Ether Ether, Subst. am Aromat und trisub. olef. Doppelbind. Schwingungsart OH-Streckschwingung CH-Streckschwingung C = O-Streckschwingung C = C-Streckschwingung CC-Streckschwingung CH-Beugeschwingung CC-Streckschwingung assoz. OH-Beugeschw. OH-Beugeschwingung CH-Beugeschwingung freie OH-Beugeschw. freie OH-Beugeschw. CO-Streckschwingung CO-Streckschwingung asym. CO-Streckschw. sym. CO-Streckschw. CH-Beugeschwingung

1370 1345 1315 1250-1170 1050-1010 1088 890-790

3. Das UV-Spektrum des isolierten Spiraeosids ist aufzunehmen. (5 mg Spiraeosid werden in 100 cm 3 Methanol gelst, davon werden 10 cm 3 mit Methanol auf 25 cm 3 aufgefllt.) Xmax = 366nm (8 = 14900). A,max = 254 nm (e = 14300). 4. Der Schmelzpunkt des isolierten Spiraeosids ist zu bestimmen.

Weitere Aufgaben a) Welche weitere Quercetinglykoside kommen als Pflanzeninhaltsstoffe vor? Geben Sie die entsprechenden Zuckerkomponenten und deren Substitutionsstellen an. b) Was sind Iso- und Neoflavone ? c) Geben Sie weitere natrlich vorkommende flavonoide Strukturen an.

2.50 und 2.51 Isolierung von Strychnin und Brucin aus Strychnos-Samen
Vorsicht: Strychnin ist sehr giftig! Prinzip /Die gepulverten Strychnos-Samen (Strychnosnux-vomicaLiNNE) werden mit Petrolether entfettet und anschlieend alkalisiert; daraus werden die Alkaloidbasen mit Dichlormethan