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Bioanalytical Sciences Xolair – anti-IgE antibody Daniel Gygax School of Life Sciences, Muttenz

Bioanalytical Sciences

Xolair – anti-IgE antibody

Daniel Gygax School of Life Sciences, Muttenz

Bioanalytical Sciences Xolair – anti-IgE antibody Daniel Gygax School of Life Sciences, Muttenz
Asthma eine wachsende Bedrohung Asthma gehört zu den häufigsten chronischen Krankheiten. Weltweit sind rund 300

Asthma eine wachsende Bedrohung

Asthma gehört zu den häufigsten chronischen Krankheiten. Weltweit sind rund 300 Millionen Menschen betroffen. Bis zum Jahr 2025 wird sich die Anzahl der Erkrankten auf 400 Millionen erhöhen. In Nordamerika, Grossbritannien, Irland, Australien und Neuseeland sowie in weiten Teilen von Südamerika ist die Prävalenz von Asthma bronchiale am höchsten (≥ 10,1%). In der Schweiz sind ungefähr 480’000 Menschen (7%) von Asthma betroffen, darunter ca. 86’000 Kinder.

(7%) von Asthma betroffen, darunter ca. 86’000 Kinder. Schimmelpilze Ursache für Asthma-Erkrankungen bei Kindern

Schimmelpilze Ursache für Asthma-Erkrankungen bei Kindern

Die Prävalenz oder Krankheitshäufigkeit ist eine Kennzahl der Gesundheits- und Krankheitslehre (Epidemiologie) und sagt aus, wieviele Menschen einer bestimmten Gruppe (Population) definierter Größe – üblicherweise 10.000 oder eine Million – an einer bestimmten Krankheit erkrankt sind.

Prävalenzratio

=

Anzahl der Kranken

/

Anzahl aller

Untersuchten

= Anzahl der Kranken / Anzahl aller Untersuchten Institute of Chemistry & Bioanalytics 2
Institute of Chemistry & Bioanalytics 3
Institute of Chemistry & Bioanalytics 3
Pathologische Mechanismen beim Asthma Die Grafik zeigt, welche Faktoren einen Asthmaanfall auslösen können und welche

Pathologische Mechanismen beim Asthma

Pathologische Mechanismen beim Asthma Die Grafik zeigt, welche Faktoren einen Asthmaanfall auslösen können und welche

Die Grafik zeigt, welche Faktoren einen Asthmaanfall auslösen können und welche pathologischen Mechanismen einem Anfall zugrunde liegen.

pathologischen Mechanismen einem Anfall zugrunde liegen. Asthma is a disease in which inflammation of the airways

Asthma is a disease in which inflammation of the airways causes airflow into and out of the lungs to be restricted. The muscles of the bronchial tree become tight and the lining of the air passages swells, reducing airflow and producing the characteristic wheezing sound. This is known as an asthma attack, which can occur as an allergic reaction to an allergen or other substance (acute asthma), or as a part of a complex disease cycle which may include reaction to stress or exercise (chronic asthma).

Overview on molecular events Institute of Chemistry & Bioanalytics 5
Overview on molecular events Institute of Chemistry & Bioanalytics 5

Overview on molecular events

Overview on molecular events Institute of Chemistry & Bioanalytics 5
Typ-1 Allergie: Sensibilisierung Bei einem Kontakt mit einem Allergen produzieren die B-Zellen IgE-Antikörper, die sich

Typ-1 Allergie: Sensibilisierung

Typ-1 Allergie: Sensibilisierung Bei einem Kontakt mit einem Allergen produzieren die B-Zellen IgE-Antikörper, die sich

Bei einem Kontakt mit einem Allergen produzieren die B-Zellen IgE-Antikörper, die sich auf den Mastzellen festheften. Diese Antikörper können, jeweils zu zweit, ein Allergenmolekül einfangen und neutralisieren. Das nennt sich auch Antigen-Antikörper- Reaktion. Bei einem ersten Kontakt mit dem Allergen werden nur wenige der auf der Mastzelle angehefteten IgE-Antikörper zur Neutralisation belegt. Dieser Reaktionsschritt nennt sich Sensibilisierung.

