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RAINER SCHOBERT
GERHARD SPITELLER
OTTO VOSTROWSKY
HO
O
N
HO
Inhaltsverzeichnis
1
Fettsuren
Vorkommen, Struktur und Eigenschaften
Biosynthese und oxidativer Abbau
Mehrfach ungesttigte, essentielle Fettsuren
Synthese von Fettsuren
1
5
9
10
Komplexe Lipide
16
16
16
20
26
27
30
31
34
34
36
Zucker
40
Einteilung
Monosaccharide
Reaktionen der Monosaccharaide
Monosaccharide mit ungewhnlicher Struktur
Di- und Oligosaccharide
Polysaccharide
Zuckersynthesen: Auf- und Abbau von Kohlehydraten
Physikalisch-chemische Eigenschaften der Monosaccharide
Biochemie der Zucker
Terpene
Struktur und Biogenese terpenoider Verbindungen
Monoterpene
Sesquiterpene
Diterpene
Sesterpene
Triterpene
Tetraterpene, Carotinoide
Polyterpene
Mikrobielle Gewinnung von Terpenen
Vitamine mit Terpenstruktur
Steroide
Struktur, Vorkommen und Nomenklatur
Cholesterin
Zoosterine
Phytosterine
Vitamin D, Calciferol und Cholecalciferol
Gallensuren
Steroid-Sapogenine
Herzwirksame Glykoside, Cardenolide
Bufadienolide
Sexualhormone
40
41
51
70
78
82
94
100
101
107
107
109
121
129
137
138
143
146
148
148
153
153
155
157
158
159
160
162
164
168
171
Corticoide
Ecdysone: Hormone in Insekten und Krebsen
Brassinolide: Pflanzenhormone mit Steroidstruktur
Synthesen und mikrobiologische Umwandlungen
Eicosanoide
Der Arachidonsure-Metabolismus
Der Cyclooxygenase-Weg
Der Lipoxygenase-Weg
Prostanoide aus marinen Organismen
Synthesen von Prostaglandinen und Leukotrienen
Juvenilhormone
Struktur, Vorkommen und Bedeutung
Synthesen
Biologische Wirksamkeit und Verwendung im Pflanzenschutz
Prostanoide aus marinen Organismen
Pheromone
Pheromone Intraspezifische Signalstoffe
Chemische Strukturen von Insekten-Pheromonen
Arachniden- und Algen-Pheromone
Sugetier-Pheromone
Emission, Perzeption und biologische Wirksamkeit
Synthese von Insekten-Pheromonen
Insekten-Pheromone im Pflanzenschutz
10
Aminosuren
Amphoteres Verhalten und isoelektrischer Punkt
Kreislauf des Stickstoffs
Einteilung und Nomenklatur der Aminosuren
Analyse von Aminosuren
Synthesen
Reaktionen von Aminosuren
zur Biochemie der Aminosuren
11
12
Vitamine
Fettlsliche Vitamin E
Vitamin K
Vitamin Q
Wasserlsliche Vitamin B1
Vitamin B2
Folsure
Nicotinamid (Vitamin B3)
177
179
180
180
194
194
194
198
199
200
211
211
212
215
199
217
217
218
225
226
226
229
235
238
238
238
240
249
252
260
264
268
268
270
272
283
285
294
310
314
318
348
349
352
354
355
358
361
363
Vitamin B6
Biotin (Vitamin B7)
Pantothensure
Vitamin B12
Vitamib C
13
14
364
367
370
372
375
378
379
384
385
386
387
388
390
390
391
393
393
393
394
394
394
Alkaloide
399
403
405
405
408
408
408
412
412
413
415
416
417
418
419
420
421
421
422
423
424
1. Fettsuren
1.1 Vorkommen, Struktur und Eigenschaften von Fettsuren
Fettsuren sind langkettige, gesttigte oder ungesttigte aliphatische Monocarbonsuren, die hufigen
natrlich vorkommenden sind unverzweigt und besitzen eine gerade Anzahl von Kohlenstoffatomen. Bis
heute sind weit ber 100 verschiedene Fettsuren, vor allem als Bausteine von Lipiden von Tieren, Pflanzen
und Mikroorganismen identifiziert worden, in unveresterter, freier Form kommen sie jedoch nur in sehr
geringer Konzentration im Gewebe und in der Zelle vor. In Bakterien findet man weniger und einfachere
Fettsuren als in hheren Organismen und sie sind hufig verzweigt. Suren mit ungerader C-Anzahl sind
selten in landbewohnenden, hufiger jedoch in marinen Organismen anzutreffen, mehrfach ungesttigte
Fettsuren sind reich in Fischleberlen zu finden.
Unter den gesttigten Fettsuren findet man hufig Kettenlngen mit 12 bis 24 C-Atomen, wobei
Palmitinsure
[Hexadecansure,
CH3(CH2)14COOH]
und
Stearinsure
[Octadecansure,
CH3(CH2)16COOH] in allen tierischen Fetten und in Lipiden berwiegen. Kurzkettige Fettsuren sind u.a.
im Palml, im Kokosfett und in Milchfetten enthalten, langkettige mit mehr als 24 C-Atomen kommen vor
allem in Wachsen vor. Die meisten ungesttigten Fettsuren sind monoungesttigt, die hufigste ist die cis9-ungesttigte lsure [(Z)-9-Octadecensure, CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH], die besonders hufig in
hheren Pflanzen und in Tieren, die bei niedrigen Temperaturen leben, gefunden wird.
In der Fettsurechemie hat sich eine Kurzschreibweise eingebrgert, die die Kohlenstoffzahl sowie die
Anzahl, Position und Konfiguration der Doppelbindungen symbolisiert. 16:0 steht z.B. fr die gesttigte
Palmitinsure, 18:19 fr die in 9-Position einfach cis-ungesttigte lsure, usw. (Die trans-Geometrie mu
gesondert angegeben werden, vergl. Tab. 1-1).
Krzel
Nomenklatur
Trivialnamen
4:0
6:0
8:0
10:0
12:0
14:0
16:0
18:0
20:0
22:0
24:0
16:19
Butansure
Hexansure
Octansure
Decansure
Dodecansure
Tetradecansure
Hexadecansure
Octadecansure
Eicosansure
Docosansure
Tetracosansure
(Z)-9-Hexadecensure
Buttersure
Capronsure
Caprylsure
Caprinsure
Laurinsure
Myristinsure
Pylmitinsure
Stearinsure
Arachinsure
Behensure
Lignocerinsure
Palmitlsure
2
18:19
18:19trans
18:111
18:29,12
18:39,12,15
18:36,9,12
20:38,11,14
20:45,8,11,14
22:113
24:115
(Z)-9-Octadecensure
(E)-9-Octadecensure
(Z)-11-Octadecensure
(9Z,12Z)-9,12-Octadecadiensure
(9Z,12Z,15Z)-9,12,15-Octadecatriensure
(6Z,9Z,12Z)-6,9,12-Octadecatriensure
(8Z,11Z,14Z)-8,11,14-Eicosatriensure
(5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14Eicosatetraensure
(Z)-13-Docosensure
(Z)-15-Tetracosensure
lsure
Elaidinsure
cis-Vaccensure
Linolsure
-Linolensure
-Linolensure
Di-homo--Linolensure
Arachidonsure
Erucasure
Nervonsure
Neben diesen Strukturen gibt es in der Natur eine Reihe ungewhnlicher Fettsuren bzw. Fettkomponenten,
wie methylverzweigte Fettsuren, Hydroxysuren, methoxy- und acetoxysubstituierte Fettsuren, Cyclopropancarbonsuren, acetylenische Carbonsuren u.a.m. (vergl. Formel 1-1). Tuberculostearinsure [10Methyloctadecansure] wird in bakteriellen Lipiden [Mycobacterium tuberculosis] gefunden, bei der
Verseifung der Lipopolysaccharide von M. tuberculosis wird u.a. Phthiensure [2,4,6-Trimethyltetracos-2ensure] erhalten, die nach Injektion bei Tieren Tuberkulosekntchen hervorruft. Mycolsuren, gesttigte
und ungesttigte -verzweigte -Hydroxyfettsuren, sind in dem Lipidpolysaccharid-Komplex der
Zellwnde von Mycobakterien enthalten. Die Zusammensetzung membrangebundener Fettsuren aus
Bakterien und Hefen ist so spezifisch, da sie zur gaschromatographischen Identifikation dieser
Mikroorganismen herangezogen wird. Cerebronsure kommt zusammen mit anderen Hydroxyfettsuren
in Lipiden des Gehirns und der Nerven vor, Ricinolsure als Glycerid im Ricinusl (aus Samen von
Rhicinus communis), Mycomycin besitzt antibiotische Eigenschaften und wurde aus Schimmelpilzen
isoliert. Glycerinester der Hydnocarpussure und der Chaulmoograsure, Cyclopentenylalkansuren, sind
im Chaulmoogra-l, Samenl von Hydnocarpus-Arten, enthalten und werden zur Leprabehandlung eingesetzt. Vor allem in Asteraceen sind Fettsuren mit Dreifachbindungen enthalten. Whrend C14- bis C22Fettsuren typisch in hheren Tieren gefunden werden, sind marine Schwmme reichhaltige Quellen fr
C24- bis C30-Analoge.
In den letzten Jahren wurden etwa 40 verschiedene Hydroxyfettsuren mit OH-Gruppen in 3'-, 4- und 5'Position als Bausteine bakterieller Polyester, der Polyhydroxyfettsuren [PHF, PHA], entdeckt, die als
Reserve- oder Speicherstoffe dienen. Die Fhigkeit zur PHF-Synthese ist ausschlielich in Bakterien
verbreitet.
n = 1,
n = 2,
n = 3,
n > 3,
R
O
O CH (CH2)n C
100 - 300.000
Poly--hydroxybuttersure
Poly--hydroxyoctansure
Die PHFs besitzen thermoplastische Eigenschaften, sie sind biologisch abbaubar und aus nachwachsenden
Rohstoffen
herstellbar.
Durch
Auswahl
geeigneter
Bakterienstmme
und
verschiedener
Wachstumssubstrate gelangt man biotechnologisch zu Polyestern, die zur Herstellung von Folien- und
Verpackungsmaterial und Anwendung in der Medizin herangezogen werden knnen.
Tuberkulostearinsure
COOH
OH
Cerebronsure
COOH
OH
Ricinolsure
COOH
COOH
COOH
Lactobazillsure
Sterculsure
COOH
COOH
Malvalinsure
Stearolsure
H
C
COOH
C
COOH
CH
Mycomycin
Matricarisure
CH2CH2COOH
HO
Nemotinsure
F-Suren, Furanfettsuren, wurden im Leberfett von Fischen, in Krebsen, Hornkorallen, in der Rinder- und
Rattenleber und im Humanblut in freier Form oder als Cholesterin- und/oder Glycerinester gefunden und
sind besonders nach Hunger perioden im Leberfett von Fischen angereichert. Im Humanblut sind die
Furanfettsuren mit einer Pentylseitenkette hufiger als die Propylderivate. Carboxylsubstituierte F-Suren
werden als Urofuransuren bezeichnet.
R
CH3-(CH2)n
CH3
(CH2)m -COOH
R = H, CH3; n = 2, 4; m = 6, 8, 10, 12
Furanfettsuren, F-Suren
COOH
CH3-(CH2)n
(CH2)2-COOH
n = 2, 4 Urofettsuren
Die sich wiederholende Folge von Methylengruppen gesttigter Fettsuren bedingt die energiermsten antiund gauche-Konformationen, wobei die gauche-Form, die in Lsung wahrscheinlich ist, um etwa 2.6 kJ
mol-1 energiereicher ist und in langen Fettsuren eine Verdrehung der Ketten bewirkt (Abb. 1-1).
Rntgenstrukturanalysen gesttigter Fettsuren ergeben eine gestaffelte all-anti-Konformation in Form
einer langgestreckten Kette im Kristallgitter.
Der Schmelzpunkt der Fettsuren hngt von deren Kettenlnge, der Anzahl sowie Position und Konfigu
ration der Doppelbindungen ab. Ungesttigte Fettsuren haben niedrigere Schmelzpunkte als die
entsprechenden gesttigten, trans-Fettsuren besitzen hhere Schmelzpunkte als die mit cis-konfigurierten
Doppelbindungen. Man kann Fettsuregemische durch Abkhlen in eine feste Phase, die einen hohen Anteil
an gesttigten besitzt, und in ein l, das reich an ungesttigten Fettsuren ist, berfhren und trennen.
Ebenso ist eine fraktionierte Kristallisation aus Methanol und Aceton mglich, ungesttigte Fettsuren sind
meist besser lslich als gesttigte. Die Unterschiede im Schmelzverhalten einzelner Fettsuren spiegelt sich
in den Phasenumwandlungstemperaturen der Lipide (vergl. 2.2) wider.
Homologe Fettsuren mit geradzahliger C-Anzahl haben Siedepunktsdifferenzen von 15-20 C und lassen
sich mittels fraktionierter Destillation im Hochvakuum aus Gemischen mit +99 % Reinheit abtrennen.
cis-Einfach ungesttigte Fettsuren lassen sich durch UV-Licht, mit Nitrit [Elaidinprobe] oder Behandlung
mit nitrosen Gasen in die stabileren trans-Formen umlagern (Gleichgewichtsgemisch mit 85 % transAnteil). Im Alkalischen isomerisieren mehrfach ungesttigte, methylenunterbrochene Fettsuren zu solchen
mit konjugierten Doppelbindungen.
Whrend gesttigte Fettsuren gegenber Sauerstoff relativ stabil sind, erleiden ungesttigte und vor allem
mehrfach ungesttigte Fettsuren leicht Autoxidation (Formel 1-3). Es entstehen allylische Hydroperoxide,
die wiederum zu Radikalen zerfallen und durch Vernetzung zur Ausbildung fester Oligomeren fhren. Die
Reaktion wird durch Radikalbildner und paramagnetische Metall-Ionen katalysiert und ist auto katalytisch.
Das intermedir gebildete allylische PeroxidRadikal -CH=CH-CH- und vielmehr noch eines mit mehreren
Doppelbindungen wie -CH=CH-CH-CH=CH- ist resonanzstabilisiert, wo durch die Radikalbildung
begnstigt wird.
+ R1-CH2-CH=CH-R2
- RH
R1-CH=CH-CH -R2
OO
OO
O2
R1-CH -CH=CH-R2
R1-CH-CH=CH-R2
R1-CH=CH-CH-R2
.
OO
1
OOH
2
R -CH-CH=CH-R
R1-CH2-CH=CH-R2
R -CH-CH=CH-R2
R1-CH -CH=CH-R2
Bei Verletzung tierischer oder pflanzlicher Zellen werden besonders groe Konzentrationen von
Hydroperoxiden und Folgeprodukten nachgewiesen, was auf Zellverletzung als Gemeinsamkeit chronischer
Erkrankungen hinweisen knnte. Phenole wirken als Radikalfnger und werden daher Fetten als
Antioxidantien zugesetzt. Von Bedeutung sind natrliche Tocopherole, die Nordihydroguajaretsure sowie
die synthetischen tert-Butylhydroxyanisol BHA, tert-Butylhydroxytoluol und Di-tert-butyl-p-cresol [Ditert-butylhydroxytoluol, BHT].
Die Biosynthese der Fettsuren luft in allen Organismen ab, besonders typisch jedoch in der Leber, im
Fettgewebe und in den Milchdrsen hherer Tiere. Der Aufbau erfolgt jeweils durch die C2-Einheit der
Essigsure und findet im Cytosol statt, als Folge werden vorwiegend unverzweigte Fettsuren mit
geradzahliger Kohlenstoffkette in der Natur gefunden. Die Katalyse der Fettsurebiosynthese ist ein
klassisches Beispiel fr einen Multienzymkomplex. Bei der Fettsurebiosynthese wird zuerst Acetyl-CoA
durch HCO3- zu Malonyl-CoA carboxyliert, die weitere Kettenverlngerung erfolgt durch sukzessive
Kondensation von Malonyl-CoA und Acetyl-CoA. Dabei wird Acetyl-CoA in einer Startreaktion als
Thioester auf die Fettsuresynthetase zum Acetyl-Acylcarrierprotein [Acetyl-ACP] transferiert, dann erfolgt
Malonyltransfer zum Acetyl-malonylcarrierprotein [Acetyl-Malonyl-ACP]. Anschlieend erfolgt die
bertragung zum Acetoacetyl-Acylcarrierprotein [Acetoacetyl-ACP]. Durch NADPH-Reduktion entsteht 3Hydroxybutyryl-ACP, Wasserabspaltung fhrt zu Crotonyl-ACP und eine zweite Reduktion zu ButyrylACP. Nach Acyltransfer wird neuerlich Malonat angelagert und wie zuerst mit der entstandenen Buttersure
acyliert (Formel 1-4). Als Abschlu wird der Palmitin- oder Stearinrest auf Coenzym A bertragen [F.
LYNEN, S.J. WAKIL, P.R. VAGELOS]. 1951 hatten F. LIPMANN und F. LYNEN das Acetyl-Coenzym A, einen
Thioester der Essigsure, als Trger der aktiven C2-Gruppe beim Auf- und Abbau der Fettsuren im
Organismus isoliert und untersucht.
HS
H2
C
O
H2 H
C N C
Cysteamin
H2
C
H2 H
C N
-Alanin
CH3
O
C
H
C
C O P O P O
H2
CH
OH HO
OH
3
Pantoesure
Pantothensure
Pantothein
CH2 Ade
O
O
HO
Coenzym A
O OH
OH
Die Fettsure-Synthetase der Hefe ist ein Multienzymkomplex, der aus einem den Surerest tragenden AcylCarrier-Protein ACP und sechs Enzymen besteht. Prosthetische Gruppe des ACP ist ein beweglicher
Pantotheinarm als Trger der zentralen SH-Gruppe, der ber eine Diphosphorsureestergruppe an die
Hydroxygruppe eines Serinrestes gebunden ist. Der Fettsure-Synthetase-Komplex, der zuerst aus E. coli
isoliert wurde und ein Teilchengewicht von 2.3 Millionen Da besitzt, wurde vor allem in der Hefe studiert
[F. LYNEN]. Von den Kristallen (20-30 nm/Molekl) existieren elektronenmikroskopische Aufnahmen,
jeder Kristall enthlt 5-6 Molekle des Enzyms. In den Mitochondrien, Zellorganellen zur Oxidation und
Energie-ATP-Umwandlung, verluft die Fettsuresynthese ausschlielich durch Umkehr der -Oxidation
des Fettsureabbaus (Fettsurespirale) und ist Malonyl-CoA-unabhngig (Formel 2-4). Endpunkt der
Fettsuresynthese ist bei Tieren hauptschlich die 16:0-Palmitinsure, die ungesttigten Fettsuren
entstehen durch Dehydrierung [Desaturasen] bzw. durch enzymatische Kettenverlngerung [Elongasen]. Im
tierischen Organismus wird eine weitere Doppelbindung nur zwischen einer bereits vorhandenen und der
Carboxylgruppe, im pflanzlichen Organismus hingegen zwischen der Doppelbindung und der terminalen
Methylgruppe eingefhrt. Der Aufbau ungeradzahliger Fettsuren wird durch Propionyl-S-ACP als
Startmolekl in Gang gebracht, Hydroxyfettsuren entstehen durch direkte Hydroxylierung der Fettsuren.
CH3CO-SCoA
Acetyl-CoA-
HCO3-
OOCCH2CO-SCoA
Carboxylase
Malonyl-CoA
Acetyl-CoA
SH
SH
CH3CO-SCoA
Enzym
Enzym
SH
Acetyl-CoA
CH3CO
HSCoA
Acetyl-ACP
-
-Ketoacyl+
Malonyl-CoA
Acetyl-ACP
ACP-Synthetase
S COCH2COO
Enzym
CH3CO S
irreversibel
Acetyl-Malonyl-ACP
- CO2
OH
S COCH2COCH3
Enzym
SH
NADPH + H+
Acetoacetyl-ACP
NADPH + H+
-KetoacetylACP-Reduktase
COCH2CH2CH3
Enzym
SH
S
Enzym
CO CH2 CH CH3
H
C
H
C
C3H
Enzym
Hydratase
SH
Acylransfer
3-Hydroxybutyryl-ACP
SH
Crotonyl-ACP
SH
Enzym
Butyryl-ACP
Enoyl-ACP-
u.s.w.
CH3CH2CH2CO S
Der Fettsureabbau, bereits wenige Jahre nach der Jahrhundertwende von F. KNOOP und H.D. DAKIN
begrndet und von F. LYNEN [1955] besttigt, ist als Umkehr des Aufbaus zu sehen, luft jedoch
ausschlielich in der Mitochondrien-Matrix ab. Die Fettsure wird zunchst durch berfhrung in das
Acyl-CoA aktiviert und dieses anschlieend mittels einer FAD-abhngigen Acyl-CoA-Dehydrogenase zum
2-trans-Enoyl-CoA dehydriert. Danach wird stereospezifisch zum L-Isomeren des 3-Hydroxyacyl-CoA
hydratisiert, es erfolgt NAD+-Oxidation zur 3-Keto verbindung, und Acetyl-CoA-Abspaltung gibt das um
zwei C-Atome krzere Acyl-CoA, welches als Substrat in die nchste Reaktionsrunde eingeht (Formel 2-5).
Bei jedem Durchgang ensteht ein Acetyl-CoA, das im Tricarbonsurecyclus weiter abgebaut wird. Aus 1
Molekl Palmitinsure werden insgesamt 129 Molekle ATP gebildet (entspricht etwa 40 % der
Verbrennungsenergie der Fettsure). Die bei der Dehydrierung entstandenen zwei Paar Wasserstoffe gehen
in die Atmungskette (ATP-Synthese) ein.
R(CH2)n(CH2)2CO-SCoA
R(CH2)n(CH2)2CO-SCoA
+ AMP + P2O74-
+ HSCoA + ATP
FAD
Acyl-CoA-Dehydrogenase
FADH2
R(CH2)nCH=CHCO-CoA
9-trans-Enoyl-CoA
H2O
Acetyl-CoA
+
R(CH2)nCO-SCoA
Enoyl-CoA-Hydratase
Acyl-CoA
OH
R(CH2)nCHCH 2CO-SCoA
Hydroxyacyldehydrogenase
Thiolase
L-3-Hydroxyacyl-CoA
NAD+
O
R(CH2)nCHCH 2CO-SCoA
NADH + H+
3-Ketoacyl-CoA
HSCoA
Beim Abbau (Z)-ungesttigter Fettsuren wie der lsure mit ihrer Doppelbindung in 9-Position entsteht in
einem spteren Zyklusdurchlauf ein Enoyl-CoA mit 3-cis-Konfiguration statt der notwendigen 2-transGeometrie. Die reversible Umwandlung wird durch eine Enoyl-CoA-Isomerase katalysiert, bevor es wieder
in die normale Sequenz des Fettsureabbaus aufgenommen wird.
Acetogenine sind eine groe Familie von strukturell komplex aufgebauten wichtigen Moleklen. Sie sind
aus C2-Essigsure-Bruchstcken aufgebaut und wichtige Zwischenprodukte der Biogenese vieler
Naturstoffe, deren Biosynthese durch Kondensationen von Acetyl- und Malonyl-Coenzym A erfolgt. Sie
werden auch als Polyketide bezeichnet, weil die biosynthetisch gebildeten Verbindungen im allgemeinen
zahlreiche, meist durch Methylengruppen getrennte und enolisierbare Ketogruppen enthalten. Sie werden
mit n = 2 als Diketid, mit n = 3 als Triketid, als Tetraketid, etc. bezeichnet. Viele Polyketide sind wichtige
therapeutische
Agenzien
wie
z.B.
Antibiotika,
Immunosuppressoren,
Antikrebsmittel
und
veterinrmedizinische Produkte. Formel 2-6 zeigt die mgliche Kondensation von C2-Synthons zu C16Polyketiden durch eine Polyketidsynthase [PKS]. Typische Acetogenin-Derivate sind Mykotoxine wie das
Semiquadratsurederivat Moniliformin (Diketid), das Patulin (Tetraketid) aus Penicillium patulum, das
Mykotoxin Ochratoxin aus Aspergillus-Arten (Pentaketid), die Cytochalasane (Nonaketide), Aflatoxine und
Tetracyclin (Dekaketide).
O
O
O
H
CH2
OR
+
O
Polyketid
O-
HO
OH
S
OH
E
O
OH
O
OH
S
E
O
Von Sugetieren knnen mehrfach ungesttigte Fettsuren mit weiteren Doppelbindungen zwischen der 9Position und der terminalen Methylgruppe nicht biosynthetisiert werden. Sie sind aber in der Lage, aus
pflanzlicher Linolsure [(9Z,12Z)-9,12-Octadecadiensure] und -Linolensure [(9Z,12Z,15Z)-9,12,15Octadecatriensure] mehrfach ungesttigte Fettsuren herzustellen. So entsteht z.B. aus Linolsure ber Linolensure [6,9,12-18:3] und Homo--linolensure [8,11,13-20:3] die fr viele Biofunktionen wichtige
Arachidonsure [(5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14-Eicosatetraensure]. Mehrfach (Z)-ungesttigte Fettsuren
sind daher fr Tier und Mensch essentielle Nahrungsbestandteile und werden manchmal als Vitamin F
(17.3) bezeichnet. Mangel an essentiellen Fettsuren fhrt bei Ratten zu pathologischen Vernderungen der
Haut und zu Wachstumsstrungen, beim Menschen sind jedoch echte Vitamin-F-Mangelzustnde nicht
bekannt. Arachidonsure, die wie oben gezeigt aus Linolsure durch Kettenverlngerung und Dehydrierung
gebildet wird, ist Biosynthesevorstufe zu Eicosanoiden, hormonhnliche C20-Substanzen mit wichtigen
physiologischen Aktivitten, Nahrungsmittel mit hohem Anteil mehrfach ungesttigter Fettsuren sind
daher physiologisch wertvoll. Essentielle Fettsuren werden vor allem zum Aufbau von Zellmembranen
bentigt, bei Mangel an essentiellen Fettsuren kommt der aktive Stoffwechsel zum Erliegen. 5,8,11,14,17Eicosapentaensure [EPA, 5,8,11,14,17-Icosapentaensure] wird vorwiegend als Glycerid im Fischl und
in Meereswirbeltieren gefunden. Sie ist Vorlufer der Prostaglandin-3- [PG3] und Thromboxan-3-Gruppe
[TBX3]
und
wirkt
gegen
Thrombosen,
Arthritis,
Schuppen
flechte,
Diabetes
mellitus
u.a.
Docosahexaensure [DHA] senkt Blutdruck und Cholesterinspiegel und kommt als Lebensmittel- und
Tierfutterzusatz in den Handel. Als DHA-reichste Quelle (30 - 40 %) wurde erst vor wenigen Jahren das
Fett aus den Augenhhlen des Thunfisch erkannt.
COOH
Linolsure
COOH
-Linolensure
COOH
Arachidonsure
10
Bei den mehrfach ungesttigten Fettsuren ist die im Saft der Vogelbeere [Sorbus aucuparia] vorkommende
kurzkettige Sorbinsure [(2E,4E)-2,4-Hexadiensure] zu nennen, die das Wachstum von Bakterien, Hefen
und Pilzen hemmt und daher als Konservierungsmittel verwendet wird.
Die Analyse komplexer Fettsuregemische gelingt meist mit hilfe der Gaschromatographie, wobei die
Fettsuren blicherweise als Methylester [FAME] chromatographisch aufgetrennt und nachgewiesen
werden. Heute wird in der Fettanalyse blicherweise ein Massenspektrometer als GC-Detektor verwendet
[GCMS], wodurch sich viele zustzliche analytische Mglichkeiten ergeben. Die Derivatisierung von
Fettsuren mit 2-Amino-2-methylpropanol fhrt zu 4,4-Dimethyloxazolinen [DMOX], die sich ebenso
mittels GCMS analysieren lassen. Diese "remote site"-Derivate von einfach oder mehrfach-ungesttigten
Fettsuren fragmentieren im Massenspektrum so charakteristisch, da aus den Spektren die Lage der
Doppelbindungen angegeben werden kann.
Zur Bestimmung der Positionen von Doppelbindungen in ungesttigten Fettsurederivaten dient hufig die
Ozonspaltung, die Epoxidierung mit m-Chlorperbenzoesure [m-CPBA], Glycolbildung und Derivatisierung
oder die Addition von Dimethyldisulfid mit anschlieender GC- und/oder GCMS-Charakterisierung der
Reaktionsprodukte.
1. O3
R-CH=CH-(CH 2)x-COOCH3
R-CH=O
O=CH-(CH 2)x-COOCH3
2. P(C6H5)3
O
m-CPBA
R-CH=CH-(CH 2)x-COOCH3
(CH2)x-COOCH3
OH
R-CH=CH-(CH 2)x-COOCH3
OH
OsO4 oder
R
(CH2)x -COOCH3
HJO4
1. CH3-S-S-CH3
R-CH=CH-(CH 2)x-COOCH3
CH3S
R
2. I2
SCH3
(CH2)x -COOCH3
OH
H2N
R-CH=CH-(CH 2)x-COOCH3
R-CH=CH-(CH 2)X
C
O
Fettsuren lassen sich durch hydrolytische Spaltung oder enzymatisch aus Lipiden erhalten. Die Industrielle
Gewinnung gelingt durch Hochdruck-Dampfspaltung von natrlichen Fetten mit Wasser bei 100-250 C in
Gegenwart geeigneter Katalysatoren (Magnesium-, Zinkoxid, Sulfonsuren) mit anschlieender
11
Mittels mikrobieller fettspaltender Enzyme, Lipasen, lassen sich Fette unter technisch relevanten
Bedingungen ebenso spalten. Die Kosten fr den Proze liegen im Vergleich zur Dampfspaltung zur Zeit
noch zu hoch, Verbesserungen dieser Enzymtechnologie knnten jedoch die Konkurrenzfhigkeit der
enzymatischen Fettspaltung erhhen.
Gesttigte Fettsuren beliebiger Kettenlngen erhlt man einfach durch Acetylensynthese und
anschlieende vollstndige Hydrierung der Dreifachbindung oder durch Hydrierung von natrlich
vorkommenden ungesttigten Fettsuren.
1. NaCN
CH3(CH2)n C
CNa + I(CH2)mCl
CH3(CH2)n C
(CH2)mCl
2. H2O
CH3(CH2)n C
(CH2)mCOOH
H2 / Ni-Kontakt
H2 H2
CH3(CH2)n C C (CH2)mCOOH
Zweifache Acylierung von Thiophen und Wolff-Kischner-Reduktion der Ketogruppen fhrt ebenso zu
Alkansuren mit beliebiger Kettenlnge.
O
Wolff-Kischner
Reduktion
CH2CH2COOH
(CH2)3COOH
S
O
O
RCOCl
R
(CH2)3COOH
Wolff-Kischner
Reduktion
R-CH2-(CH2)4-(CH2)3-COOH
Einfach (Z)- und (E)-ungesttigte Fettsuren mit wahlweiser Geometrie der Doppelbindung und variabler
Kettenlnge erhlt man durch partielle Hydrierung von Acetylenen. Die katalytische Hydrierung mittels
Lindlar-Katalysator oder P2-Nickel fhrt zu (Z)-Isomeren mit 98 % cis-Anteil, die homogene Hydrierung
mit Na in NH3 gibt (E)-Isomere in 99 % Reinheit.
NaNH 2, oder
CH3(CH2)n C
I(CH2)m Cl
CH3(CH2)n C
CH
(CH2)mCl
H3O+
CH3(CH2)n C
(CH2)mCOOH
Na / NH3
H2
Lindlar-Katalysator
(Z)-Fettsure
(E)-Fettsure
12
H
C O
R O-OOC-(CH2)m
R1
H
C
(C6H5)3P=CH
R -C
R -C
(C6H5)3P=CH-R
(CH2)m -COOR2
(CH2)m-COOR2
(CH2)m-COOR2
m = 3, 4, 5,...
C8
C2
C 7 C O O C H3
C8
C 7 C O O C H3
C3
C 7 C O O C H3
C 7 C O O C H3
C2
+
C
C3
C3
C8
C 7 C O O C H3
C8
C3
C 7 C O O C H3
C8
+
C
C2
C2
13
Seifen sind Alkalisalze hherer Fettsuren (C10-C18), die durch Neutralisation der Carbonsuren mit Alkalihydroxid oder bei der alkalischen Hydrolyse, Verseifung, von Fetten entstehen. Bereits vor rund 4.500
Jahren vermischten die Sumerer Pflanzenl mit Pottasche und kochten dadurch die ersten Seifen. Seifen
bilden in Wasser Micellen (vergl. 2.3), sind als Tenside, Netzmittel oder Detergentien grenzflchenaktive
Stoffe und vermindern die Oberflchenspannung des Wassers. Sie werden mit H+ oder Erd alkali-Ionen
(hartes Wasser) ausgefllt, danach tritt keine Schaumbildung mehr ein und die Seifenwirkung geht verloren.
Diese Kalkseifen fhren auerdem zu unerwnschten Nebenwirkungen in Textilien und Geweben.
CH3CH2CH2CH2-------------------------------------COO -
Lipophiles Ende
Na +
Hydrophiles Ende
Je nach Art unterscheidet man anionische, kationische, amphotere und nichtionische Detergentien. Seifen
zhlt man zu den anionenaktiven Detergentien, die als hydrophiles Ende negativ geladene Carboxylat-,
Sulfonat- oder Sulfatgruppen tragen. Fettalkoholsulfate [FAS] sind eine bedeutende Gruppe von Tensiden
auf der Basis von Fettalkoholen, die durch Fettsurereduktion entstehen. Kationische Seifen [Invertseifen]
weisen in der Regel eine quartre Ammoniumgruppe als Trger der Tensideigenschaft auf.
Ditalgdimethylammoniumchlorid [DTDMAC] wurde viele Jahre als hauptschliche KationtensidKomponente in Weichsplern verwendet. In den letzten Jahren hat die Bedeutung der Anionentenside zu
Gunsten der nichtionischen Tenside [Niotenside, Neutralseifen] abgenommen. Letztere sind weniger
empfindlich gegen Wasserhrte und besitzen bessere Lslichkeiten. Nichtionische Detergentien werden
neben ihrer ursprnglichen Verwendung in Wasch- und Reinigungsmitteln auch als Netz-, Dispergier- und
Emulgiermittel in Schmier- und Kraftstoffen, zum Frben von Stoffen, in der Lack- und Farbenproduktion,
bei der Produktion von Kunststoffen, bei der Flotation und in anderen technischen Verfahren sowie im
Lebensmittel- und Kosmetikbereich eingesetzt. In hochgereinigter Form werden Detergentien in der
Biochemie und Molekularbiologie als Lsungsvermittler eingesetzt. Zu den nichtionischen Detergentien
zhlen u.a. Derivate hherer Alkohole, Phenole oder Fettsuren mit Ethylenoxid (Formel 1-9). Glucamide
sind von Glucose und Fettsuren abgeleitete Tenside, die seit einiger Zeit in Waschmitteln eingesetzt
werden. Eine wichtige Gruppe sind die Fettalkoholethoxylate. Alkylpolyglykoside [APG] sind nichtionische
Tenside aus Glucose und Fettalkoholen, die aus Strke und Kokos- oder Palmkernl gewonnen werden, und
vollstndig abbaubar sind.
14
Natrliche Tenside spielen in allen Organismen eine wichtige Rolle, weil sie Stoffe untersttzen, wenn sie
natrliche Barrieren berschreiten mssen, z.B. vom Verdauungstrakt zum Blut, von Zelle zu Zelle oder
von der Atemluft zur Lunge.
H3C
Na +
(CH2)n-CO-O -
H3C
(CH2)n-O-SO2-O- Na +
Natriumalkylsulfat
Natriumcarboxylat
CH3
CH3
+
+
CH3-(CH2)1
CH2-C6H5
Cl
CH3-(CH2)11
CH2-C6H5
Br -
CH3
CH3
Benzyldimethyloctadecyl
ammoniumsulfat
N
C16H33
Benzyldodecyldimethyl
ammoniumbromid
CH3-(CH2)16 -CH2-(OCH2CH2)n-OH
Cl -
Polyether (n = 1 - 20)
Cetylpyridiniumchlorid
O
R
N
H
OH
OH 4
Glucamide, R = C11H23
1.7 Literatur
L.D. BERGELSON und M.M. SHEMYAKIN, Angew. Chem. 76, 113 (1964).
P.K. STUMPF, Metabolism of Fatty Acids, Ann. Rev. Biochem. 38, 159 (1969).
L.D. BERGELSON und M.M. SHEMYAKIN, in The Chemistry of Carboxylic Acids and Esters, p. 295, Intersc.
Publ., London (1969).
J.J. VOLPE und P.R. VAGELOS, Saturated Fatty Acid Biosynthesis and its Regulation, Annu. Rev. Biochem. 42,
21 (1973).
W.H. KUNAU Chemie und Biochemie ungesttigter Fettsuren, Angew. Chem. 88, 97 (1976).
F.D. GUNSTONE, Some New Chemical Properties of Unsaturated C18-Acids, Accounts of Chem. Res. 9,
34 (1976).
J. ERNST, W.S. SHELDRICK und J.-H. FUHRHOP, Die Struktur der essentiellen Fettsuren, Z. Naturforsch. 34b,
706 (1979).
P. NUHN, M. GUTHEIL und B. DOBNER, Vorkommen, Biosynthese und Bedeutung verzweigter Fettsuren,
15
16
Lipide
sind
lipophile,
mit
organischen
Lsungsmitteln
wie
Chloroform,
Ether,
Benzol
oder
Kohlenwasserstoffen extrahierbare organische Biomolekle. Sie sind essentielle Grundbausteine der Zelle und
haben
als
Bestandteile
von
Membranen,
Speicher-
und
Transportformen,
als
Schutz-
und
Oberflchensubstanzen und als Verbindungen, die bei der Zellerkennung, Artspezifitt und Immunitt eine
Rolle spielen, verschiedenste wichtige biologische Funktionen. Die Lipide werden unterschiedlich und oft auch
widersprchlich eingeteilt, eine befriedigende Klassifizierung aufgrund ihrer chemischen Struktur unterscheidet
a) komplexe Lipide, die Fettsureester darstellen und verseifbar sind, und b) nicht verseifbare einfache Lipide,
die keine Fettsuren enthalten. Zu den im folgenden beschriebenen komplexen Lipiden werden u.a. Fette und
le, Phospholipide, Sphingolipide und Wachse, zu den einfachen Lipiden hingegen z.B. die Terpene, Steroide
und Prostaglandine gerechnet, die gesondert behandelt werden.
Die Fettsureester des dreiwertigen Alkohols Glycerin werden Acylglycerine [frher Glyceride oder
Neutralfette]
genannt,
je
nach
Substitutionsgrad
unterscheidet
man
Monoacyl-,
Diacyl- und
Triacylglycerine [Mono-, Di- und Triglyceride]. Die Acylglycerine sind mengenmig die grte
Lipidgruppe, dienen als Energiespeicher des Organismus und stellen vor allem in Form der Triacylglycerine
das Depot- und Speicherfett im pflanzlichen und tierischen Mechanismus dar.
Bei den Triacylglycerinen kann Glycerin entweder mit nur einer Fettsure dreifach oder mit verschiedenen
Fettsuren verestert sein. Bei gemischten Estern mit unterschiedlichen Fettsureresten an C-1 und C-3 ist
das C-2 des Glycerins chiral; natrliche Fette sind aufgrund ihrer Biogenese aus L-Glycerin-3-phosphat
optisch aktiv.
H2C O
Palmitoyl
HC O Palmitoyl
H2C
Tripalmitoylglycerin
[Tripalmitin]
einfaches Triglycerin
H2C O
HC O Palmitoyl
H2C
O Palmitoyl
Stearoyl
1-Stearoyl-1-palmitoyl-3-oleyl-glycerin
gemischtes Triacylglycerin
O Oleoyl
Die bei Raumtemperatur festen Acylglycerine werden als Fette bezeichnet, die flssigen als le. Die
natrlichen Fette sind gemischte Triacylglycerine mit meist fnf oder mehr verschiedenen Fettsuren (zur
Fettsurezusammensetzung einiger Fette und le vgl. Tab. 2-2). Monoacylglycerine und Diacylglycerine
[1,2-Diacyl-sn-glycerine
(sn
stereospezifische
Nummerierung,
vgl.
2.2.4.1)]
kommen
als
Zwischenprodukte des Fettstoffwechsels nur selten in der Natur vor. In der Biochemie sind sie als
17
Bestandteile von Glycerolipiden, die bei der intrazellulren Signalbertragung bei der Bindung an
Rezeptoren als second messengers freigesetzt werden, bekannt.
Die Fettsure-Zusammensetzung der Fette hngt stark von der Herkunft ab (Tab. 2-2). Pflanzliche Fette sind
reicher an ungesttigten Fettsuren als tierische Fette, wobei lsure berwiegt. Zahlreiche Fette aus
Pflanzensamen enthalten oft spezielle Fettsuren in relativ groen Mengen, so z.B. Pflanzen aus der Familie
Lauraceae die Laurinsure, Myristicaceae die Myristinsure, der Sapindaceae Arachidonsure und der
Brassicaceae Erucasure. Charakteristisch ist das Vorkommen von Hydroxyfettsuren im Ricinusl. Die
Zusammensetzung der Fette hngt auerdem vom Klima ab, in dem die Pflanze aufgewachsen ist. Pflanzen
wrmerer Gegenden enthalten meist feste Fette, solche gemigter oder kalter Zonen vorwiegend le. Eine
breite Palette an Rohstoffen auf der Basis natrlicher le und Fette steht der industriellen Chemie (als
Oleochemie bezeichnet) zur Verfgung. Bevorzugt wurde Rindertalg als Basis fr C16/C18-Fettsuren sowie
Kokos- und Palmkernl als Quelle fr C12/C14-Fettsuren genutzt. Daneben finden aber auch Pflanzenle
mit C18-Fettsuren wie Palml, Raps-, Sonnenblumen- und Rizinusl Verwendung. Auf Glycerin,
Fettsuren und Fettsureestern sowie den einfach zugnglichen Fettalkoholen und Fettaminen baut sich ein
weiteres Produkt spektrum auf, das von Tensiden ber Kunststoffadditiva bis hin zu Kosmetika und
Pharmaka reicht.
