Zeitsehrift ftir Krebsforschung, Bd. 60, S. 91--93 (1954).

Aus dem Ins~itut fiir experimentelle Krebsforsehung der Universit/~t Heidelberg

(Direktor: Prof. Dr. H. L~TTm~).
Kann Trypanblauspeieherung zur Bestimmung der Vitalitiit
yon Tumorzellen dienen ?
Von
WERNER TItUMM*, **
(Eingegangen am 11. Februar 1954.)

HAAGE~ und S~G~I~: haben die l ~ r b b a r k e i t der Zellen des Mi~use-

Aseitestumors dureh Trypanblau in vitro als Kriterium ftir deren Viru-
lenz verwendet. Lebende Zellen f~rben sieh nieht an, w~hrend yon den
Autoren als ,,tot" bezeiehnete Zellen sieh kr~ftig anf/~rben. HAAG~N
und Sn~Gnl~ haben mit dieser Methode die Absterbegesehwindigkeit
der Zellen des M~use-Aseitestumors bei versehiedenen Temperaturen
bestimmt; die Ergebnisse zeigen im wesentliehen Parallele zu der Ab-
nahme der Virulenz, beurteilt naeh den Ergebnissen der Transplan-
tation. I n eigenen Versuehen, die zugleich als Grundlage ffir unten
besehriebene Versuehe dienten, wurden ~hnliehe Befunde, wie yon
FIAaGEN und SXEGnR besehrieben, erhoben. Aseitestumor wurde ent-
nommen und bei 370 aufgehoben. I n verschiedenen Zeitabst~nden
wurde naeh der Methodik von I-IAAG~ und S E ~ G ~ der Prozentsatz
der in vitro mit Trypanblau fitrbbaren Zellen bestimmt. I n Tabelle 1
sind die Ergebnisse yon 4 unabh/~ngigen Versuehen zusammengestellt.
Tabelle 1. Prozentzahl der mit Trypanblau /iirbbaren Zellen des Ascitestumom nach
Au/bewahrung bei 37%
Zeit Versuch Zeit ] Versueh
(Std) 1 2 3 4 (Std) I 1 2 3 4
I

0,25 2,5 1,0 0,8 1,7 4 I 48,5 16,9 15,2 29,7

0,5 2,7 1,3 2,1 3,6 6 ] 80,0 55,2 31,8 63,0
1 7,2 1,7 4,5 9,5 8 94,0 74,0 82,2 86,5
2 24,2 4,7 6,3 12,3 24 99,7 94,4 99,5 99,7
Allen Versuehen gemeinsam ist die zu Anfang langsame, sparer
sehnellere Zunahme der f~rbbaren Zellen, wobei aber im Gesamt-
verlauf die Einzelversuehe Untersehiede zeigen, so dag bei Beein-
llussungsversuehen der verwendete Tumor jeweils Mlein mit unter-
sueht werden muB.
Wenn dig F~rbbarkeit mit Trypanblau Ms Indicator einer Aviru-
lenz angesehen werden k6nnte, so mfiBte sieh hieranf eine teehnisch
* Auszug aus der Dissertation yon W. TtlVNM, Heidelberg 1952.
** Herrn Prof. F. WASSEI~>~A~X,Chicago, zu seinem 70. Geburts~age gewidmet.
92 WERNER THUMM:

einfache lViethode aufbauen lassen, um direkte zelltStende Wirkungen

chemischer Faktoren in vitro zu bestimmen. Auf Veranlassung yon
Prof. L a T T ~ habe ich daher die Wirkungen yon N-Lost (Dichloren)
und anderen Stoffen auf die Fi~rbbarkeit der Zellen des M/iuse-Ascites-
tumors durch Trypanblau untersucht.
I n verschiedenen Versuchen, bei denen zwangsl/iufig verschiedene
Proben des M/~use-Ascitestumors verwendet werden mul]ten, wurde
der Ascitestumor mit gleichen Teilen l~ingerlSsung oder LSsungen
yon N-Lost in RingerlSsung gemischt, so dab die Endkonzentrationen
50, 100, 150, 250 und 500 7/ml betrugen. Die Mischungen wurden bei
37 o bebriitet. Nach 1, 2 und 3 Std wurden mit Proben dieser Mischungen
die Trypanblaufiirbungen und die Z/~hlungen durchgeffihrt. Die Er-
gebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt.

