Bioanalytical Sciences

Xolair anti-IgE antibody

Daniel Gygax School of Life Sciences, Muttenz

Asthma eine wachsende Bedrohung

Asthma gehrt zu den hufigsten chronischen Krankheiten. Weltweit sind rund 300 Millionen Menschen betroffen. Bis zum Jahr 2025 wird sich die Anzahl der Erkrankten auf 400 Millionen erhhen. In Nordamerika, Grossbritannien, Irland, Australien und Neuseeland sowie in weiten Teilen von Sdamerika ist die Prvalenz von Asthma bronchiale am hchsten ( 10,1%). In der Schweiz sind ungefhr 480000 Menschen (7%) von Asthma betroffen, darunter ca. 86000 Kinder.
Die Prvalenz oder Krankheitshufigkeit ist eine Kennzahl der Gesundheits- und Krankheitslehre (Epidemiologie) und sagt aus, wieviele Menschen einer bestimmten Gruppe (Population) definierter Gre blicherweise 10.000 oder eine Million an einer bestimmten Krankheit erkrankt sind. Prvalenzratio = Anzahl der Kranken / Anzahl aller Untersuchten Schimmelpilze Ursache fr Asthma-Erkrankungen bei Kindern

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Pathologische Mechanismen beim Asthma

Die Grafik zeigt, welche Faktoren einen Asthmaanfall auslsen knnen und welche pathologischen Mechanismen einem Anfall zugrunde liegen.

Asthma is a disease in which inflammation of the airways causes airflow into and out of the lungs to be restricted. The muscles of the bronchial tree become tight and the lining of the air passages swells, reducing airflow and producing the characteristic wheezing sound. This is known as an asthma attack, which can occur as an allergic reaction to an allergen or other substance (acute asthma), or as a part of a complex disease cycle which may include reaction to stress or exercise (chronic asthma). 4

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Overview on molecular events

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Typ-1 Allergie: Sensibilisierung

Bei einem Kontakt mit einem Allergen produzieren die B-Zellen IgE-Antikrper, die sich auf den Mastzellen festheften. Diese Antikrper knnen, jeweils zu zweit, ein Allergenmolekl einfangen und neutralisieren. Das nennt sich auch Antigen-AntikrperReaktion. Bei einem ersten Kontakt mit dem Allergen werden nur wenige der auf der Mastzelle angehefteten IgE-Antikrper zur Neutralisation belegt. Dieser Reaktionsschritt nennt sich Sensibilisierung.

Ungefhr 90 Prozent aller Allergien sind Allergien von Soforttyp

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Typ-1 Allergie: Allergische Reaktion

Bei dem nchsten Kontakt mit demselben Antigen tritt dann die allergische Reaktion zutage. Die massenweise auf den Mastzellen festgehefteten IgE-Antikrper, das knnen zwischen 10.000 und 50.000 auf einer einzigen Mastzelle sein, fangen das Allergen ein. Das hat dann eine bermige Freisetzung von Histamin zur Folge. Durch die heftige Reaktion platzt die Mastzelle frmlich auf.
IgE wird von allergenspezifischen Plasmazellen produziert, nachdem ein Isotypenwechsel, kontrolliert von T-Zellen und T-Zell-Zytokinen, zur -Kette stattgefunden hat. Die Differenzierung der B-Zellen zu IgE produzierenden Plasmazellen erfordert zwei Signale: 1. IL-4 und IL-1349,62 und die 2. Interaktion zwischen kostimulierendem Oberflchen-Antigen CD40 der BZellen und CD-40-Liganden der T-Zellen. Institute of Chemistry & Bioanalytics 7

Therapieoptionen bei schwerem persistierendem Asthma

FEV1 (forced expiratory volume of 1 second) Die FEV1 ist ein Mass fr die Lungenfunktion und wird auch als Einsekundenkapazitt bezeichnet. Die Einsekundenkapazitt ermglicht in Relation zur Vitalkapazitt (TiffeneauIndex) die Beurteilung von obstruktiven und restriktiven Lungenerkrankungen und deren Ausmass. Siehe auch Spirometrie (FEV1).