Olivenl
(Olea europea sativa)
Leinl
(Linum usitassimum)
Kokosl
(Cocus nucifera)
Ricinusl
(Ricinus communis)
Chaulmoogral
(Hydnocarpus Kurzi)
Sojal
45
50
15 18
7 - 20
0-3
5-9
4-7
8 - 10
1-4
65 86
13 36
5-8
1-2
1-2
1-7
4 - 15
4 - 15
5 - 15
10 25
1-2
30 - 67 (18:3)
28
53
5 - 10 (10:0),
5 - 9 (8:0)
88 - 95
(Hydroxysuren)
81
(cycl. Suren)
7
Palml
42
41
10
Rapsl
60
20
15
Kokosl
48
17
16
Palmkernl
50
15
15
10
12 16
20 25
8 - 13
41
51
39
42
27
34
Schweineschmalz
Rindertalg
Kuhmilchfett
8 13
25
30
25
30
25
32
3-8
2-4
10
5 - 10 (ges.
Fettsuren C4 - C12)
18
Stark ungesttigte Fette werden auch trocknende le genannt und finden als Firnisse und lfarben
(bestehend aus Leinl und Farbpigmenten wie HgS, Mennige, etc.) Verwendung. Bei Luftzutritt und
Belichtung tritt Autoxidation ein, es bilden sich Peroxide (Ranzigwerden), die stark ungesttigten le (vgl.
Formel 2-3) verharzen an der Luft.
Der Schmelzpunkt der Glyceride wird durch die Surekomponenten bestimmt und steigt mit der Lnge der
Fettsuren. Fette mit cis-ungesttigten Fettsuren schmelzen niedriger als solche, die trans-ungesttigte
enthalten. Je strker der Grad der Ungesttigtheit, desto niedriger ist der Schmelzpunkt des Fetts.
Triacylglycerine als Ester sind in Wasser unlslich und bilden keine Mizellen (vgl. 3.1), nur Monoacyl- und
Diacylglycerine sind aufgrund der freien OH-Gruppen dazu befhigt. Letztere sind zur Herstellung
homogener und gut verdaulicher Fettprodukte fr die Lebensmitteltechnologie von Bedeutung.
Fette sind die Hauptenergiereserven der Organismen. Sie werden im menschlichen Organismus durch
Lipasen, z.B. im Pankreassaft, enzymatisch hydrolysiert. Entstehendes Glycerin und Fettsuren werden
weiter metabolisiert oder durch Acylierung von Glycerinphosphat Depotfett gebildet. Depotfette kommen
vor allem in Pflanzensamen und adipsem Gewebe der Tiere vor, das ber 80% Fett enthalten kann. Die
Zusammensetzung tierischen Depot fetts ist von der Tierart, dem Organ und der Nahrungsquelle der Tiere
abhngig. Bei Landtieren berwiegen dabei Palmitinund Stearinsure, Fette von Meerestieren enthalten viel
ungesttigte Fettsuren mit 16 - 22 C-Atomen. Milchfette besitzen einen greren Anteil an kurzkettigen
Fettsuren (Tab. 2-2).
Da Fette Gemische von Glyceriden sind und in der Regel keine genaue chemische Zusammensetzung
angegeben werden kann, wurden zur Charakterisierung sowie Kennzeichnung und Qualittssicherung in der
Lebensmittelindustrie und Pharmazie sog. Kennzahlen eingefhrt: Die Iodzahl [IZ] gibt an, wieviel g Iod an
100 g Fett addiert werden und dient zur Angabe der Menge an ungesttigten Fettsuren. Die
Verseifungszahl [VZ] gibt an, wieviel mg KOH zur Verseifung von 1 g Fett und zur Neutralisation freier
Fettsuren verbraucht werden. Die Surezahl [SZ] gibt an, wieviel mg KOH zur Neutralisation der freien
Suren in 1 g Fett verbraucht werden. Die Esterzahl [EZ] dient zur Charakterisierung von Fetten und bildet
die Differenz zwischen der Verseifungszahl und der Surezahl. Die Hydroxylzahl [OHZ] bestimmt durch
Acetylierung den Anteil an Hydroxyfettsuren, der in natrlichem Fett stets vorhanden ist. Die Peroxidzahl
[PZ] gibt die Menge an Primrprodukten der Autoxidation durch Oxidation von 2 I- zu I2 und Rcktitration
an.
19
Die Gewinnung von Fetten aus natrlichen Quellen erfolgt durch kaltes oder heies Pressen, Ausschmelzen
aus tierischem Gewebe oder Extraktion mit organischen Lsungsmitteln. Als weitere Fettquelle kommt die
Milch von Sugetieren in Frage. Die Oxidation von Paraffinen (Kohlenwasserstoffen) zu Fettsuren und
anschlieende Veresterung mit Glycerin wird nur technisch angewendet. Als Fetthrtung wird die
Hydrierung von ungesttigten Fettsuren aus billigen flssigen pflanzlichen und tierischen Fetten zu
hherschmelzenden, halbfesten bis festen Fetten bezeichnet, sie spielte frher vor allem in der MargarineProduktion eine Rolle. Die Hydrierung macht pflanzliche Fette streichfhig und mindert durch Absttigung
der Doppelbindungen die Anflligkeit gegenber Autoxidation. Gleichzeitig aber werden die essentiellen,
mehrfach ungesttigten Fettsuren entfernt. Modernen Margarinen werden heute Antioxidantien wie
Vitamin A und E oder Citronensure, die Schwermetall-Ionen bindet, zugesetzt, ferner synthetische
Aromagemische, deren Zusammensetzung mit der natrlicher Fette oder Butter identisch ist.
Mithilfe spezifischer Lipasen lassen sich natrliche oder synthetische Triglyceride in hochwertige Fette
umestern. So gelingt die Herstellung von Kakaobutter aus Olivenl und Stearinsure mittels immobilisierter
Rhizopus-Lipase.
Umsetzungen von fettchemischen Rohstoffen zu industriellen Zwischen- und Endprodukten zeigt Formel 210. Da Trennverfahren in der Oleochemie nur bedingt anwendbar sind, werden Gemische, so sie aus
anwendungstechnischen Grnden von Vorteil sind (Wasch- und Reinigungsmittel, Schmiermittel), als
solche umgesetzt.
H2C
CO R
HC
CO R
H2C
CO R
CH3OH Umesterung
NaOH Verseifung
O
R
H2O Hydrolyse
C OCH3
Methylester
CH2
C ONa
O
R
Seife
H2
R
Fett
OH
Fettalkohole
OH
Fettsuren
NH3 / H2
R
CH2 NH2
Fettamine
Die Strukturaufklrung von Fetten erfolgt zunchst durch Identifizierung der einzelnen Fettsuren, wobei
die Fette hydrolytisch durch Lipasen oder alkalische Verseifung gespalten werden. Die entstehenden Suren
werden blicherweise in die flchtigeren Methylester berfhrt und anschlieend durch GCMS ihre
Struktur aufgeklrt.
20
Acylglycerine knnen auch mit Hilfe der Dnnschichtchromatographie [DC] getrennt und identifiziert
werden. Zur Abtrennung von Glyceriden, die mit gesttigten Fettsuren substituiert sind, von solchen mit
ungesttigten Fettsuren wird zweckmigerweise die DC-Platte mit Silbernitrat imprgniert. Ag+ geht
Wechselwirkungen mit -Systemen ein, wodurch die ungesttigten Acylglycerine strker zurckgehalten
werden und langsamer mit dem Laufmittel wandern. Andere gngige Analysentechniken zur Fettanalyse
sind die HPLC und vor allem die Gaschromatographie.
Acylglycerine mit Etherbindung sind (zum Unterschied von Etherlipiden, 2.2.5) seltener vorkommende
Glycerinester, bei denen zwei Hydroxygruppen des Glycerins mit Fettsuren verestert und die dritte mit
einem langkettigen Fettalkohol verethert sind. Diese Lipide lassen sich nur durch leistungsfhige
chromatographische Methoden von den Triacylglycerinen abtrennen und entgingen dadurch lange Zeit ihrer
Entdeckung. Milde alkalische oder enzymatische Hydrolyse fhrt zu den entsprechenden Glycerinethern.
H2C O
CO-R1
HC O CO-R2
H2C
(CH2)15 CH3
1,2-Diacyl-3-hexadecyl-glycerin
2.1.3 Glykosylacylglycerine
Die Glykosylacylglycerine oder Glyceroglykolipide gehren zur Gruppe der Glykolipide und sind Glycerinester,
bei denen die C-3-OH-Gruppe des Glycerins einen glykosidisch gebundenen Zuckerrest trgt. Mono- und
Diglykosyldiacylglycerine wurden ursprnglich aus hheren Pflanzen, spter auch aus tierischem Gewebe und
Mikroorganismen isoliert, auch Trisaccharide als Zuckerkomponenten sind bekannt.
H2C
O COR
HC
O COR
H2C
OH OH
OH
O
H O
CH2OH
In der Chloroplasten-Membran hherer Pflanzen und Algen sind neben Phosphatidylglycerin (2.2.4.1) fast
ausschlielich Monogalactosyl-diacylglycerine sowie Digalactosyl-diacylglycerine enthalten. So bestehen z.B.
ber 70 % der Gesamtlipide von Tabakblttern aus Mono- und Digalactosyl-diacylglycerinen. In grampositiven Bakterien kommen vor allem Glykolipide vor, die neben Galactose auch Glucose und Mannose als
Kohlenhydratkomponenten besitzen.
21
Phosphoglyceride, auch Glycerophosphatide, Phosphatide oder Phospholipide genannt, sind die zweite groe
Gruppe der verseifbaren Lipide und stellen charakteristische Komponenten zellulrer Membranen dar. Aber
nicht alle phosphatenthaltenden Lipide sind Phosphoglyceride. In den Phosphoglyceriden ist eine primre
Hydroxygruppe des Glycerins mit Phosphorsure oder Phosphorsuremonoestern verestert, die beiden anderen
Hydroxygruppen mit Fettsuren. Das Grundgerst ist das chirale Glycerinphosphat, wobei das natrlich
vorkommende zur L-Reihe gehrt.
Die Konfigurationszuordnung des natrlichen Glycerinphosphats gelang BAER und FISCHER durch Oxidation
der primren OH-Funktion und anschlieender Hydrolyse der Phosphatgruppe zu L-Glycerinaldehyd. Wenn die
sekundre Hydroxygruppe in der FISCHER-Projektion nach links zeigt, wird das darberliegende C-Atom, das
nicht phosphorsubstituiert ist, als C-1 definiert und damit die Verbindung als sn-Glycerin-3-phosphat [sn fr
stereospezifische Nummerierung der IUPAC-IUB-Kommission nach HIRSCHMANN] bezeichnet. Nach den
IUPAC-Regeln mu aber fr die Zuordnung zur optischen Reihe das Atom mit der niedrigeren Positionszahl
herangezogen werden und damit die Verbindung als D-Glycerin-1-phosphat bezeichnet werden.
CH2-OH
HO
H2C
H2C
H O
O P OH
OH
O PO3H2
C OH
H2C
H2C
HO
OH
C
H2C
O PO3H2
H
OH
R -CO-O C
H2C
PO-OH
3-sn-Phosphatidsure
L-Phosphatidsure
OH
Zustzlich zu den beiden Fettsuren R1COOH und R2COOH enthalten die anderen Phosphoglyceride noch
einen Aminoalkohol wie Cholin, Ethanolamin oder Serin bzw. Alkohol wie Glycerin oder Inosit, der mit der
Phosphorsure verestert ist. Die wichtigsten Glycerophospholipide sind in Tab. 2-3 zusammengefat.
22
Alkoholkomponente
Phosphoglycerid
Phosphatidsure
Cholin
HO-CH2-CH2-N+(CH3)3
Ethanolamin
HO-CH2-CH2-NH2
Serin
HO CH2 CH COONH2
Phosphatidylcholine
(Lecithine)
Phosphatidylethanolamine
(Colaminkephaline)
Phosphatidylserine
(Serinkephaline)
Glycerin
HO-CH2-CH(OH)-CH2-OH
HO OH
Inosit
HO
Phosphatidylinosite
OH
HO OH
Phosphatidylcholine [Lecithine, neuerdings auch Cholin-Phosphoglyceride als Name empfohlen] werden vor
allem im Herzmuskel, in der Leber, Lunge, Gehirn, in Milch, im Eidotter (Eilecithin) und Sojabohnen
gefunden, in Bakterien kommt es nicht vor. Lecithine, die ber einen weiten pH-Bereich als Zwitterionen
vorliegen, werden in der Lebens mittel-, Kosmetik- und Pharmaindustrie als Emulgatoren eingesetzt. Wegen
des Gehalts an ungesttigten Fettsuren mssen die natrlichen Phospholipide bereits whrend der Extraktion
vor Autoxidation geschtzt werden.
H2C O
COC15 H31
HC O
COC15 H31
H2C O
PO
Lecithin
Dipalmitoyllecithin
CH2CH2N+ (CH3)3
OH
Lipide
[surfactant
lipids]
der
Lungenalveolen
bestehen
berwiegend
aus
Dipalmitoylphosphatidylcholin.
Surekatalysierte oder alkalische Hydrolyse von Phosphatidylcholin gibt -Glycerinphosphat. Enzymatisch
lassen sich Phosphatidylcholine durch Phospholipasen spezifisch spalten (Abb. 2-4), durch Abspaltung der
Fettsurereste in 1- und 2-Stellung durch Phospholipase B entsteht sn-Glycerin-3-phosphocholin, das als
Ausgangsprodukt fr Partialsynthesen von Phospholipiden dient (S. 80). Ferner lassen sich spezifisch die
Phosphorsure-Cholinesterbindung durch Phospholipase D und die Glycerin-Phosphorsurebindung durch
Phospholipase C spalten. Phospholipase C ist in bestimmten Bakterien, Phospholipase D in Bltenpflanzen
enthalten. Durch Einwirkung von Phospholipase D sind Phosphatidsuren partialsynthetisch zugnglich.
Lysophospholipide besitzen eine freie sekundre Hydroxylgruppe, wie sie durch Abspaltung der C-2-Fettsure
durch Phospholipase A2 entstehen, und besitzen die Fhigkeit Erythrozyten zu hmolysieren, der sie ihren
Namen verdanken.
23
H2C O CO R1
R2
CO O CH
H2C O
Phospholipase B (A2)
Phospholipase B (A1)
O
P O
H2 H2 +
C C N(CH3)3
O-
Phospholipase C
Phospholipase D
COC15 H31
HC O
COC15 H31
Kephalin
Dipalmitoylkephalin
+
H2C O
PO
CH2CH2NH3
O-
Im Phosphatidylserin [Serinkephalin] ist die Phosphorsure mit der Hydroxyfunktion der Aminosure L-Serin
verestert. In Abhngigkeit vom pH-Wert knnen die Phosphatidylserine in mehreren ionogenen Formen
existieren. Bei Bakterien ist Serinkephalin der Biosynthese-Precursor von Phosphatidylethanolamin.
H2C O
COC15 H31
HC O
COC15 H31
Serinkephalin
H2C O
PO
CH2 CH COO-
NH2
Phosphatidylinosite sind stickstofffreie Glycerophospholipide, bei denen Phosphatidsure mit dem cyclischen
Zuckeralkohol myo-Inosit (vgl. 5. ) verestert ist. Sie sind etwas wasserlslich und bilden stabile Gele. Aus dem
Herzmuskel konnten Phosphatidyl-myo-inosite isoliert werden, die Fettsure, Glycerin, myo-Inosit und
Phosphorsure im molaren Verhltnis 2:1:1:1 enthielten. Bei alkalischer Hydrolyse dieser Phosphatidylinosite
werden infolge einer Phosphatgruppenwanderung myo-Inosit-1-phosphat und myo-Inosit-2-phosphat gebildet.
Im Gehirn kommen Phosphatidylinosite mit weiteren Phosphorsureresten in 4- oder in 4- und 5-Stellung des
Inosits vor. Pflanzen und Mikroorganismen bilden komplexe Phosphatidylinosite, die noch Kohlenhydrate,
Sphingosin, Amine oder Aminosuren enthalten. So enthalten z.B. die aus M. tuberculosis isolierten
Phosphatidylinosite einen oder mehrere D-Mannosereste in 2-Stellung des myo-Inosits.
H2C O-COR1
HO
5
4
R O
OH
6 O
OR4
3
OH
O
P O
OH
HC O-COR2
CH2
Phosphatidylinosit
R3, R4 = H
R3 = PO3H2, R4 = H
R3, R4 = PO3H2
Im Phosphatidylglycerin ist ein zweites Molekl Glycerin mit der Phosphorsure verestert. Es kommt in
geringen Konzentrationen in den Chloroplasten der Pflanzen, in Bakterien und auch in Sugetieren vor.
Natrliches Phosphatidylglycerin besitzt die Struktur 3-sn-Phosphatidyl-1'-sn-glycerin und ist der Grundkrper
24
weiterer Glycerolipide, wie z.B. der Cardiolipine (oder Diphosphatidylglycerine), bei denen das zentrale
Glycerinmolekl mit einem zweiten Phosphatidsurerest verestert ist. Sie sind in Membranen von Bakterien
enthalten und fr die innere Membran der Mitochondrien von Eukaryoten typisch. Cardiolipin wurde zuerst aus
dem Herzmuskel, in dem es besonders viele Mitochondrien gibt, isoliert.
2
H2C O R1
H2C O
CH
O HO CH
H2C O P O CH2
R3 = H:
Ph osphatidylglycerin
R3 = Phospha tidyl:
Cardi olipin
R3 = -Co-CH(NH2)-(CH2)4-NH2: Lysylphosphati dylglycerin
R3
O-
Phosphatidylglycerin wird am C-3' des zweiten Glycerinrestes mit Aminosuren wie Lysin oder Alanin
verestert als Lipoaminsure [besser O-Aminoacyl-phosphatidylglycerin] hauptschlich in grampositiven
Bakterien gefunden. Auerdem findet man in Lipiden von Bakterien Phosphatidylglycerin-Derivate, bei denen
die 3'-OH-Gruppe des zweiten Glycerins glykosidisch an D-Glucosamin gebunden ist.
Die Biosynthese der Phospholipide geht von L-Glycerin-3-phosphat aus. Die zur Anbindung der Fettsuren
erforderliche Aktivierung erfolgt durch CoA und fhrt zur Phosphatidsure. Die Aktivierung der polaren Kopfgruppen erfolgt blicherweise mit Pyrimidindinucleotiden wie Cytidintriphosphat CTP. Durch Reaktion von
CDP-Diacylglycerin mit Serin wird in Bakterien wie z.B. E. coli Phosphatidylserin gebildet. In tierischem
Gewebe und in E. coli kann daraus durch Decarboxylierung Phophatidylethanolamin entstehen, Methylierung
fhrt
zu
Phosphatidylcholin.
CDP-Diacylglycerin
ist
gleichzeitig
die
Biosynthese-Vorstufe
von
Phosphatidylinosit und Phosphatidylglycerin. Das 3-sn-Phosphatidyl-1'-sn-glycerin reagiert mit CDPDiacylglycerin unter CMP-Abspaltung zu Cardiolipin. In Bakterien wird Cardiolipin auch durch Reaktion
zweier Molekle Phosphatidylglycerin unter Glycerinabspaltung gebildet.
sn-L-Glycerin-3-phosphat
2-Acyl-SCoA
Phosphatidsure
Diacylglycerin
Triacylglycerin
CTP
UDP-Zucker
CDP-Diacylglycerin
Serin
Cerebroside
Phosphatidylserin
- CO2
Inosit
Glycerophosphat
Phosphatidylethanolamin
Phosphatidylglycerin
Methylierung
Phosphatidylcholin
CDP-Glycerin
Phosphatidylinosit
Cardiolipin
25
Phosphatidylcholine gewinnt man aus natrlichem Material wie Eigelb oder Sojabohnen, die Isolierung anderer
Phospholipide aus natrlichen Quellen ist hingegen auerordentlich schwierig. Phospholipide mit definierter
Zusammensetzung, wie sie zur Darstellung von Modellmembranen bentigt werden, sind nur synthetisch
zugnglich. Als Ausgangsverbindungen zur Totalsynthese von Phospholipiden kommen 1,2-Diacylglycerin,
1,2-Diacyl-3-iodhydrin oder Phosphatidsure in Frage. Zur Phosphorylierung der C-3-Hydroxygruppe des
Diacylglycerins wird hufig 2-Bromoethylphosphorsuredichlorid verwendet, das anschlieend mit
Trimethylamin zu Phosphatidylcholin umgesetzt wird (Formel 2-11).
H2C
HC
H2C
O-COR
+
O-COR
Cl
O
P O
H2C O-COR
H2 H2
C C Br
Et3N, CHCl 3
H2C
Cl
OH
HC
O-COR O
O
H2 H2
C C Br
OH
1,2-Diacylglycerin
H2C O-COR
1. MeN3
2. Ag2CO3
HC O-COR O
H2C
H2 +
C N(CH3)3
H2
C
Phosphatidylcholin
OH
Formel 2-11 Totalsynthese von Phosphatidylcholin (nach HIRT und BERCHTHOLD sowie EIBL).
Ausgehend von 1,2-Diacylglycerin-3-iodhydrin gelangt man nach HAAS und VAN DEENEN zu den Zielverbindungen. Kondensationsmittel wie Carbodiimid [DCC] oder Triisopropylbenzolsulfochlorid [TPS] erlaubt
die Verwendung von Phosphatidsuren als Startsubstanzen fr die Synthese von Glycerophospholipiden
(Formel 2-12). Phosphatidsuren kann man aus sn-Glycerin-3-phosphat mit Fettsureanhydriden gewinnen.
H2C O-COR
+
HC O-COR O
H2C O
P
OH
HO
H2 H2
C C
OH
Phosphatidsure
H2C O-COR
H2C O-COR
Phosphatidylethanolamin
HC O-COR O
H2C O
H2
C
H2
C NH2
H2C O
H2
C
H2
C NH-Schutzgruppe
OH
OH
Partialsynthesen, die von aus natrlichen Quellen isolierten Phosphatidylcholinen ausgehen, gewinnen an
Bedeutung. Mittels Phospholipasen knnen die einzelnen Fettsureester spezifisch hydrolytisch gespalten und
das entstandene optisch reine sn-Glycerophosphocholin mit entsprechenden Fettsurederivaten wieder definiert
acyliert werden.
Reine Phospholipide sind weie, wachsartige Substanzen, die sich wegen des hohen Anteils ungesttigter Fettsuren durch Luftsauerstoff leicht zersetzen. Meist ist die Fettsure in Position 1 des Glycerins gesttigt, die in
26
2-Position ungesttigt. In den meisten unpolaren Lsungsmitteln, die etwas Wasser enthalten, sind
Phosphoglyceride lslich. In Wasser selbst gehen nur sehr geringe Mengen wirklich in Lsung, der Groteil
liegt als Micellen vor (vgl. 3. Lipoproteine und Membranen).
In Abhngigkeit vom pH-Wert liegen Phospholipide je nach Art der funktionellen Gruppen in verschiedenen
ionogenen Formen vor. Bei pH 7 trgt die Phosphatgruppe eine negative Ladung, die polaren Gruppen von
Phosphatidylethanolamin und Phosphatidylcholin eine positive Ladung und stellen deshalb Zwitterionen ohne
berschuladung dar. Phosphatidylserin besitzt aufgrund seiner Carboxylfunktion eine negative berschuladung, O-Lysyl-phosphatidylglycerin hingegen besitzt aufgrund der zweiten Aminogruppe des Lysins eine
positive berschuladung.
2.1.5 Etherlipide
Bei den Etherlipiden ist das C-1 des Glycerins ber eine Etherbindung mit einem Fettalkohol verknpft. Am
lngsten bekannt sind die Plasmalogene, 1-Alk-1-enyl-2-acylglycerophospholipide, bei denen eine hydrophobe
Gruppe der cis-Enolether eines Fettaldehyds (Hexadecanal oder Octadecanal) ist. Plasmalogene kommen
vergesellschaftet mit anderen Glycerophospholipiden in Pflanzen, Tieren und Mikroorganismen vor, besonders
reichlich im Gehirn und Muskeln und werden je nach Struktur als Plasmenylethanolamine oder
Plasmenylserine bezeichnet.
H2C O CH CH (CH2)n CH3
O
ROC-O CH
H
H2C O P O CH2 C COO
CH3
H2C O CH CH (CH2)n
O
ROC-O CH
H2 H2 +
H2C O P O C C NH3
Plasmenylethanolamin
+ NH3
Plasmenylserin
Ein Etherlipid ist der platelet activating factor [PAF], ein 1-O-Hexadecyl- bzw. 1-O-Octadecyl-2-acetyl-snglyceryl-3-phosphorylcholin, der nach Stimulierung von Zellen, die bei Entzndungen eine Rolle spielen,
freigesetzt wird, und der in geringsten Konzentrationen (10-10 bis 10-11 M) Thrombozyten aktiviert. Darber
hinaus besitzt PAF selektive Wirkung gegen Tumorzellen und Einflu auf den Blutdruck.
H2C
CH3CO-O
CH
H2C
(CH2)15 CH3
O
O P O
O
1-O-Hexadecyl-2-acetyl-sn-glyceryl-3-phosphorylcholin
PAF
+
CH2
CH2
N(CH3)3
Ungewhnliche Etherlipide wurden in den methanbildenden Archaebakterien gefunden, die aus CO2 durch
Reduktion CH4 produzieren. Sie enthalten als Hauptbestandteil Di- und Tetraether des Glycerins mit C20isoprenoiden Monoalkoholen (Dihydrophytol) oder
thermoacidophile
Thermoplasma
acidophilum
ein
C40-isoprenoiden
bipolares
Dialkoholen.
Tetraetherlipid
So
mit
enthlt
das
isoprenoiden
27
der Bakterienmembran fhrt. An einigen Stellen sind die beiden Membranseiten ber die hydrophoben
Dialkoholketten kovalent miteinander verbunden, was zu einer Stabilisierung der Membran fhrt.
H2C
HC
H2C
O-R
H2C
HC
H2C
R2-O
CH2
CH
CH2
O
O-R1
R1 = H, Phosphorylglycerin
R2 = Kohlenhydratrest
HO
OH
HO
2.1.6 Phosphonolipide
In den Phosphonolipiden ist statt der Orthophosphorsure der Phospholipide Phosphonsure mit Glycerin
verestert. Ciliatin ist ein aus Wimperntierchen isoliertes Derivat der 2-Aminoethanphosphonsure.
H2C
R2-CO O
CH
H2C
CO-R1
O
HO P
CH2
CH2
NH2
OH
O
O P
O
Ciliatin
aus Wimperntierchen
+
CH2
CH2
NH3
2-Aminoethanphosphonsure
Sphingolipide oder Sphingophospholipide sind komplexe Lipide mit langkettigen Aminoalkoholen als Grundgerst, die als Sphingosin bezeichnet werden. Alle Sphingolipide enthalten drei Komponenten: ein Molekl
Sphingosin (oder Sphingosin-Derivat), ein Molekl Fettsure, die amidartig an die Aminofunktion des
Sphingosins gebunden ist, und eine polare Gruppe.
2.1.7.1 Sphingosin
4-Sphingenin, Sphingosin, ist einer von etwa 20 verschiedenen natrlich vorkommenden langkettigen Aminoalkoholen. Sie sind Abkmmlinge des Sphinganin [D-erythro-2-Amino-octadecan-1,3-diol, Dihydrosphingosin],
dessen Homologe, Stereoisomere sowie Hydroxy- und ungesttigte Derivate hufig als Sphingoide bezeichnet
werden.
28
HO
H2C
NH2 OH
C
CH CH C13 H27
Sphingosin wurde bereits 1880 durch Hydrolyse aus Lipiden des menschlichen Gehirns erhalten und ist
zusammen mit Sphinganin in Sugetieren die hufigste Aminoalkoholkomponente der Sphingolipide. In
hheren Pflanzen und in Hefen werden Phytosphingosin [4-Hydroxysphinganin], in marinen Evertebraten
doppelt-ungesttigte Basen wie 4,8-Sphingadien als Sphingolipidkomponente gefunden.
2.1.7.2 Sphingomyeline
Die hufigsten Sphingolipide in den Geweben hherer Tiere und im Blutplasma (8 - 15 % der Gesamtlipide)
sind die Sphingomyeline, die mit einer langkettigen Fettsure ein Amid bilden und als polare Gruppe
Phosphorylethanolamin oder Phosphorylcholin enthalten. Die alkalische Hydrolyse fhrt zu Ceramiden, die als
N-Acylreste meist C24-Suren wie Lignocerinsure (24:0) und Nervonsure (24:115) oder die entsprechenden
-Hydroxysuren Cerebronsure oder Oxynervonsure enthalten.
OH
H2C
O PO
O CH2CH2-N(CH 3)3
H2C
OH
1
H C NH CO (CH2)7CH=CH(CH 2)7CH3
H
HC OH
C OH
HC CH-C13 H27
HC NH
Sphingomyelin
R2
CO R
R1 = -C23H47
-C23H45
-CH(OH)-C22H45
-CH(OH)-C22H43
Lignocerinsure
Nervonsure
Cerebronsure
Oxynervonsure
Die meisten Sphingolipide gehren zur Gruppe der Glykosphingolipide oder Sphingoglykolipide, die einen an
der primren Hydroxygruppe der Ceramide glykosidisch gebundenen Monosaccharid- oder Oligosaccharidrest
als polare Gruppe enthalten. Dadurch weisen die Glykosphingolipide eine groe strukturelle Mannigfaltigkeit
auf, wobei die Zucker bei den Zoosphingoglykolipiden weniger variiert werden als bei den entsprechenden
Phytosphingoglykolipiden (Tab. 2-4). Sie sind wasserlslich, wobei die Lslichkeit von der Zahl der Monosaccharideinheiten und der Anwesenheit anionischer Surekomponenten abhngt.
Die Glykosphingolipide werden eingeteilt in neutrale Sphingoglykolipide [Mono-, Di- und Oligoglykosylsphingolipide, Mono- und Oligoglycosylceramide] und saure Sphingoglykolipide, zu denen die Sulfoglykosylsphingolipide [Sulfatide] und Sialosylglykosylsphingolipide [Ganglioside] zhlen. Die neutralen Sphingoglykolipide enthalten als polare Gruppe einen oder mehrere Neutralzucker. Die einfachsten Vertreter dieser Gruppe
enthalten nur ein -glykosidisch gebundenes Monosaccharid und werden als 1,-Glykosylceramide oder
Cerebroside bezeichnet. Abspaltung der Fettsure durch alkalische Hydrolyse fhrt zum Glykosphingosin
Psychosin. Die Cerebroside des Gehirns und der Nerven sind meist D-Galactopyranoside [Galactocerebroside],
29
die anderer Organe D-Glucopyranoside oder Glucocerebroside, an die weitere Zucker gebunden sein knnen.
Fucose enthaltende Sphingoglykolipide werden als Fucolipide bezeichnet.
Die ersten Galactocerebroside wurden bereits 1882 aus menschlichem Hirn isoliert und als Phrenosin und
Kerasin bezeichnet. Diese und weitere Galactocerebroside wie Nervon bzw. Oxynervon unterscheiden sich
durch ihre Fettsurereste (Cerebronsure, Lignocerinsure, Nervonsure bzw. Oxynervonsure).
Zu den Oligoglykosylceramiden gehren Bestandteile der Zell membran, die die serologische Spezifitt der
Zellen bedingen, so u.a. die Blutgruppensubstanzen an der Oberflche der Erythrozyten, die L-Fucose als
essentielle Zuckerkomponente enthalten. Die terminalen Oligosaccharideinheiten bestimmen die Zugehrigkeit
zu den Blutgruppen A, B oder 0 und sind in Tab. 2-5 aufgefhrt. Die Oligosaccharide fr die Gruppen A und B
sind verzweigt, fr die Gruppe 0 unverzweigt. Die einzelnen Glykolipide konnten noch in verschiedene Typen
aufgetrennt werden, die sich in R [(Glyc)n-Ceramid] unterscheiden.
Abkrzung*
GbOse3
GbOse4
iGbOse3
iGbOse4
McOse3
McOse4
LcOse3
LcOse4
nLcOse4
GgOse3
GgOse4
GaOse2
GaOse3
GalNAc(13)
-GaOse3
*(Die ersten zwei bzw. drei (i = Iso, n = Neo) Buchstaben sind die Abkrzungen fr den Trivialnamen des
Oligosaccharids. Osen = Anzahl (n) von Monosaccharid-Einheiten (Ose) im Oligosaccharid).
Gala(14)-Galb(14)-Glc-Cer
GalNAcb(13)-Gala(1 4)-Galb(14)-Glc-Cer
Gala(13)-Galb(14)-Glc-Cer
GalNAcb(13)-Gala(13)-Galb(14)-Glc-Cer
Galb(14)-Galb(14)-Glc-Cer
Galb(13)-Galb(14)-Galb(14)-Glc-Cer
GlcNAcb(13)-Galb(14)-Glc-Cer
Galb(13)-GlcNAcb(13)-Galb(14)-Glc-Cer
Galb(14)-GlcNAcb(13)-Galb(14)-Glc-Cer
GlcNAcb(14)-Galb(14)-Glc-Cer
Galb(13)-GalNAcb(14)-Galb(14)-Glc-Cer
Gala(14)-Glc-Cer
Gal(14)-Gala(14)-Glc-Cer
GalNAc(13)-Gal(14)-Gala(14)-Glc-Cer
Globotriaose
Globotetraose
Isoglobotriaose
Isoglobotetraose
Mucotriaose
Mucotetraose
Lactotriaose
Lactotetraose
Neolactotetraose
Gangliotriaose
Gangliotetraose
Galabiose
Galatriaose
N-Acetylgalactosaminylgalatriaose
Tabelle 2-5. Terminale Oligosaccharidreste von Blutgruppensubstanzen (nach MORGAN und KABAT). R =
(Glyc)n-Ceramid
Blutgruppe
terminale Oligosaccharide
D-GalNAc-(13)
D-Gal-(13)-D-GlcNAc-(13)-R
L-Fuc-(12)
D-Gal-(13)
D-Gal-(13)-D-GlcNAc-(13)-R
L-Fuc-(12)
L-Fuc-(12)
D-Gal-(13)-D-GlcNAc-(13)-R
30
Bei den Sulfoglykosylsphingolipiden, (frher Sulfatide), ist in 3-Stellung der D-Galactose Schwefelsure esterartig gebunden. Eine andere Gruppe der sauren Glykosphingolipide sind die Ganglioside, die durch eine oder
mehrere in ihrem Oligosaccharidteil endstndig gebundene Sialinsuren charakterisiert sind und damit bei pH
7.0 eine negative Ladung tragen. In den Gangliosiden des Menschen ist N-Acetylneuraminsure die hufigste
Sialinsure. ber 20 verschiedene Ganglioside sind bisher identifiziert worden, in der grauen Hirnsubstanz
machen sie etwa 6 % der Gesamtlipide aus. Fast alle haben Glucose in glykosidischer Bindung am Ceramid, DGalactose und N-Acetyl-D-galactosamin kommen jedoch auch vor. Die Ganglioside des Sugetierhirns
variieren im Fettsurerest und im Kohlenhydratanteil, wobei die Zusammensetzung altersabhngig ist.
Ganglioside sind hauptschlich in den Membranen der Nervenzellen lokalisiert, dienen an der Zelloberflche
als Rezeptoren fr biologisch aktive Substanzen und spielen eine wesentliche Rolle bei den Wechselwirkungen
zwischen Zellen (Zellerkennung, Adhsion).
Am
besten
untersucht
ist
das
Rezeptorgangliosid
fr
Serotonin,
das
die
Struktur
NeuAc(24)Galb(14)GlcCer besitzt. Die meisten Ganglioside des ZNS haben jedoch wesentlich
kompliziertere Strukturen, die Molmassen der Ganglioside liegen zwischen 1.500 und 3.000.Ein relativ
hufiges Gangliosid, das u.a. in der Sugetier-Retina, in Rindernieren und im Hirngewebe nachgewiesen und
als melanom-assoziiertes Antigen bekannt ist, ist das Gangliosid GD3.
OH OH COOH
HO
AcHN
Gangliosid GD3
Rxn
O
HO
H O
OH
COOH
OH
OH
HO
AcHN
Rxn
O
Rxn
HO
HO OH
O
HO
Rxn
NHCOC23 H47
O
C13 H27
O
OH
OH
2.1.8 Glykolipide
Zum Unterschied von den oberhalb genannten Glykosiden gibt es eine Reihe von Glykolipiden, bei denen die
OH-Funktionen von Mono- oder Oligosacchariden direkt mit Fettsuren verestert sind. Zu ihnen gehren u.a.
toxische Lipide bestimmter Bakterien, die gesondert bei den Kohlenhydraten (5.7.2 Lipopolysaccharide)
abgehandelt werden. Eine auffllige Struktur besitzt ein aus marinen Bakterien isoliertes Glucoselipid, das man
als natrliches Tensid bezeichnen knnte.
31
Glucoselipid aus
marinen Bakterien spec. MM1
O
O
O
O
O
O
O
O
OH
OH
OH
OH
HO
2.1.9 Wachse
Als Wachse im engeren Sinne werden wasserunlsliche feste Ester hherer Fettsuren mit langkettigen Fettalkoholen oder cyclischen ein- oder zweiwertigen Alkoholen (z.B. Steroiden) bezeichnet. Als Fettsuren treten
in Wachsen hufig Laurin(12:0), Myristin- (14:0) und Palmitinsure (16:0), aber auch langkettige
Carbonsuren wie Cerotinsure (26:0), Montansure (28:0) oder Melissinsure (30:0) auf. Im Gegensatz zu den
anderen Lipiden sind die Surekomponenten fast ausschlielich gesttigt, hufig besitzen Alkohol und
Surekomponente die gleiche Zahl von C-Atomen. Zum Unterschied zu den Fetten sind Wachse aufgrund ihrer
lngerkettigen Alkohol- und Fettsure komponenten schwerer hydrolysierbar.
Natrliche Wachse sind meist Gemische dieser Wachsester mit Paraffinen und freien Alkoholen. Sie stellen
einen Schutz fr Haare, Federn, Haut, Bltter und Frchte gegen Umwelteinflsse und Mikroorganismen dar
und kommen als Cuticularlipide auf der Cuticula vieler Insekten vor. Die Hauptkomponenten von Bienenwachs,
das Strukturbildner fr Waben ist, sind Palmitinsureester von Fettalkoholen mit 26 bis 34 C-Atomen. Die
Hauptmenge ist Myricylpalmitat, wobei als Myricylalkohol ein Gemisch der Alkohole C30H61OH und
C32H65OH bezeichnet wird. Pflanzen wachse regulieren den Wasserhaushalt und schtzen Bltter vor dem
Austrocknen. Bei einigen pflanzlichen Wachsen wie z.B. den Wachsen der Tabak- und Kohlbltter bilden
gesttigte unverzweigte und verzweigte (iso- und anteiso-Reihe) Alkane den Hauptbestandteil, whrend in
tierischen Wachsen Paraffine nur in geringer Menge enthalten sind. Bei Sugetieren sind Ester des
Steroidalkohols Cholesterin hufig verbreitet. In einigen Wachsen kommen langkettige Diole vor, so z.B. 1,2Alkandiole im Wollwachs der Schafe oder ,-Diole im Carnauba-Wachs. Wollwachs wird als salbenartige
Masse durch Extraktion aus den Wollhaaren der Schafe gewonnen und dient zur Bereitung der Emulsionssalbe
Lanolin. Der Hauptbestandteil des sich in bestimmten Hohlrumen des Pottwals ansammelnden Walrats
[Cetaceum] ist Palmitinsurecetylester, C15H31CO-O-C16H33. Whrend die meisten Wachse wahrscheinlich
nicht wieder in den Stoffwechsel einbezogen werden knnen, stellen sie bei bestimmten Meerestieren wichtige
Reservestoffe dar.
32
H3C CH2
CH3
CH
(CH2)n CH2OH
CH3
iso-Alkan-1-ol
anteiso-Alkan-1-ol
Die Seide von Spinnen ist von einer Lipidschicht umhllt, die langkettige Methylether enthlt, auerdem
werden Diole und Ethanolamide darin gefunden. In Cuticularextrakten von Schmetterlingen und von
Wanderheuschrecken konnten langkettige 2,5-Dialkylfurane als Lipidbestandteile identifiziert werden.
H3CO
H3CO
H3CO
H3CO
HO
O
HO
N
H
O
OH
Wachse von Mycobakterien ergaben bei der Verseifung Phtiocerol, ein langkettiges methoxyliertes Diol. An
die Hydroxygruppen sind in diesen Wachsen Mycocerosinsuren, mehrfach methylierte, optisch aktive
Fettsuren, esterartig gebunden.
CH3
CH3
R-(CH 2)16
OH
OH
OCH3
Phenol.Phthiocerol: R =
HO
2.2 Literatur
L.D. BERGELSON und M.M. SHEMYAKIN, Angew. Chem. 76, 113 (1964).
H. TRUBLE, Phasenumwandlungen in Lipiden. Mgliche Schaltprozesse in biologischen Membranen,
Naturwissenschaften 58, 277 (1971).
G.B. ANSELL, J.N. HAWTHORNE und R.M.S. DAWSON (Hrsg.), in Form and Function of Phospholipids,
2. Aufl., Elsevier, London (1973).
H. TRUBLE und P. OVERATH, Biochem. Biophys. Acta 307, 491 (1973).
A.L. LEHNINGER, Lipide, Lipoproteine und Membranen; Die Biosynthese der Lipide; Der Oxidative Abbau der
Fettsuren; in Biochemie, 2. Auflage, Verlag Chemie, Weinheim - New York (1977).
