Biologie (S2 gN) UE Genetik Molekularger UO.U .

2U24

Isolierung von DNA aus Zwiebeln und Nachweis von DNA-Bausteinen

Einleitung:
Die DNA-Isolierung aus Obst und Gemüse wie z.B. der Küchenzwiebel Allium cepa verdeut-
licht das generelle Prinzip der DNA-Gewinnung aus Geweben.

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Materialien:
Allium cepa, Musa acuminata, Cucumis sativus oder Solanum lycopersicum (30 g), Waage,
Messer, Schneidebrett, Trichter, Kaffeefilter, Wasserbad, Mörser und Pistill, Schutzbrille,
Schutzhandschuhe, Bechergläser (200 ml, 500 m), Spatel, Glasstab, Wasserkocher, Ther
10 mometer

Chemikalien:
NaCi (Natriumchlorid), CH0 (Ethanol, auf -20 *C gekühlt) D,Spülmite, Waschmitel,
15Aqua destilata, HSo (konz. Schwefelsäure) , HNO, (Salpetersäure) , gesätigte
w a tppa
DisCHE-Reagenz (schwefelsaure Lösung

20Durchführung (am Beispiel Allium cepa):

3 g NaCl und 10 ml Spülmittel werden in ein Becherglas
gegeben, mit Aqua dest. auf 100 ml aufgefüllt und das
Salz unter Rühren gelöst.
30 g Allium cepa (oder anderes Obst / Gemüse) werden
25 in kleine Würfel zerschnitten und in die spülmittelhaltige
Salzlösung gegeben
3. Das Becherglas wird für 15 Min. in ein 60 °C warmes
Wasserbad ( Becherglas mit entsprechend temperier-
tem Wasser) gestellt.
U Nach Abkühlen des Gemisches auf 20 °C werden die
Zwiebelstücke in einem Mörser fein zerrieben und durch
einen Kaffefilter abfiltriert
Zum Filtrat werden unter Umrühren 0,6 g Waschmittel
gegeben, das Proteasen enthält.
O. Das Gemisch wird vorsichtig mit 100 ml eisgekühltem
Ethanol überschichtet. DNA ist in Ethanol unlöslich und
fällt daher an der Phasengrenze in Form weißer Fäden
aus, die mit einem Glasstab aufgewickelt werden kön-
nen.
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Hydrolyse der DNA:
7. Unter dem Abzug Der Niederschlag wird abfiltriert, mit 5
ml konzentrierter Schwefelsäure versetzt und für 15 Min.
in ein siedendes Wasserbad gestellt.

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