DEUTSCHE NORM Bestimmung des Oberflachenkeimgehaltes auf Einrichtungs- und Bedarfsgegenstanden im Lebensmittelbereich Tell 3: Semiquanttatves Verfahen mit nhrbodenbeschichteten| Eninahmevorichtungen (Abklatschvertahven) 13 07100,30; 67020 Deskriotoren: Oberflachenkeimzahl, Bedarfsgegenstand, Lebensmitel, Einrichtungsgegenstand, Geheltsbestimmung Determination of surface colony count on fitment and utensils in foodareas — Part 9: Semiquanttative method with culture media laminated taking up equipment (squeeze method) Détermination du comptage des colonies de la surface sur objets d'equipement et de consommation dans les domai nes alimentaires — Partie 3: Méthode sémiquantitative avec des plats recouverts du milieu de culture (méthode de répreuve) Vorwort Diese Norm wurde vorn Normenausschu8 Lebensmittel und landwirtschaftiche Produkte, Arbeitsausschu8 “Veterinar- medizinische Fleischuntersuchung’, erarbeitet und mit dem Arbeitsausschu® "Mikrobiologische Milchuntersuchung' Juli 1997 DIN 1013-3 abgastimmt Anhang A ist informativ. DIN 0113, bereich” besteht aus: ‘all 1: Quantitatives Tuptervertahren Tell 2: Semiquantitatives Tupfervertahren “Bestimmung des Oberflachenkelmgehaltes auf Einrichtungs- und Bedarfsgegenstinden im Lebensmittel- ‘ell 3: Semiquantitatives Verfahren mit nahrbodenbeschichteten Entnahmevorrichtungen (Abklatsohverfanren) 1 Anwendungsbereich Diese Norm legt ein Verfahren zur semiquantitativen Bestimmung des Oberflachenkeimgenaltes aut Einrich- tungs- und Bedarfsgegenstanden im Lebensmittelbereich fest. Als vereinfachtes Verfahren ist es zur orientierenden Keimzahibestimmung anwendbar. Neben Plate-Count- Agar (siehe Anhang B von DIN 10113 -1: 1997-07) dtrfen auch selektive Nahrmedien verwendet werden ‘ANMERKUNG: Dieses Verfahren eignet sich fur eine mikrobiologische Kontiolle der Wirksamkeit von Reinigungs- und Desinfektionsmitteln 2 Normative Verweisungen Diese Norm enthalt durch datierte oder undatierte Verwel- sungen Festlegungen aus anderen Publikationen. Diese normativen Verweisungen sind an den jeweiligen Stellen im Text zitiert, und die Publikationen sind nachstehend autgefihrt. Bei datierten Verweisungen gehéren spatere Anderungen oder Uberarbeitungen dieser Publikationen nur 2u dieser Norm, falls sie durch Anderung oder Uberar- beitung eingearbeitet sind, Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe der in Bezug genommenen Publi keation. DIN 0113-1: 1997-07 Bestimmung des Oberfiichenkeimgehaltes aut Ein- richtungs- und Bedarisgagenstanden im Lebensmit- telbereich — Tell t: Quantitatives Tupterverfahren 3 Definitionen Fur die Anwendung dieser Norm gelten die Definiionen nach DIN 10113-1 sowie die folgende: 31 Nahrbodenbeschichtete Entnahmevorrichtung Glas- oder Kunststoftriger, der manuell oder industrell miteinem Nahrboden beschichtet worden ist. 4 Pri Nach Entnahme der gegen Austrocknung geschdtzten nahrbodenbeschichtetenEntnahmevorrichtung aus einem gut verschlieBbaren Tansportbehalter wird die eschichtete Seite mit der zu untersuchenden Fiche durch Andricken in Kontakt gebracht. AnschlleBend wer- den die "beimptten’ Entnahmevorrichtungen in den gut verschlieSbaren Transportbehalter zurUickgefdhrt_und direkt in diesem Behlter bei 30°C 72 h aerob bebritet Die Auswertung erfolgt durch Zahlen der sichtbaren baw. typischen Kolonien, 5 Chemikalien und Nahrbodenbestandteile 51 Allgemeines Die Chemikalion und Nahrbodenbestandtelle missen fur rmikrobiologische Zwecke geeignet sein. Um vergieich- bare Ergebnisse zu ertalten, sollen