O.W. THIELE, Lipide, Isoprenoide und Steroide, Thieme-Verlag, Stuttgart (1979).
J.N. HAWTHORNE und G.B. ANSELL, Phospholipids, Elsevier, Amsterdam (1982).
33
H.K. MANGOLD und F. PALTAUF, Ether Lipids, Academic Press, London (1983).
P.-A. SIEGENTHALER und W. EICHENBERGER, Structure, Function and Metabolism of Plant Lipids, Elsevier,
Amsterdam (1984).
R. PRASAD, Manual on Membrane Lipids, Springer, Heidelberg (1996).
34
Wasser lst oder dispergiert Verbindungen mit sowohl polaren hydrophilen als auch unpolaren lipophilen
Gruppen in Form hochmolekularer Assoziate, die als Micellen bezeichnet werden. Molekle dieser Art heien
amphiphil oder amphipathisch, typische Vertreter sind Seifen, die Salze der Fettsuren.
Seifen-Micellen bestehen aus Hunderten bis Tausenden von Moleklen, die negativen Carboxylatgruppen
orientieren sich in Richtung der wrigen Phase und es bildet sich dadurch eine hydrophile Oberflche aus
[Sternschicht], und die auch einen Teil der Gegenionen enthlt. Das Innere bildet ein hydrophober Innenraum
mit einem hydrophoben Kern (Radius 1 - 3 nm). Den uersten Bereich der Micelle bildet die Gouy-ChapmanDoppelschicht, die sich aus den hydratisierten Gegenionen zusammensetzt. Zur Stabilisierung der Micellendispersion tragen die Ausbildung von Wasserstoffbrcken, die Hydratation und die gegenseitige Abstoung des
negativen Ladungsberschu bei. Innerhalb der Sphre wirken zustzlich hydrophobe Wechselwirkungen van
der Waals'scher Art. Die Lebenszeit eines solchen Gebildes betrgt oft nur einige Millisekunden, d.h. sie
zerfallen stndig und werden wieder neugebildet. Inverse Micellen entstehen durch Lsung von Tensiden im
unpolaren Lsungsmitteln.
Abbildung 2-6. Teilausschnitt einer idealisiert-kugelfrmigen anionischen Micelle mit positiv geladenen
Gegenionen.
hnlich verhlt sich ein polares, amphiphiles Lipid in Wasser. Die Kohlenwasserstoffketten der Fettsuren
bzw. des Sphingosins stellen die lipophilen Strukturteile dar, als hydrophile Gruppierung dienen die
Phosphatgruppen
bzw.
Phosphatester
der
Aminoalkohole
bei
den
Phosphoglyceriden,
bzw.
die
Kohlenhydratteile oder deren Schwefelsureester bei den Glykolipiden. Anfangs geht nur ein sehr geringer
Lipidanteil
in
monomolekularer
Form
in
Lsung.
Beim
berschreiten
einer
Kritischen
-2
Micellbildungskonzentration [KMK, CMC], die bei ionischen Tensiden bei 10 mol/l und bei nichtionischen
bei 10-4 mol/l liegt, assoziiert es zu den micellren Moleklverbnden.
Erhht man die Konzentration einer wrigen Lsung einer amphiphilen Verbindung wesentlich ber ihre
KMK hinaus, so entstehen aus den sphrischen Micellen zylinderfrmige Gebilde, wie durch Rntgen-Kleinwinkelstreuung in Lsung gezeigt wurde. Bei noch hheren Konzentrationen lagern sich diese Zylinder
zusammen und bilden Mesophasen [nematische Phasen, Flssigkeitskristalle], deren Zustand zwischen dem
von isotropen Flssigkeiten und dem von festen Kristallen liegt. Bei optisch aktiven Moleklen, z.B.
Cholesterinderivaten, sind die Vorzugs richtungen der einzelnen nematischen Schichten gegen einander um
35
An Phasengrenzflchen wie Wasser/Luft tendieren amphiphile Molekle zur Wanderung an die Grenzflche.
Dadurch kommt es zur Ausbildung monomolekularer Schichten [Monolayers] und zur Erniedrigung der Oberflchenspannung des Wassers. Zwischen zwei getrennten wrigen Phasen hingegen bilden sich bimolekulare
Doppelschichten [Bilayers] aus. Solche Bilayersysteme sind Modelle natrlicher Membranen und wurden
eingehendst studiert. Vesikel, die spontan durch Rhren oder Ultrabeschallung von Phosphoglyceriden in
Wasser entstehen, sind in sich geschlossene flssigkeitsgefllte Blschen aus bimolekularen Membranen (Abb.
2-8). Je nach Genese bestehen sie aus mehreren, zwiebelschalenartig ineinander angeordneten bimolekularen
Membranen. Fr die Art dieser berstrukturen ist die Struktur der komplexen Lipide, vor allem das Verhltnis
zwischen apolarem Kohlenwasserstoffteil und den polaren Kopfgruppen verantwortlich. Im Gegensatz zu
Micellen enthalten Vesikel im Inneren Wasser und nicht hydrophobe CH2-Ketten. Sie sind tagelang stabil,
lassen sich chromatographisch fraktionieren und knnen rntgenographisch und elektronenmikroskopisch
untersucht werden. Liposomen sind Lecithin-Vesikel und dienen als Transport- und Applikations systeme fr
Pharmaka and Kosmetika, die sich je nach Zusammensetzung in die wrige Innenphase als auch zwischen die
Fettsureketten inkorporieren lassen.
Abbildung 3-8. Mikrovesikel aus einer Bilayermembran, die innere Flche besteht aus etwa nur halb so vielen
Moleklen wie die uere.
Zur Herstellung von Lipidmembranen wird die Lsung eines Lipids ber ein 1 - 2 mm groes Loch in einer
Platte gestreift und anschlieend in Wasser getaucht. Der Lipidtropfen sammelt sich als ringfrmiger Wulst, im
Zentrum verbleibt eine bimolekulare Schicht, die aufgrund der Dnne (< als Wellenlnge des sichtbaren Lichts)
schwarz erscheint [black lipid membrane, BLM]. (Den chemischen Aufbau einer Lipidmembran zeigt Formel 314).
36
OH
(H3 C)3N
H2
C
H2
C O
CH2
H3N
OH
(CH2)4
NH3
H2
C O
H2
C CH
CH2
H2C
CH
OH
HC
HC
O
O
O OH
OH
HO
OH
HC
H2C
CH2
CH
HO
OH
OH
COO
O
HC
CH2
H2C
H2
C O
CH2
H2C
NH2
H2
C
CH
COO
OH
NH2
OH
HC
O
OH
H2C
O
O
HO
NH2
CH2
CH
H2C O P
OH
O
H2
C CH
O
H2
C
(CH2)4
CH
OH
HO
HO
NH2
OH
O
P O
CH2
O
NH2
HC
H2C
O
O
O
O
CH2
CH
H2C O P
OH
OH
O
H2
C CH
O
H2
C
(CH2)4
CH
NH2
BLMs eignen sich zu Untersuchungen von Stoff- und Ladungstransportphnomenen, wie sie bei der Permeation
durch Lipidschichten auftreten. Die Durchlssigkeit der BLM fr dipolare Molekle wie Harnstoff, Glucose
oder Glycerin ist wesentlich geringer als fr Wasser, besser durchdringen grere nichtgeladene Molekle mit
unpolaren Resten die Membran. Fr kleine Ionen wie K+, Na+, Cl-, PO4H2-, Cholin, usw. stellt eine BLM ein
fast unberwindliches Hindernis dar. Zur Messung der Permeationsgeschwindigkeiten knnen die Leitfhigkeit,
das Membranpotential, der osmotische Druck, Messung der Radioaktivitt bei markierten Moleklen oder
optische Methoden herangezogen werden.
Lipide assoziieren mit Proteinen zu Lipoproteinen, die die physikalischen Eigenschaften beider Verbindungsklassen besitzen. Es gibt zwei Typen von Lipoproteinen, die Transport-Lipoproteine und die Membransysteme.
Dabei werden die Lipid- und die Proteinkomponente durch hydrophobe Wechselwirkungen der unpolaren Teile
der beiden zusammengehalten.
Im Serum von Sugetieren kommen komplexe Lipide und Proteine vor, die relativ konstante
Mengenverhltnisse besitzen und die als Transport-Lipoproteine wasserunlsliche Lipide wie Cholesterin,
Cholesterinester und Triacylglycerine zwischen den Organen ber die Blutbahn transportieren. Sie werden nach
Dichte und Partikelgre charakterisiert, man unterscheidet Chylomikronen (Partikelgre 75 - 1.000 nm),
VLDL [very low density lipoprotein, 30 - 50 nm], LDL [low density protein, 20 - 22 nm] und HDL [high density
lipoprotein, 7.5 - 10 nm]. Ein LDL transportiert Cholesterin im Plasma, an der Zielzelle bindet das Partikel an
den LDL-Rezeptor und wird von der Zelle aufgenommen. Wird zuviel Fettsuren aufgenommen oder liegt ein
Defekt am LDL-Rezeptor vor, so kommt es zur Anreicherung von LDL und Cholesterin im Blut. Daraus kann
37
es bei Schdigung der Arterienwnde zur Einlagerung von LDL in die Zellwand fhren und sich ein Thrombus
bilden, der zu Herzinfarkt oder Schlaganfall fhrt. HDL hingegen ist u.a. fr die Entfernung von Cholesterin
aus dem Blut verantwortlich. Man nimmt an, da gesttigte Fettsuren die LDL-Partikel modifizieren und die
Bindung am LDL-Rezeptor negativ beeinflussen. Dagegen scheinen ungesttigte Fettsuren den LDL-Rezeptor
so zu verndern, da eine hhere Affinitt der LDL-Partikel zum Rezeptor resultiert.
Biologische Membranen sind dnne (ca. 8 nm), zweidimensionale Aggregate aus Lipiden, insbesondere
Phospholipiden und Proteinen, die bis zu 80% des Zelltrockengewichtes besitzen knnen. Sie dienen dem
Zweck, den freien Stofftransport zu beschrnken und zu spezialisieren, gleichzeitig grenzen sie verschiedene
wrige Kompartimente voneinander und die Zelle nach auen ab. Sie stellen hochselektive
Permeabilittsschranken dar und ermglichen Stoff- und Informationsaustausch (Zellerregung). Sie besitzen die
Fhigkeit, Strukturdefekte spontan zu reparieren. Zellen eukaryotischer Organismen enthalten auerdem eine
Reihe intrazellulrer Membranen (z.B. das endoplasmatische Reticulum) und Membran-umschlossene
Organellen (Mitochondrien, Zellkerne, Liposomen, usw.), die ihrerseits das Zellinnere in verschiedene
Kompartimente aufteilen.
Whrend die Kapillarmembranen der Blutgefe, der Lungenblschen, etc. einen relativ raschen Stofftransport
erlauben, entsprechen Zellmembranen den bimolekularen Lipidschichten einer BLM. Ihre Leitfhigkeit fr
Ionen ist gering, soda sich die Elektrolytzusammensetzung des Zellinneren von der der Umgebung deutlich
unterscheiden kann. Fr den Transport kleiner Molekle wie Wasser sind Kinken verantwortlich, das sind
Hohlrume zwischen den Fettsureketten in Lipiddoppelschichten, die durch Konformationsbergnge von
antizur gauche-Konformation in den Ketten unter geringem Energieaufwand entstehen und in denen kleine
Molekel Platz finden. Diese Kinken sind entlang der Alkylketten und innerhalb der Lipidschicht beweglich und
wandern mit dem Wassermolekl durch die Membran [TRUBLE].
Die meisten Membranen besitzen etwa 40% Lipid- und 60% Proteinanteil. Membranen, die hauptschlich als
Barrieren wirken, enthalten relativ viel Lipide, whrend hingegen funktionelle Membranen wie z.B. die Mitochondrienmembran als Trger zahlreicher Enzymsysteme mehr Proteinanteil als Lipidanteil besitzen.
Membranlipide
sind
meist
polar
und
hauptschlich
Phospholipide,
ihre
Zusammensetzung
ist
strukturbestimmend und charakteristisch fr das jeweilige Membransystem, fr das Organ und die Art. Das
molare Verhltnis der Lipide in einer Membran scheint genetisch determiniert zu sein und kann durch
"Ftterung" nicht verndert werden. Im Gegensatz dazu knnen die Fettsurekomponenten der Lipide durch
Angebot artfremder Fettsuren durch das Medium variiert werden. Bei den in den Membranen verankerten
Proteinen unterscheidet man periphere Proteine, die nur lose angelagert sind, und die integralen Proteine, die
die Lipid-Doppelschicht durchdringen. Letztere besitzen oft Bedeutung fr den Ionentransport. Biologische
Membranen sind asymmetrisch, d.h. sie unter scheiden sich im Aufbau der zellinneren und der ueren Schicht.
38
Diese asymmetrische Anordnung ist die Grundvoraussetzung fr aktive Transportprozesse, bei denen eine
Substanz entgegen ihrem elektrochemischen Gradienten von der einen zur anderen Seite "gepumpt" wird.
Mit physikalischen Methoden wie z.B. Elektronenmikroskopie, ORD- und CD-Messung kann man die
Anordnung von Lipiden und Proteinen und deren Zusammensetzung bestimmen. Das Innere der BilayerStruktur
representiert
eine
kontinuierliche
Kohlenwasserstoffphase.
Bei
einer
bestimmten
Phasenumwandlungstemperatur Tt [transition temperature], die einem Phasenbergang kristallin flssigkristallin entspricht, gehen die Alkylketten von einer geordneten Struktur in eine beweglichere ber. Die
Temperatur Tt hngt sowohl von der Struktur der polaren Kopfgruppe als auch von den Kettenlngen der
Fettsuren und dem Grad ihrer Ungesttigtheit ab. Unterhalb dieser Temperatur liegen gesttigte Acylreste
gestreckt in der all-trans-Konfiguration vor und bilden ein zweidimensionales, hexagonales Gitter, oberhalb der
Umwandlungstemperatur enthlt jede Kette mehrere gauche-Konformationen, die zu einer lateralen Expansion
des Gitters und zu einem ungeordneten Zustand fhren. Einwertige Kationen (Na+, K+) erniedrigen die
Umwandlungstemperatur und machen die Membran fluider, zweiwertige Ionen (Ca2+, Mg2+) erhhen hingegen
die Umwandlungs temperatur. Ebenso fhrt die Erhhung des pH-Wertes (Vernderung der Ladung der
Kopfgruppe) zu einer Erniedrigung der Umwandlungstemperatur. Diese Eigenschaften werden u.a. durch
Leitfhigkeitsmessungen, Rntgenstreuung, Volumetrie, Mikrokalorimetrie, Markierung der Fettsuren durch
Spin-Markierung und anschlieende ESR-Spektroskopie oder Fluoreszenzspektroskopie (Abb. 3-10) mithilfe
von FLuoreszenzsonden bestimmt.
Beim fluid-mosaic model [S.J. SINGER und G.L. Nicolson, 1972] bilden Phospholipide als Bilayer eine flexible
flssig-kristalline Matrix, in der sich die Kohlenwasserstoffketten lateral frei bewegen. Sie hat einen hohen
Widerstand und ist impermeabel fr polare Molekle. Die funktionellen Proteine "schwimmen" auf der von
integralen Proteinen durchsetzten Doppelschicht und knnen lateral diffundieren. Durch eine Aggregation
spezifischer Membranproteine in der Ebene, d.h. eine Ungleichverteilung, knnten von einer Membran
spezifische, topologische Signale ausgehen.
39
2.3 Literatur
40
4. Kohlenhydrate
4. Kohlenhydrate
4.1 Einteilung der Kohlenhydrate
Kohlenhydrate sind Polyhydroxyaldehyde oder -ketone, die aus der pflanzlichen Photosynthese [CO2 + H2O
CH2O + O2] stammen. Neben Lipiden, Proteinen und Nucleinsuren sind sie eine der vier groen Gruppen
lebenswichtiger Verbindungen und machen den weitaus grten Teil der organischen Materie auf der
Erdoberflche aus. Der Name "Hydrat des Kohlenstoffs" [K. SCHMIDT, 1844] bezog sich ursprnglich auf
Verbindungen der Zusammensetzung Cn(H2O)n, das heute fr viele Kohlenhydrate, wie z.B. Desoxyzucker
(4.4.2), Aminozucker (4.4.3.) und Pseudozucker (4.4.4) jedoch nicht zutrifft.
Die Einteilung der Kohlenhydrate erfolgt nach der Zahl der Bausteine in
-
Monosaccharide [griech. saccharon = Zucker], die aus einer Zuckereinheit bestehen, wie z.B. Glucose,
Fructose, Ribose, etc. Monosaccharide (5.2) kommen in freier Form kaum in der Natur vor, man findet sie
hauptschlich in Form von Oligo- und Polysacchariden und in Verbindung mit anderen Naturstoffen, z.B. als
Glykoside (4.3.9.2), Glykolipide (2.2.8) und Glykoproteine (4.8.5.1).
-
zhlen Disaccharide, wie z.B. Saccharose, Maltose, etc., Trisaccharide wie die Raffinose, Tetrasaccharide, usw.
- Polysaccharide (4.6) sind hochmolekulare Stoffe und bestehen aus bis ber 1.000 Monosaccharideinheiten.
Homopolysaccharide sind aus einem einzigen Zuckermonomeren aufgebaut, aus verschiedenen Zuckern
zusammengesetzt sind die Heteropolysaccharide.
4.2 Monosaccharide
Je nach Art der Carbonylfunktion unterscheidet man zwischen Aldosen und Ketosen. Nach der Zahl der CAtome teilt man sie auerdem in Triosen, Tetrosen, Pentosen, Hexosen und Heptosen ein, biologisch relevant
sind vor allem Pentosen und Hexosen. Zusammengezogen werden Aldosen als Aldotetrosen, Aldopentosen,
Aldohexosen, usw., Ketosen als Tetrulosen, Pentulosen, Hexulosen, usw. bezeichnet. ber zweihundert
verschiedene Monosaccharide hat man mittlerweile in der Natur entdeckt. Die einfachsten Vertreter sind die
Aldotriose Glycerinaldehyd [=Glyceraldehyd] und die Ketotriose Dihydroxyaceton, beides Oxidationsprodukte
des dreiwertigen Alkohols Glycerin.
CH=O
CH-OH
CH2-OH
40
Glycerinaldehyd
Glyceraldehyd
2,3-Dihydroxypropanal
CH2-OH
C=O
CH2-OH
Dihydroxyaceton
1,3-Dihydroxypropan-2-on
41
4. Kohlenhydrate
Vor allem durch die brillianten Arbeiten des deutschen Chemikers E. FISCHER gelang gegen Ende des 19.
Jahrhunderts die Strukturaufklrung der Glucose und der anderen Monosaccharide. Einige der dazu
verwendeten Reaktionen werden in Formel 4-1 aufgezeigt.
CH=O
n-C6H14
P / HI
n-Hexan
CH2OH
CH2OH
NH2OH
C6H12O6
NOH
Oxim
CH2OH
HCN
CH2OH
CH2OH
OH
Na / Hg
C
Br2 / H2O
CH2OH
CH2OAc
CHOH
CHOAc
Cyanhydrin
COOH
CHOH
CHOAc
Ac2O
Gluconsure
HC
CHOH
CHOH
CH2OH
OH
CHOAc
Sorbit
(Glucit)
CHOAc
CH2OAc
Hexaacetat
Mit Ausnahme des Dihydroxyacetons sind alle Monosaccharide chiral und jeweils verschiedene optische
Isomere mglich. Da es ursprnglich keine Mglichkeit gab, die absolute Konfiguration der Kohlenhydrate zu
klren, einigte man sich auf eine Bezugssubstanz, die eine angenommene Konfiguration hatte. Diese
Konfiguration heit relative Konfiguration. Ursprnglich wurde die Glucose als Bezugssubstanz gewhlt, erst
spter [1906] wurde Glycerinaldehyd, der vorteilhaft nur ein asymmetrisches C-Atom besitzt, als
Bezugssubstanz vorgeschlagen. Auf dessen Chiralittszentrum wird das asymmetrische Kohlenstoffatom C-5
der Glucose bezogen. Dem rechtsdrehenden (+)-Enantiomer des Glyceraldehyds wurde die perspektivische
Formel, bei der die OH-Gruppe am Chiralittszentrum auf der rechten Seite der Hauptkette liegt, willkrlich
zugeordnet und als D-Glyceraldehyd [dexter = rechts] bezeichnet. Mit der spter entwickelten (R/S)-Konvention
des CIP-Systems [CAHN, INGOLD, PRELOG] ergibt sich fr D-(+)-Glyceraldehyd die absolute Konfiguration (R)
und fr L-(-)-Glyceraldehyd die (S)-Konfiguration.
CHO
O=HC
CH=O
CH=O
OH
OH
CH2OH
oder
OH
OH
Projektion in die
Tafeleben
H
HOH2C
(R)-(+)-Glyceraldehyd
CH2OH
D-(+)-Glyceraldehyd
CH2OH
FISCHER-Projektion
Diese willkrliche Annahme stellte sich 1951 als zufllig richtig heraus, als durch Rntgenstrukturanalyse die
absolute Konfiguration der Weinsuren bekannt wurde, mit der D-(+)-Glyceraldehyd bereits chemisch korreliert
worden war.
41
42
4. Kohlenhydrate
E. FISCHER konnte alle 16 isomeren Aldohexosen durch chemische Reaktionen konfigurativ zuordnen und auf
den D-(+)-Glyceraldehyd beziehen. In der FISCHER-Projektion, einer von ihm 1891 vorgeschlagenen Formelschreibweise, wird ein Monosaccharid so gezeichnet, da die CC-Bindungen der bereinander angeordneten
C-Atome jeweils hinter die Zeichenebene zeigen, whrend die rechts und links angeordneten Substituenten vor
der Zeichenebene liegen. Das Atom mit der hchsten Oxidationsstufe steht oben. Die Zuordnung zur D-Reihe
oder L-Reihe [laevus = links] richtet sich nach der Stellung der sekundren Hydroxygruppe, die am weitesten
von der Carbonylfunktion (hchste Positionsnummer) entfernt ist. Steht diese in der Projektion nach rechts und
besitzt damit die gleiche Konfiguration wie der D-(+)-Glycerinaldehyd, so zhlt man die Verbindung zur DReihe, steht sie nach links, entspricht sie der L-Reihe. Eine Aldohexose besitzt 4 Asymmetriezentren, es gibt
daher 16 Stereoisomere (24 = 16) und davon 8 Enantiomerenpaare, von denen jeweils das eine Enantiomere der
D-Reihe,
das andere der L-Reihe angehren. Fast alle in der Natur vorkommenden Zucker gehren zur D-Reihe
[(R)-Reihe nach CAHN, INGOLD und PRELOG] an, die natrlich vorkommende Form der Glucose ist die
rechtsdrehende D-(+)-Glucose.
CH=O
CH=O
Merkregel:
H
HO
OH
H
OH
OH
CH2OH
ta rechts
ti links
ta rechts
ta rechts
H
H
H
*
*
*
*
OH
OH
OH
OH
CH2OH
D-(+)-Glucose
Mit den unter 5.2.1 und im folgenden angefhrten Reaktionen konnte E. FISCHER die relative Konfiguration der
einzelnen Monosaccharide bestimmen und ihre Strukturformeln in einem Zuckerstammbaum (Formel 5-2 und
5-3) wiedergegeben.
Die beiden Triosen Glyceraldehyd und Dihydroxyaceton spielen in Form ihrer Phosphate beim Kohlenhydratstoffwechsel eine wichtige Rolle.
Die Tetrose Threose [threo-2,3,4-Trihydroxybutanal] kommt sowohl in der D- als auch der L-Form vor.
Zusammen mit der Erythrose [erythro-2,3,4-Trihydroxybutanal] wird sie aufgrund der Stereochemie von C-2
und C-3 durch die Vorsilben threo- und erythro- zur Bezeichnung von Diastereomeren benutzt, die an zwei
benachbarten Chiralittszentren zwei gleiche Substituenten tragen und sich jedoch nur in der Konfiguration
eines Zentrums (Epimere, vgl. 5.3.4) unterscheiden.
42
43
CHO
H
OH
HO
OH
HO
HO
CH2OH
D-(-)-
D-Xylose
CH2OH
L-(+)-Erythrose
CHO
CHO
CHO
OH
H
CH2OH
D-(-)-
4. Kohlenhydrate
HO
H
H
OH
CH2OH
L-(+)-Threose
[Holzzucker, xylos = Holz] ist die in Pflanzen weitverbreitetste Pentose. Sie kommt allerdings nicht in
freier Form, sondern als Komponente in Xylanen (5.6.3.4) und Glykosiden (5.3.9.2) in Laub- und
Nadelhlzern, Stroh, Kleie, Samen, Pflanzengummen, etc. vor. Xylose wird bei der Holzverzuckerung und aus
Abfllen der Celluloseproduktion erhalten, besitzt die Hlfte der Skraft von Saccharose und wirkt abfhrend.
L-Arabinose
ist ebenso in pflanzlichen Gummen und Glykosiden relativ weit verbreitet, D-Arabinose kann aus
Rbenschnitzeln gewonnen werden. D-Ribose ist als Bestandteil der Ribonucleinsuren (17. Nucleinsuren)
besonders wichtig.
D-Glucose
spielt eine zentrale Rolle im Kohlenhydratstoff wechsel der Organismen und ist deren wichtigster
Energielieferant. Im menschlichen Blut sind ca. 0.1 % enthalten (Blutzucker), eine Unterschreitung dieses
Wertes fhrt zum hypoglykmischen Schock; der Gehalt wird durch die Peptidhormone Insulin und Glucagon
reguliert. Wegen des Vorkommens in Weintrauben wird D-(+)-Glucose auch Traubenzucker [Dextrose]
genannt. Technisch wird Glucose durch Hydrolyse von Strke gewonnen und stellt als Monomerenbaustein der
Polysaccharide Strke, Glycogen und Cellulose die hufigste organische Verbindung auf unserem Planeten dar.
Galactose ist Komponente einiger Oligo- und Polysaccharide als auch verschiedener Glykoside und kommt in
der Natur in beiden enantiomeren Formen in greren Mengen vor. D-Galactose ist Bestandteil des
Disaccharids Lactose, des Trisaccharids Raffinose (5.5), verschiedener Polysaccharide (Pektine, Galactane,
5.8.4.4) und Glykoside, L-Galactose ist in Polysacchariden wie Agar und verschiedenen Schleimen enthalten.
Im Polysaccharid Agarose kommen sogar beide Enantiomeren nebeneinander vor. D-Talose ist ein Bestandteil
der Antibiotika Hygromycine (18. ). Von einigen Ausnahmen abgesehen, schemcken die nicht-natrlichen LHexosen hnlich s wie die ubiquitren D-Hexosen, besitzen jedoch keinen Nhrwert.
43
44
4. Kohlenhydrate
CHO
H
D-(+)Glyceraldehyd
OH
CH 2OH
CHO
CHO
H
H
HO
OH
D-(-)Erythrose
CH 2OH
OH
CHO
H
HO
OH
OH
HO
OH
OH
CHO
CHO
HO
OH
OH
HO
OH
OH
OH
OH
CH 2OH
D-(+)Allose
CHO
OH
CH 2OH
D-(+)Altrose
HO
HO
OH
OH
CH2OH
D-(+)Glucose
HO
OH
CH 2OH
D-(-)Lyxose
D-(+)Xylose
CHO
OH
HO
CH 2OH
D-(-)Arabinose
CHO
OH
OH
CH 2OH
D-(-)Ribose
D-(-)Threose
CHO
H
CH 2OH
OH
CH2OH
CHO
OH
H
H
CHO
HO
HO
OH
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
OH
D-(+)Mannose
CHO
CHO
OH
OH
CH 2OH
CHO
OH
CH 2OH
D-(+)Gulose
OH
CH 2OH
D-(+)-
Idose
OH
CH 2OH
D-(+)Talose
OH
OH
CH 2OH
D-(+)Galactose
D-Fructose
Frchten und Honig als Invertzucker vor und ist ein Baustein des Disaccharids Saccharose [Rohrzucker] und
des Polysaccharids Inulin. Wirtschaftlich attraktiv ist die Gewinnung von Fructose aus Strke, die enzymatisch
in Glucose-Sirup umgewandelt wird. Unter Einwirkung der Isomerase entsteht in guten Ausbeuten Fructose
("Isoglucose") in Form des sog. Isosirups, der als Sungsmittel Anwendung findet. Im menschlichen
Organismus findet sich D-Fructose in Spuren im Blut, im Sperma und Fruchtwasser. D-Tagatose ist eine seltene
Ketohexose aus Pflanzengummen.
44
45
4. Kohlenhydrate
CH2OH
Dihydroxyaceton
O
CH2OH
CH2OH
O
H
OH
D-Erythrulose
CH2OH
CH2OH
CH2OH
D-Xylulose
D-Ribulose
H
OH
HO
OH
H
CH2OH
CH2OH
CH2OH
OH
HO
OH
OH
HO
OH
OH
CH2OH
D-Psicose
OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
HO
HO
OH
CH2OH
D-Fructose
OH
D-Sorbose
H
H
OH
CH2OH
D-Tagatose
Formel 4-3. Zuckerstammbaum, Strukturformeln der D-Ketosen, die sich von Dihydroxyaceton ableiten.
Zur systematischen Bezeichung der Aldosen wird die C-Zahl in den Stammnamen eingebunden, also Pentose,
Hexose, usw., Ketosen werden mit dem Suffix -ul bezeichnet, z.B. Hexulose. Die Bezeichnung der relativen
Konfiguration der einzelnen Hydroxygruppen leitet sich dann von den Trivialnamen der Monosaccharide ab,
folgende Prfixe werden als Stereodeskriptoren benutzt:
Zahl der chiralen C-Atome
Prfix
glycero-
erythro-, threo-
Bei acyclischen Monosacchariden mit mehr als vier stereogenen Zentren werden zwei oder mehr Stereodeskriptoren zur Konfigurationsbezeichnung herangezogen. Das erste stehende Prfix dient zur Bezeichnung
der Restes, der fr die Reihenzugehrigkeit entscheidend ist und am unteren Ende steht (Tab. 5-1 und Formel 54).
systematsicher Name
Abkrzung
Glyceraldehyd
Ribose
Glucose
Galactose
Mannose
Fructose
Ribulose
glycero-Triose
ribo-Pentose
gluco-Hexose
galacto-Hexose
manno-Hexose
arabino-2-Hexulose
erythro-2-Pentose
Rib
Glc
Gal
Man
Fru
45
46
CHO
CHO
H
4. Kohlenhydrate
CH2OH
CH2OH
OH
HO
HO
OH
D-glycero
C O
HO
D-manno
D-gluco
H
OH
OH
OH
C O
D-glycero
HO
H
H
OH
OH
OH
HO
HO
HO
H
CH2OH
OH
D-altro
OH
OH
OH
D-allo
OH
L-ribo
OH
CH2OH
HO
D-manno-D-gluco-Heptose
D-altro-Heptulose
CH2OH
(Sedoheptulose)
L-ribo-D-manno-Nonose
L-glycero
CH2OH
L-glycero-D-allo-D-glycero-3-Nonulose
Monosaccharide zeigen zwar typische Carbonylreaktionen, geben jedoch kein Bisulfitaddukt und keine
Reaktion mit fuchsinschwefliger Sure. Die C=O-Bande im IR-Spektrum besitzt geringe Intensitt, und bei
Behandlung mit CH3OH/HCl entstehen zwei Monomethylderivate. Die Ursache dafr ist der bergang des sp2Carbonylkohlenstoffs in ein sp3-Hybrid und die Ausbildung einer cyclischen Halbacetalform. Dadurch entsteht
ein neues Chiralittszentrum und entsprechend zwei Diastereomere. Die neu gebildete HalbacetalHydroxygruppe wird als anomere oder glykosidische OH-Gruppe, die beiden diastereomeren Formen als
Anomere bezeichnet. Die Verbindung, bei der in der FISCHER-Projektion die anomere OH-Gruppe die gleiche
Konfiguration besitzt wie die fr die Zuordnung zur D- und L-Reihe herangezogene Hydroxygruppe, wird als
Anomer, die andere als Anomer bezeichnet. Sechsring-Halbacetale, die durch intramolekulare
Cyclisierung der C-5-Hydroxygruppe einer Aldose entstehen, werden als Pyranosen bezeichnet, Zucker in der
Fnfring-Halbacetalform werden Furanosen genannt.
H
OH
OH
HO
O
OH
OH
CH2OH
-D-Glucopyranose
-D-Glucose-(1,5)
H
OH
O
OH
OH
OH O
OH
OH
CH2OH
-D-Glucopyranose
-D-Glucose-(1,5)
OH
CH2OH
-D-Glucofuranose
-D-Glucose-(1,4)
Kristallin liegen Zucker ausschlielich als Halbacetale vor, in wriger Lsung stehen die cyclischen Formen
der Monosaccharide ber die offene Form miteinander im Gleichgewicht. D-Glucose kristallisiert aus wrigem
Ethanol als D-Glucopyranose. Von der Fructose ist ausschlielich die D-Fructopyranose-Form isolierbar.
Ein Sonderfall ist die 2-Desoxyribose, die vorwiegend offenkettig vorliegt. Whrend bei der Glucose, Mannose,
Galactose und Gulose fast ausschlielich die Pyranoseform auftritt, findet man bei der Allose, Altrose, Talose
46
47
4. Kohlenhydrate
und Idose auch die und Form der Furanosestruktur. Xylose liegt sowohl in der Pyranose-, in der
Furanose-Form und als freier Aldehyd vor. In Formel 5-5 sind beispielhaft die Gleichgewichtsstrukturen der
Altrose in wriger Lsung aufgefhrt.
HOH2C HO
O
HO
HOH2C HO
O
HO
OH
OH
HO
HO
H
O
C
HO
CH2OH
HO
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
OH
OH
HO
O
OH
HO OH
HO OH
Zur bildlichen Darstellung der cyclischen Halbacetalformen ist die HAWORTH-Projektion [Sir W.N. HAWORTH,
Chemie-Nobelpreis 1937] besser geeignet als die FISCHER-Projektion. Das Molekl wird als ebener Ring
dargestellt und die Wasserstoffatome vereinfachend weggelassen. blicherweise sind C-1 stlich und das RingO-Atom nordstlich plaziert. Die in der FISCHER-Projektion rechtsliegenden Substituenten zeigen in der
HAWORTH-Projektion nach unten, die links liegenden nach oben. In der Form der D-Zucker steht die OHGruppe am anomeren C-Atom nach unten und in der Form nach oben, bei den L-Zuckern stehen sie
entsprechend in den umgekehrten Positionen (Formel 4-6).
CHO
H
6
OH
CH2OH
CH2OH
OH
HO
H
4
OH
OH
Drehung um
OH
CHO
OH
CHO
Achse C-4/C-5
OH
2
CH2OH
offenkettige
D-Glucose
FISCHER-Projektion
H
OH
OH
OH
OH
gnstige Konformation
fr den Ringschlu
CH2OH
CH2OH
H C OH
O OH
H
OH
OH
bzw.
HO
OH
OH
HO
-Form
OH
D-Glucopyranose
HAWORTH-Projektion
OH
H
HO
-Form
H
OH
-D-Glucopyranose
FISCHERprojektion
H
CH2OH
Formel 5-6. HAWORTH-Darstellung der cyclischen Formen der D-Glucose, Umsetzung von Fischer- in die
Haworth-Projektion.
Die der HAWORTH-Projektion entsprechende Darstellung der "Sesselkonformationen" der Pyranosen gibt am
anschaulichsten die sterischen Gegebenheiten der cyclischen Halbacetale wieder. Die beiden isomeren Sessel47
48
4. Kohlenhydrate
formen werden durch die Deskriptoren 1C4 und 4C1 [1C- bzw. C1-Konformation nach REEVES] spezifiziert, C
steht fr chair (entsprechend B fr boat, S fr skew und H fr half chair), die Ziffern geben an, welches der
beiden Ring-Atome (C-1 bzw. C-4) oberhalb oder unterhalb der die durch die parallelen Seiten gebildeten Ringebene angeordnet ist.
OH
H
HOH2C
CH2OH
HO
HO
OH
O
H
HO
OH
OH
OH
-D-Glucopyranose - 4C1
-D-Glucopyranose - 1C4
C1-Konformation
1C-Konformation
Bei den fnfgliedrigen Furanosen knnen die Substituenten keine perfekte gestaffelte Konformation
einnehmen, es treten jeweils 10 Briefumschlag- [E fr envelope] und 10 Twistformen [T fr twist] auf, deren
Inversionsenergiebarrieren relativ klein sind.
Wichtige Methode zur Konfigurations- und Konformationsbestimmung von Kohlenhydraten in Lsung ist die
NMR-Spektroskopie. Weiters sind natrlich die Rntgenstrukturanalyse von Zuckern und chiroptische
Methoden (4.9.1) von Bedeutung. Die Konformationen der D-Glucose sind mittels Kraftfeld-Rechnungen als
auch semiempirisch berechnet und die lokalen und globalen Minima bestimmt worden. Auch das berechnete
Anomerenverhltnis vieler Aldosen steht in guter bereinsimmung mit experimentellen Daten.
4.2.3.2 Mutarotation
Bei einer frisch zubereiteten wrige Zuckerlsung beobachtet man nach einiger Zeit eine nderung des
Drehwerts. Diese als Mutarotation bezeichnete Gleichgewichtseinstellung erfolgt durch Tautomerie zwischen
offenkettiger Struktur und den ringfrmigen Halbacetalformen, die dadurch eintretende nderung der optischen
Drehung kann polarimetrisch verfolgt werden.
D-Glucose + H2O , -Gleichgewichtsgemisch
D = 112
D = 52.7
-D-Glucose
D = 19
Fr eine Pyranose berwiegt diejenige Sesselform, die die grte Hufung equatorialer Substituenten aufweist
und die energetisch gnstigste Konformation darstellt. Der bei Glucose gefundene Endwert von 52.7 entspricht
einer Gleichgewichtsverteilung von 36 % und 63 % -Form, < 1 % sind offenkettige und furanoside
Formen. In den 63 % Form drckt sich die grere Stabilitt des Anomeren mit der all-equatorialAnordnung der Ringsubstituenten gegenber der Form aus. Der grer als erwartete Anteil (36 %) des
energetisch ungnstigen Anomer mit axialem C-1-Substituenten wird mit dem anomeren Effekt (5.2.3.3)
erklrt.
48
49
4. Kohlenhydrate
HO
e
e HO
H CH2OH
H O
HO
CH2OH
H CH2OH
H O
H
OH
O
e
HO
OH
OH
Ha
He
-D-Glucopyranose
HO
OH e
H
e
OH
Ha
Ha
-D-Glucopyranose
HO
OH
HO
H
H
-D-Idopyranose
Die -Form der D-Glucose ist thermodynamisch stabiler als die Form, da sich alle sekundren Hydroxygruppen als auch die CH2-OH Gruppe in der bevorzugten quatorialen Lage befinden. Dennoch bevorzugen
elektronegative Gruppen wie Alkoxy-, Acyloxygruppen oder Halogen, weniger jedoch Hydroxygruppen, die
axiale Position. Dieser stereoelektronische Effekt wird anomerer Effekt genannt und nimmt mit der Reihe Br >
Cl > OCOPh > OCOCH3 > OCH3 > SR > OH > NH2 > COOCH3 ab.
Erklrt wird der anomere Effekt durch elektrostatische Wechselwirkungen. Eine elektronegative Gruppe in 1Position wird, wahrscheinlich durch elektrostatische Abstoung der freien Elektronen mit dem benachbarten
Ringsauerstoff, in die axiale Position gedrngt. Im Falle des Anomeren addieren sich die Dipoleffekte,
whrend sie sich beim Anomeren durch Subtraktion abschwchen (Abb. 4-1).
O
O
O
H
O
O H
H O
49
50
4. Kohlenhydrate
Whrend der anomere Effekt die axiale Form der D-Glucopyranose begnstigt, stabilisiert die Solvatation
die sterisch weniger gehinderte -Form. Daher verstrkt die Elektronegativitt des C-1-Substituenten den
anomeren Effekt, whrend er mit zunehmender Polaritt des Lsungsmittels abgeschwcht wird. Wegen der
Solvatation in wriger Lsung berwiegt die energetisch gnstigere -Form, bei langsamer Kristallisation
wasserfreier Glucose bildet sich jedoch ausschlielich die Form.
Bei
kristallinen
Derivaten
erfolgt
die
Bestimmung
der
Konfiguration
des
anomeren
C-Atoms
H
OH
+
OH
H
O
HO
B
OH
O
B
HO
O
H
O
H
Zur Bestimmung der Ringgre von Zuckern mu zunchst die Spannweite des Halbacetalrings durch Vollacetalbildung (5.3.9) fixiert werden. Die anschlieende Permethylierung und Rckhydrolyse der Acetalgruppierung gibt teilmethylierte Zuckerderivate, die sich zu Methoxyalkandisuren oxidieren lassen. Aus deren
Kohlenstoffskelett lt sich auf die ursprngliche Ringgre der Zucker schlieen, aus der Glucopyranose
entsteht Trimethoxyglutarsure, im Falle der Glucofuranose entsteht die Dimethoxybernsteinsure.