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Molecular mechanism of action in asthma

Allergen

IgE

Allergen cross-links IgE on mast cells

Mast cell

- An attack of asthma begins when an allergen is inhaled - The allergen binds to IgE antibodies on mast cells in the lungs - Binding triggers release of histamines and leukotrienes of the mast cells - Smooth muscle cells of the bronchi to contract narrowing the lumen of the bronchi
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Biologische Eigenschaften der wichtigsten Immunglobuline

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Im Jahre 1921 erhielt ein Faktor, der aus dem Serum isoliert wurde und von einer Person zur anderen bertragbar war, den Namen Reagin. Eine zentrale Bedeutung in der allergischen Entzndungskaskade wurde schon damals vermutet. Knapp 40 Jahre spter (1960) identifizierten US-amerikanische und schwedische Forscher unabhngig voneinander, Reagin als einen zirkulierenden Antikrper-Subtyp und benannten ihn als Immunglobulin E (IgE).

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Die Struktur von IgE

Molekularstruktur (links) und schematische Darstellung (rechts) von IgE

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Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile

Mastzelle

Basophiler Granulozyt

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Omalizumab Xolair in allergic diseases

- Xolair: - Binds IgE regardless of allergen specificity - Inhibits mast-cell degranulation - Limits the release of inflammatory mediators - Down-regulates high-affinity receptors
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IgE spielt eine entscheidende Rolle bei der Entzndungskaskade

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Die Rolle von IgE bei allergischem Asthma

Bei Patienten mit allergischem Asthma kann durch Kontakt mit einem Allergen eine Mastzelldegranulation ausgelst werden. Die freigesetzten Mediatoren wie Histamin, Prostaglandine, Leukotriene und Thromboxane wirken auf die glatte Muskulatur der Luftwege und lsen eine sofortige Bronchokonstriktion aus. Dies fhrt innerhalb von Minuten nach dem Kontakt mit dem Allergen zur Entwicklung der typischen Asthmasymptome. Erst nach einigen Stunden tritt aufgrund der Aktivierung und Rekrutierung von Entzndungszellen (Eosinophile) die klassische allergische Sptreaktion auf.

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Dendritische Zellen von Asthmapatienten binden mehr IgE

Die Expression von FcRI-Rezeptoren wird nicht nur auf Eosinophilen sondern auch auf anderen Zellen (z.B. Neutrophile33, Blutplttchen53 und Epithelzellen13) beobachtet. Die Bedeutung der Rezeptoren auf diesen Zellen bei allergischem Asthma ist bisher noch nicht vollstndig aufgeklrt.

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Humanisierung des monoklonalen Anti-IgE-Antikrpers

Das Gerst des Anti-IgE-Moleks (XOLAIR) ist aus humanem Immunglobulin G aufgebaut. Die Region des CDR (komplementarittsbestimmende Region) ist gegen das IgE gerichtet. Es wird in Musen gezchtet und anschliessend auf das menschliche Immunglobulin bertragen . Der humanisierte monoklonale Antikrper Omalizumab (XOLAIR) enthlt deshalb lediglich 5% nichthumane (murine) Anteile. Die mgliche Entwicklung allergischer Reaktionen wird dadurch auf ein Minimum reduziert, was sich positiv auf das Sicherheitsprofil auswirkt. Zustzlich trgt die Humanisierung zu einer Verbesserung sowohl der Pharmakokinetik als auch der therapeutischen Wirksamkeit bei.
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Bindung von Xolair an den anti-IgE-Antikrper

XOLAIR bindet an die Region des IgE-Molekls, die mit FcRI-Rezeptoren der Zelloberflhen interagiert. Die Bindungsstelle fr den IgE-Rezeptor befindet sich in der C3-Dome des IgE-Molekls. An genau dieser Position bilden sechs wichtige Aminosuren ein System aus drei Schleifen. XOLAIR identifiziert genau diese Domne und bindet mit seinem CDR an die C3Domne des menschlichen IgEs mit einer Affinitt, die mit der Bindungsaffinitt zwischen IgE und den FcRIRezeptoren auf der Zielzelle vergleichbar ist.

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XOLAIR fhrt zu einer Down-Regulation der IgE-Rezeptoren

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Wirkungen von Anti-IgE

Die Behandlung mit XOLAIR reduziert die Konzentration anfreiem Serum-IgE und frt zu einer Down-Regulation der FcRI-Rezeptoren auf Basophilen und Mastzellen sowie anderen Entzndungszellen. XOLAIR reduziert ausserdem die Expression von FcRI auf dendritischen Zellen und beeinflusst auf diese Weise mglicherweise die Allergenprsentation ein grundlegender Prozess bei allergischen Vorgngen.