Ungefähr 90 Prozent aller Allergien sind Allergien von Soforttyp

Typ-1 Allergie: Allergische Reaktion Bei dem nächsten Kontakt mit demselben Antigen tritt dann die allergische

Typ-1 Allergie: Allergische Reaktion

Typ-1 Allergie: Allergische Reaktion Bei dem nächsten Kontakt mit demselben Antigen tritt dann die allergische Reaktion

Bei dem nächsten Kontakt mit demselben Antigen tritt dann die allergische Reaktion zutage. Die massenweise auf den Mastzellen festgehefteten IgE-Antikörper, das können zwischen 10.000 und 50.000 auf einer einzigen Mastzelle sein, fangen das Allergen ein. Das hat dann eine übermäßige Freisetzung von Histamin zur Folge. Durch die heftige Reaktion platzt die Mastzelle förmlich auf.

IgE wird von allergenspezifischen Plasmazellen produziert, nachdem ein Isotypenwechsel, kontrolliert von T-Zellen und T-Zell-Zytokinen, zur ε-Kette stattgefunden hat. Die Differenzierung der B-Zellen zu IgE produzierenden Plasmazellen erfordert zwei Signale:

1. IL-4 und IL-1349,62 und die 2. Interaktion zwischen kostimulierendem Oberflächen-Antigen CD40 der B- Zellen und CD-40-Liganden der T-Zellen.

Therapieoptionen bei schwerem persistierendem Asthma FEV1 (forced expiratory volume of 1 second) Die FEV1 ist

Therapieoptionen bei schwerem persistierendem Asthma

FEV1 (forced expiratory volume of 1 second) Die FEV1 ist ein Mass für die Lungenfunktion
FEV1 (forced expiratory volume of 1
second)
Die FEV1 ist ein Mass für die
Lungenfunktion und wird auch als
Einsekundenkapazität bezeichnet. Die
Einsekundenkapazität
ermöglicht in Relation zur Vitalkapazität
(Tiffeneau-
Index) die Beurteilung von obstruktiven
und restriktiven
Lungenerkrankungen und deren
Ausmass. Siehe auch Spirometrie
(FEV1).
Molecular mechanism of action in asthma Allergen IgE Allergen cross-links IgE on mast cells Mast

Molecular mechanism of action in asthma

Allergen IgE Allergen cross-links IgE on mast cells Mast cell
Allergen
IgE
Allergen
cross-links
IgE on mast cells
Mast cell
IgE Allergen cross-links IgE on mast cells Mast cell - An attack of asthma begins when
IgE Allergen cross-links IgE on mast cells Mast cell - An attack of asthma begins when
IgE Allergen cross-links IgE on mast cells Mast cell - An attack of asthma begins when
IgE Allergen cross-links IgE on mast cells Mast cell - An attack of asthma begins when

- An attack of asthma begins when an allergen is inhaled

- The allergen binds to IgE antibodies on mast cells in the lungs

- Binding triggers release of histamines and leukotrienes of the mast cells

- Smooth muscle cells of the bronchi to contract narrowing the lumen of the bronchi

Biologische Eigenschaften der wichtigsten Immunglobuline Institute of Chemistry & Bioanalytics 10

Biologische Eigenschaften der wichtigsten Immunglobuline

Biologische Eigenschaften der wichtigsten Immunglobuline Institute of Chemistry & Bioanalytics 10
Im Jahre 1921 erhielt ein Faktor, der aus dem Serum isoliert wurde und von einer

Im Jahre 1921 erhielt ein Faktor, der aus dem Serum isoliert wurde und von einer Person zur anderen übertragbar war, den Namen „Reagin“. Eine zentrale Bedeutung in der allergischen Entzündungskaskade wurde schon damals vermutet. Knapp 40 Jahre später (1960) identifizierten US-amerikanische und schwedische Forscher unabhängig voneinander, Reagin als einen zirkulierenden Antikörper-Subtyp und benannten ihn als Immunglobulin E (IgE).