50
51
OCH3
OH
Dimethylsulfat
4. Kohlenhydrate
OCH3
OCH3
O
HO
H
H3CO
H
OH
Hydrolyse
O
mit H+ / H2O
OCH3
CH2OCH3
CH2OH
Methyl-2,3,4,6-tetra-O-methyl(a,b)-D-glucopyranosid
(,)-Methylglucosid
H
H
H3CO
H
OCH3
OCH3
H
COOH
CHO
OH
OCH3
Oxidation
O
OCH3
H3CO
CH2OCH3
Halbacetal
mit HNO3
H
H
H3CO
H
OCH3
OH
OCH3
-ar-Sure
Trimethoxyglutarsure
COOH
CH2OCH3
al-Form
4.3.1 Reduktion
Die Reduktion der Carbonylgruppe von Monosacchariden mit NaBH4, Natriumamalgam oder durch
katalytische Hydrierung fhrt zu Zuckeralkoholen [Alditole]. Bei Ketosen entstehen dabei durch Ausbildung
eines neuen Chiralittszentrums zwei isomere Alkohole, aus Fructose z.B. entstehen Sorbit und Mannit. Da aus
unterschiedlichen Aldosen sowie Ketosen der gleiche Alkohol entstehen kann, verringert sich gegenber den
Carbonylzuckern die Anzahl der mglichen Stereoisomeren der Alditole. D-Glucit [Glucitol D-Sorbit,
Sorbitol] entsteht sowohl aus D-Glucose wie aus L-Gulose (die "Kopf-Schwanz-vertauschte" D-Glucose) und
wird daher auch als L-Gulit bezeichnet. Auerdem erhlt man ihn neben D-Mannit [Mannitol], dem
Reduktionsprodukt von D-Mannose, durch Reduktion von D-Fructose.
51
52
4. Kohlenhydrate
CHO
CH2OH
CH 2OH
CH2OH
CH 2OH
CHO
CH 2OH
CH2OH
D-Glucit, D-Sorbit
L-Gulose
CHO
D-Glucose
CH2OH
D-Fructose
D-Glucit
CHO
HO
HO
HO
HO
CH2OH
D-Glucose
CH2OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
oder L-Gulit
OH
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
D-Mannit
D-Mannose
Die Alditole werden nach der Zahl ihrer Kohlenstoffatome eingeteilt in Pentite, Hexite, etc. Sechs
Verbindungen aus der Hexitreihe sind mglich, davon sind Allit und Galactit optisch inaktive
Mesoverbindungen.
meso-Alditole
CH2OH
OH
HO
HO
OH
OH
OH
CH2OH
D-Glucit
CH2OH
CH2OH
HO
OH
CH2OH
D-Idit
CH2OH
CH2OH
CH2OH
OH
OH
OH
HO
OH
OH
OH
HO
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
HO
HO
HO
CH2OH
D-Mannit
D-Altrit
Allit
OH
OH
CH2OH
Galactit
Alditole gehen keine typischen Zuckernachweisreaktionen ein, lassen sich jedoch wegen ihrer
Polyhydroxystruktur verethern und verestern. Da Zuckeralkohole s schmecken, finden einige als
Zuckerersatzstoffe Verwendung. Natrlich vorkommende Alditole sind z.B. Sorbit, Mannit, Dulcit, Xylit,
Arabit (frher Lyxit), Ribit, Threit, Erythrit und Glycerin. Sorbit [D-Glucit] ist in den Frchten der Vogelbeere
[Sorbus aucuparia] enthalten, wird technisch durch Reduktion von D-Glucose hergestellt und dient als
Zuckerersatz bei Diabetesdit und als Ausgangsverbindung bei der Vitamin-C-Synthese (vgl. 5.4.5). L-Idit
kommt neben D-Glucit in der Eberesche vor. D-Mannit kommt in Pilzen, Algen und hheren Pflanzen (MannaEsche) vor. Dulcit [Galactit] tritt im Harn von an Galactosmie Erkrankten auf und wird aus MadagaskarManna [Melampyrum nemorosum] gewonnen. Xylit wird durch katalytische Hydrierung von Xylose hergestellt
und kommt in geringer Menge in manchen Pilzen, in Obst und Gemse vor, und wird als Zuckeraustauschstoff
verwendet. Ribit [Adonit] ist Bestandteil der Teichonsuren (5.7.1.5), die in Bakterienzellwnden vorkommen.
Threit [1,2,3,4-Butantetrol] kommt als (2R,3R)-Zuckeralkohol im Hallimasch [Armellaria mellea] und in
einigen Pflanzen vor, Erythrit [meso-1,2,3,4-Butantetrol], die optisch inaktive Form des Threit, ist Inhaltsstoff
einiger Flechten, Algen und Pilze.
52
53
4. Kohlenhydrate
4.3.2 Oxidation
Die wichtigsten Oxidationsprodukte sind die durch Oxidation der Aldehydfunktion aus Aldosen entstehenden
Aldonsuren, die Aldarsuren durch Oxidation sowohl der Aldehydgruppe als auch der terminalen, primren
Hydroxygruppe, sowie die Uronsuren, bei denen nur die terminale, primre Hydroxylgruppe von Aldosen
oxidiert wird.
4.3.2.1 Aldonsuren
Durch Oxidation mit milden Oxidationsmitteln wie Bromwasser, Jod oder verdnnte HNO3 erhlt man die
Aldonsuren, deren Salze in der offenkettigen Form vorliegen. Die Suren gehen leicht in Lactone ber, bei der
Oxidation der Glucose entsteht aus dem Produkt Gluconsure zuerst ein -Lacton, aus dem sich pH-abhngig
das stabilere -Lacton bildet. Gegenber den Halbacetalen und Glykosiden, bei denen die pyranosiden
Sechsring-Formen stabiler sind als die furanosiden Fnfring-Formen, sind bei Lactonen aufgrund der
Winkelaufweitung des sp2-Carbonylkohlenstoffs die Fnfring--Lactone stabiler als die -Lactone
CHO
COOH
OH
OH
O
HO
HO
pH < 3
OH
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
D-Glucose
D-Gluconsure
D-Glucono--lacton
D-Glucono--lacton
Aldonsuren werden nur selten in der Natur gefunden, manche Pilze und Bakterien enthalten jedoch Oxidasen,
die D-Glucose zu D-Gluconsure oxidieren. D-Gluconsure [Dextronsure] wird zu den sog. Fruchtsuren
gerechnet und findet Verwendung in Textilhilfsmitteln, als Limonadenzusatz und in therapeutischen CalciumPrparaten.
Auf der Oxidation basieren viele qualitative Nachweisreaktionen fr Monosacharide (4.10.2), wie z.B. die
FEHLING-Probe, die TOLLENS-Reaktion, etc. Hierbei werden die Zucker durch CuII bzw. AgI oxidiert, whrend
die reduzierten Metalle (CuI bzw. Ag0) aufgrund farbiger Komplex- bzw. Metallspiegelbildung die eigentlichen
Indikatoren darstellen.
Durch strkere Oxidationsmittel wie halbkonz. HNO3 werden beide funktionellen Endgruppen der Aldosen
unter der Bildung von Zuckersuren [Aldarsuren] oxidiert. Aufgrund der konstitutionellen Symmetrie der
,-Disuren nimmt die Zahl der mglichen Stereoisomere gegenber den Ausgangsaldosen ab. Zu
Kennzeichnung der Zuckersuren bedient man sich der bereits erwhnten Stereodeskriptoren (5.2.2). D53
54
4. Kohlenhydrate
Glucarsure erhlt man durch Oxidation von Glucose, Saccharose oder Strke, die technische Glucarsure wird
meist als Zuckersure, ihre Salze und Ester als Saccharate bezeichnet. Fr den Fall der D-Galactose entsteht die
meso-Galactarsure [Schleimsure], die als optisch inaktive meso-Form vorliegt. Aus D-Threose entsteht DWeinsure [Threarsure, 2,3-Dihydroxybernsteinsure]. Natrliche Weinsure kommt als L-(+)-Form in vielen
Pflanzen und Frchten in freier Form vor, als Kalium-, Calcium- oder Magnesiumsalz und als
Kaliumhydrogentartrat [Weinstein], das sich nach der Grung des Weins abscheidet.
COOH
CHO
OH
HO
HO
CHO
OH
OH
HNO3
OH
OH
OH
OH
HO
HO
COOH
OH
HO
HO
HNO3
OH
OH
CH2OH
COOH
CH2OH
COOH
D-Glucose
D-Glucarsure
D-Zuckersure
D-Galactose
D-Galactarsure
D-Schleimsure
COOH
COOH
HO
H
H
OH
COOH
D-(-)-Weinsure
H
HO
OH
H
COOH
L-(+)-Weinsure
(2R,3R)-Form
Die Oxidation zu Zuckersuren spielte eine wichtige Rolle bei der Konfigurationszuordnung von Zuckern durch
E. FISCHER. Die beiden optisch aktiven D-Aldotetrosen, D-Threose und D-Erythrose, deren Strukturformeln zur
Symmetrie-Punktgruppe C1 gehren, geben bei Behandlung mit HNO3 im ersten Fall eine optisch aktive
Disure (C2-Symmetrie), im zweiten Fall jedoch eine meso-Verbindung (CS-Symmetrie). Daraus kann die
relative Konfiguration der Hydroxygruppen der Tetrosen zugeordnet werden. Liefert die Oxidation einer DAldopentose eine optisch aktive C5-Dicarbonsure (Punktgruppe C1), so mu es sich dabei um D-Lyxose oder
D-Arabinose
gehandelt haben (Formel 5-8). Die Oxidationsprodukte der beiden anderen D-Pentosen sind
optisch inaktive meso-Formen mit CS-Symmetrie. Die gleichen meso-Dicarbonsuren werden auch erhalten,
wenn die Enantiomeren der beiden Aldopentosen, d.h. die entsprechende L-Ribose und L-Xylose, oxidiert
werden. Im Falle der Arabinose und der Lyxose hingegen sind die aus D- und L-Zuckern durch Oxidation
erhaltenen Zuckersuren enantiomer (Abb. 4-2 zeigt FISCHER-Projektionen der C4- bis C7-Aldarsuren mit
Angabe der Symmetrie).
CH=O
CH=O
CH=O
CH=O
CH=O
CHOH
CHOH
mgliche
Konfiguration:
CHOH
CH2OH
CH2OH
D-Ribose
CH2OH
D-Lyxose
CH2OH
D-Arabinose
COOH
COOH
COOH
COOH
COOH
COOH
CH2OH
D-Xylose
COOH
HNO 3
meso
optisch aktiv
COOH
meso
54
55
4. Kohlenhydrate
Abbildung 4-2: FISCHER-Projektionen der C4- bis C7-Aldarsuren mit Angabe der Symmetrie.
Bei der Oxidation mglicher Aldohexosen sind vier optisch aktive Stereoisomere und zwei meso-Verbindungen
zu erwarten. Ergeben zwei verschiedene Aldohexosen bei der Oxidation die gleichen Aldarsuren, so mu es
sich entweder um das Paar Altrose/Talose handeln oder eine der Aldosen mu der D-Reihe und eine der LReihe angehrt haben. D-Glucarsure kann sowohl durch Oxidation von D-Glucose als auch L-Gulose
entstehen.
55
56
4. Kohlenhydrate
COOH
CHO
CHO
CHO
CH2OH
Oxidation
Oxidation
COOH
CH2OH
D-(+)-Glucose
CH2OH
Glucarsure
L-(+)-Gulose
Aldarsuren knnen Mono- und Dilactone bilden. Die Monolactonbildung kann zur Unterscheidung zwischen
Glucose und Mannose herangezogen werden. Glucarsure, durch Oxidation von Glucose entstanden, bildet
zwei -Monolactone, die aus Mannose stammende Mannarsure nur eines.
O
COOH
C
COOH
OH
OH O
OH
OH
O
HO
HO
+
OH
OH
COOH
OH
OH
OH
COOH
D-Glucose
OH
HO
HO
HO
HO
O
OH
OH
OH
OH
COOH
-Dilacton
COOH
C
COOH
OH
C
OH
COOH
C
O
D-Mannose
4.3.2.3 Uronsuren
Die Oxidation von Aldosen zu Uronsuren entspricht der alleinigen Oxidation der terminalen primren
Hydroxygruppe und ist nur nach vorangehendem Schutz der Carbonylfunktion bzw. der Halbacetal-OH-Gruppe
mglich. Als Schutzgruppen kommen Glykoside, Acetate, Acetale und Ketale in Frage, zur Oxidation dient
Distickstofftetroxid oder KMnO4.
CH2OH
OH
CHO
COOH
N2O4
OH
OCH3
HO
OCH3
HO
H
HO
OH
H+ / H2O
OH
H
OH
OH
H
OH
D-Methylglucosid
D-Glucuronsure
COOH
Glucuronsuren sind Bestandteile von Polysacchariden, wie Glycuronanen, Pektinsubstanzen, Alginsuren und
Mucopolysacchariden. D-Glucuronsure besitzt im Organismus Schlepperfunktion und dient zur Ausscheidung
krperfremder und krpereigener Stoffe. Mit Uridindiphosphat glykosidisch veresterte UDP-Glucuronsure
(5.11.1) bildet mit Alkoholen, Phenolen, Thiolen und aromatischen Aminen entsprechende Glykoside
[Glucuronide] und durch Veresterung mit aromatischen Carbonsuren Ester. Die saure Gruppierung erleichtert
den Transport durch das Gewebe. Die Ausscheidung der entsprechenden Phenolglucuronsuren, Indoxylglucuronsuren, etc. durch die Nieren dient zur Entgiftung dieser Substanzen als auch zur Entfernung von
56
57
4. Kohlenhydrate
Arzneimitteln. Doch knnen durch Glucuronidierung auch Carcinogene im Organismus gebildet werden
[Giftung]. D-Glucuronsure ist bei den meisten Tieren Ausgangssubstanz der Ascorbinsure-Biosynthese.
Bei den Uronsuren bleiben wegen der Aldehydfunktion Zuckereigenschaften wie z.B. Mutarotation (5.2.3.2)
erhalten. Sie liegen als Pyranosen oder Furanosen vor, neigen zur Epimerisierung an C-5 und bilden Lactone.
D-Glucuronsure
ist als 6,3-Lacton Glucuron [Dicuron] in vielen Pflanzenschleimen und tierischem Faser- und
Bindegewebe enthalten.
O
H COH
HO CH
O
OH
OH
HO
O
O
OH
OH
O
OH
COOH
,-Gemisch der
D-Glucuronsure
OH
Glucuron
H
OH
D-Glucuronsure--lacton
D-Glucono-3,6-lacton
Uronsuren ermglichen die Umwandlung von D-Zuckern in L-Zucker. Wird D-Glucose unter Schutz der
Carbonylfunktion zur D-Glucuronsure oxidiert, so entsteht nach selektiver Reduktion der CHO-Gruppe zur
primren Alkoholgruppe und anschlieender Reduktion der COOH-Gruppe zur Aldehydfunktion die L-Guloset.
Dies ergibt eine "Kopf-Schwanz-Vertauschung" des Zuckers und wurde zur chemischen Korrelation der
Monosaccharide
herangezogen.
Die
physikalischen
und
vor
allem
optischen
Eigenschaften
der
Reaktionsprodukte erlauben Aussagen ber die Konfiguration der Ausgangsverbindung und lassen u.a. die
Unterscheidung zwischen D-Glucose und D-Mannose zu. Aus erster entsteht, wie in Formel 5-9 gezeigt, der
neue Zucker L-Gulose mit unterschiedlichen Eigenschaften, aus letzterer wiederum das Ausgangsprodukt DMannose.
CHO
CH2OH
CHO
CH2OH
CHO
CH2OH
CHO
CH2OH
CHO
Reaktionsprodukt:
identisch mit
Ausgangsverbindung
Enantiomer der
Ausgangsverbindung
CH2OH
CHO
CH2OH
CHO
CH2OH
CHO
vllig neuer
Zucker
CH2OH
D-Glucose
CHO
CH2OH
L-Gulose
Die Oxidation der Ketosen erfolgt bevorzugt an der zur Carbonylgruppe benachbarten primren OH-Gruppe.
Aus L-Sorbose z.B. entsteht durch Oxidation Ascorbinsure (4.4.5), das -Lacton der Endiolform der 2Ketogulonsure.
57
58
4. Kohlenhydrate
Unter geeigneten Bedingungen ist bei verschiedenen Kohlenhydraten die selektive Oxidation sekundrer
Hydroxygruppen mglich. Vorausgesetzt, die Acetalgruppe und die primre Hydroxygruppe wird geschtzt,
kann eine selektive Oxidation einer axialen Hydroxygruppe vor einer quatorialen Gruppe durchgefhrt
werden. Als Beispiel ist die Oxidation von Methyl--L-arabinopyranosid mit O2/Pt angefhrt.
HO
O
O2 / Pt
OCH3
HO
OCH3
HO
OH
OH
Methyl--L-arabinopyranosid
4.3.3 Osazonbildung
Die meisten Monosaccharide bilden bei pH 4 - 5 mit einem quivalent Phenylhydrazin die entsprechenden
Phenylhydrazone. In schwach saurer Lsung reagieren Aldosen und Ketosen jedoch mit 3 Molquivalenten
Phenylhydrazin zu den kristallinen Osazonen, die zur Charakterisierung von Kohlenhydraten herangezogen
wurden. Liefern zwei Aldosen das gleiche Osazon, handelt es sich um C-2-epimere Zucker, liefern eine Aldose
und eine Ketose das gleiche Osazon, so ist C-2 der Ketose der Sitz der Ketonfunktion.
H
+
CHO
HC
NH NH C6H5
OH
NH
NH C6H5
- H2N-C6H5
OH
HC
N NH-C6H5
N NH-C6H5
2 C6H5-NHNH2
C
O
HC
H
H
C
C
NH C6H5
C6H5-NHNH 2
CHOH
- NH3
C O
Besser geeignet zur Charakterisierung von Kohlenhydraten sind jedoch die durch Oxidation mit CuII-sulfat aus
den Osazonen entstehenden Osatriazole.
HC
N NH-C6H5
N NH-C6H5
N
CuII
C6H5
- H2N-C6H5
Osazon
Osatriazol
Osazone lassen sich durch Umsetzung mit Benzaldehyd leicht zu Osonen spalten. Deren Aldehydfunktion ist
leichter reduzierbar als die Ketonfunktion, so da Aldosen ber ihre Osone zu den entsprechenden Ketosen
umgewandelt werden knnen.
H
H
C
C
58
N
N
NHPh
NHPh
2 PhCHO
- 2 Ph-CH=NNHPh
H
C
CH OH
C
59
4. Kohlenhydrate
In wrigem alkalischen Milieu finden bereits bei Raumtemperatur Umlagerungen statt, die auf der Einstellung
eines Tautomerie-Gleichgewichtes beruhen. Die basenkatalysierte Ketose-Aldose-Isomerisierung ist unter dem
Namen LOBRY DE BRUYN-ALBERDA VAN EKENSTEIN-Umlagerung bekannt. Zwischenprodukt ist ein Endiol,
das sowohl die Entstehung von Epimeren als auch Isomeren (Aldose Ketose) bewirkt.
CHO
CHO
CH2OH
H
O
CH2OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
Dihydroxyaceton
isomer
D-Glycerinaldehyd epimer
L-Glycerinaldehyd
HC OH
C OH
CH2OH
Endiol
Bei der Einwirkung von verdnntem Alkali auf D-Glucose stehen durch Epimerisierung 63.5 % Glucose und
2.5 % Mannose im Gleichgewicht, und durch Isomerisierung 31 % Fructose und 3 % andere Zucker wie z.B.
Psicose. Eine gezielte Epimerisierung ist auf diese Weise nicht mglich, da von Fructose aus Umlagerungen
durch das gesamte Molekl mglich sind. Leicht erfolgen hingegen Epimerisierungen der entsprechenden
Aldonsuren
mit
Pyridin.
Enzymatische
Epimerisierungen
und
Isomerisierungen
spielen
im
Kohlenhydratstoffwechsel eine Rolle. Bei den enzymatischen Epimerisierungen handelt es sich meist um einen
Konfigurationswechsel an C-4 (Glucose Galactose), weniger hufig an C-2 und C-5.
Unter Einwirkung von starkem Alkali lagern sich Aldosen in der Hitze zu Saccharinsuren, C-2-Methylaldonsuren, um, D-Glucose gibt neben anderen Produkten -D-Glucosaccharinsure.
CHO
H
COOH
OH
-
HO
OH
OH
CH2OH
OH
H3C
OH
OH
OH
CH2OH
2-Methylaldonsure
-D-Glucosaccharinsure
Starkes Alkali bewirkt bei Ketosen Spaltreaktionen in Form der Retroaldolreaktion, aus Fructose entsteht u.a.
Dihydroxyaceton und Glycerinaldehyd, weitere Fragmentierung von Dihydroxyaceton fhrt zu Glycolaldehyd
und Formaldehyd. Die vergleichbare enzymatische Spaltung tritt bei der alkoholischen Grung und Glykolyse
(4.11) auf.
59
60
CH2OH
CH2OH
4. Kohlenhydrate
CH2OH
OH-
CH=O
O
CH2OH
O
-
Dihydroxyaceton
CH2
OH
HC
CH2OH
Glycolaldehyd
Formaldehyd
CHOH
D-Fructose
CH2OH
Glycerinaldehyd
Mit verdnnten Mineralsuren tritt bei Monosacchariden in wriger Lsung Anomerisierung durch
Umwandlung Zucker Zucker ein (vgl. 5.2.3.4). Strkere Suren bewirken Wasserabspaltung unter
Bildung von Furanderivaten. Bei der Umsetzung von Pentosen entsteht Furfural [Furfurylaldehyd],
Aldohexosen und Fructose ergeben 5-Hydroxymethylfurfural, aus 6-Desoxyaldohexosen entsteht 5Methylfurfural. Die Synthese von Furfural durch surekatalysierte Wasserabspaltung aus Pentosen, welche als
Polysaccharide [Pentosane] in Haferspelzen, Mais, Schilf, Reis, Kleie, Erdnuschalen, usw. vorkommen, wird
im technischen Mastab durchgefhrt. Durch Decarbonylierung mit Metalloxiden (400C) wird Furan
gewonnen.
CHO
CHO
CHO
H
CHOH
H+
CHOH
OH
CH2
CH
O
H
OH
- H2O
CHOH
CH2OH
CHOH
CH2OH
CHOH
CHO
CH=O
Metalloxide
Furfural
CH2OH
Furan
Von den Estern anorganischer Suren besitzen vor allem die Phosphorsureester fr viele biochemische
Prozesse Bedeutung. Bei den natrlich vorkommenden Phosphaten sind blicherweise die endstndigen
primren Hydroxygruppen mit Orthophosphorsure verestert, z.B. D-Glucose-6-phosphat, D-Fructose-6phosphat oder D-Fructose-1,6-diphosphat. Von besonderer Bedeutung sind die Phosphorsureester der
Nucleoside,
die
Nucleotide,
als
Bausteine
der
Nucleinsuren.
Dabei
kommen
neben
den
Orthophosphorsureestern auch die reaktionsfhigen und energiereichen Diphosphate und Triphosphate vor.
Schwefelsureester von Kohlenhydraten finden sich verbreitet in der Natur, z.B. in Chondroitinsulfat und
Heparin, den Sulfatiden oder einigen Galactanen der Algen. Diese Ester sind ebenso wie die Phosphatester
60
61
4. Kohlenhydrate
wegen des sauren Charakters gegen Alkali relativ bestndig. Zuckernitrate, Ester der Salpetersure, entstehen
bei der Behandlung von Zuckern mit Nitriersure und besitzen Sprengstoffeigenschaften.
Monosaccharidester von Carbonsuren kommen in der Natur vor allem als Acetate z.B. in den herzwirksamen
Glykosiden, als Fettsureester in bestimmten Lipopolysacchariden und als Ester von Phenolcarbonsuren in
Gerbstoffen vor.
Ester organischer Suren haben als Ausgangsprodukte und Schutzgruppen fr Zuckersynthesen Bedeutung.
Acetylierung von D-Glucose mit Acetanhydrid gibt die gut kristallisierende 1,2,3,4,6-Penta-O-acetyl--Dglucopyranose, deren reaktionsfhige C-1-Acetoxygruppe fr Glykosidsynthesen Bedeutung besitzt.
CH2OAc
OAc
O
OAc
CH2OH
O
Ac2O
OH
H,OH
AcO
OH
OAc
OH
Teilacetylierte Zucker neigen zur Wanderung von Acylgruppen an benachbarte freie OH-Gruppen.
O
-
C O C CH3
C O
C O H
CH3
C O C CH3
C
C O
C O H
H
Bei der Hydrolyse der Acetatreste wird die Konfiguration des C-Atoms, an dem die acetylierte OH-Gruppe
steht, im allgemeinen nicht verndert. Die Abspaltung erfolgt zweckmigerweise nach ZEMPLN durch
Umesterung mit Alkoholat.
O
CH3
OCH3
- CH3OH
C
CH3
CH3
OH
CH3
- O
Eine selektive Blockierung der primren OH-Funktion ist vor allem mit raumerfllenden Schutzgruppen z.B.
als Adamantoat, Pivaloat und Benzoat mglich, tiefe Temperaturen erlauben bei verschiedenen
Monosacchariden sogar eine selektive Acylierung von quatorialen Hydroxygruppen vor axialen.
a
OH
CH2OH
O
a
e
Bz2O
HO
- 20 C, Pyridin
e
HO
OCH3
BzO
e
OH
CH2OBz
O
e
BzO
OCH3
Bz = Benzoyl
Methyl-D-galactosid
cis-Vicinale Glycolgruppierungen lassen sich mit Phosgen zu cyclischen Carbonaten umsetzen. Der klassische
Kohlensureester als OH-Schutzgruppe ist der Benzyloxycarbonylrest, wie er durch Veresterung mit Benzyl-
61
62
4. Kohlenhydrate
chloroformiat [Benzyloxycarbonylchlorid] entsteht. Der Vorteil dieser Schutzgruppe liegt vor allem in der
Mglichkeit der schonenden Abspaltung durch katalytische Hydrierung.
O
C
OH
OH
COCl2
OH
OCH2C6H5
Benzylchloroformiat
Benzyloxycarbonylchlorid
cyclisches Carbonat
cis-vic-Glycol
Cl
O
O
OCH2C6H5
Benzyloxycarbonylderivat
Vor allem Tosylate [p-Toluolsulfonsureester, Tos] sowie Mesylate [Methansulfonsureester, Mes] finden
Anwendung als Sulfonsureester [Sulfonate]. Mit Nucleophilen lassen sich Zuckersulfonate zu anderen Zuckerderivaten umsetzen und besitzen fr Synthesen Bedeutung. Im Unterschied zu Carbonsureestern wird bei
einem nucleophilen Angriff die C-O Bindung der Alkoholkomponente des Esters gespalten und bei einem
chiralen C-Atom erfolgt in der Regel Konfigurationsumkehr [WALDEN-Umkehr]. Tosylate erlauben die
selektive Blockierung der primren Hydroxylgruppe nach vorherigem Schutz der Aldehydfunktion.
Methylether von Monosacchariden, durch Methylierung mit Dimethylsulfat oder Methyliodid, sind in der Regel
flssig, schmecken bitter und lassen sich im Hochvakuum destillieren. Die Ether lassen sich meist nicht mehr
spalten, ohne da das Gesamtgerst verndert wird. Partiell methylierte Zucker kommen in zahlreichen pflanzlichen Glykosiden z.B. in Digitalis- und Strophantus-Arten vor.
C6H5
HOH2C
C6H5 C
Ac2O
OH
C6H5
OH
OH
(C6H5)3CCl
Pyridin
Pyridin
HO
HO
HO
HO OH
OH
OH
C6H5
C6H5
HO
AcO
H2 / Ni
OAc
OAc
C6H5
Ac2O
OAc
Pyridin
AcO OAc
AcO OAc
AcO OAc
Durch Reaktion mit Aldehyden und Ketonen zu Acetalen bzw. Ketalen gelingt eine selektive Blockierung
einzelner Hydroxygruppen. Ketone liefern im allgemeinen cyclische Fnfring-Ketale, Aldehyde dagegen
bevorzugt Sechsring-Acetale. Grund dafr ist das Auftreten destabilisierunder 1,3-diaxialer Wechselwirkungen
im Dioxanring bei Ketalen, whrend in Acetalen der Aldehyd-Alkylrest quatorial orientiert sein kann und die
Sechsringbildung bevorzugt ist.
62
63
H3C
O
H3C
RO
H3C
1,3-diaxiale OR
Wechselwirkung
O
RO
OR
Hauptprodukt
HO
HO
HO
RO
OR
HO
O
O
H3C
O
O
HO
H3C
4. Kohlenhydrate
O
O
HO
H+/
H+/
H
H
H
H3C
Hauptprodukt
RO
OR
HO
O
O
O
RO
OR
Es wird jeweils die maximale Zahl von Hydroxygruppen acetalisiert, die Umwandlung der in die Form
sowie der Ringwechsel von Pyranose zu Furanose ist zu bercksichtigen. Mit Aceton reagiert D-Glucose aus
der furanosiden Form zum 1,2,5,6-Diacetonid, D-Mannose bildet ein 2,3,5,6-Diacetonid, Galactose hingegen
bildet ein pyranosides 1,2,3,4-Diacetonid. Mit Benzaldehyd reagiert Glucose zur 4,6-Benzylidenglucose.
O
CH2OH
H+/
O
OH
O
O
O
OH
OH
HO
O
HO
CH2OH
O
OH HO
O
O
H+/
O
O
OH
O
O
OH
HO
CH2OH
HO
H+/
O
OH
CH2OH
O
O
OH
O
O
HO
CH2OH
O
H
OH
H2
C
/ Ph-CH=O
O
OH
OH
OH
HO
HO
OH
Ersetzt man die glykosidische OH-Gruppe der cyclischen Halbacetalform von Aldosen oder Ketosen durch eine
nucleophile Gruppe, so entstehen als Glykoside bezeichnete gemischte Vollacetale. Die Zuckerkomponente
wird als Glykon bezeichnet, der zuckerfremde Anteil des Acetals ist das Aglykon. Der systematische Name
eines Glykosids enthlt die Bezeichnung des Aglykons, die Konfiguration am anomeren C-Atom, Angaben zur
63
64
4. Kohlenhydrate
Reihe, Name des Glykons und Ringweite. Glykoside, bei denen es sich sowohl beim Glykon als auch beim
Aglykon um ein Saccharid handelt, bezeichnet man als Holoside, bei den Heterosiden ist das Glykon
glykosidisch mit einer Nicht-Kohlenhydrat-Komponente verbunden.
CH2OH
Aglykon
Glykon
CH2OH
O
O
OH
CH2OH
OCH3
O
OH
OH CH O
OH
OCH3
OH
Arbutin
HO
HO
OH
OH
Bei den Glykosiden sind jeweils zwei Anomere ( und Form) mglich, je nach Art des Bindungsatoms
spricht man von O-Glykosiden, N-Glykosiden oder S-Glykosiden. Verbindungen mit entsprechenden C-CBindungen, die keine echten Acetale darstellen, werden als C-Glykoside bezeichnet.
O
O
OR
O-Glykosid
O
SR
S-Glykosid
N-Glykosid
C-Glykosid
Als Acetale sind Glykoside im allgemeinen gegen Alkali stabil. Ausnahmen bilden Glykoside von Alkoholen,
die in Stellung elektronenziehende Gruppen besitzen und zur Eliminierung neigen, und solche von
Phenolen, aus denen als alkalische Spaltprodukte 1,6-Anhydroverbindungen entstehen. Surekatalysiert und
enzymatisch werden sie hydrolytisch in Glykon und Aglykon gespalten.
HOH2C
HO
HO
H+
O
OR
schnell
HOH2C
HO
HO
OH
-D-Glucopyranosid
O
OH
H
O
+
langsam
R
- ROH
HOH2C
HO
HO
+ H 2O
O +
H
OH
schnell
HOH2C
HO
HO
O
H, OH
OH
D-Glucose
2-Desoxyglykoside sind gegenber den 2-Hydroxyderivaten extrem surehydrolyselabil, surelabil sind auch
gewisse glykosidierte Uronsuren. Die Glykoside von 2-Aminozuckern hingegen sind gegenber Suren stabil.
64
65
4. Kohlenhydrate
enzymatisch
CH2
H2N
COOH
Phenylalanin
CH2
CH2
HC
NOH
HC
OH
HC
OR
Aldoxim des
Phenylacetonitril
Phenylacetaldehyds
Cyanhydrin
Amygdalin:
R = Gentiobiose
Prunasin:
R = Glucose
glykosidierte Gruppierung
Aglykon
Beispiele
Steroide
des Aglykons
O-Glykoside
alkoholische
Hydroxygruppe
Steroid-Saponine (S. )
Terpene
Terpen-Saponine (S. )
Hydroxyaminosuren
Glykoproteine (S. )
Hydroxynitrile
Stoffwechselprodukte
Aminoglykosid-Antibiotika (S. )
von Mikroorganismen
Macrolid-Antibiotika (S. )
Diglyceride, Ceramide
Glykolipide (S. )
Phenole
Hydroxygruppen
Cumarylalkoholglucosid
o-Cumarsureglucosid
Auronglykoside
Hydroxyanthrachinonglykoside
Flavonoide
Flavonolglykoside (Rutin)
Anthocyane
S-Glykoside
Mercaptogruppe
Thiohydroxamsureester
N-Glykoside
Amidgruppe
Asparagin
Glykoproteine
N-Atome von
Purine, Pyrimidine
Nucleoside (S. )
Heteroaromaten
Nucleosid-Antibiotika
Benzimidazol
Vitamin B12
Nicotinsureamid
Pyridinnucleotide
Die Glucosinolate [Senflglykoside] sind eine Gruppe von Glucose-thioglykosiden, die in verschiedenen
Brassicaceen, Capparaceen und Resedaceen vorkommen, zu denen zahlreiche Nutzpflanzen wie alle Kohlarten,
Meerrettich, Rettich, Radieschen, Senf und Raps gehren. Sie werden leicht durch Pflanzenenzyme zu Senflen
[Isothiocyanaten] gespalten und tragen charakteristisch zu den Eigenschaften dieser Pflanzen bei. Rapsschrot
kann erheblichen Gehalt an Glucosinolaten aufweisen und Stoffwechselstrungen bei Tieren verursachen, wenn
ihrem Futter grere Mengen an Rapsschrot beigesetzt werden. Allylsenfl, das aus dem Glykosid Sinigrin
entsteht, bewirkt den scharfen Geschmack des Senfs [Brassigra nigra].
65
66
CH2OH
S
O
OH
HS
H2
C R
H2
C R
enzymatische
4. Kohlenhydrate
N OSO3K
N OSO3K
Umlagerung
H2
C N C
CH2OH
Spaltung
+
OH
O
OH
OH
Senflglykosid aus
1-Thio-D-glucose
Sinigrin: R = -CH=CH2
Isothiocyanat
Senfl
Allylsenfl: R = -CH=CH2
H, OH
HO
,-Glucose
OH
Zu den natrlichen N-Glykosiden gehren vor allem die Nucleoside als Bausteine der Nucleinsuren, bei denen
Purin- und Pyrimidinbasen N-glykosidisch mit D-Ribose oder 2-Desoxy-D-ribose verbunden sind.
Bei den C-Glykosiden ist das C-1 einer Aldose unmittelbar mit einem Kohlenstoffatom des Aglykons
verbunden. In der Natur kommen C-Glykosyl-Verbindungen von Anthracen-Derivaten, Flavonen und
heterocyclischen Ringsystemen vor. Pseudouridin ist ein C-1-C-verknpftes Ribofuranosyluracil, das als
seltener Nucleosidbaustein in t-RNS gefunden wird.
4.3.9.3. Glykosidsynthesen
Zur Synthese von Glykosiden und Sacchariden fhrt im allgemeinen der nucleophile Austausch der
glykosidischen OH-Funktion gegen einen anderen Substituenten. Die anionische Verdrngung der
glykosidischen Hydroxylgruppe eines Monosaccharids gelingt nicht, Direktsubstitution ist erst nach
Protonierung mglich. Das nach Umsetzung mit Alkohol in Gegenwart von HCl [E. FISCHER] nach SN1
entstehende Carbeniumion wird durch den Ringsauerstoff stabilisiert und damit seine Bildung begnstigt. DGlucose und Methanol gibt ein Gemisch der und Anomeren (Diastereomere) von Methyl-Dglucopyranosid
und
Methyl-D-glucofuranosid,
wobei
sich
die
sonst
schwer
zugnglichen
D-
D-Glucose
OH
HO
OH
H + / H2O
Methyl-- D-glucopyranosid
CH2OH
OCH3
O
OH
Methyl-- D-glucopyranosid
CH2OH
CH2OH
O +
CH3OH
OH
OH
CH3OH
HO
HO
HO
OH
32 %
OH
OCH3
OH
66 %
Eine Variante der FISCHER-Methode ist die FISCHER-HELFERICH-Synthese, bei der die peracetylierte
Verbindung eingesetzt wird, jedoch drastische Reaktionsbedingungen erforderlich sind. hnlich Variante ist
die Reaktion der O-Pentaacetyl-D-glucose in einer Phenolschmelze unter Surekatalyse. Aufgrund des
Nachbargruppeneffekts (S.
quatoriale Stellung des Phenylrings entsteht hierbei vor allem das -Glucosid.
66
67
CH2OAc
O
OAc
- AcO
OAc
O
CH2OAc
CH2OAc
O
OAc +
O
OAc
AcO
O
OAc
O
OAc
C6H5-OH
O
CH3
CH2OAc
Oa
AcO
AcO
4. Kohlenhydrate
CH3
+
CH
AcO
CH3
OC6H5
e
AcO
AcO
H
OAc
O
O
e
AcO
H
In neuerer Zeit gewinnen Glykosylfluoride zunehmend an Bedeutung, unter Lewis-Surekatalyse gelingt die
Darstellung von O-, N-, S- oder C-Glykosiden. Die Herstellung der Fluoride gelingt aus den Bromiden bzw.
Chloriden durch Umhalogenierung mit Silberfluorid. Ausgehend von acetylierten Bromglucosiden entsteht
durch
Stabilisierung
der
positiven
C-1-Ladung
durch
Bildung
des
Acetoxoniumions
aus
der
Nachbaracetatgruppe das 1,2-trans-verknpfte Fluoroglucosid. Im Falle der verluft die Reaktion ber einen
SN2-Mechanismus unter WALDEN-Umkehr ebenso zum Anomeren. Wird das perbenzylierte Chlorid
jedoch mit Kaliumhydrogenfluorid statt mit Silberfluorid umgesetzt, entsteht unter Retention das Fluorid.
Dies spricht fr eine thermodynamisch kontrollierte Reaktion zum thermodynamisch stabileren Fluorid.
OBnz
OBnz
KF . HF
BnzO
BnzO
BnzO
BnzO
O +
OBnz
BnzO
BnzO
Cl
BnzO
BnzO
BnzO
F
Bnz = Benzyl
Beim Versuch der Glykosid-Darstellung aus -Halogenglykosiden treten Schwierigkeiten auf. Halogenglykoside sind instabiler als die Formen und es erfolgt leicht eine Isomerisierung. Zwar resultieren
aus -Halogenglykosiden mit CH3OH Glykoside, mit sperrigen Alkoholen erhlt man jedoch allenfalls
Gemische der und -Formen. Grund dafr sind entweder wieder Nachbargruppeneffekte, die den Angriff
von ROH nur aus der nicht abgeschirmten Richtung ermglichen, oder die Bildung stabiler
Oxocarbeniumionen, die den Angriff des ROH aus der weniger behinderten quatorialen Richtung zum
Glykosid zulassen.
OR
Trichloracetimidat
RO
RO
-Anomer
RO
O
NH
CH2Cl2, RT
CCl 3
HOOC-R1
RO
RO
O
O
RO
R1
-Acylanomer
Alkohole werden unter Inversion am anomeren Zentrum in Gegenwart von Lewis-Suren zum Anomer
glykosiliert, vorausgesetzt, da kein nachbargruppenaktiver Substituent an C-2 steht.
67
68
4. Kohlenhydrate
R
OBnz
BF3 - Etherat
BnzO
BnzO
NH
BnzO
O
- 10 C
OBnz
CCl3
-Anomer
H
HO
-Glucosid
Bnz = Benzyl
BnzO
BnzO
O
BnzO
O
OAc
Zn
O-Glykosid einer
2-Desoxyaldose
O
OAc
H+
C6H5OH
HOAc
Br
OAc
AcO
CH2OAc
CH2OAc
AcO
AcO
Glycal
H2C
O CH2
H
OH
H
OH
OH
H
H
O
OH
O
O
HO
OH
OH
HO
HO
HO
CH2
OH
OH
3,6-Anhydro-D-glucose
AcOH2C
1,6-Anhydro-D-glucopyranose
Lvoglucosan
AcOH2C
N(CH3)3
Br
OAc
Disaccharid-Zuckeranhydrid
aus D-Furctose
H2C
O
(CH3)3N
OAc
AcO
HO
O
OH
OH
Ba(OH)2
OAc
OH
HO
AcO
OAc
OH
Lvoglucosan
1,6-Anhydro-D-glucopyranose
Anhydrozucker entstehen meist unter Bildung von Oxiranen [Ethylenoxiden] oder Oxolanen [Tetrahydrofuranen], Ausgangsprodukte sind Halogenverbindungen oder besser Tosylate. Bei Vorliegen chiraler
Sulfonsureester erfolgt WALDEN-Umkehr. Chitose ist die 2,5-Anhydro-D-mannose. Die in verschiedenen
Galactanen vorliegenden 3,6-Anhydro-L-galactopyranose-Reste entstehen durch Abspaltung von Schwefelsure
aus den in diesen Polysacchariden vorkommenden sauren Schwefelsureestern.
68
69
O
OTos
HOH2C
4. Kohlenhydrate
H2C
HO
HO
O
HO
O
CHO
OH
OH
2,5-Anhydro-D-mannose
3,6-Anhydro-L-galactose-Rest
Aldosen reagieren mit Mercaptanen unter Bildung von Thioacetalen. Die Thioacetalfunktion blockiert die
Carbonylgruppe und ermglicht so Reaktionen an den Hydroxylgruppen. Die Abspaltung der Thioacetalgruppe
gelingt mit Brom. ber geeignete Mercaptale lassen sich auf diesem Weg nichtglykosidische Vollacetale von
Aldosen herstellen. Die Reduktion der Thioacetalfunktion fhrt zu 1-Desoxyzuckern.