eindeutig dekiarierte Fortsetzung Seite 2 bis 4 Normenausschu® Labensmittel und landwirtschattiche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung eV. (© DIN Dovtaches Ina fi Normung eV. lege At Gor verselaNigung, auch auezugewaie, erin gestae, fr it Gentian des DIN Devtsches st fr Norman 8 -Aleinverkaut dor Normen dutch Bout Verlag Gm, 10772 Bain Protege 08 "Ret. Nr DIN 10119-3:1997-07 Verte 0008Seite 2 DIN 10113-3 : 1997-07 Nahrbodenbestandtelle und analysenreine Chemikelien nd Tiockennahrbécen verwendet werden. Den Anwei- sungen des Herstellers ist zu folgen. Das verwendete Wasser mu entweder in Glasgeraten destiliert oder ent- rmineralisiert und mindestens von entsprechender Rein- helt sein, Es dart keine Bestandteile enthalten, die das, Wachstum von Mikroorganismen besinflussen, 5.2 Nahrboden (Plate-Count-Agar) 524 Allgemeines ‘Abhiingig von dem jeweiligen Untersuchungszweck wird ein for den quantiiativen Nachweis. spezifischer Kelm- spektren erforderliches selektives Nahrmedium, das den jeweiligen in Normen autgefahrten Rezepturen entspricht, verwendet (siehe Anhang B von DIN 1013-1 1997-07) Fur die Bestimmung der aeroben Gesamtkeimzahl wird Plate-Count-Agar verwendet. 522 Zusammensetzung — 509 Pepton (Casein, typtisch verdaut) 259 Hefeextrakt pulverisiert —109 Glucose = 12bis 18.9 Agar, je nach Geliereigenschatt 1000 ml Wasser Zur Inaktivierung etwaiger Desinfektionsmittelrickstands miissen dem Nahrooden entsprechende Enthemmer Zzugesetzt werden (z.B. 10,0 g Polyoxyethylensorbitanmo- ‘nooleat (Tween 80°')) und 3.0 g Lecithin je Liter). Dabei ist darauf zu achten, da das Lecithin nach dem Steflisieren des Nahroodens homogen in diesem vertilt wird. Die Zugabe von Tween 80° fuhrt telweise zu einer veranderten Koloniemorphologie, cie bei der Auswertung der Nahrbodentrager beriicksichtigt werden muB. ANMERKUNG: Prinzipiell kann kein bestimmter Enthemmer vorgegeben werden, da der Einsatz von der Art des verwendeten Desinfektionsmittels abhangt. Haftende Desinfektionsmittel (z.B. quae temare_Ammoniumverbindungen, Amphotenside) konnen Fllcksténde auf Flachen hinterlassen und ‘somit einen Enthemmer notwendig machen. Diese Mittel werden durch den angagebenen Enthem= mer neutralisiert. Nicht haftende und flchtige Mit- tel (z.B. alkoholische Desinfektionsmittel, Sauren) sind nach ordnungsgemaBem Nachspulen zum Zeitounkt der Probenahme auf der Flache nicht mehr vorhanden, 523. Herstellung Die Nahrbodenbestandteile oder der Tiockennahrboden werden in Wasser geldst. Der pH-Wert ist so einzustellen, deB er nach dem Sterilsieren bei pH= 70-01 liegt gemessen bel einer Temperatur von etwa 45°C. Der Nahrboden wird in Kulturrdhrchen oder -kolben dberge- fart und 15 min bei 121°C sterilisiet. Wenn der Nahrboden nicht unmittelbar nach der Herstel- lung verwendet wir, ist er im Dunkeln und bel einer Tem- peratur zwischen 0°C und 5°C so aufzubewahren, da keine Veranderungen eintreten kénnen. Er dart nicht lan- ger als einen Monat derart autbewahrt werden. 