Die Struktur von IgE Molekularstruktur (links) und schematische Darstellung (rechts) von IgE Institute of Chemistry

Die Struktur von IgE

Die Struktur von IgE Molekularstruktur (links) und schematische Darstellung (rechts) von IgE Institute of Chemistry &

Molekularstruktur (links) und schematische Darstellung (rechts) von IgE

Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile Mastzelle Basophiler Granulozyt Institute of Chemistry & Bioanalytics

Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile

Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile Mastzelle Basophiler Granulozyt Institute of Chemistry & Bioanalytics 13
Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile Mastzelle Basophiler Granulozyt Institute of Chemistry & Bioanalytics 13

Mastzelle

Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile Mastzelle Basophiler Granulozyt Institute of Chemistry & Bioanalytics 13

Basophiler Granulozyt

Bindung von IgE an Mastzellen und Basophile Mastzelle Basophiler Granulozyt Institute of Chemistry & Bioanalytics 13
Omalizumab – Xolair  in allergic diseases - Xolair: - Binds IgE regardless of allergen

Omalizumab – Xolair in allergic diseases

Omalizumab – Xolair  in allergic diseases - Xolair: - Binds IgE regardless of allergen specificity

- Xolair:

- Binds IgE regardless of allergen specificity

- Inhibits mast-cell degranulation

- Limits the release of inflammatory mediators

- Down-regulates high-affinity receptors

of inflammatory mediators - Down-regulates high-affinity receptors Institute of Chemistry & Bioanalytics 14
IgE spielt eine entscheidende Rolle bei der Entzündungskaskade Institute of Chemistry & Bioanalytics 15

IgE spielt eine entscheidende Rolle bei der Entzündungskaskade

IgE spielt eine entscheidende Rolle bei der Entzündungskaskade Institute of Chemistry & Bioanalytics 15
IgE spielt eine entscheidende Rolle bei der Entzündungskaskade Institute of Chemistry & Bioanalytics 15
IgE spielt eine entscheidende Rolle bei der Entzündungskaskade Institute of Chemistry & Bioanalytics 15
Die Rolle von IgE bei allergischem Asthma Bei Patienten mit allergischem Asthma kann durch Kontakt

Die Rolle von IgE bei allergischem Asthma

Die Rolle von IgE bei allergischem Asthma Bei Patienten mit allergischem Asthma kann durch Kontakt mit
Die Rolle von IgE bei allergischem Asthma Bei Patienten mit allergischem Asthma kann durch Kontakt mit

Bei Patienten mit allergischem Asthma kann durch Kontakt mit einem Allergen eine Mastzelldegranulation ausgelöst werden. Die freigesetzten Mediatoren wie Histamin, Prostaglandine, Leukotriene und Thromboxane wirken auf die glatte Muskulatur der Luftwege und lösen eine sofortige Bronchokonstriktion aus. Dies führt innerhalb von Minuten nach dem Kontakt mit dem Allergen zur Entwicklung der typischen Asthmasymptome. Erst nach einigen Stunden tritt aufgrund der Aktivierung und Rekrutierung von Entzündungszellen (Eosinophile) die klassische allergische Spätreaktion auf.

Dendritische Zellen von Asthmapatienten binden mehr IgE Die Expression von FcεRI-Rezeptoren wird nicht nur auf

Dendritische Zellen von Asthmapatienten binden mehr IgE

Dendritische Zellen von Asthmapatienten binden mehr IgE Die Expression von FcεRI-Rezeptoren wird nicht nur auf
Dendritische Zellen von Asthmapatienten binden mehr IgE Die Expression von FcεRI-Rezeptoren wird nicht nur auf

Die Expression von FcεRI-Rezeptoren wird nicht nur auf Eosinophilen sondern auch auf anderen Zellen (z.B. Neutrophile33, Blutplättchen53 und Epithelzellen13) beobachtet. Die Bedeutung der Rezeptoren auf diesen Zellen bei allergischem Asthma ist bisher noch nicht vollständig aufgeklärt.