RS
CH=O
SR
RS
Br
RaNi / H2
CH3
CH=O
H2O
Br2
RSH
ROH
RS
OR
Br
RO
OR
Br2
OR
ROH
1-Desoxyzucker
al-Acetal
4.3.12 MAILLARD-Reaktion
Unter der MAILLARD-Reaktion [L.C. MAILLARD, 1912] versteht man ein Konglomerat von Reaktionen
reduzierender Zucker mit Aminosuren, Peptiden oder Proteinen. Damit spielt die Reaktion in der Lebensmittelchemie, bei der Bildung von Aromastoffen und Pigmenten (Melaninoidine) und bei Vernderung von
Nahrungsmitteln durch Lagerung und Verarbeitung eine wichtige Rolle. So gibt z.B. D-Glucose mit Aminen
instabile N-Glykoside 2, die sich zu den stabileren Aminozuckern 3 [AMADORI-Umlagerung, vgl. 5.4.3]
umlagern. Durch Hydrolyse und Wasserabspaltung entsteht ber das 3-Desoxyoson 4 5-Hydroxymethyl-2furfural.
H2C
H
OH
OH
H
O
OH
OH
CH2OH
D-Glucopyranose
H2N-R
HC
Umlagerung
O
OH
NHR
AMADORI-
NHR
OH
OH
O
CH2
HOH2C
OH
OH
CH2OH
OH
OH
CH2OH
OH
CHO
5-Hydroxymethyl-2-furfural
CH2OH
3-Desoxyoson 4
Weitere Abbauwege fhren zur Spaltung der Zuckerverbindungen und zur Bildung von Dicarbonylen, typische
Reaktionsprodukte sind Acetylfuran, Maltol, Isomaltol, Furaneol [Ananas-Furanon] und 5-Hydroxy-5,6dihydromaltol. ber 120 verschiedene Pyrazine wurden beim Rsten von Saccharose mit Serin und Threonin
69
70
4. Kohlenhydrate
identifiziert. Damit gehren Pyrazine u.a. zu wichtigen Trgern von Rstaromen wie z.B. Kaffee.
Reaktionsprodukte von Zuckern mit schwefelhaltige Aminosuren tragen vor allem zum Aroma von Brot,
Fleisch und Kaffee bei (Abb. 5- zeigt einige Aromastoffe, die durch Maillard-Reaktion gebildet werden).
O
OH
OH
OH
O
COCH 3
Acetylfuran
OH
HO
COCH 3
Maltol
Isomaltol
Furaneol
5-HydroxyTetramethyl5,6-dihydromaltol
pyrazin
N
O
S
S
N
H
CH3
O
O
CH3
OH
CH3
OH
HO
CH3
HO
OH
O
NHCH3
OH
CH2OH
OH
H3C
H3C
OCH3
O
CHO
OH
OH
OH
OH
OH OH
4.4.2 Desoxyzucker
Desoxyzuckern fehlen eine oder mehrere Hydroxygruppen. Diese Zucker werden selten in freier Form
gefunden, meist handelt es sich bei den natrlich vorkommenden Desoxyzuckern um glykosidisch gebundene
Desoxyaldosen in Oligosacchariden, Antibiotika, Lipopolysacchariden, usw. Weit ber 100 verschiedene
solcher Desoxymonosaccharide oder Derivate sind bekannt, ihnen kann sowohl die primre als auch eine der
sekundren Hydroxyfunktionen fehlen. Der hufigste 6-Desoxyzucker [auch Methylosen oder Methylpentosen],
die L-Rhamnose [6-Desoxy-L-mannose], kommt frei im Giftsumach [Rhus toxicodendron] vor und glykosidisch
[Rhamnosid] gebunden in zahlreichen Heterosiden und Heteropolysacchariden. Die L-Rhamnose dient als
Edukt fr hochwertige Aromastoffe und ist ein vielseitig einsetzbares Zwischenprodukt fr organische
70
71
4. Kohlenhydrate
Synthesen. Sie wird aus verschiedenen pflanzlichen Rohstoffen wie Rutin, Hesperidin und Naringin gewonnen,
ist jedoch auch biotechnisch zugnglich. L-Fucose [6-Desoxy-L-galactose] ist u.a. in den Glykoproteinen der
Blutgruppensubstanzen enthalten sowie als Bestandteil von Polysacchariden mariner Braunalgen. D-Fucose
[Rhodeose] kommt in hheren Pflanzen und Baumharzen vor. Der wohl wichtigste Desoxyzucker ist die 2Desoxy-D-ribose [2-Desoxy-D-erythro-pentose] als Bestandteil der Desoxyribonucleinsuren. 2-Desoxyribose
frbt im Gegensatz zu den brigen Zuckern Fuchsin-Schwefelige Sure und ermglicht dadurch den Nachweis
von DNS. In herzwirksamen Glykosiden (6. Steroide) und Lipopolysacchariden von Mikroorganismen werden
zahlreiche Didesoxyaldosen, denen zwei Hydroxylfunktionen fehlen, gefunden. L-2-Desoxyfucose ist eine 2,6Didesoxyaldohexose, ebenso wie die Methylether D-Digitoxose, D-Cymarose, D-Diginose und L-Oleandrose
aus den genannten Glykosiden. 3,6-Didesoxyaldohexosen wie z.B. D-Tyvelose, D-Abequose, D-Paratose, LColitose und L-Ascarylose wurden als Bestandteil von Lipopolysacchariden gefunden. Aus Streptomyceten
konnte die 2,3,6-Tridesoxyaldose L-Rhodinose erhalten werden (Tab. 5-3). Weitere Beispiele sind L-Amicetose,
L-Aculose, L. Cinerulose, D-Kerriose und L-Angolosamin.
HO
HO
CH3
OH
OH
L-Rhamnose
O
OH
CH3
OH
CH3
HO
OCH3
OH
OH
OH
OH
CH3
HO
HO
HO
O
HO
CH3
HO
O
HO
O
O
CH3
CH3
OH
CH3
OH O
CH3
OH
OH
OH
HO
O
L-Amicetose
L-Aculose
L-Cinerulose
D-Kerriose
N(CH3)2
L-Angolosamin
71
72
4. Kohlenhydrate
2-Desoxyribose
CHO
CH2
H-C-OH
H-C-OH
CH2OH
L-Rhamnose
CHO
H-C-OH
H-C-OH
HO-C-H
HO-C-H
CH3
L-Fucose
CHO
HO-C-H
H-C-OH
HO-C-H
HO-C-H
CH3
D-Quinovose
CHO
H-C-OH
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH3
D-Antiarose
CHO
H-C-OH
H-C-OH
HO-C-H
H-C-OH
CH3
D-Digitalose*
CHO
H-C-OH
CH3O-C-H
HO-C-H
H-C-OH
CH3
L-Thevetose*
CHO
HO-C-H
H-C-OCH3
HO-C-H
HO-C-H
CH3
L-Acotriose
CHO
H-C-OH
H-C-OCH3
HO-C-H
HO-C-H-
CH3
L-Acovenose*
CHO
H-C-OH
H-C-OCH3
H-C-OH
HO-C-H
CH3
D-Digitoxose*
CHO
CH2
H-C-OH
H-C-OH
H-C-OH
CH3
D-Biovenose*
CHO
CH2
H-C-OH
HO-C-H
H-C-OH
CH3
D-Cymarose*
CHO
CH2
H-C-OCH3
H-C-OH
H-C-OH
CH3
D-Diginose*
CHO
CH2
CH3O-C-H
HO-C-H
H-C-OH
CH3
D-Sarmentose*
CHO
CH2
H-C-OCH3
H-C-OH
H-C-OH
CH3
L-Oleandrose*
CHO
CH2
H-C-OCH3
HO-C-H
H-O-CH
CH3
D-Tyvelose
CHO
HO-C-H
CH2
H-C-OH
H-C-OH
CH3
D-Abequose
CHO
H-C-OH
CH2
HO-C-H
H-C-OH
CH3
D-Paratose
CHO
H-C-OH
CH2
H-C-OH
H-C-OH
CH3
L-Colitose
CHO
HO-C-H
CH2
H-C-OH
HO-C-H
CH3
L-Ascarylose
CHO
H-C-OH
CH2
HO-C-H
HO-C-H
CH3
L-Rhodinose
CHO
CH2
CH2
H-C-OH
HO-C-H
CH3
2-Desoxyzucker werden durch Addition von Wasser an Glycale (5.3.10) dargestellt, 6-Desoxyzucker entstehen
durch Tosylierung (5.3.7) der C-6-Hydroxygruppe und anschlieende LiAlH4-Reduktion.
CH2OH
CH2OH
CH2OH
O
H+
+ H2O
OH
OH
HO
HO
HO
Glycal
H+
CH2OH
2-Desoxyaldohexose
CH2OTos
O
OH
OH
O
1. LiAlH4
TosCl
OH
OH
OH
2. H + / H2O
OCH3
OH
Methyl--D-glucose
HO
72
HO
OCH3
OH
HO
OH
6-Desoxy-D-glucose
73
4. Kohlenhydrate
Aminozucker zeichnen sich durch den Ersatz einer oder mehrerer Hydroxygruppen durch eine Aminofunktion
aus und sind u.a. glykosidische Bestandteile zahlreicher Antibiotika (Tab. 4-4). Sie kommen ferner als NAcetyl- oder N-Sulfuryl -Derivate in Polysacchariden und vor allem in Kohlenhydrat-Protein-Verbindungen
vor, aus denen sie in Form ihrer kristallinen Hydrochloride isoliert werden. Bis heute sind ber 60
Aminozucker bekannt, die verbreitetsten sind D-Glucosamin [2-Amino-2-desoxy-D-glucose], D-Galactosamin
[2-Amino-2-desoxyD-galactose] und D-Mannosamin [2-Amino-2-desoxy-D-mannose]). D-Glucosamin wurde
1878 als erstes tierisches Kohlenhydrat aus Hummerschalen (Chitin) hergestellt und ist Bestandteil von
Aminoglykosid-Antibiotika. N-Methyl-L-glucosamin ist Bestandteil des Antibiotikums Streptomycin. N-AcetylD-glucosamin
Gerstpolysaccharid von Insekten, Schalentieren und zahlreichen Weichtieren. N-Acetyl-D-galactosamin ist als
Baustein der Chondroitinsulfate Bestandteil von Sehnen, Knorpeln und Bindegewebe. Der 3-OHMilchsureether des N-Acetyl-D-glucosamins, N-Acetylmuraminsure [N-Acetylmuramsure, 2-Acetamido-3O-[1-(S)-carboxyethyl]2-desoxy-D-glucose] ist Bestandteil von Zellwnden grampositiver Bakterien. In
hheren Pflanzen werden Aminozucker kaum gefunden. Diaminozucker sind selten, das Bacillosamin wurde
1958 als erster in einem Polysaccharid des Bacillus licheniformis entdeckt.
CH2OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
HO
O
O
OH
OR
OH
OH
OH
O
OH
H2N
OH
HO
HO
HO
HN
D-Glucosamin (R = H)
N-Acetyl-D-glucosamin
NH2
NH2
OH
D-Galactosamin
Muraminsure
(R = CH(COOH)-CH3)
D-Mannosam in
(R = COCH 3)
Antibiotikum
2-Amino-2-desoxy-D-
H-C-NH2
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2OH
Streptomycin
CHO
CH3NH-C-H H-C-OH
HO-C-H
Kanamycin, Tobramycin
CHO
H-C-OH
NH2-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2OH
Kanamycin
CHO
H-C-OH
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2NH2
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2NH2
(CH3)2N-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2OH
glucose (Paromamin)
2-Desoxy-2-methylamino-
CH2OH
L-glucose
3-Amino-3-desoxy-Dglucose (Kanosamin)
6-Amino-6-desoxy-Dglucose
2,6-Diamino-2,6-didesoxy- Neomycin C
CHO
D-glucose (Neosamin C)
3-Desoxy-3-
CHO
H-C-OH
73
74
4. Kohlenhydrate
dimethylaminoD-glucose (Mycaminose)
3-Dimethylamino-3,4,6-tri- Erythromycin, Oleandomycin
CHO
H-C-OH
CH3NH-C-H
CH2
H-C-OH
CH3
CHO
HO-C-H
H2N-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH3
CHO
H-C-NH2
HO-C-H
HO-C-H
HO-C-H
CH2NH2
Anthracyclin-Antibiotika
CHO
CH2
H-C-NH2
H-C-OH
HO-C-H
CH3
Gentamycin C
CHO
H-C-NH2
CH2
CH2
H-C-OH
CH(CH3)NH2 bzw.
desoxy-D-glucose
(Desos
amin, Picrocin)
3-Amino-3,6-didesoxy-D-
Nystatin, Amphothericin
mannose (Mycosamin)
2,6-Diamino-2,6-didesoxy- Neomycin B, Paramomycin I
L-idose
(Paramose,
Neos
amin B)
3-Amino-2,3,6-tridesoxyLgalactose (Daunosamin)
2,6-Diamino-2,3,4,6-tetra
desoxyhexosen
CH(CH3)NHCH3
2,6-Diamino-2,3,4,6-tetra
Sisomycin
CHO
H-C-NH2
CH2
HC = COH
Gentamycin
CHO
H-C-OH
H2N-C-H
H-C-OH
CH2OH
Puromycin
CHO
H-C-OH
H-C-NH2
H-C-OH
CH2OH
desoxy-D-glycero-hex-4enose
3-Desoxy-3-methylaminoD-xylose (Gentosamin)
3-Amino-3-desoxy-Dribose
Die Einfhrung einer Aminofunktion in die 3-Position der Glucose lt sich ber das 1,2,5,6-Diacetonid
erreichen. Oxidation mit RuO4 und Reduktion zu 15 gibt die Konfigurationsumkehr an C-3. Mesylierung und
Substitution durch Azid liefert nach der Reduktion zu 16 die gewnschte 3-Aminogruppe, nach Abspaltung der
Schutzgruppen wird 3-Amino-3-desoxy-D-glucose erhalten.
O
RuO4
O
OH
O
O
NaBH4
NaIO4
O
14 O
1,2,5,6-D-Glucosediacetonid
15 HO O
CH2OH
O
NH2
O
Hydrolyse
O
NH2
1. MesCl
2. NH3 / DMF
3. H2 / Pd
OH
HO
OH
16
3-Amino-3-desoxy-D-glucose
NaBH4
HO
OH
Nojirimycin
74
HOH2C
HO
HO
HO
Desoxynojirimycin
75
4. Kohlenhydrate
Bei der Umsetzung von aromatischen Aminen mit D-Glucose wurden anstelle der erwarteten N-Glucoside NAryl-Derivate von 1-Amino-1-desoxy-2-ketosen erhalten. Diese als AMADORI-Umlagerung bezeichnete
Isomerisierung von Aldoxylaminen [N-Glykosiden] zu Aminozuckern erfolgt durch Erwrmen bzw. sure- oder
basenkatalysiert und ist irreversibel. Dabei wird die labile Glykosidverbindung zum stabilen Aminozucker
umgewandelt. Die entsprechende berfhrung von Ketosylaminen in 2-Aminoaldosen ist als reversible HEYNSUmlagerung bekannt.
CH2OH
H2C
O
HO
AMADORIO
Umlagerung
OH
HO
NH Ar
OH
H
N
O CH2OH
5
OH
N-Aryl--D-glucopyranosylamin
HO
HO
HO
OH
HO
CH2OH
Ar
HEYNS-
NHR
Umlagerung
O
OH
HO
HO
NHR
N-Aryl-1-amino-1-desoxyD-fructopyranose
Neuraminsure [5-Amino-3,5-didesoxy-D-glycero-D-galacto-2-nonulosonsure] ist die Onsure einer Aminoketononose und stellt den Grundkrper der Sialinsuren dar. Sie kommt in freier Form in der Natur nicht vor,
ist instabil und cyclisiert spontan durch intramolekularen Angriff der 5-Aminofunktion an die Carbonylfunktion
zu 4-Hydroxy-5(1,2,3,4-tetrahydroxybutyl)1-pyrrolin-2-carbonsure.
HOOC
OH
CH2
OH
H2N
H2N
O COOH
CHOH
CH
OH
OH
CH2OH
HOCH 2
HOCH 2
COOH
COOH
HOCH
OH
HO CHOH
H H
H2C C C CH
OH
OH
O
H2N
HO
CH2OH
HO OH OH OH
4-Hydroxy-5(1,2,3,4-tetrahydroxybutyl)1-pyrrolidin-2-carbonsure
Neuraminsure, 5-Amino-3,5-didesoxy-2-nonulosonsure
Die Sialinsuren [Sial(in)suren, griech. sialon = Speichel] sind meist mono- oder diacylierte Neuraminsuren
[Acylneuraminsuren]. Sie zhlen zu den wichtigsten Bestandteilen der Schleimstoffe [Mucine], die von den
Schleimhuten im Atmungs- und Urogenitaltrakt abgesondert werden und auch in der Augenhhle vorkommen.
Sie sind als Bestandteile membranbildender Sphingolipide, insbesondere der Ganglioside, der Blutgruppensubstanzen und vieler Glykoproteine in tierischen Zellen und Krperflssigkeiten und einigen
Mikroorganismen vorhanden, wurden bisher jedoch noch nicht in Pflanzen gefunden.
Heute kennt man ber 20 Sialinsuren, wovon die meisten von R. SCHAUER in den 70er Jahren entdeckt
wurden. Die wichtigste Acylneuraminsure ist die N-Acetylneuraminsure [NANA, Lactaminsure, OSialinsure]. Im allgemeinen bilden die Sialinsuren glykosidisch gebunden das terminale Ende von
Oligosaccharidketten. Whrend die freie N-Acetylneuraminsure in der -Form vorliegt, sind die Sialinsuren
glykosidisch gebunden.
75
76
4. Kohlenhydrate
Den terminal gebundenen Sialinsuren kommt eine zentrale Rolle bei Wechselwirkungen zwischen biologisch
aktiven Moleklen und Zellen sowie bei der Zellerkennung zu, was fr pflanzliche und tierische Zellen, aber
auch fr Bakterien, Viren und andere Krankheitserreger gilt. Zellen werden an ihren Oberflchenkomponenten
erkannt. Darunter sind Glykokonjugate, die aus Proteinen oder Fetten und Zuckern aufgebaut sind. Deren
Oligosaccharidketten bei Menschen und hheren Tieren enden hufig mit an Galactose gebundener Sialinsure.
Diese beiden Struktureinheiten sind fr die Erkennungsmechanismen von Bedeutung. Die Anordnung der
Sialinsure- bzw. Galactose-Reste kann ein zelltypisches Muster auf der Zelloberflche bilden, die von anderen
Zellsystemen, z.B. Makrophagen, unterschieden werden.
4.4.4.1 Cyclitole
Strukturell verwandt mit den acyclischen Alditolen sind die Cyclitole [Cyclite], Cycloalkane mit mindestens
drei Hydroxygruppen. Am verbreitetsten sind die Inosite, Hexahydroxycyclohexane. Auer dem einzigen
Enantiomerenpaar L- und D-chiro-Inosit sind alle anderen Cyclitole meso-Formen. Zur Kennzeichnung werden
die Hydroxy- und andere Gruppen, die ober- oder unterhalb der Ringebene stehen, durch einen Schrgstrich
getrennt. Myo-Inosit kommt sowohl im Tier als auch in Pflanzen frei und gebunden vor und ist fr manche
Mikroorganismen ein Wuchsstoff. In Pflanzen dient der Hexakis-phosphorsureester Phytinsure als Phosphatreserve. (+)-Quercit [(1L-1,3,4/2,5)-Cyclohexan pentol] kommt in Eichen [Quercus spp.] vor. (+)-Pinitol wirkt
als Frahemmstoff und Inhibitor der Larvenentwicklung bei Insekten.
Spiegelebene
OH OH
OH
1
OH OH
2
OH
OH OH
1
OH
CH3O
2
6
OH
OH
HO
HO
OH
HO
OH
OH
OH
HO
OHHO
4
HO
OH
OH
OH
HO
(+)-Quercit
(+)-1D-chiro-Inosit (-)-1L-chiro-Inosit
myo-Inosit
(1,2,3,5/4,6-Inosit) (1,2,4/3,5,6)-Inosit (1,2,4/3,5,6)-Inosit (1,3,4/2,5-Cyclo(+)-Inosit
hexanpentol)
(-)-Inosit
OH
OH
(+)-Pinitol
Von Bedeutung sind die Cyclitolcarbonsuren. D-(-)-Chinasure [1L-1(OH),3,4/5-Tetrahydroxycyclohexancarbonsure] ist neben Chatechin-Gerbstoffen in der Chinarinde salzartig an die China-Alkaloide (15.
gebunden und in Pflanzen weit verbreitet und entsteht aus Erythrose-4-phosphat ber 5-Dehydrochinasure,
einer Zwischenstufe des Shikimisure-Weges zur Biosynthese von Aromaten (vergl. 19. ).
OH
HO
HO
COOH
5-Dehydrochinasure
76
OH
OH
HO
OH
HO
COOH
Chinasure
HO
OH
COOH
Shikimisure
(3,4,5-Trihydroxy-1cyclohexencarbonsure)
77
4. Kohlenhydrate
4.4.4.2 Pseudozucker
Der Name Pseudozucker steht fr eine Klasse von Verbindungen, in welchen der Ringsauerstoff eines Zuckers
durch eine Methylengruppe ersetzt ist und Ring-C-Atome entsprechend der Konfiguration der Saccharide
substituiert sind. Pseudozucker kommen in freier Form in der Kulturbrhe von Mikroorganismen, vor allem
aber als Komponenten von Pseudooligosacchariden als Enzym-Inhibitoren und Antibiotika vor. Zwei Typen
werden unterschieden, Pseudopyranosen und Pseudofuranosen. Aufgrund ihrer hnlichkeit zu echten
Zuckern geben Pseudozucker Anla zu Erwartungen biologischer Aktivitten. Einige biologisch aktive
Pseudozucker werden in der Natur gefunden, Beispiele sind Valiolamin und Valienamin, Bestandteile des
Trisaccharid-Antibiotikums Validamycin A (17. ) bzw. der Acarbose (17. ).
HOH2C
OH
HOH2C
HO
HO
HO HONH
2
HO
HO
OH
Pseudo--Dgalactopyranose
CH2OH
OH
HO
HO
H
Valiolamin
NH2
Valienamin
L-(+)-Ascorbinsure,
on] wurde erstmals aus Paprika. Kohl und Nebennieren in kristalliner Form gewonnen [A. SZENT-GYRGYI,
1927 "Hexuronsure"], spter aus vielen anderen Frchten, Gemsen usw. Die Strukturaufklrung und erste
Synthese erfolgte 1933 durch E.L. HIRST und W.N. HAWORTH.
Aus Ascorbinsure, 2-Oxo-(S)-gulonsurelacton (bzw. 3-Oxo-), entsteht durch Oxidation, besonders in Gegenwart von Schwermetallen, Dehydroascorbinsure, die in einer Halbketalstruktur vorliegt. Letztere kann im
Krper wieder zu Ascorbinsure reduziert werden. Wegen ihrer leichten Oxidierbarkeit wird Ascorbinsure in
Lebensmitteln als Antioxidans verwendet.
+
HO
HO
OH
OH
HO
HO
O
OH
OH
Ascorbinsure
O
-H
O
OH
-2e-
HO
O
OH
O
O
HO
-H+
O
OH
OH
OH
Dehydroascorbinsure
Ascorbinsure ist eine zweiprotonige Sure, wobei die C-3-OH-Gruppe strker sauer ist als C-2-OH wegen der
Resonanzstabilisierung des Anions.
77
78
L-(+)-Ascorbinsure
4. Kohlenhydrate
wird industriell nach einem Verfahren nach T. REICHSTEIN hergestellt. Der durch
Reduktion von D-Glucose (bzw. L-Sorbose) erhaltene D-Sorbit [D-Glucit, L-Gulit] wird mikrobiologisch mit
Acetobacter suboxidans spezifisch zu L-Sorbose oxidiert. Ketalisierung mit Aceton ergibt die Sorbofuranose,
durch Oxidation, Hydrolyse und Wassserabspaltung wird L-Ascorbinsure erhalten (Formel 4-17).
CH2OH
CH2OH
HO
HO
spontane
+
O / H
OH
OH
OH
D-Glucose
HO
HO
O2
NaBH4
Acetobacter
suboxidans
HO
Cyclisierung
CH2OH
HO
HO
CH2OH
CH2OH
(R)-Glucit
D-Sorbit
L-Gulit
(S)-Sorbose
L-Sorbose
COOH
OH
(S)-Sorbose
Pyranosid
COOCH3
CH2OH
CH-OH
O
O
HO
OO
CH2OH
NaOCl
oder
KMnO4
HO
OO
O
H2O / H +
CH3OH / H +
1. CaCO3
2. H
HO
OH
COOH
O
O
(S)-Sorbose
Furanosid
L-Ascorbinsure
CH2OH
CH2OH
2-Oxo-(S)-gulonsure 2-Oxo-(S)-gulonsuremethylester
Die Westindische Kirsche Acerola als Frucht eines in Mittelamerika heimischen Strauches gilt als Vitamin Creichste Frucht. Sowohl Saft als auch ein durch Sprhtrocknung gewonnenes Pulver enthalten bis zu 25%
Ascorbinsure und werden zu Nahrungszwecken verwendet.
Disaccharide und Oligosaccharide bestehen aus zwei bzw. bis 9 Monosaccharid-Einheiten, die einzelnen
Strukturen unterscheiden sich durch die Aufbau beteiligten Monosaccharide deren unterschiedliche Art der
Verknpfung.
4.5.1 Disaccharide
Disaccharide sind Glykoside, in denen die Alkoholkomponente ein zweiter Zucker ist [Holoside]. Die
Verknpfung kann entweder zwischen beiden glykosidischen OH-Funktionen oder zwischen einer
glykosidischen OH-Gruppe und einer alkoholischen OH-Gruppe des zweiten Monosaccharids erfolgen kann.
Die 4-Hydroxyfunktion ist am hufigsten an der Glykosidbindung der Oligo- und Polysaccharide beteiligt
(14), weniger hufig findet man (16)-, (13)- oder gar (12)-Verknpfung. Sowohl die glykosidische
Bindung als auch das anomere Hydroxyl der zweiten Zuckerkomponente kann oder konfiguriert sein und
zwei anomere Disaccharide sind mglich. Im Fall der glykosidischen Verknpfung ber beide halbacetalischen
78
79
4. Kohlenhydrate
OH-Gruppen ist das entstandene Disaccharid nicht reduzierend, bleibt die Halbacetalgruppierung des zweiten
Bausteins erhalten, so besitzt es reduzierende Eigenschaften, bildet Osazone und zeigt Mutarotation.
CH2OH
H
O
CH2OH
CH2OH
O
CH2OH
OH
-glykosidische
anomeres
Hydroxyl
OH
-glykosidische
1,4-Verknpfung
Aus zwei Moleklen D-Glucose knnen folgende Bindungstypen und Disaccharide entstehen:
Bindungstyp
systematischer Name
Trivialname
11
-D-Glucopyranosyl--D-glucopyranosid
Trehalose
(14)
4(-D-Glucopyranosyl)-D-glucopyranose
Maltose
(14)
4(-D-Glucopyranosyl)-D-glucopyranose
Cellobiose
(16)
6(-D-Glucopyranosyl)-D-glucopyranose
Isomaltose, Brachiose
(16)
6(-D-Glucopyranosyl)-D-glucopyranose
Gentiobiose
Saccharose
Rohrzucker
Saccharose ist das am hufigsten vorkommende Disaccharid berhaupt und aus vielen Pflanzen und Frchten
isoliert worden. In geringeren Mengen ist Saccharose in Pflanzen anzutreffen, z.B. im Smais und
Zuckerhirse, in Pflanzensften wie Palmsaft (Palmzucker), in Frchten (Dattelzucker), Samen, Baumsften
(Ahornzucker) und Wurzeln. Den hchsten Saccharosegehalt weisen Zuchtformen des Zuckerrohrs [Saccharum
officinarum, 14 - 20 %] und die Zuckerrbe [Beta vulgaris saccharifera, 16 20 %] auf. Die Entdeckung der
Saccharose in der Zuckerrbe geht auf den Berliner Chemiker MARGGRAF [1747] zurck. Vor der ersten
Gewinnung von Zucker aus Zuckerrohr [300 - 600 n.Chr. in Ostindien] war Honig das einzige Sungsmittel.
Rohrzucker oder Rbenzucker ist der wichtigste Nahrungszucker und wird industriell aus Zuckerrohr bzw.
Zuckerrben ber mehrere Reinigungsschritte (Raffinadezucker) gewonnen.
Maltose [Malzzucker] entsteht durch enzymatische Spaltung von Strke durch Amylase bzw. Diastase bei
der Bierherstellung. Maltose besteht aus zwei a(14)-glykosidisch verknpften Glucoseeinheiten und kann als
79
80
4. Kohlenhydrate
Maltose [4-(D-Glucopyranosyl)-D-glucopyranose] oder Maltose [4-(D-Glucopyranosyl)-Dglucopyranose] auftreten, die sich durch die Konfiguration des anomeren C-Atoms der reduzierenden Hlfte
des Zuckers unterscheiden.
4
HO
-Maltose
4-O-(-D-Glucopyranosyl)--D-glucopyranose
CH2OH
O
H
HO
O 4
HO
HO
-glykosidische Bindung
CH2OH
O
freies Acetal,
reduzierender Zucker
OH
HO
Cellobiose besteht wie Maltose aus zwei Moleklen Glucose, die aber glykosidisch miteinander verknpft
sind. Sie entsteht beim Abbau von Cellulose; die Spaltung zu Glucose wird durch das Enzym Emulsin
[Glucosidase] bewirkt.
HO
HO
CH2OH
O
-D-Glucopyranose
O
HO
HO
Cellobiose
4-O-(-D-glucopyranosyl)--D-glucopyranose
D-Glu--(14)-D--Glu
CH2OH
O
H
HO
OH
isoliert.
HO
4
CH2OH
O 1
O
HO
HO
HO
OH
CH2OH
O
-Lactose
4-O-(-D-Galgactopyranosyl)--D-glucopyranose
D-Gal-(14)--D-Glu
HO
-D-Glucose
-D-Galactose
OH
HOH2C
OH
CH2
O
O
OH
HOH2C
O
OH
Trehalose
80
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
OH
HO
Melibiose
HO
HO
OH
OH
OH
OH
OH
Primverose
6-O--D-Xylopyranosyl-D-glucose
81
4. Kohlenhydrate
4.5.2 Oligosaccharide
Das verbreitetste Trisaccharid ist die Raffinose [D-Galactopyranosyl-(16)-D-glucopyranosyl-(12)D-fructofuranosid], die in zahlreichen Pflanzen vorkommt und aus Zuckerrbenmelasse gewonnen wird. Die
surekatalysierte Hydrolyse gibt je ein Mol D-Galactose, D-Glucose und D-Fructose, unter schwach-sauren
Bedingungen wird D-Fructose und das Disaccharid Melibiose. Gentianose [O-D-Fructofuranosyl -(21)D-glucopyranosyl-(61)-D-glucopyranosid] ist aus Gentiana-Arten isoliert worden, die Surespaltung
ergibt D-Fructose und Gentiobiose, Spaltung mit Emulsin D-Glucose und Saccharose. Weitere Trisaccharide
sind Kestose, Maltotriose und die Melicitose.
CH2OH
Raffinose
OH
O
OH
CH2
CH2OH
O
HO
O
O
OH
OH
O
OH
CH2OH
OH
HO
Tetrasaccharide bestehen aus vier Monosaccharideinheiten, zu ihnen zhlen die Stachyose [Lupeose, Cicerose,
Galactose-Galactose-Glucose-Fructose] aus den Wurzelknollen von Knollenziest [Stachys tubifera], die
Lychnose (Galactose-Glucose-Fructose-Galactose) und die Secalose (vier Fructose-Einheiten).
Cyclodextrine [CDs] sind cyclische, nicht reduzierende und kristalline Oligosaccharide, die aus Amylose durch
eine Amylase aus Bacillus macerans abgebaut werden [SCHARDINGEr-Dextrine]. Sie entstehen durch
Verknpfung der helikalen Windungen der Amylose (Formel 5-22) in den Formen , und -Cyclodextrin
und bestehen aus 6, 7 bzw. 8 Glucopyranoseeinheiten (Formel 5-18). Alle sekundren OH-Gruppen befinden
sich auf der einen, breiteren Seite, alle primren OH-Gruppen auf der unteren, schmleren Seite eines
konischen, toroidalen offenen Kegelstumpfs. Diese einzigartige Form ermglicht den Moleklen, andere
Substanzen einzuschlieen [molecular encapsulation]. Diese CD-Wirt-Gast-Komplexe sind relativ stabil, so
da modifizierte CDs heute als chirale Selektoren in der Flssig- und Gaschromatographie sowie in der
Kapillarelektrophorese eingesetzt werden.
HOH2C
OH O
HO
-Dextrin
CH2OH
O
1,69 nm
OH
HO
primre
OH-Gruppen
an C-6
O
HO
HOH2C
CH2OH
OH
0,95
hydrophobe
Cavitt
O
OH
HO
OHO
OH
HO
HOH2C O
O
CH2OH
n=1
2
3
-Cyclodextrin
-Cyclodextrin
-Cyclodextrin
sekundre
OH-Gruppen
an C-2 und C-3
81
82
4. Kohlenhydrate
4.6 Polysaccharide
Polysaccharide bestehen aus einer Vielzahl glykosidisch gebundener Zuckerkomponenten. Sind sie aus nur
einem Zuckermonomeren als Baustein zusammengesetzt, spricht man von Homopolysacchariden (Tab. 4-5), die
aus mehreren Zuckern aufgebauten heien Heteropolysaccharide (Tab. 4-6). In Polysacchariden knnen
mehrere Bindungstypen vorliegen, und ausgehend von einer Hauptkette mit reduzierender Endgruppe knnen
kammartige oder baumartige Verzweigungen auftreten.
Viele Polysaccharide sind Speichersubstanzen von Tieren, Pflanzen und Mikroorganismen und besitzen
Bedeutung als Strukturelemente. Sie bilden die Matrix der Zellwnde sowie das Exogerst verschiedener
niederer Tiere. Bestimmte Polysaccharid-Fragmente stellen immunologische Determinanten dar und sind fr
interzellulre Wechselwirkungen von Bedeutung.
Die wichtigsten Bausteine der Polysaccharide sind die Hexosen D-Glucose, D-Mannose, beide enantiomeren
Formen der Galactose sowie D-Fructose, die Pentosen L-Arabinose und D-Xylose, die 6-Desoxyzucker L-Fucose
und L-Rhamnose, die Aminozucker D-Glucosamin und D-Galactosamin, und die Uronsuren D-Glucuronsure,
D-Galacturonsure, D-Mannuronsure
und L-Iduronsure. Bis auf Fructose und Arabinose liegen in den Poly-
sacchariden alle Zucker als Pyranosen vor, bei einigen sind die Hydroxygruppen methyliert oder verestert,
esterartig vor allem an Schwefelsure gebunden. Polysaccharide mit Aminozuckern kommen meist nur in
Tieren vor, das einzige Homopolysaccharid dieser Art ist das Chitin.
Zahlreiche native und chemisch modifizierte Polysaccharide finden als Zustze zu Pharmaka, Nahrungsmitteln
und Kosmetika und in der Textilindustrie Verwendung. Sie werden meist aus pflanzlichen Materialien isoliert,
einige werden mikrobiologisch aus niedermolekularen Kohlenhydrat-Substraten wie Glucose, Fructose und
Saccharose gewonnen. Auch Alginsuren, die eine groe kommerzielle Bedeutung besitzen, konnten ebenso
mit Hilfe von Bakterien produziert werden.
Bei den Polysacchariden werden Strukturen hherer Ordnung gefunden, die auf intermolekulare Wechselwirkungen zurckzufhren sind. Die entscheidenden Krfte sind Wasserstoffbrckenbindungen sowie
Dipolwechselwirkungen und Ionenbeziehungen. Voraussetzung ist, da in den Polysaccharidketten Abschnitte
82
83
4. Kohlenhydrate
mit sich regelmig wiederholenden Sequenzen vorhanden sind, Unterbrechung dieser Regelmigkeit durch
Verzweigung oder Einbau eines anderen Zuckers fhrt zum Abbruch der geordneten Assoziation.
Der hchste Ordnungsgrad wird bei Polysacchariden mit ideal gestreckter Kette und damit der Mglichkeit zur
maximalen Ausbildung von Wasserstoffbrcken erreicht. Solche sind z.B. Cellulose oder Chitin mit D-glucoStruktur, die im festen Aggregatzustand Fasern oder Bnder ausbilden. Die Zucker liegen in diesen fibrillren
Polysacchariden in der Konformation vor, bei der die Substituenten quatorial angeordnet sind.
OH
OH
CH2OH
O
R
OH
O
R HOH2C
CH2OH
O
O
OH
R
Cellulose: R = H
Chitin:
R = NHAc
Zur Ausbildung eines festen "kristallinen" Zustandes sind nur lineare Homopolysaccharide und sequentielle
Heteropolysaccharide bzw. regelmig verzweigte Homopolysaccharide geeignet. Neben bandartigen
Strukturen, wie sie von Cellulose, Chitin und Mannanen ausgebildet werden, werden bei Polysacchariden im
festen Zustand auch Helixstrukturen (siehe Amylose) gefunden.
In Lsung liegen die meisten Polysaccharide wahrscheinlich als ungeordnetes Knuel [random coil] vor, in
einigen Fllen wurden jedoch auch bandartige oder helikale Sekundrstrukturen wahrscheinlich gemacht. Meist
kommt es gleichzeitig zu starken intermolekularen Wechselwirkungen und zur Ausbildung hherer
Ordnungszustnde. So wurden z.B. zweioder mehrstrngige Assoziate von Helices oder Bndern oder von
Helices mit Bndern beschrieben [REES].
4.6.2.2 Lslichkeit
Polysaccharide sind dann in Wasser lslich, wenn die zwischenmolekularen Wechselwirkungen des Polysaccharids durch Hydratation der Hydroxygruppen der Zuckerreste weitgehend unwirksam werden. Hochgeordnete Strukturen wie das D-Glucan Cellulose ist daher in Wasser praktisch unlslich. Durch partielle
Methylierung der Hydroxygruppen wird jedoch die Zahl der intermolekularen Wasserstoffbrcken verringert
und die Lslichkeit nimmt zu. Methylierte Cellulose mit einem Substitutionsgrad von 1 - 2 ist in Wasser lslich.
4.6.2.3 Gelbildung
Viele Polysaccharide bilden in Gegenwart von Wasser Gele. Dabei geht das ursprnglich in Lsung als random
coil vorliegende Polysaccharid [Sol] in eine netzwerkhnliche Struktur [Gel] ber, die durch permanente
Wechselbeziehungen zwischen den Polysaccharidmoleklen hervorgerufen wird. Das Gel besteht aus amorphen
Regionen mit Kettenabschnitten mit random coil-Konformation und Regionen hochgeordneter Strukturen, wie
durch Rntgendiffraktionsmessungen nachgewiesen werden kann.
83
84
Sol
4. Kohlenhydrate
G el
Abbildung 4-4. Schematische Darstellung der Gelierung von Polysacchariden (nach REES).
Der bergang Sol Gel erfolgt bei definierter Temperatur und ist mit den Phasenumwandlungen in Lipidschichten und der Denaturierung von Proteinen vergleichbar. Dabei treten auch Hystereseerscheinungen auf. So
"schmilzt" z.B. ein Agargel beim Erwrmen auf ca. 90 C, erstarrt beim Abkhlen jedoch erst wieder bei ca. 40
C.
Gelbildende Polysaccharide kommen vor allem in der Wand junger Pflanzenzellen, in tierischen Flssigkeiten
und Bindegeweben sowie in der Bakterienkapsel vor. Alginsuren, Pektine und Agar werden in der Lebensmittelindustrie
eingesetzt,
im
Laboratorium
haben
Gelbildner
Bedeutung
als
Kulturbden
von
Mikroorganismen und als Trger fr die Elektrophorese sowie bei der Gelfiltration. Fr letztere werden
insbesondere synthetische Gele eingesetzt wie quer vernetzte Dextrane.
4.6.2.4 Molekulargewichtsbestimmung
4.6.3 Homopolysaccharide
Homopolysaccharide sind nur aus einem einzigen Monosaccharid aufgebaut (Tab. 5-6) und nach diesem
Grundbaustein bezeichnet.
4.6.3.1 Glucane
84
85
4. Kohlenhydrate
Glucane sind die verbreitetsten Polysaccharide. Zu den D-Glucanen gehrt vor allem die D(14)
verknpfte Cellulose, zu den D-Glucanen zhlen die strkehnlichen Polysaccharide. (13)-, (14)- und
(16)-Bindungen kommen in Glucanen von Algen, Pilzen, Flechten und hheren Pflanzen vor.
Die Cellulose [D(14)-Glucan] besteht aus linear -glykosidisch verknpften Glucoseeinheiten und stellt
das hufigst vorkommende Kohlenhydrat dar. Jhrlich werden von Pflanzen etwa 10 Billionen t Kohlenstoff als
Cellulose gebunden. Baumwolle ist fast reine Cellulose (ca. 98 % des Trockengewichts), einen hohen
Prozentsatz an Cellulose enthalten Flachs, Hanf, Ramie und Jute. Holz besteht neben Hemicellulosen und
Lignin aus 40 - 50 % Cellulose, Grser zu etwa 30 %. Zur Entfernung der Nicht-Celluloseanteile des Holzes
sind industriell der Sulfit-Aufschlu und der alkalische Aufschlu bekannt, die danach anfallende Cellulose
wird als Cellulose bezeichnet und enthlt meist noch Hemicellulosen.
Cellulose besitzt als Zellstoff fr die Papierfabrikation Bedeutung, technisch wichtig sind die Cellulosenitrate,
die flschlicherweise als "Nitrocellulose" bezeichnet werden, und die in hochnitrierter Form unter dem Namen
Schiebaumwolle als rauchloses Schiepulver Verwendung finden. Geringer nitrierte Cellulose ist die
Kollodiumwolle, aus der durch Verkneten mit Campher Zelluloid entsteht. Celluloseacetat dient zur Herstellung
von Acetatseide und Sicherheitsfilm, mikrokristallines Cellulosetriacetat dient als stationre Phase fr
Enantiomerentrennung in der Flssigchromatographie.