Tabelle 2.
Prozent gef~rbte ZeHen Prozent gef/~rbteZellen
Dichlo~en nach Diehloren nach
7/ml I Std 2 Std 3 Std 7/mI 1 Std 2 Std 3 Std

0 13,7 15,4 22,3 150 6,4 9,7 12,5

50 12,2 14,5 17,3 0 3,9 7,6 9,7
0 3,9 11,0 14,9 250 7,1 9,8 10,9
100 5,1 11,9 16,7 0 3,3 6,9 14,3
0 3,8 6,9 19,7 500 4,1 9,3 16,5

Selbst bis zu den hSchsten untersuchten Dosen ergab sich kein aus-
gepr/~gter Unterschied in der F~rbbarkeit der mit N-Lost behandelten
Zellen gegenfiber den parallel untersuchten unbehandelten Tumorzellen.
Nach diesen Ergebnissen mfiBten die mit N-Lost behandelten Zellen
also noch volle Virulenz zeigen. Der Transp]&ntationsversuch zeigte
~ber ein ganz anderes Ergebnis. Ascitestumor wurde in gleicher Weise
mit Zusatz yon Ringerl5sung bzw. mit 50, 100, 150, 250 und 500 7/ml
N-Lost 3 Std bei 370 bebrfitet. Zur Entfernung des iiberschfissigen
N-Losts wurden die Zellen ~ller Ansi~tze abzentrifugiert, 3mal an der
Zentrifuge mit RingerlSsung gewaschen, mit dem urspriinglichen
Volumen l~ingerl6sung aufgeschiittelt und mit 0,2 cm 3 an M/iuse i. p.
verimpft. Die nur mit l~ingerlSsung bebriiteten Zellen fiihrten zur
schnellen Entwicklung eines Ascitestumors und Tod der Tiere nach
12 Tagen. Alle mit N-Lost behandelten Zellen ergaben in der Beob-
achtungszeit yon 30 Tagen keine Tumorentwicklung. Ihre Virulenz
m u g also vollstiindig oder weitgehendst herabgesetzt sein.
Mit Tri-/?-chlor/ithyl-amin-hydrochlorid (Sinalost) batten L E T T ~
und W~sT 2 schon gleichartige Ergebnisse im Transplantationsversuch
erhalten. Die einstiindige Einwirkung von 50 bzw. 100 7/ml Sinalost
bei 370 ffihrte schon zu einem weitgehenden Verlust der Virulenz der
 Tryl0anblauspeieherung zur Bestimmung der Vita]it~t yon Tumorzellen. 93

so behandclten Tumorzellen. Ieh babe gleichartigeVersuche wie zuvor

mit Dichloren such mit Sinalost durehgeffihrt und auch bier ergab
sieh keine Steigerung der Zahl der mit Trypanblau fiirbbaren Zellen
unter der Einwirkung yon bis zu 250 y/ml Sinalost. Trypanblaufgrbbar-
keit und Transplantation zeigen also in beiden F~llen versehiedene
Resultate an. Es w~re denkbar, daI3 dureh die Einwirkung der beiden
genannten chemischen Agentien die Permeabilit~t der Zellen ver~ndert
ist, so dM~ die Farbstoffaufnahme nieht mSglich ist. Jedoch habe ich
gleichartig negative Ergebnisse such mit Stoffen erhalten wie Patulin
und Quecksilber-propy]-bromid, yon denen man such eine direkte
zellsch~digende Wirkung annehmen kann.
Die Versuehe zeigen, da~ die Trypanblauspeicherung als Indicator
fiir eine durch chemische Faktoren erzeugte Avirulenz yon Tumorze]len
nicht verwendet werden kann; nut der Transplantationsversuch kann
diese Frage beantworten. Es ergibt sich das Problem, ob die Trypan-
blauspeicherung nur den Indicator ffir eine bisher nicht n~her charak-
terisierte Stoffwechselsch~digung der Tumorzelle darstellt und nicht
far ihren Tod, also nur einen Sekter in dem breiten Feld reversibter
und irreversibler Sch~digungen, die zwischen den Grenzf~]len einer
vo]l virulenten und einer vSllig aviru]enten Zelle ]iegen, wiedergibt.

Zusammen]assung.
Es wurde untersucht, ob eine dutch Einwirkung chemischer Fak-
torcn in ~itro bewirkte Avirulenz yon Tumorzelien durch die Speiche-
rung yon Trypanblau nachgewiesen werden kann. Bei nach dem Trans-
plantationsergebnis avirulenten behandelten Tumorzellen konnte je-
doch keine Trypanblauspeicherung beobachtet werden. Diese Methode
kann also nicht den Transplantationsversueh ersetzen.
Herin Prof. Dr. It. LEWTt~ bin ich fiir Anregung and F6rderung der Arbeit
zu groBem Dank verpfliehtet.

Literatur.
1 HAAGE~,E., u. F. G. SE~GEn: Z. Krebsforseh. 47, 394 (1938). - - 2W~sT, W. :
Diss. Heidelberg 1952.

Dr. W. T~IVM~I, (17a) Heidelberg,

Institut fiir experimentelle Krebsforsehung der Universit~t, VoBstr. 3.