Humanisierung des monoklonalen Anti-IgE-Antikörpers Das Gerüst des Anti-IgE-Molek ・ s (XOLAIR) ist aus humanem

Humanisierung des monoklonalen Anti-IgE-Antikörpers

Humanisierung des monoklonalen Anti-IgE-Antikörpers Das Gerüst des Anti-IgE-Molek ・ s (XOLAIR) ist aus humanem

Das Gerüst des Anti-IgE-Moleks (XOLAIR) ist aus humanem Immunglobulin G aufgebaut. Die Region des CDR (komplementaritätsbestimmende Region) ist gegen das IgE gerichtet. Es wird in Mäusen gezüchtet und anschliessend auf das menschliche Immunglobulin übertragen . Der humanisierte monoklonale Antikörper Omalizumab (XOLAIR) enthält deshalb lediglich 5% nichthumane (murine) Anteile. Die mögliche Entwicklung allergischer Reaktionen wird dadurch auf ein Minimum reduziert, was sich positiv auf das Sicherheitsprofil auswirkt. Zusätzlich trägt die Humanisierung zu einer Verbesserung sowohl der Pharmakokinetik als auch der therapeutischen Wirksamkeit bei.

Bindung von Xolair an den anti-IgE-Antikörper XOLAIR bindet an die Region des IgE-Moleküls, die mit

Bindung von Xolair an den anti-IgE-Antikörper

Bindung von Xolair an den anti-IgE-Antikörper XOLAIR bindet an die Region des IgE-Moleküls, die mit FcεRI-Rezeptoren

XOLAIR bindet an die Region des IgE-Moleküls, die mit FcεRI-Rezeptoren der Zelloberflhen interagiert. Die Bindungsstelle für den IgE-Rezeptor befindet sich in der Cε3-Domäe des IgE-Moleküls. An genau dieser Position bilden sechs wichtige Aminosäuren ein System aus drei Schleifen. XOLAIR identifiziert genau diese Domäne und bindet mit seinem CDR an die Cε3- Domäne des menschlichen IgEs mit einer Affinität, die mit der Bindungsaffinität zwischen IgE und den FcεRI- Rezeptoren auf der Zielzelle vergleichbar ist.

zwischen IgE und den FcεRI- Rezeptoren auf der Zielzelle vergleichbar ist. Institute of Chemistry & Bioanalytics
zwischen IgE und den FcεRI- Rezeptoren auf der Zielzelle vergleichbar ist. Institute of Chemistry & Bioanalytics
XOLAIR führt zu einer Down-Regulation der IgE-Rezeptoren Institute of Chemistry & Bioanalytics 20

XOLAIR führt zu einer Down-Regulation der IgE-Rezeptoren

XOLAIR führt zu einer Down-Regulation der IgE-Rezeptoren Institute of Chemistry & Bioanalytics 20
XOLAIR führt zu einer Down-Regulation der IgE-Rezeptoren Institute of Chemistry & Bioanalytics 20
XOLAIR führt zu einer Down-Regulation der IgE-Rezeptoren Institute of Chemistry & Bioanalytics 20
Wirkungen von Anti-IgE Die Behandlung mit XOLAIR reduziert die Konzentration anfreiem Serum-IgE und f ・

Wirkungen von Anti-IgE

Wirkungen von Anti-IgE Die Behandlung mit XOLAIR reduziert die Konzentration anfreiem Serum-IgE und f ・ rt

Die Behandlung mit XOLAIR reduziert die Konzentration anfreiem Serum-IgE und frt zu einer Down-Regulation der FcεRI-Rezeptoren auf Basophilen und Mastzellen sowie anderen Entzündungszellen. XOLAIR reduziert ausserdem die Expression von FcεRI auf dendritischen Zellen und beeinflusst auf diese Weise möglicherweise die Allergenpräsentation – ein grundlegender Prozess bei allergischen Vorgängen.