HO
O
OH HOH C
2
OH HOH2C
O
HO
O
Cellulose
O
O
OH
Cellulose ist aufgrund ihres hohen Polymerisations- und Ordnungsgrades in Wasser und in allen organischen
Lsungsmitteln praktisch unlslich. Unter Einwirkung von Alkalilauge quillt sie zu Alkalicellulose, deren
mechanische
Bearbeitung
verschiedenste
Verarbeitungsformen
der
Hydratcellulose
wie
Papier,
86
4. Kohlenhydrate
Die Polysaccharidketten der Cellulose lagern sich zu Elementarfibrillen [Protofibrillen] von ca. 3.5 nm Durchmesser zusammen, die aus bis zu 36 Polysaccharidketten gebildet werden. Aus diesen Elementarfibrillen
werden dann Mikrofibrillen von 5 - 10 nm Durchmesser und 50 - 60 nm Lnge gebildet, die sich mit dem
Elektronenmikroskop erkennen lassen.
In nativer Cellulose mit ungefhr 70 % Kristallinitt sind neben greren Bereichen hochgeordneter Abschnitte
auch solche geringerer Ordnung (amorphe Bereiche) anzutreffen (Abb. 4-6). In der sekundren Zellwand der
Pflanzen sind die Cellulosefibrillen in eine Matrix aus anderen Polysacchariden (Hemicellulosen, Pektine) und
Lignin eingebettet.
Das Molekulargewicht der Cellulose liegt zwischen 200.000 und 1,000.000 Da, der durchschnittliche
Polymerisationsgrad der nativen Cellulose liegt bei ca. 1.000 (Methode der chemischen Endgruppenbestimmung). Ultrazentrifugation sowie Viskositts- oder Trbungsmessungen ergaben Werte zwischen 5.000
und 10.000.
D(13)-Glucane kommen in Pilzen, Algen und hheren Pflanzen vor. Am besten untersucht ist das
Laminaran der Braunalge Laminaria, das auerdem noch (16)-verzweigt ist. (13)- und (14)-Bindungen
enthlt das Lichenan des Islndischen Mooses [Cetraria islandica], dessen getrocknete Thalli [Lichen
islandicus] als Schleimdroge pharmazeutische Anwendung finden. Ein (12)-Glucan wird als extrazellulres
Polysaccharid vom pflanzenpathogenen Agrobacteria produziert. Das (16)-Glucan Pustulan wird von der
Flechte Umbilicaria pustulata gebildet.
Die wichtigste Gruppe der D-Glucane sind die strkehnlichen Polysaccharide Amylose, Amylopektin, und
Glycogen mit (14)- bzw. (14)- und (16)-Bindungen, ferner gehren dazu verschiedenen Polysaccharide
von Mikroorganismen sowie die Dextrane und das Pullulan. Letzteres wird von Kulturen von Pullularia
pullulans produziert, hefehnlichen Pilzen, die mit Saccharose als C-Quelle wachsen. Es enthlt regulr
verteilte (14)- und (16)-Bindungen mit folgender Teilsequenz:
86
87
4. Kohlenhydrate
---Glc-(16)-Glc-(14)-Glc-(14)-Glc-(16)-Glc-(14)---
Strke ist das Assimilationsprodukt grner Pflanzen und ist als Hauptbestandteil von Kartoffeln, Getreide und
Reis ein wichtiges Nahrungsmittel. Die Vergrung von Strke fhrt ber Maltose und Glucose zu Ethanol. Sie
ist die Glucosespeicherform der meisten hheren Pflanzen und wird in Form kleiner wasserunlslicher Krner
[Granula] in den Chloroplasten abgelagert. In diesen Strkegranula gibt es kristalline und amorphe Regionen,
die gegenber Hydrolyse verschiedene Stabilitten aufweisen.
Polysaccharid
Bindung
Vorkommen
-D-Glucane
Cellulose
14
in Pflanzen
Laminaran
13, 16
Lichenan
13, 14
Pustulan
16
Amylose
14
in Pflanzen
Amylopektin
14, 16
in Pflanzen
Glycogen
14, 16
in Tieren
Dextran
16, 13
Leuconostoc-Arten, Bakterien
-D-Glucane
14, 12
Pullulan
Pullularia pullulans
14, 16
Nigeran
Aspergillus niger
13, 14
Isolichenan
Cetraria islandica
13, 14
-D-Aminoglucane
Chitin
14
-D-Fructane*
Inulin
21
Asteraceae, Pflanzen
Levan
26
Bakterien, Poaceae
14
Landpflanzen
-L(13)
-D-Mannane
Galactane
Agarose
-D(14)
Carrageenane
-L-Arabinane*
-D-Xylane
Xylan
-D(13)
-D(14)
Gigartina stellata)
15, 13
in zahlreichen Pflanzen
14
* als Furanoside
Strke ist ein Gemisch aus 15 - 25 % Amylose und 75 - 85 % Amylopektin, die sich durch ihre Lslichkeit, ihre
Molmasse und ihre Farbreaktion mit einer Iodlsung unterscheiden. Die Amylose besteht im wesentlichen aus
etwa 100 - 1.400 glykosidisch 1,4-verknpften D-Glucopyranoseeinheiten (15.000 - 220.000 Da) in Form
87
88
4. Kohlenhydrate
linearer Ketten, und zu einem geringen Teil aus glykosidischen Bindungen in Verzweigungen. Amylose lst
sich in heiem Wasser kolloidal ("lsliche Strke") und lt sich mit Alkohol wieder ausfllen.
O
HO
CH2OH
O
HO
O
HO
CH2OH
O
HO
O
HO
Amylose
CH2OH
O
HO
O
Verknpfte Glucane kommen zum Unterschied von den (14)-Glucanen nicht als Fibrillen vor, die
glykosidische Bindung bedingt eine schraubenfrmige Anordnung der Glucosereste. Fr die sog. V-Form der
Amylose, die durch Fllen mit Alkohol erhltlich ist, konnte eine Helix mit 6 (oder weniger hufig mit 7)
Glucoseresten pro Windung wahrscheinlich gemacht werden. Das Innere dieser Helix ist hydrophob und es
knnen sich in die rhrenartigen Strukturen Molekle passender Gre einlagern. Einschluverbindungen
dieser Art bildet z.B. Iod, wobei die Farbe der Iodeinschluverbindung durch Wechselwirkung der
Elektronenhlle des Iods mit den Hydroxygruppen der Amylose zustandekommt. Der Amylose-Iod-Komplex,
der in der Iodometrie als Indikator Anwendung findet, enthlt 19.5 % Iod und ist krftig blau gefrbt (lmax = 660
nm).
Amylopektin, etwa 80 % der Strke, ist stark verzweigt und besitzt eine Molmasse von etwa 400.000 1,000.000 Da. Die einzelnen Ketten sind noch durch 4 - 6 % a(16)-glykosidische Bindungen vernetzt, die
(14)-verknpften Seitenketten bestehen aus jeweils 20 bis 25 Glucoseresten. Amylopektin quillt in heiem
Wasser und bildet viskosen Strkekleister. Es reagiert mit Iod unter Rotfrbung (lmax = 540 nm), der IodKomplex enthlt 0.5 - 0.8 % Iod.
O
HO
CH2OH
O
CH2OH
O
(14)-Seitenkette
CH2OH
Amylopektin
O
O
O
HO
HO
HO
CH2OH
HO
O
O
(16)-Verzweigung
O
HO
H2C
HO
O
O
(14)-Hauptkette
HO
HO
O
HO
Glykogen ist die Reservestrke und Speicherform der D-Glucose der Tiere und wird vor allem in der Leber und
in den Muskeln angereichert, ist aber auch in den Zellen von Invertebraten und Protozoen enthalten. Es besteht
aus hochverzweigten D-Glucose-Ketten; die Moleklmassen schwanken zwischen 4,000.000 und 14,000.000
Da. Der Aufbau des Glykogens entspricht etwa dem des Amylopektins, allerdings ist es strker verzweigt und
die Seitenketten sind krzer (10 - 14 Glucoseeinheiten). Trotz der hohen Moleklmasse ist Glykogen noch gut
wasserlslich. Im Maiskorn ist ein Glucan enthalten, das dem Glykogen hnliche Eigenschaften aufweist
und als Phytoglykogen bezeichnet wird.
88
89
4. Kohlenhydrate
Dextrane sind schleimartige neutrale Polysaccharide und werden von Bakterien, vor allem der Gattung
Leuconostoc mit Saccharose oder Raffinose als Substrat produziert und in die Kulturflssigkeit abgegeben.
Bakterien der Mundhhle bilden mit dem Zucker aus der Nahrung einen Dextranfilm, der eine wesentliche
Rolle bei der Ausbildung von Caries spielt. Dieser Film erleichtert die Kolonisierung cariogener Bakterien und
dient ihnen als Nahrungsquelle. Dextrane werden in Klebstoffen, Leimen, Filmen, Anstrichmitteln, Papier- und
Textilfinishes und Kosmetika eingesetzt. Die Bildung hochmolekularer, unlslicher Dextrane kann
verantwortlich fr das Verstopfen von Filtern, Ventilen und Rohrleitungen in der zuckerverarbeitenden
Industrie sein. Hydrolytisch abgebaute Dextrane dienen als Blutplasmaersatz [Plasmaexpander]
4.6.3.2 Chitin
Chitin ist das einzige Homopolysaccharid, das aus einem Aminozucker (N-Acetyl-D-glucosamin) aufgebaut ist.
Es dient im Pflanzen- und Tierreich als Gerstsubstanz, in Pilzen und Grnalgen ist es Bestandteil der Zellmembran, bei Insekten und Crustaceen Hauptbestandteil des Exogerstes. Analog zur Cellulose sind N-AcetylD-glucosamin-Molekle
haft aus Hummer- oder Krebsschalen isolieren, eine einzige Krabbenart erzeugt jhrlich schtzungsweise
mehrere Millionen Tonnen Chitin.
HOH2C
O
O
HO
AcHN
AcHN
HO
O
HOH2C
HOH2C
O
HO
Chitin
O
O
AcHN
4.6.4 Heteropolysaccharide
Heteropolysaccharide sind aus mehr als einem Monosaccharid-Baustein aufgebaut und werden entsprechend
der Struktur der Monomeren eingeteilt.
4.6.4.1 Glycane
89
90
4. Kohlenhydrate
4.6.4.3 Glycuronane
Glycuronane oder Polyuronide sind Polysaccharide, deren Ketten hauptschlich aus Glycuronsuren. Daneben
gibt
es
zahlreiche
Heteropolysaccharide
[Glycanoglycuronane]
und
komplexe
Polysaccharide
Pektinsubstanzen kommen vor allem in der Zellwand und der Interzellulrschicht sowie in den Sften von
Landpflanzen, aber auch bestimmten Algen vor. Grundbaustein ist eine (14)-verknpfte D-Galactopyranuronsure, in der Kette knnen neutrale Zucker wie L-Rhamnose eingebaut sein. An das Galacturonan sind
Galactane, Arabinonane, Galactoxylane oder Xylofucane gebunden. Bei den Pektinsuren liegen die
Carboxylgruppen der Galacturonsurenreste in freier Form vor, bei den Pektinen sind sie mit Methanol
verestert.
4)-D-GalUA(12)-L-Rha-(14)-D-GalUA-(14)-D-GalUA(1
n
D-Galactan
oder L-Araban
GalUA = Gal-uronsure
D-Galactoxylan oder
D-Xylo-L-fucan
Pektinsuren bilden in Gegenwart von Ca2+- oder Mg2+-Ionen in der Pflanze einen unlslichen Komplex, der als
Protopektin bezeichnet wird. Durch enzymatische Methylierung, wie sie in reifen Frchten stattfindet, entsteht
daraus lsliches Pektin. Diese Pektine bilden in Gegenwart von Zuckern stabile Gele, sind fr die Gelierung
von Fruchtsften verantwortlich und finden z.B. bei der Marmeladenbereitung Verwendung.
Braunalgen [Phaeophyta] enthalten als Zellwand-Polyuronide die Alginsuren. Mit einem MG von etwa
200.000 besteht Alginsure aus homopolymeren Blcken von (14)-verknpfter D-Mannopyranuronsure
bzw. (14)-verknpfter L-Gulopyranuronsure von verschiedener Lnge und Blcken mit alternierender
Sequenz beider Uronsuren.
Sie wird fr kommerzielle Zwecke meist aus Braunalgen der Gattung Laminaria, Macrocystis und Ascophyllum
isoliert, konnten aber auch mit Hilfe der Bakterien Pseudomonas aeruginosa und Azobacter vinelandii
produziert werden. Das lineare Glycuronan liegt in den Algen als Ca-Salz vor, beim Ansuern fllt die Alginsure als gelatinser Niederschlag aus.Das Natriumsalz oder der 2-Hydroxypropylester der Alginsure finden
Verwendung als Verdickungsmittel in der Lebensmittelindustrie (z.B. fr Eiscremes) sowie in der
pharmazeutischen Technologie als Tablettensprengmittel.
COOH
O
O
OH HO
4.6.4.46 Glycanoglycuronane
90
O
COOH
OHHO
91
4. Kohlenhydrate
Polysaccharide dieser Gruppe sind hinsichtlich ihrer Monomeren-Struktur, der Bindungstypen sowie der Art
der Verzweigungen sehr variabel aufgebaut. Zu den Glycanoglycuronanen gehren die meisten Gummen und
Schleime der Pflanzen. Als Schleime werden Polysaccharide bezeichnet, die meist in der Zellwand der Pflanze
vorkommen und hochviskose, kolloidale Lsungen bilden. Die festen, klebrigen Gummen werden dagegen erst
nach Verletzung gebildet und ausgeschieden. Sie kommen vor allem in Bumen der Fabales vor.
Die Gummen kommen als Ca- oder Mg-Salze vor, einige wie z.B. Gummi arabicum oder Tragacantha werden
als Verdickungsmittel und als Emulsionsstabilisator in der pharmazeutischen in der Lebensmitteltechnologie
verwendet. Am besten bekannt ist Gummi arabicum, das von verschiedenen Acacia-Arten gebildet wird. Die
salzfreie Arabinsure ist ein Glycuronogalactan, das zustzlich noch L-Arabinose und L-Rhamnose enthlt.
Tragant [Tragacantha] wird von verschiedenen Astragalus-Arten [Leguminosae] Kleinasiens gebildet.
4.6. Heparin
Heparin, aus Lungen von Schlachttieren gewonnen, ist ein geradkettiges Heteropolysaccharid, das grtenteils
aus Glucosamin und Glucuronsure besteht und ein Molgewicht von 5.000 - 40.000 Da besitzt. Es bildet salzartige Verbindungen mit Proteinen. Die saure Reaktion kommt durch Schwefelsure zustande, die esterartig an
Hydroxygruppen oder amidartig an die Aminogruppe von Glucosamin gebunden ist. Da Heparin die
Blutgerinnung durch Einwirkung auf Thrombin hemmt, hat es therapeutisch als Antikoagulans Bedeutung.
O
SO3OH
-
O2 C
O
O
OSO 3-
O
HO
H2C
Heparin
OH
Schwefelsureester
OH
HN O
O3SO
O
n
HN
OH
Schwefelsureamid
hnliche sulfatisierte Polysaccharide besitzen Bedeutung als Chemotherapeutika bei der Behandlung von AIDS
[acquired immune deficiency syndrome]. Das HIV-Virus [human immunodeficiency virus] zerstrt irreparabel
das menschliche Immunsystem, soda fr HIV-positive Patienten ein antivirales Therapeutikum mit geringer
Toxizitt verlangt wird, dessen Einnahme bereits vor dem Ausbruch der eigentlichen Symptome erfolgen soll
und das ber einen langen Zeitraum, gegebenenfalls lebenslnglich, eingenommen werden mu. Neben
Nucleosidanalogen werden klinisch antiviral wirkende sulfatisierte Polysaccharide, wie das aus Seealgen und
Pilzen extrahierte Dextransulfat, verwendet.
4.7.1.3 Glykoproteine
Glykoproteine sind N-glykosidisch verknpfte Oligo- und Polysaccharid-Seitenketten von Proteinen und treten
gemeinsam mit den Proteoglykanen in den Blutgruppensubstanzen, Nervenenden und Zellmembranen auf.
91
92
4. Kohlenhydrate
Glykoproteine wurden hauptschlich in hheren Tieren gefunden. Von den ca. 60 Proteinen des menschlichen
Krpers scheinen nur zwei, Albumin und Pralbumin, nicht glykosyliert zu sein. Weit verbreitet sind sialinsurehltige Glykoproteine [Sialoglykoproteine], die vor allem als Bestandteile von Schleimstoffen und des
Glykocalyx der Zelloberflche vorkommen. Natrliche Glykoproteine erfllen bei biologischen Prozessen
vielgestaltige Aufgaben als Glykoenzyme, Proteohormone (Gonadotropine, Thyrotropin, Thyroglobulin),
Milch- und Eiproteine sowie Lectine, Toxine, Transportsysteme, Immunglobuline, Plasmaproteine oder
Strukturproteine.. Der Oligosaccharidanteil dient fr die Zell-Zell-Erkennung, fungiert weiter als Rezeptor fr
Hormone, Proteine und Viren und ist verantwortlich fr die Immunreaktionen. Viele Glykoproteine sind
Polymere von Subeinheiten. Charakteristisch ist, da Glykoproteine weniger empfindlich gegenber
proteolytischen Enzymen und Denaturierung sind als andere Proteine.
Als Kohlenhydratkomponente enthalten Glykoproteine vor allem D-Mannose und 2-Acetamino-2-desoxy-Dglucose. Einige hufig vorkommende Sequenzen sind in Abb. 5-8 zusammengefat.
NaeAc-(22)-Gal-(14)-GlcNac-(12)-Man-(13)
Man-(14)-GlcNac-(14)-GlcNAc-Asn
NeuAc-(26)-Gal-(14)-GlcNac-(12)-Man-(16)
-Amylase, Ribonuclease B (Rind, Schwein)
Ovalbumin, Prothrombin (Rind), Thyroglobulin (Mensch, Kalb,
Schwein), Taka-Amylase
IgE, IgM (Mensch), Ig G (Mensch, Rind)
IgE, IgM (Mensch), Ig G (Rind), Thyroglobulin (Schwein)
Myeloma-IgE (Mensch), menschliches Sero- und Lactotransferrin
Der Kohlenhydratgehalt der Immunoglobuline kann zwischen 2 - 3 (IgG) und 10 - 12 % (IgM) schwanken. Die
Kohlenhydratkomponenten spielen wahrscheinlich eine Rolle beim Transport der intrazellulr synthetisierten
Immunoglobuline in den Extrazellulrraum.
Die Plasmamembran der Bakterien ist von einer elastischen Zellwand umgeben. Aufgrund des
unterschiedlichen Verhaltens dieser ueren Zellwand bei der Gramfrbung, einer im 19. Jahrhundert vom
dnischen Bakteriologen CHRISTIAN GRAM entwickelten Frbemethode, lassen sich Bakterien in zwei Gruppen
einteilen. Bei den gram-positiven Bakterien bleibt der Farbstoff aus Kristallviolett mit Iodiodkalium-Lsung
nach dem Behandeln mit Alkohol bestehen, bei den gram-negativen Bakterien wird er entfrbt. Das
unterschiedliche Verhalten wird auf Unterschiede in der Maschenweite der Zellwandmatrix zurckgefhrt, die
bei gram-positiven Bakterien kleiner ist, so da der sperrige Komplex nicht herausgelst werden kann.
92
93
4. Kohlenhydrate
Den schematischen Aufbau der Zellwand gram-positiver und gram-negativer Bakterien zeigt Abb. 5-9. Die feste
Matrix der bakteriellen Zellwand besteht aus einer Peptidoglykanschicht, dem Murein. Das Netzwerk des
Peptidoglykans wird aus linearen Glykanstrngen gebildet, die durch Peptidketten quervernetzt sind (Abb. 510). Bei gram-negativen Bakterien ist die Zellwand dnner und weniger stark vernetzt als bei gram-positiven
Bakterien. Zustzlich sind gram-negative von einer ueren Membran umhllt, die aus Phospholipiden und
Lipidpolysacchariden besteht.
Abbildung 4-9. Aufbau grampositiver und gramnegativer Zellwnde. Gram-negative Bakterien verfgen
zustzlich ber eine uere Membran.
Das Glykan ist ein Blockpolymer aus (14)-verknpftem N-Acetylglucosamin und N-Acetyl-3-Olactylglucosamin (N-Acetylmuramsure). Jeder Strang enthlt 10 bis 50 derartiger Disaccharideinheiten. An die
Carboxylgruppe der Muramsurereste ist amidartig ein Tetra- oder seltener Pentapeptid gebunden, bei dem Dund L-Aminosuren alternieren.
Abbildung 4-10. Schematische Darstellung des Mureins der Zellwand von Bakterien der Gruppe A.
MurAc-Ala-D-iGln [Muramyldipeptid, MDP] ist die kleinste sich wiederholende Einheit der Zellwand von
grampositiven Mycobakterien. Es bewirkt die Stimulation von Antikrpern und vergrert die Resistenz gegen
verschiedene pathogene Mikroorganismen. Als Nebenwirkung ist vor allem die Fieberreaktion [pyrogen] zu
nennen. Unmittelbar an der Muramsure sitzt meist L-Alanin (Abb. 5-10), am Ende des Oligopeptids D-Alanin.
Nach der Art der Quervernetzung werden zwei Gruppen von Peptidoglycanen unterschieden. Bei der Gruppe A
kommt die Quervernetzung durch eine Diaminosure zustande, deren o-Aminogruppe direkt (bei gramnegativen Bakterien) oder ber eine weitere Peptidkette (bei gram-positiven Bakterien) mit dem D-Alaninrest
der nchsten Einheit verbunden ist.
93
94
HOH2C
HO
4. Kohlenhydrate
O
OH
Muramyldipeptid MDP
NHAc
H
N
H
L-Ala
CO2H
CONH2
D-isoGlu-NH2
Das einfachste Verfahren zur Totalsynthese von Kohlenhydraten basiert auf der basischen Oligomerisierung
von Formaldehyd. Aus Formaldehyd entsteht Glycolaldehyd, der in einer Aldolreaktion Glycerinaldehyd ergibt.
Weitere Aldolkondensationen, gleichzeitig auftretende Isomerisierungen und Epimerisierungen lassen ein
Gemisch gerad- und verzweigtkettiger Monosaccharide verschiedenster Konfiguration [Formose] entstehen.
Diese sog. Formose-Reaktion besitzt prparativ wenig Bedeutungbesitzt; im Rahmen von Untersuchungen
prbiologischer Synthesen ist jedoch interessant, da bei der Formosereaktion vor allem Hexosen und Pentosen
entstehen (Formel 5-26).
H C
H
H C
C
O
CH2OH
Glycolaldehyd
H C
+ HCH=O
Formaldehyd
+ HCH=O
CHOH
C(OH)CH 2OH
CH2OH
CH2OH
Glycerinaldehyd
+ Glycolaldehyd
H C
CHOH
Formose
CHOH
Aldotetrose
CH2OH
Der Aufbau von Kohlenhydraten ist durch eine Vielzahl von CC-Verknpfungen denkbar. Whlt als
Ausgangsverbindungen fr die Aldolreaktion grere Synthone, so wird die Isomerenzahl eingeschrnkt. Dies
gilt z.B. fr die Kondensation von Dihydroxyaceton und Glycerinaldehyd [FISCHER, 1887], die in Gegenwart
von Ba(OH)2 neben einem verzweigten Zucker zu einem Gemisch von Fructose und Sorbose fhrt. Dabei wird,
wie auch an anderen Beispielen gezeigt, bevorzugt die threo-Konfiguration (trans-stndig) der neugebildeten
asymmetrischen C-Atome C-3 und C-4 beobachtet.
94
95
4. Kohlenhydrate
CH2OH
Dihydroxyaceton
+
CHO
Na2CO3
HC OH
HO CH
CH2OH
Br2
C O
C O
CH2OH
CHOH
CH2OH
CH2OH
C O
Ba(OH)2
HO CH
HC OH
HC OH
HC OH
CH2OH
HC OH
CH2OH
D-Fructose
Glycerol
CH2OH
CH2OH
D-Sorbose
Glyceraldehyd
Die Entwicklungen von enantioselektiven, stereoselektiven und diastereoselektiven Synthesen und der Einsatz
billiger Monosaccharide und ihrer Derivate als chirale Synthone [Chirone] erweckte in den letzten Jahren
besonders das Interesse an Synthesen in der Kohlenhydratchemie. SHARPLESS-Epoxidierung und PUMMERERReaktion sind die Schlsselreaktionen eines Syntheseprinzips von MASAMUNE, SHARPLESS und Mitarbeitern,
das hier am Beispiel der stereoselektiven Totalsynthese von L-Mannose hier demonstriert wird. Aus einem (E)Allylalkohol 17 entsteht durch Sharpless-Epoxidierung unter Verwendung von (+)-Weinsurediethylester [(+)AE] der optisch aktive Epoxyalkohol 18, welcher im Gleichgewicht mit dem Positionsisomeren 19 [PAYNEUmlagerung]
steht.
Substitution
mit
Thiophenol,
PUMMERER-Reaktion,
reduktive
Spaltung
und
Acetonidbildung fhren zum Derivat 21 der L-Erythrose. In einem zweiten Reaktionszyklus wird durch (E)selektive WITTIG-Olefinierung mit Formylmethylenphosphoran, NaBH4-Reduktion, erneuter asymmetrischer
Epoxidierung mit (-)-Weinsurediethylester das Epoxy-hexosederivat 22 erhalten, das durch PAYNEquilibrierung, Epoxidffnung und Acetonidbildung, erneuter PUMMERER-Reaktion, Umwandlung der
Acetoxysulfid- in die Aldehydgruppe, und Abspaltung der Schutzgruppen zu L-Mannose fhrt.
OH
SHARPLESS-
RO
SC6H5
OH
Oxidation
(+)-AE
HO
C6H5-SH
HO
OH-
HO
RO
RO
17
19
18
OR
CHO
O
1. Ph3P=CH-CH=O
2. NaBH4
3.
SHARPLESSOxidation
1. OH-, C6H5-SH
O
20
SC6H5
SC6H5
O
2. Acetylbildung
CHO
OH
OH
HO
HO
OH
OR
21
22
OR
23
OR
L-Mannose
R = CH(C6H5)2
die
entsprechenden
(E)bzw.
(Z)-Allylalkohole
25
berfhrt.
Die
Oxidation
mit
tert-Butyl
95
96
4. Kohlenhydrate
OH
D-AE
OH
OH
R
O
(E,2R)-26
OH
OH
erythro-(2S)-27
OH
(E)-25
L-AE
OH
OH
(E,2S)-26
R-CH=O
OH
erythro-(2R)-27
24
O
D-AE
OH
OH
OH
R
R
OH
OH
(Z,2R)-26
threo-(2S)-27
R
(Z)-25
L-AE
OH
O
OH
OH
R
OH
AE = Weinsureester
(Z,2S)-26
threo-(2R)-27
4.8.2 Partialsynthesen
Einige Monosaccharide zhlen zu den billigsten enantiomerenreinen Verbindungen und werden durch gezielte
Manipulation einzelner Hydroxygruppen hufig als Ausgangsstoffe zur Synthese chiraler Molekle
herangezogen. In der Kohlenhydratsynthese sind damit vorrangig Kettenverlngerung bzw. -verkrzung von
Bedeutung.
Die klassische C5+C1-Verknpfung zum Aufbau von Aldohexosen ist die Cyanhydrinsynthese nach KILIANIFISCHER mit D-Arabinose (Formel 4-28). Addition von HCN an Arabinose gibt ein Cyanhydrin, dessen
neugebildetes Chiralittszentrum C-2 racemisch ist. Durch Hydrolyse werden zwei diastereomere Carbonsuren
bzw. Lactone gebildet, deren anschlieende Reduktion zu einem Gemisch aus D-Glucose und D-Mannose mit
unterschiedlicher Stereochemie an C-2 fhrt.
96
97
COOH
CN
CHO
CHOH
CHOH
HO
4. Kohlenhydrate
HO
HO
H+ / H2O
HCN
- H2O
OH
OH
OH
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
D-Gluconsurenitril
+
D-Mannonsurenitril
CH2OH
D-Arabinose
D-Gluconsure
+
D-Mannonsure
CHO
CHO
O
C
H
CHOH O
HO
OH
HO
HO
HO
Na / Hg
OH
CH2OH
OH
OH
OH
OH
CH2OH
D-Mannose
CH2OH
-Lactone
D-Glucose
Statt eines 1:1-Gemisches der Diastereomeren wird dabei bevorzugt das Epimere gebildet, bei dem die
Hydroxyle am C-2 und C-3 trans-stndig angeordnet sind (Mannose). Dies ist nach der CRAM'schen Regel nicht
zu erwarten, nach der der CN-Angriff von der sterisch weniger gehinderten Seite erfolgen sollte. Bevorzugtes
Produkt sollte Glucose sein.
H
CN
O
C
HO
HO
HO
HO
H
R
mehr RH weniger
gehindert gehindert
HR
H
CN
HO
H
H
OH
RCN
H
HO
Arabinose
CH=O
OH
H
OH
HO
H
R
Glucose
hnliche und weitere Reaktionen zur aufbauenden Partialsynthese sind z.B. a) die KUHN-Variante der
Cyanhydrinsynthese zur Darstellung von 2-Amino-2-desoxyzuckern, b) die NEF-Reaktion, c) WITTIG-Reaktion
zur Darstellung von 2-Desoxyaldosen und d) die Umsetzung mit Diazomethan mit anschlieender WOLFFUmlagerung.
97
98
CN
CHO
a)
b)
CH=O
HCN
NH3
CHO
HC NH2
Base
KUHN-Variante der
Cyanhydrinsynthese
2-Amino-2-desoxyaldose
HC NH2
R
HC NO2
CHOH
R'
CH2 NO2
R'
4. Kohlenhydrate
NEF-Reaktion
NEF-Reaktion
R = H Aldose
R = Alkyl Ketose
CHOH
NaOH / H2SO4
R'
Base
NO2
1. Reduktion
2. NEF-Reaktion
NaOH / H2SO4
CH2
CH
R'
HC O
c)
2-Desoxyzucker
R'
CH3OCH
PPh3
Hydrolyse
HC CH OCH3
HC O
R
R
CH2
2-Desoxyzucker
R
CHO
O
O
d)
HC O
HC
CH2N2
C Cl
N2
C O
W OLFFUmlagerung
R
R
H2O
CH
R
R
H2C
OH
C=O
2-Ketose
1. CH3COOH
2. Hydrolyse
R CH2
COOH
Onsure eines
2-Desoxyzuckers
Beim WOHL-Abbau [WOHL und ZEMPLEN] wird eine Aldose in die um ein C-Atom rmere Aldose berfhrt.
Dabei wird z.B. eine Hexose zunchst in ihr Oxim berfhrt, Acetylierung und Wasserabspaltung gibt ein
Nitril, welches beim Behandeln mit NH3/AgO oder Natriummethanolat Blausure abspaltet. Die Hydrolyse der
Acetate fhrt zum verkrzten Zucker, das C-2-Atom des ursprnglichen Zuckers wird Trger der neuen
Carbonylfunktion (Formel 5-31).
H
CHO
NOH
N
CHO
HO
HO
OH
HO
AcO
OH
NH2OH
Ac2O
HO
OAc
1. CH3ONa / CHCl3
OH
HO
AcO
2. H2O
OH
OH
OAc
OH
CH2OH
CH2OH
CH2OAc
CH2OH
D-Idose
Oxim
Nitril
D-Xylose
Der WOHL-Abbau gibt die Mglichkeit, in Verbindung mit der Oxidation zu Aldarsuren (Formel 5-32) die vier
mglichen Aldopentosen zu unterscheiden. Unterwirft man eine Aldopentose dem Wohlabbau und oxidiert die
resultierende Aldotetrose zur entsprechenden Dicarbonsure, so lt sich aus deren optischer Aktivitt bzw.
Inaktivitt die Konfiguration der ursprnglichen Aldopentose ableiten.
98
99
CHO
CHO
COOH
4. Kohlenhydrate
CHO
CHO
Oxidation
W OHL-
W OHL-
Abbau
Abbau
D-Weinsure
(optisch aktiv)
Oxidation
CH2OH
CH2OH
CH2OH
D-Lyxose
D-Arabinose
CH2OH
COOH
COOH
CH2OH
Der RUFF-Abbau einer D-Aldose verluft ber die entsprechende Aldonsure, deren Calciumsalz mit H2O2 in
Gegenwart von Eisen-III-acetat CO2 abspaltet und in die um ein C-Atom kleinere Aldose bergeht.
COOH
COOH
CHO
CHO
OH
OH
OH
OH
1. Ca(OH)2
OH
OH
OH
2. Fe+++ / H2O2
OH
OH
OH
OH
CH2OH
CH2OH
CH2OH
OH
- CO2
OH
OH
CH2OH
D-Ribose
D-Allonsure
D-Allose
Zu einer um ein C-Atom verkrzten Aldose gelangt man hnlich durch Oxidation zur Aldonsure und
anschlieende oxidative Spaltung mit FENTON-Reagens (H2O2/Fe(II)SO4).
CH=O
COOH
CH-OH
NaOBr
CH=O
CH-OH
H2O2
+ CO2 + H2O
R
R
FeSO4
Aldonsure
Aldose
verkrzte
Aldose
Beim WEHRMANN-Abbau wird das Sureamid einer Aldonsure einem HOFMANN-Sureamidabbau unterworfen.
NH2
CH=O
COOH
C=O
CHOH
CHOH
CHOH
NaOBr(Cl)
R
Aldose
Aldonsure
HOFMANNAbbau
H
R C N
OH
+ H2O
R
C O
H
C
O
NH2
R
- CO2
C H
OH
Sureamid
verkrzte
Aldose
Durch Kondensation von 3-Phenylthiopropanal mit Dihydroxyacetonphosphat mittels D-Fructose-1,6diphosphat-Aldolase aus Kaninchenmuskel [RAMA] und saurer Phosphatase [H+-Pase] erhielten WHITESIDES
et al. in einer chemoenzymatischen Synthese das Hydroxyketon 28. Die Ketofunktion lt sich mit Sorbitoldehydrogenase [SDH] diastereoselektiv zu 29 reduzieren, der (S)-Alkohol 29 acetylieren und zum Sulfoxid 30
oxidieren. Durch Eliminierung des PhSO-Gruppe (31) und Ozonspaltung wird L-Xylose erhalten. Die
99
100
4. Kohlenhydrate
PUMMERER-Umlagerung liefert andererseits aus 30 das Hemithioacetal 32, das mit DIBALH in die 2-Desoxy-Lxylo-hexose berfhrt werden kann.
OP
OH
OH
OAc
OH
OAc
HO
1. Ac2O
HO
HO
1. RAMA
2. H - Pase
O
H
OH
OH
H
H
SPh
OAc
SDH
H
SPh
28
2. m-CPBA
OAc
H
H
SPh
SPh
29
30
O
OAc
HC
OAc
O
H
HO
O3
AcO
OH
OAc
HC
O
OAc
OAc
HO
AcO
OH
HO
DIBALH
OH
HO
OAc
31
OH
L-Xylose
2-Desoxy-L-xylo-hexose
32
H
SPh
O
Monosaccharide besitzen mehrere Chiralittszentren und sind optisch aktiv, empirisch gefundene
Zusammenhnge zwischen Struktur und Konfiguration werden durch die HUDSONschen Regeln ausgedrckt.
Nach der 1. HUDSONschen Regel ist das Anomere in der D-Reihe immer strker rechtsdrehend als das
entsprechende Amonere, die 2. Regel besagt, da das Drehvermgen durch den bergang von der cyclischen
Halbacetalform des Monosaccharids zum Glykosid kaum beeinflut wird. Diese Regeln basieren auf der
Isorotationsregel, die besagt, da sich das Drehvermgen eines Anomeren aus dem Beitrag des Strukturteils
mit dem C-1-Chiralittszentrum und dem Teil mit den restlichen chiralen Zentren zusammensetzt.
Monosaccharide zeigen ber 200 nm kein Absorptionsmaximum und dementsprechend auch keinen COTTONEffekt. Letzterer tritt erst bei Zuckerderivaten auf, die chromophore Gruppen tragen, und bei zahlreichen
Glykoside wie Pyrimidin- und Purinnucleoside oder Flavonglykoside.
4.9.2 1H-NMR-Spektroskopie
Die 1H-Kernresonanzspektroskopie spielt bei der Ermittlung von Konformation und Konfiguration von Zuckern
eine wesentliche Rolle. Die Kopplungskonstanten miteinander koppelnder Protonen sind abhngig von deren
Diederwinkel [KARPLUS-Gleichung], so da D- und D-Glucopyranoside leicht unterschieden und
100
101
4. Kohlenhydrate
zugeordnet werden knnen. Bei Kohlenhydraten wurde auch erstmals beobachtet, da quatoriale Protonen im
allgemeinen bei tieferem Feld absorbieren als axiale Protonen.
Ha
Ha
Re
He
O
C-2
C-2
OHe
C-3
OHe
C-3
Ha
-D-Glucopyranosyl
H-C-1 / H-C-2 180
Kopplungskonstante J = 7 - 12 Hz
Ra
-D-Glucopyranosyl
H-C-1 / H-C-2 60
Kopplungskonstante J = 2 - 3 Hz
Mittelpunkt des Kohlenhydratstoffwechsels, der im Gesamtstoffwechsel der Zelle eine zentrale Rolle spielt, ist
die D-Glucose, die als Energiespeicher und Ausgangsverbindung fr die Biosynthese einer Vielzahl von
Verbindungen dient. Die Biosynthese der Glucose [Gluconeogenese, Abb. 4.14] geht von Zwischenprodukten
des Citrat-Cyclus aus und stellt in seinen wesentlichen Schritten die Rckreaktion des Kohlenhydratabbaus
[Glykolyse, 4.11.3] dar.
Citrat-Cyclus
Phosphoenolpyruvat
Calvin-Cyclus
3-Phosphoglycerat
Glycerinaldehyd-3-phosphat
Dihydroxyaceton-phosphat
Fructose-1,6-diphosphat F-1,6-P
Fructose-6-phosphat F-6-P
Glucose-6-phosphat G-6-P
In grnen Pflanzen und einigen Bakterienfamilien findet die Glucose-Neubildung in der Dunkelreaktion der
Photosynthese durch Reduktion von CO2 entsprechend der Reaktionsgleichung
6 CO2
6 H2
C6H12O6 +
6 O2
101
102
4. Kohlenhydrate
statt, wie CALVIN durch radioaktive Markierungsexperimente zeigen konnte. Substrat fr die CO2-Fixierung
ist D-Ribulose-1,5-diphosphat, das ber den CALVIN-Cyclus gebildet wird und zu 2 Moleklen 3Phosphoglycerat reagiert. Die eigentliche Bildung der Hexose erfolgt durch gemischte Aldolkondensation der
zwei Triosephosphate Glyceraldehyd-3-phosphat und Dihydroxyacetonphosphat. Aus 6 Moleklen Ribulose1,5-diphosphat und 6 Moleklen CO2 entstehen 12 Glycerinaldehyd-3-phosphat-Molekel, wovon zwei zum
Aufbau von Glucose, Saccharose und Strke verwendet werden, und die restlichen 10 wieder zu 6 Moleklen
Ribulosediphosphat regeneriert werden (CALVIN-Cyclus, Abb. 4-14).
O
O
O
C +
O
O
OH
O
O-
P
O
HOOC
H2O
O
OH
O
O
H
O
OH
O
OH
O
O-
P
O-
2
O
P
O P
OH O
COO -
O-
O-
O-
Die Biosynthese der Oligo- und Polysaccharide erfolgt durch bertragung aktivierter Monosaccharidreste auf
die wachsende Saccharidkette als Akzeptor. Der Transfer wird durch Enzyme katalysiert, als aktivierte Formen
der Monosaccharide (Donatoren) dienen Zuckernucleotide, wie z.B. Uridindiphosphoglucose [UDPG] (Abb. 416).
Phosphoglucomutase
Glucose-6-phosphat
UTP, UDP-Pyrophosphorylase
Glucose-1-phosphat
Startpolysaccharid
Uridindiphosphoglucose
Startpolysaccharid-Glucose + UDP
102
103
4. Kohlenhydrate
4.11.3 Glykolyse
Die Umkehrung der Gluconeogenese ist die Glykolyse [auch EMBDEN-MEYERHOF-PARNAS-Abbau], der bei
allen Organismen in gleicher Weise verlaufende anaerobe Abbau von Glucose zu Brenztraubensure. In den
Muskeln wird weiter unter anaeroben Bedingungen aus Brenztraubensure Milchsure produziert, unter
aeroben Bedingungen wird Acetat gebildet, das als Acetylcoenzym A zum einen die Biosynthesevorstufe fr
Fettsuren, Terpene und Polyketide ist, zum anderen in den Citrat-Cyclus einmndet. Die rechtsdrehende (S)Milchsure kommt im Muskelgewebe vor, die sog. Grungsmilchsure ist racemisch. Bei der alkoholischen
Grung entsteht durch Decarboxylierung und Reduktion aus Pyruvat Ethanol (Formel 4-31).
OH
OH
Isomerase
ATP
- ADP
HO
OH
OH
OH
Fructose-1,6-diphosphat
F-1,6-P
Dihydroxyacetonphosphat
C=O
CH2-OH
HO
P
+ ADP
CH-OH
CH-OH
H2C
Fructose-6-phosphat
F-6-P
COO -
- ATP
+
Diphosphoglycerat
CH2
HC O
+ ADP
- H2O
C O
COO -
CH2-OH
3-Phosphoglycerat
H2C
Glycerinaldehydphosphat
COO -
Isomerisierung
CH-OH
+ NADH
OH
O
CH=O
OH
HO
Fructose-6-phosphat
F-6-P
H2C
H2C
ATP
HO
Glucose-6-phosphat
G-6-P
O
O
O
HO
- ADP
OH
OH
OH
Glucose
OH
OH
HO
O
HO
2-Phosphoglycerat
- ATP
Phosphoenolpyruvat
CH3
CH3
NADH
CH-OH
C=O
-
Milchsure
COOH
COO
Pyruvat
O
NAD / CoASH
Acetyl-CoA
CH3C
CH3
HC
ScoA
NADH
H3C
CH2OH
Ethanol
Formel 4-31. Glykolyse, Abbau von Glucose zu Brenztraubensure. Bildung von Milchsure, Acetyl-CoA und
alkoholische Grung..