4) Tween” ist ein Warenzeichen der ICl-America Inc. Uber Bezugsquelien gibt Auskunf: Normenausschus Lebensmittel und landwirtschattiche Produke (NAL) im DIN Deutsches institut fdr Normung e.V, Burg- grafenstrafe 6, 10787 Berlin, Postanschrit 10772 Berlin 5.2.4 Beschichtung der Entnahmevorrichtungen Die vorher griindlich gereinigten sterilen Kunststoft- oder Glas-Nahrbodentrager werden waagerecht gelagert, mit einer ausreichenden Menge des gaschmolzenen Nahrbo- dens beschichtet und zum Verfestigen stehengelassen, Die Agarplatten sind derart zu befullen, daB sich der Agar Uber den Rand hervorwélot. Nach kurzer Trooknung z. B. 30 min bei 50°C werden die fertig beschichteten Entnah- ‘mevorrichtungen in einen gut verschileGbaren Transport- behalter Ubergefahrt Bei einer Lagerung zwischen 0°C und 6°C sind die nah bodenbeschichteten Entnahmevorrichtungen in der Rego! bis 4 Wochen verwendbat. ANMERKUNG: Geeignete gebrauchsfertige Sy- tome sind im Handel erhailich. Bei der Verwen- dung dieser Produkte ist den Anweisungen des Her- sellers auch hinsichtich der Lagerung 2u folgen. 6 Gerate Nach DIN 101134 Zusatzlich werden benétigt: Platten oder Objekttréger aus Kunststof! oder Glas, ster oder sterlisierbar 7 Durchfiihrung 71 Abklatsch-Vorgang Unmittloar nach der Entnahme aus den gut verschiies Daren Tansporthehaltemn wird die nahrbodenbeschich- fete Eninahmevorrichtung (siohe 52.4) etwa 5s mit der gesamten Kontakttlache aut die Oberfiéche gedrickt (iene Bilder At und A2). Der Druck und die Anpassung an dia Oberfiache dart keine Luftblasen zwischen der Nahrbodenmasse und der zu untorsuchenden Flache entstehen lassen. Die beimptten Entnahmevorrichtungen werden unmittel- bar canach in den gut versenliosbaren Transportbanaiter verbracht. Deract geschitzt, dirten sie unter LichtabschiuS und bei einer Temperatur zwischen O°C und 5°C nicht linger als 24 h aufoowahrt werden, Der Kontakt der Nahrbdden mit Kondenswasser mu8 Uunbedingt vermieden werden. 72 Bebriitung Die _nahrbodenbeschichteten | Entnahmevorrchtungen werden aorob (72 = 2) h bei 30°C im Brutschrank bebri- fet. Adhangig. von der Zielkeimgruppe dart die Bebri- tungszeit auf 48 h reduzien werden ANMERKUNG: Fir die Bestimmung bestiny Mikroorganismen (z.B. Enterobakteriazeen, Psel domonaden, €. coli und Koagulase-positver Sta- Dhylokokken) durfen entsprechende selektive Nahrmecien mit jewells spezifschen Bebrutungs- bedingungen eingesetzt werden (siehe Anhang 8 von DIN 10113-1: 1997-07), 8 Auswertung 81 Zahlung der Kolonien Nach Ablaut der Bebritungszeit werden alle aut dem Nahrboden gewachsenen Kolonien, unabhangig_ von Gré8e, Form und Farbe, gezahit ANMERKUNG: Bei der Verwendung von selektiven Nahrmedien werden die jeweils charakteristischen Kolonien gezahi.82 Auswerteschema In Vorversuchen ist dieses Verfahren mit dem Verfahren nach DIN 10113-1 zu vergleichen. Anhand der ermittelten Ergebnisse ist das Auswerteschema (z.B, Tabelle 1) an dio Leistungsféhigkeit des Abklatschsystems anzupas- Dieser Abgleich mit dem quantitativen Tupfervertahren ‘muf auf jeden Fall auch bei anderslautenden Empfehlun- gen der Hersteller bestimmter Systeme vorgenommen werden. Seite 3 DIN 10113-3 : 1997-07 9 Untersuchungsbericht Im Untersuchungsbericht sind unter Hinweis auf diese Norm mindestens anzugeben: a) Art und Bezeichnung der Probenahmefiache; ) Art und Datum der Probenahme; ©) Eingangs- und Untersuchungsdatum d) das eingesetzte Untersuchungsverfahren; ©) Ergebnis nach vor Hersteller vorgegebenen Kate- gorien; 4) gegebenentalls Abweichungen von den Festlegun- gen dieser Norm Tabelle 1: Beisplel fir ein Auswerteschema fdr mesophile aerobe Keimzahlen (Oberflachenkeimgehalt) ‘Anzahl der gezahiten Kolonien Schllssel Kategorie ein Wachstum = ° 1 bis 3 Kolonien ( 1 “4is 10 Kolonien + 2 “1 bis 20 Kolonien + 2 31 bis 60 Kolonien pre 4 ‘er 60 Kolonien, aber nicht konfilierend tHe 5 Rasenwachstum, konfuierend R 6Seite 4 DIN 101133 :1997-07 Anhang A _(informativ) Beispiele fiir die Handhabung nahrbodenbeschichteter Entnahmevorrichtungen Bild A2: Platten