Resorption, Distribution, Metabolismus und Elimination von Xolair Der Abbau von XOLAIR wird durch sein IgG1-Gerüst

Resorption, Distribution, Metabolismus und Elimination von Xolair

Distribution, Metabolismus und Elimination von Xolair Der Abbau von XOLAIR wird durch sein IgG1-Gerüst und die

Der Abbau von XOLAIR wird durch sein IgG1-Gerüst und die spezifische Bindung an IgE bestimmt. Die Leber ist einer der Orte, an denen IgE abgebaut wird, einschließlich des Abbaus durch durch das hepatische retikuloendotheliale System (RES) und die Endothelzellen. Intaktes IgG wird außerdem über die Galle ausgeschieden und auf diese Weise im Gastrointestinaltrakt abgebaut. XOLAIR® wird über das neonatale Fc-Rezeptor (FcRn)- System recycelt und durch die spezifische Bindung an IgE und Komplexbildung mit IgE aus dem Blutkreislauf entfernt. Man geht davon aus, dass die XOLAIR:IgE- Komplexe über eine Interaktion mit FcγR abgebaut werden. Die Elimination von IgE erfolgt über die Bindung an seine hoch affinen Rezeptoren (FcεRI) sowie durch eine nichtspezifische Proteinbindung. Die Entfernung von IgE erfolgt für gewöhnlich schnell, d.h. mit einer Halbwertszeit von wenigen Tagen. Bei der Bildung von XOLAIR:IgE-Komplexen findet eine Verlagerung des IgE-Abbauweges vom schnellen FcεRI- zum langsameren FcγR-Abbauweg statt.

Xolair bildet kleine biologisch inaktive Komplexe mit IgE Institute of Chemistry & Bioanalytics 23

Xolair bildet kleine biologisch inaktive Komplexe mit IgE

Xolair bildet kleine biologisch inaktive Komplexe mit IgE Institute of Chemistry & Bioanalytics 23
Massgeschneiderte Dosierungsstrategie Um die individuelle Dosierung zu vereinfachen und eine effektive Reduktion der

Massgeschneiderte Dosierungsstrategie

Massgeschneiderte Dosierungsstrategie Um die individuelle Dosierung zu vereinfachen und eine effektive Reduktion der

Um die individuelle Dosierung zu vereinfachen und eine effektive Reduktion der Konzentration an freiem IgE sicher zu stellen, wurde eine mehrstufige Dosiertabelle entwickelt.

IgE sicher zu stellen, wurde eine mehrstufige Dosiertabelle entwickelt. Institute of Chemistry & Bioanalytics 24
IgE sicher zu stellen, wurde eine mehrstufige Dosiertabelle entwickelt. Institute of Chemistry & Bioanalytics 24
Dosing of Omalizumab Allergic rhinitis Asthma PK 2400 240 24 atopic patients 1 IU/mL =

Dosing of Omalizumab

Allergic

rhinitis

Asthma

PK 2400 240 24 atopic patients 1 IU/mL = 2.4 ng/mL Total Serum IgE ng/mL
PK
2400
240
24
atopic patients
1 IU/mL = 2.4 ng/mL
Total Serum IgE
ng/mL
Relationship dose, IgE and symptoms PK-PD PK-PD-Eficacy CGP 51901 [mg/dose] Source: Racine-Poon et al., Clinical

Relationship dose, IgE and symptoms

PK-PD

Relationship dose, IgE and symptoms PK-PD PK-PD-Eficacy CGP 51901 [mg/dose] Source: Racine-Poon et al., Clinical Pharmacol

PK-PD-Eficacy

CGP 51901 [mg/dose]
CGP 51901 [mg/dose]

Source: Racine-Poon et al., Clinical Pharmacol Therapeutics,1997: 62, 675-90.