103
104
4. Kohlenhydrate
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105
106
4. Kohlenhydrate
106
107
5. Terpene
5. Terpene
.1 Struktur und Biogenese terpenoider Verbindungen
ber 2.000 Pflanzenarten, die sich auf ca. 60 Familien verteilen, enthalten in ihren Blten, Blttern, Nadeln und
Frchten und in ihren Harzen etherische le, die oft in eigenen "lzellen" gesammelt werden. Diese le
enthalten
flchtige
organische
Substanzen
mit
ausgeprgtem
Geruch
und
lassen
sich
durch
Wasserdampfdestillation, Extraktion oder durch Hei- und Kaltpressen gewinnen. Die einzelnen Komponenten
der meist komplexen Gemische etherischer le gehren berwiegend zu den Terpenen. Die Terpene wiederum
zhlt man gemeinsam mit den Steroiden (Kap. 6. Steroide) zu den einfachen Lipiden (Lipoide).
Die Terpene lassen sich formal als Oligomere des Kohlenwasserstoffs Isopren [2-Methyl-1.3-butadien]
auffassen und aus C5-Einheiten, Isopentylen- oder Isoprenein heiten [Isoprenoide] zusammensetzen. Je nach
Zahl dieser Basiseinheiten teilt man sie in Monoterpene (C10, 2 Isopreneinheiten), Sesquiterpene (C15, 3
Isopreneinheiten), Diterpene (C20, 4 Isopreneinheiten), Sesterpene (C25), Triterpene (C30) und Tetraterpene (C40)
ein. Die Steroide leiten sich von den Triterpenen ab, Carotinoide besitzen meist Tetraterpen-Struktur. Die
Isopentylen-Basiseinheiten knnen entweder Kopf-Schwanz- oder Kopf-Kopf-verknpft sein (Abb. 5-1).
CH2
CH3
CH CH2 CH2
C
C
C
C
CH3
H2C C CH CH2
Isopren
Monoterpene
2 Einheiten
C10
Sesquiterpene
3 Einheiten
C15
Diterpene
4 Einheiten
C20
Sesterpene
5 Einheiten
C25
Triterpene
6 Einheiten
C30
Tetraterpene
8 Einheiten
C40
Polyterpene
> 8 Einheiten
Isopentylen-Basiseinheit
Kopf - SchwanzAnordnung
Kopf - KopfC
C
C
Dieses Kriterium des Aufbaues des Kohlenstoffskelettes der Isoprenoide wurde ursprnglich von O. WALLACH
[1887, Chemienobelpreis 1910] aufgestellt und spter von L. RUZICKA [1922, Chemienobelpreis 1939] als
biogenetische Isoprenregel formuliert und stellt eine wertvolle Hilfe zur Konstitutionsermittlung komplexer
Terpene dar.
Etherische le und damit auch viele Terpene besitzen antimikrobielle Wirksamkeit, die fast in
allenKulturkreisen bekannt war. Sie werden zur Konservierung, fr kosmetische Prparate, als Therapeutika
und in der Parfum- und Aromenindustrie verwendet. Einige Terpene wirken als Pflanzenwachstumsregulatoren
108
5. Terpene
und sind wichtige Mediatoren der Wechselwirkung zwischen Pflanzen und Insekten. Auerdem gibt es eine
Reihe von Pheromonen, Hormonen, Juvenilhormonen, Alkaloiden, Chlorophyllen und Vitaminen mit
Isoprenoidstruktur.
Terpene und Terpenoide bilden eine heterogene Klasse von Naturstoffen, die von flchtigen,
niedermolekularen bis zu hochmolekularen, polymeren Verbindungen reicht. Unter ihnen findet man
acyclische, mono-, bi- und tri und tetracyclische und kondensierte Systeme, Kohlenwasserstoffe, Alkohole,
Ketone, Aldehyde, Epoxide, heterocyclische Verbindungen, Ether, Carbonsuren und Ester. Ihr Bauprinzip
wird am besten durch die Biosynthese [F. LYNEN, K. BLOCH, Nobelpreis 1964] verstanden; Mittelpunkt ist die
Mevalonsure, die aus 3 Moleklen AcetylCoA entsteht. Damit zhlen die Terpene zusammen mit den
Steroiden und Fettsuren zu den sich von der Essigsure ableitenden Acetogeninen [2.1.2.4]. Zwei Molekle
AcetylCoA treten zunchst zu AcetoacetylCoA zusammen, ein drittes Molekl wird durch Kondensation zum
3-Hydroxy-3-methylglutarsurederivat angefgt. Reduktive Abspaltung von CoA gibt Mevalonsure. Letztere
kann als Monolacton Mevalolacton vorliegen, das als Wachstumsfaktor aus Lactobacillus acidophilus isoliert
wurde. Zweifache Phosphorylierung von Mevalonsure gibt dasentsprechende Pyrophosphat, Decarboxylierung
und Wasserabspaltung fhrt zu Isopent-3-enylpyrophosphat IPP [aktives Isopren], das durch eine Isomerase in
das stabilere 3.3-Dimethylallylpyrophosphat DMAPP [Prenol] umgelagert wird.
O
HO
O
AcCoA
CH3C
HO
AcCoA
NADH
H 2O
- CoASH
SCoA
SCoA
AcetylCoA
HOOC
AcetoacetylCoA
SCoA
(R)-Mevalonsure
COOH
CH2
CH2
ATP
HO
CH3
HO
O P O
O
ATP
CH3
CH2
CH2
O
H2C
H2C
5-Pyrophosphomevalonsure
CH3
H2C
C
O
PP
P O
O
O
-
Isomerase
CH2
- H3PO 4
- CO 2
3-Phopho-5-pyrophosphomevalonsure
H3C
PP
O
5-Phosphomevalonsure
H2C
CH2OH
HOOC
O
(S)-3-Hydroxy-methylglutaryl-CoA
COOH
ATP
H
C
CH 2
PP
H3C
3,3-Dimethylallylpyrophosphat
3,3-Dimethylallylpyrophosphat DMAPP lt sich leicht nukleophil substituieren, als Nucleophil wirkt die
Doppel bindung des Isopentenylpyrophosphats. Durch Kopf-Schwanz -Kondensation entsteht (E)-2Geranylpyrophosphat oder (Z)-2-Nerylpyrophosphat, dessen Hydrolyse zum acyclischen Monoterpenalkohol
Geraniol bzw. Nerol fhrt.
109
O PP
5. Terpene
CH3
- PP-O-
H3C
C CH CH2
H2C
CH2 CH2
CH3
H3C
PP
H3C
PP
H3C
DMAPP
IPP
CH3
CH3
- H+
Hydrolyse
H3C
C CH CH2 CH2 C
CH
CH2 O
H3C
C CH CH2 CH2 C
PP
H3C
CH
CH2 OH
H3C
Geranylpyrophosphat
Geraniol
Durch Verknpfung mit einer weiteren IPP-Einheit gelangt man zu den isomeren Farnesylpyrophosphaten,
welche die Vorstufen zu den Sesquiterpenen und zu den anderen Terpenen und Steroiden darstellen (Abb. 5-2
gibt eine Gesamtbersicht ber die Biosynthesewege der Terpenoide, die Biogenese der einzelnen
Terpenklassen werden detailliert in den entsprechenden Abschnitten beschrieben).
.2 Monoterpene
Die Monoterpene bilden oft zusammen mit den Sesquiterpenen den Hauptbestandteil der etherischen le und
bedingen durch ihre Flchtigkeit oft den typischen Geruch von Pflanzen und Pflanzenlen. Ihre industrielle
Bedeutung liegt vor allem in ihrer Verwendung als Riech- bzw. Aromastoffe.
Das acyclische Geranylpyrophosphat bzw. das entsprechende Geranylcarbeniumion spielen die zentrale Rolle
bei der Biogenese der Monoterpene, eine Reihe von Umlagerungs- und Folgereaktionen fhrt zu acyclischen,
cyclischen und polycyclischen Verbindungen. Einfache und mehrfache Umlagerung und Substitution bzw.
Protonabstraktion fhren zu Linalool und. zu Nerol bzw. zu Myrcen. Intramolekulare Cyclisierungen fhren zu
110
5. Terpene
+
+
Zu den acyclischen Monoterpenen zhlen die Kohlenwasserstoffe Myrcen und die stereoisomeren (Z)- und (E)Ocimen, Alkohole wie z.B. Geraniol, Nerol, Citronellol, Linalool und Myrcenol, die Aldehyde Geranial, Neral,
Citronellal und die Geraniumsure.
OH
CH2OH
CH2OH
Myrcen
(Z)-Ocimen
(E)-Ocimen
Cosmen
Linalool
Geraniol
COOH
CHO
CH2OH
Nerol
CHO
CH2OH
CHO
OH
Geranial
Citral a
Neral
Citral b
Citronellal
Geraniumsure
111
5. Terpene
Der acyclische Monoterpenalkohol Linalool kommt vorwiegend als Acetat bis zu 50 % im Lavendell [Oleum
Lavendulae] vor. (-)-Linalool ist der Hauptanteil von amerikanischem Basilikum-l (~50 %) und wird aus
Rosenholzl (von Cayenne linaloe) gewonnen, das l der Korianderfrchte [Coriandrum sativum] besteht aus
60-70 % (+)-Linalool. Die erste, spter auch technisch verwertete Synthese des Linalools gelang L. RUZICKA
und V. FORNASIR [1919] durch Ethinylierung von Methylheptenon und partielle Hydrierung des gebildeten
Dehydrolinalools.
HO
OH
H2
Pd / C
H
Methylheptenon
Dehydrolinalool
Linalool
Auf einer thermischen Reaktion basiert eine technische Synthese von Linalool, ausgehend von (-)--Pinen.
Dieses wird selektiv zum cis-Pinan hydriert, aus dem sich mit Luftsauerstoff 75 % cis- und 25 % transPinanhydroperoxid bilden. Reduktion ergibt die entsprechenden Pinanole, die sich destillativ trennen lassen.
Die thermische Zersetzung von cis-Pinanol ergibt (+)-Linalool, die von trans-Pinanol liefert (-)-Linalool [G.
OHLOFF].
H
HOO
H2 / Pd
HOO
O2
H2
Radikalstarter
(-)--Pinen
cis-Pinan
HO
Pinanhydroperoxide
HO
HO
HO
cis-
Pinanole
trans
(+)-Linalool
(-)-Linalool
Surekatalysiert isomerisiert Linalool zu Geraniol und Nerol. Geraniol kommt als Hauptkomponente in
Geranium- und Rosenl vor, das geruchlich wertvollere cis-Isomere Nerol findet man z.B. im Bergamottl.
Geraniol und Nerol gehen durch Behandlung mit Suren in den monocyclischen Terpenalkohol -Terpineol
ber, ihre Reduktion fhrt zu Citronellol und schlielich zu Dihydrocitronellol. Myrcenol wurde im Hopfenl
gefunden und ist ein Grundstoff der Riechstoff- und Parfumherstellung. Citral besitzt den Geruch und
Geschmack von Zitronen und wird als synthetisches Zitronenaroma in der Parfmindustrie verwendet.
Natrliches Citral wird durch Destillation aus Lemongrasl [Cymbopogon flexuosus, bis 85 %] gewonnen,
industriell wird es durch Oxidation von Nerol hergestellt. Es ist ein wichtiger Riech- und Geschmackstoff,
Vorprodukt fr zahlreiche Riechstoffe und Schlsselbaustein der Vitamin A-Synthese. Durch Alkalien wird
Citral hydrolytisch in Acetaldehyd und 2-Methylhept-2-en-6-on gespalten, das Citral in etherischen len hufig
begleitet. Citral wurde auerdem als Markierungssubstanz in Blattschneiderameisen und im NASSANOFF-Sekret
von Honigbienen nachgewiesen. Geranial [Citral a], das in Gegenwart von Suren leicht zum aromatischen
Kohlenwasserstoff p-Cymol cyclisiert, und Neral [Citral b] sind in etherischen len vieler Citrus-Arten
112
5. Terpene
enthalten. Die (+)-Form von Citronellol und Citronellal kommt im Citronelll vor, das (-)-Citronellol im
Rosenl. Geraniumsure macht zu einem Groteil das Aroma der Scheurebe- und Traminer-Weine und
verschiedener Traubensorten aus.
Ipsdienol und das Dihydroderivat Ipsenol sind zusammen mit (+)-cis-Verbenol die aktiven Prinzipien der
Sexualpheromone verschiedener Borkenkferarten der Gattung Ips (7.2.2). (Z)- und (E)-Tageton sind die
Hauptkomponenten des etherischen ls von Tagetes glandulifera, (Z)- und (E)-Ocimenon werden ebenso in
Tagetes-len gefunden.
OH
OH
Ipsdienol
Ipsenol
Tageton
Ocimenon
Kondensation von Geranial mit Aceton ergibt das -Ionon, das mit verdnnter Sure in - und -Ionon
berfhrt werden kann. Die Ionone, die mit ihrem C13-Gerst auch als Norsesquiterpene gesehen werden
knnen, sind wegen ihres Veilchengeruches Bestandteil vieler Parfums, -Ionon, das thermodynamisch
stabilste Ionon, dient als Ausgangsprodukt fr die technische Vitamin-A-Synthese.
Aceton
H+
+
Ba(OH)2
Ionon
Geranial
Ionon
Ionon
Damascone [1-(2,6,6-Trimethylcyclohexenyl)-2-buten-1-on] sind Jonon-Isomere, von denen - und Damascon im Tee-Aroma enthalten sind. Von den mglichen Damascenonen hat -Damascenon [1-(2,6,6Trimethyl-1,3-cyclohexadienyl)-2-buten-1-on]
als
essentieller
Bestandteil
des
bulgarischen
Rosenls
Damascon
Damascon
Damascenon
Der Grundkrper der monocyclischen Monoterpene ist das p-Menthan, die wichtigsten Verbindungen dieser
Reihe sind die Menthadien-Kohlenwasserstoffe -Terpinen, -Terpinen, Limonen, Terpinolen, - und Phellandren und das aromatische p-Cymol.
7
2
3
IUPAC: 1-Isopropyl-4-methylcyclohexan
8
9
pMenthan,
10
113
5. Terpene
Limonen [1,8(9)-Menthadien] ist der Hauptbestandteil der Citrusschalenle, riecht zitronenartig und besitzt als
technischer Riechstoff Bedeutung. Beide Stereoisomeren findet man in der Natur, (+)-Limonen kommt im
Kmmell (aus Carum carvi) vor, (-)-Limonen im Fichtennadell. Limonen ist eines der klassischen Beispiele
fr chirales Erkennen durch den Geruchsinn. Whrend (S)(-)-Limonen die Grundlage (bis zu 97 %) fr
Agrumenle (Parfumgrundstoffe) bildet, besitzt das (R)(+)-Limonen eine Fehlaroma-Note. Bereits 1878 gelang
BOUCHARDAT durch Erhitzen von Isopren die Darstellung von Dipenten, dem racemischen Gemisch der beiden
Limonenisomeren. Dipenten dient als Lsungsmittel und lt sich durch [4+2]-Cycloaddition von
Methylbutadien bei 300 C oder durch Dehydrierung von -Terpineol herstellen. -Terpinen wurde als
Hauptkomponente im Wasserdampfdestillat von Majoran [Majorana hortensis] identifiziert. Terpinolen [pMentha-1,4(8)-dien] wird als technisches Parfmierungsmittel zur Schuh- und Mbelpflegemittel, fr Wachse
u. dgl. verwendet.
-Terpinen
-Terpinen
Limonen
p-Cymol
1,3,8-Menthatrien und 1-Methyl-4-isopropenylbenzol sind mit dem strengen und typischen Geruch von
Petersilie, Petroselinum crispum, assoziiert.
1,3,8-Menthatrien
1-Methyl-4-isopropylbenzol
Als Sauerstoffverbindungen der p-Menthanreihe kennt man die Alkohole -Terpineol, Menthol, Piperitol,
Pulegol, Dihydrocarveol und Carveol, die terpenoiden Phenole Carvacrol und Thymol, die Ketone Menthon,
Piperiton, Pulegon und Carvon und den eher seltenen Cuminaldehyd.
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
-Terpineol
Menthol
Piperitol
Pulegol
Dihydrocarveol
Carveol
CHO
Carvacrol
OH
Menthol
Piperitol
Pulegol
Carveol
Carvacrol
Carvacrol
114
5. Terpene
-Terpineol hat einen fliederartigen Geruch, bakterizide Eigenschaften und besitzt als Zusatz in Waschmitteln
und Kosmetika und als Desinfektionsmittel groe Bedeutung fr die Kosmetikindustrie. Es kommt in
erheblicher Menge im Kardamoml (aus Elettaria cardamomum) vor. -Terpinylacetat mit seinem krautigwrzigen Geruch ist das wichtigeste Derivat. -Terpineol, Terpinylacetat und das hyazinthartig riechende Terpineol entstehen ber 1,8-Terpin [1,8-Dihydroxy-p-menthan] bei Behandlung von -Pinen mit Suren.
Synthetisches Rohterpineol [Yellow Pine Oil] aus -Pinen wird zu Desinfektionszwecken verwendet und spielt
auerdem als Flotationsmittel zur Erzaufbereitung eine Rolle.
Racemisches -Terpineol lt sich durch eine regioselektive DIELS-ALDER-Reaktion aus Acrylsuremethylester
und Isopren darstellen.
CH3MgBr
+
COOCH3
COOCH3
OH
4-Methylcyclohex-3-en1-carbonsuremethylester
()--Terpineol
Thymol und Carvacrol kommen u.a. im etherischen l des Thymians [Thymus vulgaris] und in len von
Majoran- und Origanum-Arten vor und haben als Desinfektionsmittel in der Zahnmedizin Bedeutung. Menthon
kommt zu etwa 20 % im Pfefferminzl [Oleum Menthae piperitae] vor, Piperiton neben Piperitol in
zahlreichen Eukalyptuslen vor, und (+)-Pulegon ist z.B. Hauptbestandteil des Poleils (von Mentha
pulegium). Carvon ist Hauptkomponente von Kmmell [Oleum Carvi] und dem l von Dill [Anethum
graveolens]. Whrend (R)(-)-Carvon jedoch Minzaroma besitzt, ist das (S)(+)-Carvon die Aromaleitsubstanz
des Kmmels. Cuminaldehyd ist Bestandteil des Cuminls aus dem Rmischen Kmmel, sein Geruch ist
krautig-schweiartig und erinnert an konzentriertes Curry-Aroma.
Menthol [2-Isopropenyl-5-methylcyclohexanol] kommt in freier Form und als Acetat als Hauptkomponente im
Pfefferminzl (aus Mentha piperita) vor. Es besitzt drei Chiralittszentren, und es existieren acht optisch-aktive
Isomere (= 4 Enantiomerenpaare), die Menthol, Neomenthol, Isomenthol und Neoisomenthol heien. Eine
starke geruchliche Diskriminierung wurde unter allen vier diastereomeren Mentholen gefunden, auch die
enantiomeren
Menthole
riechen
unterschiedlich.
Whrend
natrliches
(-)-(1R,3R,4S)-Menthol
den
charakteristischen Pfefferminz-Geschmack und -Geruch mit erfrischendem Khleffekt besitzt, wird das (+)Enantiomer als staubig, krautig und weniger minzig empfunden.
115
5. Terpene
H
H
CH3
e
e
3
*
H
OH
(CH3)2CH
OH
*
CH(CH3)2
H3C
OH
CH(CH3)2
CH(CH3)2
CH3
OH
()-Menthol
CH(CH3)2
OH
H3C
()-Neomenthol
CH3
()-Isomenthol
OH
()-Neoisomenthol
(-)-Menthol besitzt Bedeutung fr die Herstellung von Zahnpasten, Mundwasser, Kaugummi, Zigaretten,
Kosmetika und pharmazeutische Prparate, der Weltverbrauch wurde fr 1988 auf 5.600 t geschtzt. Als
billiger optisch-aktiver Alkohol dient es fr Racematspaltungen. Eine weitere Bedeutung gewinnt Menthol als
Hilfsreagenz bei asymmetrischen Synthesen. So entsteht bei der asymmetrischen Aldolreaktion von (-)Menthylacetat mit Acetophenon und anschlieender Hydrolyse die -Hydroxysure bevorzugt in der (S)Konfiguration.
O
O
Et2NMgBr
MgBr
C6H5COCH3
HO
(-)-Menthylacetat
COOH
O
H
OMgBr
C6H5
O
KOH
C6H5
(S)-Form 51 %
MgBr
O
OH
COOH
Hauptprodukt
(R)-Form 2 %
Eine einfache Vollsynthese von ()-Menthol geht von m-Kresol aus. Dessen FRIEDEL -CRAFTS Alkylierung
fhrt zu Thymol, das katalytisch zu den vier Diastereomeren von Menthol hydriert wird. Das ()-Menthol kann
durch Destillation abgetrennt werden, die Trennung der beiden optischen Antipoden gelingt durch Ausfllen
durch Animpfen mit (-)-Menthylbenzoat.
H2
OH
OH
OH
m-Kresol
Thymol
Menthol
116
COOR
5. Terpene
COOR
RO-
COOR
O
-Methyl-'-isopropylpimelinsurediester
OH
()-Menthol
Menthon
Eine heute noch angewandte technische Synthese von (-)-Menthol geht von -Phellandren aus [G. OHLOFF].
Auerdem kann (-)-Menthol aus (+)-Citronellal durch sauer katalysierte Cyclisierung zum (-)-Isopulegol und
anschlieende Hydrierung erhalten werden.
H+
CHO
OH
(+)-Citronellol
(-)-Isopulegol
OH
(+)-Neoisopulegol
OH
OH
(+)-Isoisopulegol
OH
(+)-Neoisoisopulegol
(-)-Menthol
Pd / H2
Rh Cl
P
Ph2
(C2H5)2NH
NEt2
Farnesen
NEt2
H3O+
(R)-3
H2
ZnBr2
CHO
OH
OH
Isopulegol
(-)-Menthol
Citronellal
Eine besonders geruchsintensive Substanz aus der p-Menthan reihe ist (R)-1-p-Menthen-8-thiol, das als
Aromatrger des Grapefruitsafts mit 0.02 ppb einen der niedrigsten Geruchsschwellenwerte besitzt, der einer
Konzentration von 2 g in 100.000 t Wasser entspricht. Diastereomere 8-Mercapto-p-menthan-3-one werden im
l von Buchu-Blttern gefunden und sind wichtige Ingredienzien zur Imitation von Blaubeer-Aroma. Ascaridol
ist ein natrliches Terpen-Peroxid und kommt als Hauptbestandteil in dem als Wurmmittel verwendeten
amerikanischen Wurmsamenl [Chenopodiuml aus Chenopodium ambrosoides] vor. Es lt sich durch [4+2]Cycloaddition von Singulett-Sauerstoff aus -Terpinen gewinnen und geht durch Hydrierung in 1.8-Terpin
ber. Terpin, das auch durch Hydratisierung von -Pinen ber -Terpineol entsteht, spaltet unter
Sureeinwirkung Wasser ab unter Bildung des cyclischen Ethers 1.8-Cineol [Eukalyptol], der die
organoleptische Komponente des Eukalyptusls darstellt. Eukalyptol ist auerdem eine Sekretkomponente des
117
5. Terpene
rove beetles Stenus comma, wo es wahrscheinlich als Antisepticum fungiert. Seltener als das 1,8-Isomere wird
1,4-Cineol in Pflanzenlen gefunden.
OH
O
O
SH
SH
OH
1,8-Terpin
1,8-Cineol
Eukalyptol
1,4-Cineol
Blockiert man in Neral die Carbonylfunktion durch Bildung der SCHIFF'schen Base 4, so cyclisiert es nicht wie
unter sauren Bedingungen blich zu p-Cymol, sondern es resultiert ein Gemisch aus -Cyclocitral und Cyclocitral. Aus -Cyclocitral entsteht durch Dehydrierung mit Selendioxid Safranal, das auch bei der
Hydrolyse von Pikrocrocin, dem Bitterstoff des Safrans, erhalten wird.
H+
H2O
+
N
- C6H5NH3+
-Cyclocitral
5
CHO
CHO
CHO
-Cyclocitral
CHO
H+
SeO2
Glucose-O
Pikrocrocin
Safranal
Die Wichtigkeit cyclischer Monoterpen-Ether wurde erst nach der Entdeckung des Rosenoxids und der
Strukturaufklrung der Linolooloxide erkannt. Diastereomere Rosenoxide wurden zuerst im Rosenl und
Geraniuml, und spter auch im Thoraxdrsen-Sekret des Cerambyciden-Kfers Aromia moschata [Coleoptera,
Cerambycidae] entdeckt. Das kostbare Produkt, als Basisstoff fr nahezu jedes Parfm zum Preis von 17.000 43.000 DM/kg erhltlich, lt sich "solarchemisch" durch Photooxygenierung mit Singulettsauerstoff unter
Sonnenlicht aus billigem Citronellal (ca. 300 DM/kg) herstellen. Linalooloxide kommen in pyranoider und
furanoider Form vor allem im Shiul, in verschiedenen Citruslen und im Aroma von Tee, Aprikosen, Ananas
und Weintrauben vor. Monoterpenoide Furanderivate kommen in begrenzter Zahl in Aromapflanzen vor.
Menthofuran ist in len aus der Pfefferminze zu finden, Perillen wurde aus dem etherischen l der Bltter von
Perilla citriodora als auch in der Ameise Lasius fuliginosus gefunden. Rosenfuran wurde das erste Mal aus
Rosenl isoliert, das monoterpenoide Thiophenderivat spielt im Aroma des Hopfens eine Rolle.
HO
O
S
Linalooloxide
Hopfen-Aroma
Perillen
Rosenoxid
HO
Menthofuran
Rosenfuran
118
5. Terpene
HO
H3C
CH3
H
H3C
H
R
COOH
O
R
O
H
Pyrethrin I
Chrysanthemumsure, R = CH3
Pyrethrolon, R = -CH=CH2
Pyrethrinsure, R = COOCH3
Cinerolon, R = CH3
Iridodial wird als Wehrsekret in der Ameisengattung Iridomyrmex produziert und mit Plagodial und
Chrysomelidial als Wehrsekret in Larven von Blattkfern [Chrysomelidae] gefunden.
CHO
CHO
CHO
Irodial
OH
CHO
Plagodial
CHO
Chrysomelidial
Unter den Monoterpenlactonen findet man ebenso Derivate der Iridan-Reihe. Die Konzentration von
Nepetalacton, das auch als Pheromon in Blattlausarten (7.2.6) gefunden wird, betrgt bis zu 78 % im amerikanischen Katzenminze-l aus Nepeta cataria, whrend das Epinepetalacton der Hauptbestandteil (70 %) des
etherischen ls aus Nepeta mussini ist.
H
O
H
O
H
O
Nepetalacton
Epinepetalacton
Grundkrper der bicyclischen Monoterpene sind die Kohlenwasserstoffe Thujan, Caran, Pinan, Camphan,
Isobornylan, Isocamphan und Fenchan.
Thujan
Caran Pinan
Camphan
Isobornylan
Isocamphan
Fenchan
Aus der Thujangruppe kommen -Thujen und Sabinen in len vor, Thujon [3-Thujanon, 1-Isopropyl-4-methylbicyclo[0.1.3]hexan -3-on] findet sich im Salbeil und in Wermutlen (aus Artemisia absinthium) und wirkt als
Nervengift. Thujon sowie chronischer Mibrauch des aus der Wermutpflanze hergestellten Likrs oder Brannt-
119
5. Terpene
weins [Absinth] kann epileptische Krmpfe hervorrufen und zu psychischen Schden und Verfall
[Absinthismus] fhren. Todesflle bei der frheren Verwendung von Wermutkraut als Wurmmittel sind
bekannt. 3-Caren [Caren-3] kommt in verschiedenen Terpentinlen in groer Menge vor. Die bedeutendste
natrliche Quelle fr monoterpenoide Rohstoffe stellt Kiefernharz dar, dessen Jahresweltproduktion auf 1.5
Mio t geschtzt und das zu Kolophonium und Terpentinl fraktioniert wird. Die Hauptinhaltsstoffe von
Terpentinl aus Coniferen verschiedenster Provenienz sind (+)- und (-)--Pinen bzw. (-)--Pinen. (+)--Pinen
wird z.B. aus griechischem, (-)--Pinen aus spanischem Terpentinl isoliert. -Pinen dient zur Herstellung von
1,8-Cineol und Terpinylacetat und als Ausgangsmaterial bei der technischen Kampfersynthese. Nach neueren
Verfahren lt sich -Pinen technisch zu -Pinen isomerisieren. Die funktionellen Derivate der Pinene sind im
wesentlichen Verbenol, Verbenon, Pinocarveol, Myrtenol und Myrtenal.
O
-Thujen
Sabinen
3-Caren
Thujon
CH2OH
-Pinen
-Pinen
Camphen
CHO
OH
O
OH
OH
Verbenol
Verbenon
Pinocarveol
Myrtenol
Myrtenal
Borneol
Kampher
Verbenol [2-Pinen-4-ol] kommt in Terpentin vor, die (+)-trans- und die (+)-cis-Form findet man auerdem in
den Aggregationspheromonen von Borkenkfern (7.2.2). Zusammen mit Verbenon kommt es u.a. im l von
Boswellia serrata vor. Pinocarveol wird in der linksdrehenden Form im l von Eucalyptus globulus gefunden.
Borneol und Bornylacetat sind sehr verbreitet, (+)-Borneol kann aus Campherl, (-)-Borneol aus Pinaceenl
gewonnen werden. Borneol und Isoborneol sind exo/endo-Isomere und stellen Zwischenprodukte der
technischen Kampfersynthese (Formel 3-4) dar, beide lassen sich zu Camphen dehydratisieren.
(+)-(1R,4R)-Kampfer [Campher] wurde frher als Japankampfer aus dem Holzl des ostasiatischen Kampferbaums Cinnamomum camphora gewonnen, (-)-Kampfer [Matricariakampfer] kommt im Mutterkraut- und im
Kamillenl [aus Matricaria chamomilla] vor. Das Hauptanwendungsgebiet von Kampfer liegt in der Zelluloidherstellung und Verwendung als Weichmacher fr Zelluloseester, frher wurde er als Analeptikum (Kreislaufanregungsmittel) und durchblutungsfrderndes Mittel fr Einreibungen verwendet. Da die natrlichen
Ressourcen fr Kampfer nicht ausreichen, wird er technisch gewonnen. Die entscheidenden Schritte bei der
technischen Kampfersynthese sind drei WAGNER-MEERWEIN-Umlagerungen (Formel 3-4), d.s. Umlagerungen
trigonaler Carbeniumionen in Form von Alkylwanderungen, wobei der wandernde Alkylrest Teil eines Ringes
ist.
120
CH3 CH3
H+
5. Terpene
W AGNERMEERWEIN-
Cl -
OH-
CH 3
Umlagerung
20 C
0 C, HCl
-Pinen
- Cl -
Cl
Bornylchlorid
W AGNERMEERWEIN-
- H+
W AGNERMEERWEIN-
H+
HOAc
Umlagerung
Umlagerung
Camphen
OH
O-COCH 3
CH3COO
H 2O
OH
O2
H
- CH3COOH
Isoborneol
Isobornylacetat
Kampher
a-Pinen wird mit trockenem Chlorwasserstoff behandelt, wobei das entstehende Carbeniumion durch WAGNERMEERWEIN-Umlagerung in ein Carbokation bergeht, aus dem das stabile (+)-Bornylchlorid entsteht. Durch
basenkatalysierte Dehydrohalogenierung und eine weitere Umlagerungsreaktionen entsteht der racemische
Kohlenwasserstoff rac-Camphen. Addition von Essigsure gibt rac-Isobornylacetat, dessen Hydrolyse racIsoborneol ergibt, das sich zu racemischem Kampfer oxidieren lt.
Die Fenchene sind relativ selten in etherischen len nachgewiesen; sie entstehen vor allem durch Dehydratisierung der Fenchole. Der Hauptvertreter der Fenchangruppe ist Fenchon, das u.a. im Fenchel-, Thuja- und
Kmmell vorkommt. Dessen Reduktion mit Natrium und Alkohol ergibt -Fenchol, das auch im Wurzell von
Pinus palestris vorkommt. Eine ungewhnliche Bicyclo[3.2.0]heptanstruktur besitzen (-)-Filifolen aus
Artemisia filifolia und das Enantiomere, das in der australischen Pflanze Zieria Smithii gefunden wurde.
H
O
-Fenchen
-Fenchen
-Fenchen
Fenchon
OH
-Fenchol
(-)-Filifolen
Das einzige in Nadelholz-len vorkommende tricyclische Monoterpen ist das Tricyclen, eine weie, kristalline
Substanz vom Schmp. 68 C. Es wird vor allem in Terpentinlen gefunden und begleitet fast immer das
Camphen des Handels.
121
5. Terpene
Tricyclen
.3 Sesquiterpene
Die Sesquiterpene bestehen aus mehr als 2.000 natrlich vorkommenden Reprsentanten und stellen die grte
Gruppe der isoprenoiden Naturstoffe. Mehr als 100 verschiedene Kohlenstoffgerste sind bekannt, und obwohl
etwa 500 Sesquiterpene in Gerchen und Aromen gefunden werden, besitzen nur etwa 20 Bedeutung als Riechund Aromastoffe.
Die C15-Sesquiterpene bestehen aus drei Isopreneinheiten und entstehen durch eine weitere Addition von
aktivem Isopren IPP an Geranylpyrophosphat GPP. Dabei entstehen (2Z,6E)-2,6- und (2E,6E)-2,6Farnesylpyrophosphat FPP als Vorstufen, aus denen u.a. die Sesquiterpenalkohole Farnesol und Nerolidol
sowie die isomeren Farnesene entstehen.
O
PP
O
PP
PP
+
Geranylpyrophosphat
IPP
Farnesylpyrophosphat FPP
Das nach Maiglckchen riechende Farnesol ist weitverbreitet in Bltenaromen sowie im Moschuskrnerl,
trgt zum "Bouquet" von Champagner bei und besitzt Juvenilhormon-Aktivitt (vgl. Kap. 8). Am hufigsten
tritt das trans-trans-Isomer auf. Bei den Bakteriochlorophyllen c, d und e bildet Farnesol anstelle von Phytol
die typische Seitenkette. Sowohl (+)- als auch (-)-Nerolidol kann aus verschiedenen etherischen len isoliert
werden. Das synthetische Gemisch der ()-cis- und ()-trans-Isomeren besitzt einen milden blumigen Geruch
und wird als Zwischenprodukt fr die von Vitamin E-Synthese (3.10.2) und Vitamin K1-Synthese (3.10.3)
verwendet. Das C11-Homoterpen (6E)-2,6-Dimethyl-2,6,8-nonatrien wird bei Verletzung von Tomatenpflanzen
durch Fragmentierung aus Nerolidol biosynthetisiert und wirkt als Lockstoff fr Raubmilben.
Whrend Farnesol, Nerolidol und der entsprechende Aldehyd Farnesal bereits seit langer Zeit als natrliche
Aromasubstanzen bekannt waren, ist die Bedeutung der Farnesene erst in neuerer Zeit erkannt worden. Farnesen, erstmals im Hopfenl gefunden, ist inzwischen aus einer Vielzahl von Aromen isoliert worden. Die
stereoisomeren (E,E)- und (Z,E)--Farnesene sind stndige Begleiter von Agrumenlen, scheinen eine wichtige
Rolle als Aromakomponenten in pfeln zu spielen und sind Attraktivstoffe fr Larven des Apfelwicklers
[Laspeyresia pommonella, Lepidoptera]. (E)--Farnesen wurde in Sekreten einiger Blattlausarten identifiziert
(7.2.6) und dient den Insekten als Alarmpheromon. Die den Farnesenen entsprechenden Sinensale kommen in
allen Citruslen vor und besitzen wegen ihrer enormen Orangengeruchsstrke einen hohen Aromawert.
122
(E)--Farnesen
5. Terpene
(Z)--Farnesen
(E)--Farnesen
O=HC
O=HC
O=H
C
(E,E,E)--Sinensal
-Sinensal
(E,E,Z)--Sinensal
+
+
Zu den monocyclischen Sechsring-Sesquiterpenen gehrt z.B. -Bisabolen, ein in Pflanzen weit verbreiteter
Sesquiterpenkohlenwasserstoff, der u.a. im Bergamottl und in Myrrhe, dem Gummiharz von CommophoraArten, enthalten ist. (-)--Bisabolol ist mit bis 20 % im Kamillenl enthalten und trgt zur antiphlogistischen
und spasmolytischen Wirkung der Pflanze bei, die (+)-Form kommt im Knospenl der Balsampappel vor. Die
Bisabolene gehren zusammen mit den bicyclischen Cadinen und Caryophyllenen zu den hufigsten
Sesquiterpen-Kohlenwasserstoffen.(-)-Zingiberen, (-)-Sesquiphellandren, (+)-ar-Curcumen und (-)--Bisabolen
machen zusammen 50 - 70 % von Ingwerl (aus Zingiber officinale) aus. Zingiberen wird zusammen mit
Caryophyllen und -Cadinen von Blatthaaren der Kartoffelpflanzen bei Verletzung sekretiert und wirkt
besonders toxisch auf den Kartoffelkfer (LD 7.2 g/Kfer).
OH
-Bisabolen
-Bisabolen
-Bisabolol
Zingiberen
Sesquiphellandren
ar-Curcumen
ar-Curcumen [-Curcumen] und -Curcumen wurde in den Wurzeln des Ingwergewchses Curcuma aromatica
nachgewiesen, den gleichen Strukturtyp besitzt das Lanceol. Das Eudalingerst enthalten die Elemene
vorgebildet; -Elemen kommt im Calmusl vor, -Elemen und Elemol z.B. im Zdravetzl (aus Geranium
macrorrhizum).
123
5. Terpene
OH
CH2OH
-Curcumen
-Elemen
Lanceol
-Elemen
Elemol
Die 10-gliedrigen Makrocyclen leiten sich vom Germacran ab. Das 11-gliedrige Humulen [-Caryophyllen]
kommt u.a. im Hopfenl (aus Humulus lupulus) vor und begleitet stets das bicyclische -Caryophyllen (3.3.3).
Hauptbestandteil des ls des wilden Ingwers ist das Zerumbon.
O
-Humulen
Germacran
Zerumbon
mit
Jonon-Struktur
und
Phytohormon-Wirkung.
Sie
bewirkt
als
Antagonist
der
OH
COOH
Abscisinsure
CHO
HO
Xanthoxin
Zu den bicyclischen Sesquiterpenen gehren u.a. das wohl hufigste C15H24-Sesquiterpen Caryophyllen, die
hufig vorkommenden Cadinene, die Sesquiterpene vom Eudesman- und Eremophilantyp, sowie die
verschiedenen Verbindungen mit Azulenstruktur. (-)-Caryophyllen [Caryophyllen] kommt im Nelken- und
Hopfenl vor und ist in Aromen weitverbreitet, seine Riechschwelle betrgt in wriger Lsung 64 ppb.
Caryophyllenoxid, das erstmals im l aus Eugenia caryophyllata entdeckt wurde und mit etwa 20 % im
etherischen l indischer Alpinia-Arten vertreten ist, begleitet oft den Kohlenwasserstoff und besitzt eine
holzige Geruchsnote. Gemeinsam mit den Betulenolen kommen sie in Birkenknospenlen vor.
H
H
H
CH2OH
O
H
(-)-Caryophyllen
Caryophyllenoxid
-Betulenol
OH
-Betulenol
124
5. Terpene
Die Cadinene und Cadinole unterscheiden sich untereinander durch die Lage der Doppelbindungen, die
Konformation der Ringverknpfungsstellen und der OH-Gruppen. Die Cadinene sind die bekanntesten und am
weitesten verbreiteten Sesquiterpene und wurden bereits 1840 aus Cubebenl isoliert. Hauptvertreter ist das Cadinen, als Cadinole seien hier -Cadinol, -Cadinol, T-Muurolol und T-Cadinol genannt. Braunalgen der
Gattung Dictyopteris enthalten in ihrem etherischen l -Cadinen und -Cadinol, als weitere Vertreter dieser
Gruppe sind bekannt das Khusol aus Vetiverl und das aromatische Calamenen. Ein dimeres Sesquiterpen vom
Cadinan-Typ ist das Gossypol aus Baumwollsaatl. Es hemmt Stoffwechselenzyme der Spermien und wirkt
daher fertilittshemmend.
OH
H
OH
-Cadinen
-Cadinen
OH
-Cadinol
-Cadinol
OHC
OH
OH
T-Muurolol
OH
CHO
H
HO
OH
HO
OH
H
CH2OH
T-Cadinol
Khusol
Calamenen
Gossypol
-Selinen ist eine Komponente des Selleriels und fr den charakteristischen Geruch des Selleries
verantwortlich. Wichtige Alkohole dieser Reihe sind die Eudesmole, von denen - und -Eudesmol in
Eukalyptuslen vorkommen. Rishitin, ebenso vom Eudesmantyp, wurde aus der Kartoffel [Solanum tuberosum]
isoliert und wirkt als pflanzlicher Abwehrstoff [Phytoalexine, vgl.
Chrysanthemum indicum.