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Resorption, Distribution, Metabolismus und Elimination von Xolair

Der Abbau von XOLAIR wird durch sein IgG1-Gerst und die spezifische Bindung an IgE bestimmt. Die Leber ist einer der Orte, an denen IgE abgebaut wird, einschlielich des Abbaus durch durch das hepatische retikuloendotheliale System (RES) und die Endothelzellen. Intaktes IgG wird auerdem ber die Galle ausgeschieden und auf diese Weise im Gastrointestinaltrakt abgebaut. XOLAIR wird ber das neonatale Fc-Rezeptor (FcRn)System recycelt und durch die spezifische Bindung an IgE und Komplexbildung mit IgE aus dem Blutkreislauf entfernt. Man geht davon aus, dass die XOLAIR:IgEKomplexe ber eine Interaktion mit FcR abgebaut werden. Die Elimination von IgE erfolgt ber die Bindung an seine hoch affinen Rezeptoren (FcRI) sowie durch eine nichtspezifische Proteinbindung. Die Entfernung von IgE erfolgt fr gewhnlich schnell, d.h. mit einer Halbwertszeit von wenigen Tagen. Bei der Bildung von XOLAIR:IgE-Komplexen findet eine Verlagerung des IgE-Abbauweges vom schnellen FcRIzum langsameren FcR-Abbauweg statt.

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Xolair bildet kleine biologisch inaktive Komplexe mit IgE

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Massgeschneiderte Dosierungsstrategie

Um die individuelle Dosierung zu vereinfachen und eine effektive Reduktion der Konzentration an freiem IgE sicher zu stellen, wurde eine mehrstufige Dosiertabelle entwickelt.

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Dosing of Omalizumab
Allergic rhinitis Asthma

Total Serum IgE ng/mL

PK

2400 240 24

atopic patients

1 IU/mL = 2.4 ng/mL

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Relationship dose, IgE and symptoms

PK-PD

PK-PD-Eficacy

CGP 51901 [mg/dose]

Source: Racine-Poon et al., Clinical Pharmacol Therapeutics,1997: 62, 675-90. Institute of Chemistry & Bioanalytics 26

Xolair bewirkt eine signifikante Reduktion der Hufigkeit von Asthmaexazerbation

Xolair reduzierte signifikant die Hufigkeit der Asthmaexazerbationen im Vergleich zu Kontrollgruppen (0,91 vs. 1,47; p < 0,0001) (Abbildung 5.7). Dies entspricht einer Abnahme um 38,3%.

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Sicherheitsdaten

Bei der Analyse der unerwnschten Ereignisse wurden aus der Studienpopulation 6132 Patienten untersucht. Dabei waren in der XOLAIR- und in der Kontrollgruppe die hufigsten beschriebenen unerwnschten Ereignisse Entzndungen des Nasen-Rachen-Raums, Infektionen der oberen Atemwege, Kopfschmerzen und Entzndungen der Nasennebenhhlen. Die Unterschiede zwischen den Gruppen waren gering und wiesen auf keine spezielle Organtoxizitt hin. Die unerwnschten Ereignisse waren im Allgemeinen leicht bis mssig und von kurzer Dauer.
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Assays to determine drug and anti-drug antibodies in serum

Determination of drug
acridinium label

Determination of anti-drug antibodies

1st step

2nd step
E P

CGP 51901

CGP 51901 enzyme antibody IgE

anti-CGP 51901 capture antibody

anti-CGP 51901 antibody

Paramagnetic particles

anti-IgE blocking antibody

specificity: working range: throughput:

free drug 10-1000 ng/mL 160 samples/d

specificity: working range:

immune response antibodies 5-100 equivalents/mL

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Y
CGP 51901 capture antibody 29

anti-CGP 51901 signal antibody

Assays to determine total and free IgE in serum

Determination of total IgE Determination of free IgE

1st step

2nd step

Y Y

CGP 51901-IgE complex CGP 51901

anti-IgE1 capture antibody

Pre-incubation of sample with CGP 51901

IgE or sample

specificity: working range: throughput:

free and complex IgE 2- 460 ng/mL 160 samples/d

specificity: working range: throughput:

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anti-IgE2 fluorescence antibody

CGP 51901-IgE complex

YY

E P
anti-IgE2 enzyme antibody CGP 51901 capture antibody

free IgE 9- 500 ng/mL 90 samples/d

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