Xolair bewirkt eine signifikante Reduktion der Häufigkeit von Asthmaexazerbation Xolair reduzierte signifikant die

Xolair bewirkt eine signifikante Reduktion der Häufigkeit von Asthmaexazerbation

Reduktion der Häufigkeit von Asthmaexazerbation Xolair reduzierte signifikant die Häufigkeit der Asthma-

Xolair reduzierte signifikant die Häufigkeit der Asthma- exazerbationen im Vergleich zu Kontrollgruppen (0,91 vs. 1,47; p < 0,0001) (Abbildung 5.7). Dies entspricht einer Abnahme um

38,3%.

Sicherheitsdaten Bei der Analyse der unerwünschten Ereignisse wurden aus der Studienpopulation 6’132 Patienten

Sicherheitsdaten

Sicherheitsdaten Bei der Analyse der unerwünschten Ereignisse wurden aus der Studienpopulation 6’132 Patienten
Sicherheitsdaten Bei der Analyse der unerwünschten Ereignisse wurden aus der Studienpopulation 6’132 Patienten

Bei der Analyse der unerwünschten Ereignisse wurden aus der Studienpopulation 6’132 Patienten untersucht. Dabei waren in der XOLAIR- und in der Kontrollgruppe die häufigsten beschriebenen unerwünschten Ereignisse Entzündungen des Nasen-Rachen-Raums, Infektionen der oberen Atemwege, Kopfschmerzen und Entzündungen der Nasennebenhöhlen. Die Unterschiede zwischen den Gruppen waren gering und wiesen auf keine spezielle Organtoxizität hin. Die unerwünschten Ereignisse waren im Allgemeinen leicht bis mässig und von kurzer Dauer.

Assays to determine drug and anti-drug antibodies in serum Determination of drug YYYY YYYY acridinium

Assays to determine drug and anti-drug antibodies in serum

Determination of drug

drug and anti-drug antibodies in serum Determination of drug YYYY YYYY acridinium label anti-CGP 51901 signal

YYYY

YYYY

antibodies in serum Determination of drug YYYY YYYY acridinium label anti-CGP 51901 signal antibody CGP 51901

acridinium

label

anti-CGP 51901 signal antibody

CGP 51901

anti-CGP 51901 capture antibody

Paramagnetic

particles

specificity:

working range:

throughput:

free drug 10-1000 ng/mL 160 samples/d

Determination of anti-drug antibodies

1st step

2nd step

IgE

Determination of anti-drug antibodies 1st step 2nd step IgE E P YYYY CGP 51901 enzyme antibody
E P
E
P

YYYY

CGP 51901 enzyme antibody

anti-CGP 51901 antibody

YYYY

YYYY

CGP 51901 capture antibody

anti-IgE blocking antibody

YYYY CGP 51901 capture antibody anti-IgE blocking antibody specificity: working range: immune response antibodies
YYYY CGP 51901 capture antibody anti-IgE blocking antibody specificity: working range: immune response antibodies

specificity:

working range:

immune response antibodies 5-100 equivalents/mL

Assays to determine total and free IgE in serum Determination of total IgE 1st step

Assays to determine total and free IgE in serum

Determination of total IgE

1st step

2nd step

CGP 51901

serum Determination of total IgE 1st step 2nd step CGP 51901 YYYY YYYY CGP 51901-IgE complex

YYYYYYYY

CGP 51901-IgE

complex

anti-IgE2

fluorescence

antibody

YYYY

Pre-incubation of sample with CGP 51901

YYYY

antibody YYYY Pre-incubation of sample with CGP 51901 YYYY anti-IgE1 capture antibody specificity: working range:

anti-IgE1

capture antibody

specificity:

working range:

throughput:

free and complex IgE 2- 460 ng/mL 160 samples/d

Determination of free IgE

YYYY

CGP 51901-IgE complex

IgE or

sample

E P anti-IgE2 enzyme YYYY
E
P
anti-IgE2
enzyme
YYYY

antibody

YYYY

CGP 51901 capture antibody

enzyme YYYY antibody YYYY CGP 51901 capture antibody specificity: working range: throughput: free IgE 9-

specificity:

working range:

throughput:

free IgE 9- 500 ng/mL 90 samples/d