HO
HO
OH
-Selinen
-Eudesmol
OH
OH
-Eudesmol
Rishitin
Chrysanthemol
Die Sesquiterpene vom Eremophilantyp gehorchen nicht der Isoprenregel (3.1). Der Kohlenwasserstoff
Eremophilen wurde in Baldrianl gefunden, Nootkaten im Kernholz der Scheinzypresse Chamaecyparis nootkatensis. Das (+)-Nootkaton, das aus Grapefruitschalen isoliert werden kann, leistet einen wichtigen Beitrag
zum spezifischen Aroma vieler Citrusarten. Es ist fr das typische Grapefruitaroma verantwortlich und noch
mit 1 ppb in Wasser detektierbar. Eng verwandt ist das aus Orangen isolierte Valencen, das wie Nootkaton als
Aromastoff in Erfrischungsgetrnken verwendet wird, und dessen Oxidation zu Nootkaton fhrt. (+)--Vetivon
kommt im Vetiverl vor und besitzt eine holzige, blumige Geruchsnote. (-)-Valeranon ist im Valerianl
vorhanden, besitzt ebenso ein nicht-isoprenoides Kohlenstoffskelett und wird als geruchlos beschrieben.
125
5. Terpene
Nootkaten
Eremophilen
(+)-Nootkaton
(+)-Valencen
(-)-Valeranon
(+)--Vetivon
Drimenol ist ein Driman-Derivat aus dem Holzl von Drimys Winteri. Driman-Dialdehyde sind Warbuganal
und Polygodial [Tadeonal] aus ostafrikanischen Bumen der Gattung Warburgia [Cannellaceae], letzteres
kommt auerdem in Polygonum hydropiper und in Nacktkiemern (Schnecken) vor. Die beiden Aldehyde
wirken als Insektenfra-Hemmstoffe und natrliche Pestizide.
HO
CH2OH
CHO
CHO
CHO
CHO
Drimenol
Walburganal
Polygodial
Azulene sind nichtbenzoide Aromaten und spielen als entzndungshemmende Substanzen medizinisch ein
gewisse Rolle. In den Pflanzen sind meist Vorstufen der Azulene [Proazulene] vorhanden, die Azulene selbst
entstehen oft erst bei der Gewinnung der etherischen le z.B. durch Destillation. Guajol ist Hauptbestandteil
des Guajakholzls und lt sich mit Schwefel zum herrlich blau gefrbten Guajazulen dehydrieren. Dieses
kommt im Geraniuml vor und wird fr pharmazeutische Zwecke synthetisch hergestellt. Chamazulen bildet
sich in der Kamille [Matricaria chamomilla] aus Matrizin (5.3.6) durch Decarboxylierung. Das violette
Vetivazulen findet man im Vetiverl. Der charakteristische Geruch von Karottensamen [Dacus carota], der an
den der Wurzeln erinnert, wurde der Gegenwart von Carotol (25 - 65 %) zugeschrieben. Velleral ist ein
hautreizender, mutagener Sesquiterpen-Metabolit aus Pilzen der Gattung Lactarius (Milchlinge) und anderer
Russulaceae (Tublinge) und wirkt auf Insekten als Frahemmstoff.
OCH3
OCH3
OH
OH
Guajol
Guajazulen
Chamazulen
Vetivazulen
Carotol
Velleral
OH
O
HO
O
OH
HO
O
O
O
OAc
O
Artamaloid
Artenolid
O
126
Die
Geruchstrger
des
ostindischen
5. Terpene
Sandelholzls
sind
die
Santalole,
neben
denen
verwandte
Kohlenwasserstoffe, Alkohole, Aldehyde und Suren enthalten sind. -Santalol und -Santalen besitzen
Bicyclo[2.2.1]heptanstruktur, whrend die -Derivate tricyclischer Natur sind.
CH2OH
-Santalol
-Santalen
2. Alkylierung
H
O
O
O
3. LiAlH4
18
19
1. PCC
CH2OH
20
2. W OLFF-KISHNERReduktion
(-)--Santalen
trans--Bergamoten ist mengenmig das bedeutendste Sesquiterpen im Bergamottl aus Citrus bergamia. Im
Holzl der Himalaya-Ceder kommen Himalachol und die Himalachene vor, Widdrol und Cuparen in
Kernholzextrakten von Widdringtonia-Arten.
OH
OH
trans--Bergamoten
Widdrol
Himachalol
Cuparen
Spirostruktur besitzen Hinesol aus Atractylisl, -Chamigren aus dem Fruchtl von Schizandra chinensis, Vetivon aus Vetiverl und Acoron, das im Kalmusl gefunden wurde.
O
O
OH
Hinesol
-Chamigren
-Vetivon
Acoron
Der u.a. im Cubebenl vorkommende Cubebencampher besitzt ein Cadinangrundgerst, zur Eudesmanreihe
gehrt Maaliol (aus Maalil). Eremophilanderivate sind z.B. -Gurjunen [Calaren] aus Gurjunbalsaml und
Aristolon aus dem Wurzell von Aristolochia debilis.
127
5. Terpene
OH
HO
Cubebencampher
-Gurjunen
[Calaren]
Maaliol
Aristolon
HO
-Gurjunen
Aromadendren
Viridiflorol
Maaliol
Durch Wasserdampfdestillation von Holzabfllen von Juniperus virginiana aus der Bleistift- und Zigarrenkistenproduktion gewinnt man virginisches Cedernholzl, das ca. 80 % - und -Cedren, ferner Cedrol,
Cedrylacetat u.a. enthlt.
OH
-Cedren
-Cedren
Cedrol
-Santalol ist eine tricyclische Hauptkomponente aus ost indischem Sandelholzl aus Santalum album, (-)-Santalen ist auch ein Spurenstoff in Lavendell.
CH2OH
-Santalol
(-)--Santalen
- und -Bourbonen und das Keton 21 als Metabolit des -Bourbonens wurden als Naturstoffe mit neuem
Kohlenstoffgerst vor etwa 35 Jahren in Geraniuml entdeckt.
-Bourbonen
-Bourbonen
Keton 21
(-)-Patchoulialkohol trgt als tricyclischer Sesquiterpenalkohol gemeinsam mit (-)-Norpatchoulenol und den
sensorisch eher unbedeutenden Kohlenwasserstoffen Seychellen und - und -Patchoulen zum PatchoulilAroma (aus Pogostemon patchouli, Labiatae) bei. Das praktisch in unbeschrnkter Menge zugngliche (+)Longifolen (aus indischem Terpentinl von Pinus longifolia) stellt ein ideales Ausgangsmittel zur Herstellung
synthetischer sesquiterpenoider Riechstoffe dar.
128
5. Terpene
OH
OH
OH
-Patchoulen
-Patchoulen (+)-Longifolen
Complicatsure [Dehydrohirsutsure C] ist aus dem hufig auf totem Holz anzutreffenden Striegeligen
Schichtpilz [Stereum hirsutum].
H
COOH
O
Complicatsure
H
5.3.5 Norsesquiterpene
Tetracarbocyclische Struktur besitzt das Norsesquiterpen Nortetrapatchoulol aus Patchoulil. Die Vitispirane
sind eine Klasse C13-norisoprenoider Spiroether, die als Aromakomponenten in Vanille, Honig, Quitte, Weintrauben sowie Grapefruitsaft und Geraniuml nachgewiesen wurden.
OH
Norpatchoulol
Vitispiran
5.3.6 Sesquiterpenlactone
Verbindungen mit ausgeprgten biologischen und oft pharmakologischen Wirksamkeiten findet man vor allem
unter den Sesquiterpenlactonen, eine grere Anzahl von ihnen besitzt sogar Antitumoraktivitt. Die meisten
Sesquiterpenlactone besitzen eine -Methylen--lacton- oder -Methyl--lacton-Substruktur, zahlreiche
Verbindungen dieser Art werden in den Asteraceen gefunden. Diese Methyl(en)butyrolactone wie z.B. das in
Sonnenblumen [Helianthus tuberosus] vorkommende Heliangin wirken als Phytotoxine und als Allergene wie
das
Parthenin
aus
indischem
Parthenium
hysterophorus.
Die
Verbindungen
werden
auf
den
Grundkohlenwasser stofftyp bezogen mit dem Suffix -olid bezeichnet (z.B. Guajanolid, Eudesmanolid,
Pseudoguajanolid). Die meisten Sesquiterpenlactone wie z.B. Matricin, der Vorlufer von Chamazulen (3.3.3),
gehren zur Gruppe der Guajanolide, bei denen die Carboxylgruppe mit der Hydroxygruppe in 6- oder 8Stellung (6- oder 8-olid) verestert ist. 10gliedrige Ringe als Strukturmerkmal besitzen Molephantin und
Molephantinin aus Elephantus mollis. Vom gleichen Typ sind die Germacrolide Eupoformolacton A und B und
Eupatolid aus Eupatorium formosanum, die Hela-Zellen auflsen knnen, und das Helenalin aus Anaphalis
morrisonicola.
129
5. Terpene
10
R1
O
8
O-COCH3
O
12
Guajanolid O
R2
HO
HO
Matrizin
O
Heliangin
(Eudesmanolid)
Eupoformolacton A und B
O
HO
O
A: R1 = H, R2 = OAc
B: R1 = CO H
R
OH
HOCH2
CH2OH
R2 = OAc
HO
O
O
O
O
Parthenin O
Molephantin, R = H O
(Pseudoguajanolid) Molephantinin, R = CH3
Eupatolid
-Santonin wurde bereits 1930 aus Zitwerblten [Artemisia cina] isoliert und aufgrund seiner anthelmintischen
Wirkung frher zur Bekmpfung von Spulwrmern eingesetzt. Picrotoxin ist ein Gemisch zweier -Lactone und
wurde aus den Coccelskrnern, den Frchten der Meerspermaceae-Art Anamirta cocculus, isoliert. Es wirkt
stark zentralerregend und besitzt bei Schlafmittelvergiftungen als Analepticum gewisse therapeutische
Bedeutung. Eine Gruppe von Sesquiterpenen mit einer Spiro-Epoxidgruppierung sind die Trichothecene,
Pilzgifte von verschiedenen auf Getreide wachsenden Schimmelpilzen [Fungi imperfecti u.a. Fusarien].
H
O
H O
O
CO
O
O
R1
R4
R2
OH
O
CH2R3
Picrotoxin
Santonin
R5
Trichothecene
Tutin [Tutu] ist ein giftiges Sesquiterpenlacton aus Coriaria-Arten Neuseelands und Japans, das in Honig
[Gifthonig] gelangen und Vergiftungen verursachen kann. Eine doppelte Lactonstruktur besitzt Vernolepin aus
Veronica hymenolepis mit ausgeprgter Antitumor-Aktivitt.
O
OH
O
O
CO
O
O
H
OH
Tutin
Vernelopin
O
.4 Diterpene
Diterpene werden nur in den hochsiedenden Anteilen etherischer le gefunden, hufiger jedoch in Balsamen,
Extrakten und Harzen. Sie entstehen durch eine weitere Kondensation von aktivem Isopren an
Farnesyldiphosphat unter Bildung von Geranylgeranyldiphosphat, dessen Hydrolyse Geranylgeraniol ergibt.
130
5. Terpene
H2O
PP
CH2OH
Geranylgeraniol
Der phylogenetisch sehr alte acyclische Diterpenalkohol Phytol ist verestert im Chlorophyll enthalten [WILLSTTTER].
Auerdem kommt es etherartig gebunden in Lipiden von Archaebakterien vor. Plaunotol ist ein
acyclischer Diterpendialkohol aus Croton sublyratus [Euphorbiaceae], der in der thailndischen Volksmedizin
Verwendung findet. Geranylgeraniol und Eleganonal wurden zusammen mit anderen linearen Diterpenabkmmlingen in der Braunalge Cystoseira balearica gefunden. Crocetin ist als ein Diterpen-Carotinoid (vgl.
3.7.1) die Surekomponente des Digentiobioseesters Crocin [Gardenin], dem Farbstoff des Safran [Crocus
sativus].
CH2OH
CH2OH
CH2OH
Phytol
Plaunotol
O
O
OR
CHO
RO
O
Crocetin, R = H
Crocin [Gardenin], R = Gentiobiose
Eleganonal
Furanoditerpene werden relativ hufig in Compositen gefunden, Microglossinsure aus Microglossa zeylanica
und Thymifodisure aus Baccharis thymifolia sind zwei Beispiele dafr.
HOOC
HOOC
Microglossinsure
HOOC
HOOC
Thymifodisure
Das zweifellos wichtigste Diterpen, Vitamin A, ist fr Wachstum und Sehfhigkeit (vgl. 5.4.4) von Bedeutung.
Vitamin A1 [Axerophthol, all-trans-Retinol, allgem. Vitamin A genannt] ist ein primrer Alkohol mit 5
konjugierten Doppelbindungen, der 1931 von P. KARRER in kristalliner Form aus Heilbutt-l isoliert und die
Struktur aufgeklrt werden konnte. Vitamin A2 [3,4-Dehydroretinol] ist in Swasserfischen enthalten, besitzt
eine weitere konjugierte Doppelbindung und etwa 1/3 der Vitamin A-Aktivitt. Das konjugierte Doppelbindungssystem ist gegen Suren empfindlich. Unter sauren Bedingungen wird Vitamin A zu biologisch
inaktiven Retro-Verbindungen isomerisiert, berdies entstehen unerwnschte cis-Formen. Die Reaktion von
Vitamin A-Alkohol mit ethanolischer Salzsure fhrt unter Dehydratisierung zu Anhydrovitamin A.
131
5. Terpene
CH2OH
CH2OH
CH2OH
Retro-Vitamin A
Anhydrovitamin A
Durch die Doppelbindungen ist Vitamin A leicht oxidierbar, die im Handel erhltlichen Vitamin A-Ester
(Acetat, Palmitat) sind stabiler. Zur Behandlung von Hauterkrankungen (Akne, Psoriasis) dienen vor allem
Vitamin-A-Sure und oral anwendbare synthetische Derivate des Retinols.
Ausgangsverbindung fr die industrielle Vitamin A-Synthese ist das -Ionon, das bei der BASF aus Isobuten
und Aceton hergestellt wird.
NaC
CH2O
OCH3
Kondensation
Ethinylierung
OH
22
Isopentenylaceton
- CO2
O
CAROLLUmlagerung
CH
H+
Cyclisierung
-Ionon
23
Pseudoionon
O
HO
CH3
CH3
C
O
HC
CH/ Base
-Ionon
Ethinyl--ionol
H2 +
C PPh3
PPh3.HCl
OH
H2C
CH-Metall
Vinyl--ionol
O
Cl
1. Base
O CCH3
24
2.
O=CH
O-COCH3
Vitamin A-Acetat
132
5. Terpene
fhrt zum ,-ungesttigten Aldehyd 26, der durch Grignard-Synthese ein Diol 27 gibt, das nach partieller
Hydrierung, Acetylierung und Wasserabspaltung unter Allyl umlagerung Vitamin A-Acetat ergibt (Formel 5-8).
CH3
CH3
C
O
-Ionon
COOC2H5O
ClCH2COOEt
1. NaOH
CH=O
2. H , - CO2
DARZENS-
26
25
Reaktion
CH3
CH3
CH2OH 1. Pd / H2 Lindlar
C
BrMg-C
CH
CH2OMgBr
Vitamin A-Acetat
2. Ac2O
OH
27
3. H
Industrielle Bedeutung fr die Vitamin A-Synthese besitzt auch die HORNER- (WADSWORTH-EMMONS)Olefinierung: Umsetzung von -Ionon mit dem Anion des Diethyl-(ethoxycarbonyl)-methylphosphonats 28 und
Umesterung gibt einen -Jonyliden-essigester, der reduziert wird. Die analogen Umsetzungen wie in Formel 39 und Isomerisierung mit Iod ergeben all-trans-konfiguriertes Vitamin A-Acetat.
O
1. (C2H5O)2P
CH
1. LiAlH4
2. (C6H5)3P.HBr
C
O
-Ionon
Vitamin A-Acetat
COOEt
COOEt
-Ionylidenessigester
2. Umesterung
3. NaOCH3
4.
O=CH
OAc
Auch grogliedrige Ringe werden unter den monocyclischen Diterpenen gefunden, ein neungliedriger Ring ist
als Strukturteil in der Dilophinsure aus der Braunalge Dilophus guineensis, ein zehngliedriger in Pachytriol
aus der Braunalge Dictyota dichotoma. Cyclisierungsreaktionen der Diterpene knnen bis zu einem 14gliedrigen Ring fhren, wie er z.B. in Cembren A aus Nadelbaumharzen und im Olibanumharz (Weihrauch)
gefunden wird.
HOOC
Pachytriol
HOOC HO
Dilophinsure
OH
Cembren A
Zu den bicyclischen Diterpenen gehren die Verbindungen mit Labdan- und Clerodanstruktur. Beispiel fr ein
Labdanditerpen ist (-)-Sclareol aus Muskatellersalbei Salvia sclarea, dessen Chromsureoxidation zu Ambrariechstoffen fhrt. Vom gleichen Struktur typ ist das aus den Pflanzen Coelus forskholi isolierte Forskolin.
Manool stammt aus dem Holzextrakt von Dacrydium biforme, Scoparinsure A wurde aus der
paraguayanischen Droge Typycha Kuratu [Scoparia dulcis] gewonnen. Der Ester 28 wurde aus dem Schleim
133
5. Terpene
der marinen Lungenschnecke Trimusculus reticulatus erhalten und dient als Abschreckstoff gegenber
ruberischen Seesternen.
OH
O
OH
OH
CH2OH
CH2OH
O
OH
OH
OH
OAc
H
HOOC
OBz
HO
(-)-Scareol
28
Manool
Forskolin
Scoparinsure A
Die Mehrzahl der cyclischen Diterpene leiten sich vom tricyclischen Abietan und vom tetracyclischen
Giberellan ab, die durch Phosphatabspaltung und Methylgruppenwanderung bzw. WAGNER-MEERWEINUmlagerung und Ringkontraktion aus Geranylgeranylpyrophosphat entstehen.
Abietan
PP
Geranylgeranylpyrophosphat
ent-Gibberellan
Harzsuren wie die Abietinsure und Neoabietinsure besitzen tricyclische Perhydrophenanthrenstruktur und
sind Hauptbestandteile des Coniferenharzes [Colophonium]. Podocarpinsure [Podocarpsure] ist Bestandteil
des Podocarpusharzes aus dem Holz der Harzeibe [Podocarpaceae]. Die Gattung Calceolaria
[Scrophulariaceae]
enthlt
verschiedene
Pflanzen,
die
volksmedizinisch
Bedeutung
haben.
Das
Dehydroabietinal 29 wurde aus C. ascendens isoliert, 18-Oxoferruginol 30 aus dem Blattl der Konifere
Torreya nucifera [Taxadeae], 1-Oxohinokiol 31 findet man unter den Terpenoiden von Calocedrus formosana
[Cupressaceae], und Nimbidiol ist aus der Wurzelrinde des Neembaums Azadirachta indica [Meliaceae].
OH
H
HOOC
Abietinsure
Neoabietinsure
HOOC
Podocarpinsure
[Podocarpsure]
HOOC
OH
OH
OH
29
30
? 31
HOH2C
HO
O=HC
?
H
Nimbidiol
Die Renillafouline A, B und C wurden aus der gemeinen Seefeder Renilla reniformis isoliert und inhibieren die
Festsetzung von Seepocken auf Schiffsrmpfen. Vinigrol ist ein Diterpen aus dem Pilz Virgaria nigra mit
blutdrucksenkender und PAF-antagonistischer Wirkung.
134
5. Terpene
OR2
OH
OR1
OH
Renillafoulin A R1, R2 = Ac
O
B R1 = Ac, R2 = C2H5CO
O
OH
O
HO
H
C R1 = Ac, R2 = C3H7CO
O
H H
Vinigrol
Zur Gibberellangruppe gehren die tetracyclischen Gibberelline, eine Gruppe diterpenoider Phytohormone, die
u.a. die Samenkeimung und Bltenbildung frdern. Das erste wurde bereits 1926 [KUROSAWA] aus Kulturfiltraten des phytophagen Ascomyceten Fusarium moniliforme entdeckt, bisher wurden ber 60 verschiedene
Gibberelline aus Pilzen und hheren Pflanzen isoliert. Die Gibberelline lassen sich je nach Zahl der C-Atome in
C20-Gibberelline [ent-Gibberelline] und C19[ent-20-nor-Gibberelline], denen C-20 fehlt, einteilen. Am
leichtesten zugnglich ist Gibberellin A3 [Gibberellinsure], das kommerziell aus Fermentationsanstzen von F.
moniliforme gewonnen wird und wegen seines Einflusses auf das Lngenwachstum der Pflanzen uerst
interessant ist.
O
OC
HO
H
HOOC
COOH
OH
HO
H
COOH
Das tricyclische Taxan-Gerst bildet die Grundstruktur verschiedener ungewhnlicher Diterpene. Taxacine
sind polyhydroxylierte Taxane aus der Eibe Taxus cuspidata und Abbauprodukte der Taxine, giftiger
Eibenalkaloide. Die Taxane, allen voran das Taxol, nehmen derzeit als Anti-Krebsmittel groes Interesse in
Anspruch. Der ergiebigste Zugang erfolgt, trotz bekannter Totalsynthesen, ber die Rinde der pazifischen oder
kalifornischen Eibe. Taxol ist ein Taxan -Diterpen aus der Rinde der pazifischen Eibe T. brevifolia, das als
Cytostatikum in die Zellteilung eingreift. Es zeigt im klinischen Test gute Therapieerfolge gegen bestimmte
Karzinome und maligne Melanome und wurde vor kurzem in den USA zur Chemotherapie zugelassen. Da der
steigende Substanzbedarf nicht mehr mit nordamerikanischen Eiben abgedeckt werden kann, wird nach neuen
Quellen wie z.B. Zellkulturen oder die kultivierbare Europische Eibe [T. baccata] gesucht. Das darin
enthaltene 10-Deacetylbaccatin II lt sich semisynthetisch in Taxol berfhren und knnte damit das Problem
der Taxolgewinnung lsen. Zahlreiche neue Taxoide wurden in verschiedenen Eibenarten gefunden, die sich
nur wenig von Taxol unterscheiden. Ausnahmen jedoch sind u.a. die Taxuspine A und B. Im Gegensatz zu
Taxol bewirken die Taxuspine, die in der japanischen Eibe T. cuspidata gefunden wurden, eine Akkumulation
von Vincistrin (14.
Wallifoliol ist ein neuartiges Diterpen aus der Himalaya-Eibe T. wallichania, das ein neuartiges 5/6/6/6/4Ringgerst aufweist.
135
HO
5. Terpene
R1 O
CH3COO
OH
OCOCH3
C6H5
O
O
H
OH
Taxin I
N(CH3)2
N
H
OH
HO
H
CH3COO
OH
Taxacin I R1 = OH
Taxacin II R2 = H
C6H5
O
OAc
O
OH
HO
C6H5COO
Taxol
R1 = COCH3, R2 = C6H5
HO
HO
O
C6H5COO
H
H
O
O
O CCH3
OH
HO
OH
OAc
O
OAc
OH
HO
H
OAc
O
AcO
AcO
O2CC6H5
H
H
HO
C6H5COO
OAc
Taxuspin A, 5/7/6-Gerst
Wallifoliol
5/6/6/6/4-Ringgerst
O
O
O CCH3
Taxuspin B, 6/10/6-Gerst
HO
10-Deacetylbaccatin II
Daphnetoxin ist ein giftiges Diterpenoid aus Seidelbast-Arten, das beim Menschen Kontakt-Dermatitis auslst.
Der entsprechende Cinnamylidenessigsureester ist das Mezerein.
O
C6H5
O H
O
O
O
OH
H
C
H
C
H
C
OH
OH
H
C
O
O
O
Daphnetoxin
O
OH
OH
Mezerein
OH
Die Stbchen und Zpfchen der Retina des menschlichen Auges, die fr Dmmerungssehen bzw. Farbsehen
verantwortlich sind, enthalten einen lichtempfindlichen Farbstoff, den roten Sehpurpur oder "orangegelbes"
Rhodopsin. Es ist ein Proteid, dessen prosthetische Gruppe Retinen1, der Vitamin A1 entsprechende Aldehyd
cis-11-Retinal, durch enzymatische Dehydrierung aus Retinol entsteht. Deshalb ist Vitamin A zur Bildung des
Sehpurpurs notwendig. Die Formylgruppe des Retinals ist mit der -Aminogruppe eines Lysins im Protein
Opsin zu einer SCHIFFschen Base verknpft.
11
+ Opsin
12
s-cis
h
HN
11-cis, 12-s-cis-Retinal-Opsin
[s fr single bond]
all-trans-Retinal-Opsin
Opsin
Bei Einwirkung von sichtbarem Licht wandelt sich die cis-11-Doppelbindung des Retinalteils im Protein zur
all-trans-Konfiguration um. Diese von Licht ausgelste Isomerisierung entspricht einer molekularen
Bewegung, bei der all-trans-Form ist die -CH=O - Gruppe 0.7 nm von der ursprnglichen Position entfernt.
136
5. Terpene
Damit verndert sie die Polarisation der Stbchenmembran, bewirkt Nervenimpulse in den Synapsen und lst
den Sehvorgang aus. Nach der Reaktion wird das all-trans-Retinal vom Protein abgelst, zum cis-11-Retinal
rckisomerisiert und nach neuerlicher Bildung der SCHIFFschen Base wieder in den Kreislauf zurckgefhrt
[WALD, HONIG und KARPLUS]. Irreversibel vernderte Retinal-Molekle werden durch Vitamin A ersetzt.
Licht h
HC
NH
roter Sehpurpur
11-cis,12-s-cis-Retinal-Opsin
11-trans-12-s-cis-Prlumi-Rhodopsin
(violett)
thermisch
11-cis,12-s-trans-Lumi-Rhodopsin
(purpurrot)
+ Opsin
thermisch
all-trans-Meta-Rhodopsin
Hydrolyse, - Opsin
Isomerase
11-cis,12-s-cis-Retinal
11-trans-Retinal
Alkohol-Dehydrogenase
NADH + H+
Alkohol-Dehydrogenase
Isomerase
11-cis-Retinol
11-trans-Retinol
Die cis-trans-Isomerisierung von Rhodopsin, der essentielle Schritt beim Sehvorgang, ist eine der schnellsten
untersuchten photochemischen Reaktionen und innerhalb von 200 Femtosekunden (200 fs = 2 . 10-13 sek) abgeschlossen. Ergebnisse der Laser-Femtosekunden-Spektroskopie deuten auf einen fast barrierefreien bergang
bei der Bildung des Photoprodukts hin. Die Isomerisierung von all-trans-Retinal im Sonnenlicht fhrt
berwiegend zum 13-cis-Isomeren. Die einzelnen Retinal-Isomeren lassen sich im UV-Spektrum unterscheiden.
Die thermodynamisch stabilste Form des Retinols ist die all-trans-Form, unter den cis-Isomeren sind das 9-cis-,
das 13-cis- und das 9,13-dicis-Isomer am stabilsten.
Einfacher zu isolieren als das Rhodopsin hherer Tiere ist das des Halobacterium halobium, eine
photochemisch aktive "Purpurmembran", die zum Groteil aus Bakteriorhodopsin besteht; als Chromophor
dient all-trans- und 13-cis-Rhodopsin.
Im biologischen System gewhrleistet die Wahl des energiereicheren 11-cis-Retinal-Isomer optimale Ausbeute
bei der Photoisomerisierung. Aus der photochemisch-aktiven Membranfraktion [Purpurmembran] der auf
extremen Salzstandorten (Totes Meer, Ksten Kaliforniens, Sdafrikas und Sdaustraliens, sogar auf
137
5. Terpene
gepkeltem Fisch) lebenden Archaebakterien Halobacterium halobium lt sich das stabilere, aus 13-cisRetinal aufgebaute Bacteriorhodopsin isolieren. Durch Lichteinwirkung kommt es zur Isomerisierung zum alltrans-Rhodopsin, zum Protonentransport durch die Membran und zur Generierung eines elektrischen Potentials,
das zur Energiegewinnung in der Zelle genutzt wird. Die Lipide der Purpurmembran enthalten einen Anteil an
etherartig gebundenem Dihydrophytol (2.2.5).
Die Anpassung an hohe Bestrahlungsstrken der Sonne hat an den extremen Standorten das berleben der
Halobakterien gesichert Mehrere Photorezeptoren arbeiten zusammen, die in ihrem Aufbau dem Sehpurpur des
Menschen bzw. der Tiere verblffend hnlich sind. Bakteriorhodopsin, entdeckt von D. OESTERHELT und W.
STOECKENIUS, bildet Areale, die bis zu 50 % der Membranoberflche bedecken knnen. Nach Absorption eines
Lichtquants durchluft Bakteriorhodopsin unter Absorptionsnderung eine Reihe photochemischer und thermochemischer Zwischenstufen und kehrt ohne weitere Energie-Zufuhr in seinen Ausgangszustand zurck (Abb. 34). Bei Zimmertemperatur und Lichtsttigung wird dieser Photocyclus etwa zweihundertmal pro Sekunde
durchlaufen. Hierin besteht ein wichtiger Unterschied zum Sehpurpur Rhodopsin, das unter Aufwendung von
Stoffwechselenergie (Wirbeltier-Auge) bzw. erst durch Absorption eines weiteren Lichtquants (Insekten-Auge)
in seinen Ausgangszustand zurckgefhrt werden mu.
Bakteriorhodopsin
(570 nm)
Zwischenstufen
H+
(Cytoplasma)
Zwischenstufen
412 nmKomplex
H+
(Auenmedium)
Abbildung 5-3. Photocyclus von Bakteriorhodopsin. Nach Absorption eines Photons wird Bakteriorhodopsin
ber mehrere Zwischenstufen zum deprotonierten 412 nm-Komplex umgewandelt, der ber weitere
Zwischenstufen in den Ausgangszustand zurckfindet.
Cyanopsin ist der Sehfarbstoff der Fische und besteht aus 3,4-Dehydroretinal [3,7-Dimethyl-9t-(2,6,6-trimethylcyclohexa-1,3-dienyl)nona-2E,4E,6E,8E-tetraenal] und Opsin.
.5 Sesterpene
138
5. Terpene
Die Sesterpene sind eine kleine Gruppe von C25-Terpenen, deren erste Vertreter erstmals 1965 aus Insektenwachsen und aus niederen Pilzen isoliert wurden. Cochliobolin B [Zizamin B] und die phytotoxisch wirkenden
Ophioboline A, B, C und F, von den pflanzenpathogenen Pilzen Cochliobolus miyabeanus bzw. Helminthosporium oryzae produziert, leiten sich vom tricyclischen Grundgerst Ophiobolan ab.
H
O=CH
O=CH
OH
Cochliobolin B
[Zizanin B]
Ophiobolan
H
OH
Ophiobolin A
HO
.6 Triterpene
Die Triterpene umfassen mehrere Substanzklassen mit zahlreichen biologisch wichtigen Vertretern. Zu ihnen
gehren neben den im folgenden beschriebenen Verbindungen auch die Steroidhormone (Kap. 6.
Saponine (6.7), Steroidalkaloide (17.
), Steroid-
Triterpene entsteht im Gegensatz zur regelmigen Kopf-Schwanz-Folge bei den Diterpenen durch Kopf-KopfKondensation aus zwei Moleklen Farnesyldiphosphat und ist daher aus zwei spiegelbildlich symmetrischen
Hlften aufgebaut. Zwischenstufe ist das Prsqualendiphosphat, ein Cyclopropylmethanolderivat, das zum
Hexaenkohlenwasserstoff Squalen fhrt.
PP
H2
C
PP
Kopf-Kopf-Kondensation
H2C
- PPO -
K-K
H2C
Prsqualendiphosphat
PP
Squalen
K-K
Kopf-Kopf-Addition
Squalen wurde ursprnglich aus Leberl von Haifischen [Squalus spp.] isoliert, ist aber auch in Pflanzenlen,
Knollenbltterpilzen und Mutterkorn enthalten und tritt in geringer Konzentration weitverbreitet auf. Besondere
Bedeutung hat es als Biosynthesevorstufe von Steroiden (vgl. 4.2 Cholesterin). Durch Cycloadditionen ber das
Squalenepoxid entstehen Methylsterole wie z.B. Protosterol, die durch Methylverschiebungen von 14- in 13Stellung und 8- in 14-Stellung und gleichzeitige Hydridverschiebungen bei Tieren und Pilzen das Lanosterin
und bei hheren Pflanzen und Algen das Cycloartenol ergeben. Cycloartenol [9,19-Cyclo-24-lanosten-3-ol],
bei dem die C-19-Methylgruppe des Lanosterins einen Dreiring bilden, ist die Vorstufe vieler pflanzlicher
Steroide und wurde aus Wolfsmilchgewchsen [Euphorbiaceae] und als Nebenkomponente des Leinls isoliert.
139
5. Terpene
K-K
2,3-Squalenepoxid
Protosterol
H
HO
Squalen
24
26
20
25
12
17
11
19
27
1
14
15
7 asymmetrische Zentren
27 = 128 Isomere
HO
HO
H
Lanosterin
Cycloartenol
Formel 5-10. Schema der Biosynthese von Triterpenen und Steroiden (K-K Kopf-Kopf -Addition).
Lanosterin [5-Lanosta-8,24-dien-3-ol] kommt zusammen mit Agnosterin [Agnosterol, 5-Lanosta7,9(11),24-trien-3-ol], 24,25-Dihydrolanosterin und 24,25-Dihydroagnosterin im Wollfett der Schafe vor und
wird daraus industriell gewonnen. Das Diensystem des Agnosterins bildet sich leicht durch Luftoxidation des
Lanosterins. Durch Abspaltung der drei C-4- und C-14-Methylgruppen aus Lanosterin entsteht Cholesterin, der
direkte Biosynthese-Precursor der Steroidhormone (vgl. 5.2 Cholesterin).
24
24
24
COOH
25
25
25
11
11
11
HO
HO
H
Agnosterin
HO
24,25-Dihydrolanosterin
24,25-Dihydroagnosterin
Aus Mikroorganismen wurden zahlreiche Carbonsuren isoliert, die das Grundgerst des Lanostans bzw. C-24Methyllanostans aufweisen. Die Carboxylgruppe dieser Suren steht in 21- oder 26-Stellung, die C30-Suren
werden von Basidiomyceten, die C31-Suren von Ascomyceten produziert.
Triterpene treten im Gegensatz zu den anderen Terpenen relativ selten in der Natur auf, vor allem in Extrakten,
Harzen und Balsamen von Pflanzen. Neben den wenigen acyclischen, bicyclischen und tricyclischen Strukturen
und der tetracyclischen Lanosterol-Gruppe sind besonders pentacyclische Triterpene verbreitet, die der Ursan-,
Olean- und Lupangruppe angehren.
Lansinsure ist eine bicyclische seco-Disure, entstanden durch Spaltung der Ringe A und A' des
tetracyclischen Onocerins. (-)-Ambrein, das durch gestrte Squalen-Cyclisierung entsteht, ist als geruchloser
tricyclischer Triterpenalkohol die Hauptkomponente der Ambra, einem pathologischen Stoffwechselprodukt
des Pottwals, das als Wundverschlu bei Verletzung der Darmwand dient. Die spter ausgeschiedenen
140
5. Terpene
Kotsteine sind Luft und Licht ausgesetzt und es entstehen die fr die Ambra-spezifischen Geruchsqualitten
typischen Metaboliten 35, Ambrox, -Ambrinol, Ambraaldehyd und Alkohol 36.
HOOC
OH
Lansinsure
Ambrein
HOOC
CHO
-Ambrinol
CH2OH
OH
35
Ambrox
Ambraaldehyd
36
Eine umfangreiche Gruppe tetracyclischer Triterpene sind die meist als Glykoside vorliegenden Curcubitacine,
Bitterstoffe von Gurken- und Krbisgewchsen [Cucurbitaceae]. Einige von ihnen besitzen cytotoxische
Wirkung und inhibieren das Wachs tum gewisser Krebsformen des Menschen, Cucurbitacin B bewhrte sich in
einigen Fllen bei Brustkrebs. Manche wirken abfhrend und diuretisch, als Insektenlockstoffe sowie als
Antigibberelline. Die Cucurbitacine sind ungesttigte Lanostan-Derivate, die sich durch formale Verschiebung
der 10-stndigen C-19-Methylgruppe nach C-9 von diesen unterscheiden. Charakteristisch ist eine 11-OxoGruppe, eine 5-Doppelbindung, in der Seitenkette liegt ,-ungesttigte Carbonylgruppe vor. Mehr als 25
verschiedene Cucurbitacine sind bis 1975 isoliert worden, Cucurbitacin E [Elaterin] wurde bereits 1831 in
kristalliner Form erhalten.
HO
O
O-COCH3
O
R1
R1
H
H
OH
R4
R2
Cucurbitacine
R2
R3
OH
-O-
OH
-O-
OH
R4
Cucurbitacin
CH2OH
CH3
A
B
CH2OH
R3
Dammarene sind im Pflanzenreich weitverbreitete, oft glykosidisch gebundene tetracyclische Triterpene. Die
wichtigsten Vertreter sind der Kohlenwasserstoff Dammaradien aus Farnen und das Dammarendiol, der
Hauptinhaltsstoff des Dammarharzes, das frher ein Bestandteil der Kleber von Heftpflaster war.
R2
R3
H
H
R1 = H, R2 = H, R3 =
OH
R1 = OH, R2 = H, R3 =
1
Viele Triterpen-Glykoside bilden schumende, seifenartige wrige Lsungen, wirken hmolysierend und
werden zu den Saponinen gerechnet. Diese Triterpen-Saponine kommen vorwiegend in zweikeimblttrigen
Pflanzen [Dikotylen] vor. Wegen ihrer Carboxylgruppen werden einige auch als saure Saponine bezeichnet. Zu
141
5. Terpene
den tetracyclischen Triterpen-Saponinen gehren u.a. die sog. Ginsenoside, Wirkstoffe der aus der chinesischen
und koreanischen Volksmedizin bernommenen Ginsengwurzel [Panax ginseng]. Als Sapogenine, die Aglyka
der Saponine, findet man Protopanaxadiol und Protopanaxatriol.
R3
HO
H
R2
H
HO
H
Protopanaxadiol
R1 = H, R2 = OH, R3 = CH3
Protopanaxtriol
R1 = OH, R2 = CH3, R3 = OH
Durch einen bestimmten Faltungsmechanismus von Squalen kommt es zur vollstndigen Cyclisierung des
Grundkrpers unter Bildung pentacyclischer glykosidischer Triterpen-Saponine, die in zahlreichen Pflanzen
vorkommen. Dazu gehren z.B. -Amyrin mit der Grundstruktur des 5-Ursans, das in vielen Balsamen und im
Milchsaft des Lwenzahns gefunden wird. Vom gleichen Strukturtyp ist die Ursolsure, das Aglykon saurer
Saponine, die in Blttern zahlreicher Pflanzen und in Fruchtschalen vorkommt, ebenso das Bauerenol.
H
H
-Amyrin
HO
H
COOH
HO
H
Bauerenol
Ursolsure
Vom 5-Oleantyp sind -Amyrin [-Amyrenol, -Viscol], das in der Zuckerrbe, in Oliven und im Oleander
vorkommt, die in der Sholzwurzel [Radix Liquiritiae von Glycyrrhiza-Arten] enthaltene Glycyrrhetinsure
sowie die in Guajacum-Arten und in Efeu [Hedera helix] enthaltene Oleanolsure. Zum gleichen Strukturtyp
werden Germanicol und Glutinol gezhlt.
COOH
O
H
H
HO
H
HO
-Amyrin
Glycyrrhetinsure
H
HO
COOH H
HO
H
Oleanolsure
Glutinol
Eine Vielzahl glykosidischer Triterpene mit unterschiedlichen biologischen Aktivitten wird in marinen
Organismen gefunden. Die Holothurine, eine Gruppe hochtoxischer Saponine aus Seegurken [Holothurien],
bestehen aus Holothuringeninen als Aglyka, die das Grund gerst des Holostans besitzen. Charakteristische
Genine sind Holotoxin, Seychellogenin, Holothurinogenin, 22,25-Epoxyholothurinogenin und Bivittosid Cgenin. Die Holothurientoxine wurden ursprnglich als Fisch gifte isoliert, als Saponine besitzen sie
142
5. Terpene
hmolytische Aktivitt. Spter erst wurde ber deren neurotoxische, bakterizide und antimykotische Wirkung
berichtet. In vivo besitzen sie Wirkung gegen Tumorzellen, die besonderes Interesse in der Medizin erregte.
O
HO
OH
H
O
H
HO
Holostan
HO
O
Holotoxin
HO
Bivittosid C-genin
H
HO
R
OH
Seychellogenin R = H
Holothurinogenin R = OH
HO
H
22,25-Epoxyholothurinogenin
HO
H
Viele Prokaryonten enthalten das pentacyclische Triterpen Hopan, allgemein werden pentacyclische Triterpene
bakteriellen Ursprungs als Hopanoide bezeichnet. Ihre Bildung erfolgt wie die des Tetrahymanols nicht ber
Squalenepoxid, sondern durch direkte Cyclisierung von Squalen. Dadurch fehlt diesen nichtpflanzlichen
Triterpenen die 3-Hydroxygruppe. Die ersten Hopanoide wurden in Sedimenten, Mineralien und Erdl entdeckt
und als Geohopanoide bezeichnet. Es handelt sich um Verbindungen mit bis zu 35 C-Atomen und bis zu
hexacyclischer Struktur und sie galten als molekulare Fossilien. Erst spter wurden Stoffe dieser Art als
Biohopanoide in Mikroorganismen und Pflanzen gefunden, z.B. in Bakterien, Blaualgen, Farnen und Flechten.
Im
extrem
thermoacidophilen
Bakterium
Bacillus
wurde
acidocaldarius
Bakteriohopantetrol
[Tetrahydroxybacteriophan] gefunden, das in den Membranender Bakterien offenbar die Funktion der Sterine
bernimmt.
OH
H
OH
OH
H
OH
OH
Hopan
Tetrahymanol
Bakteriohopantetrol
[Tetrahydroxybacteriophan]
Der immergrne Neembaum Azadirachta indica [Meliaceae], der heilige Baum der Hindus in Indien, dient in
der indischen Volksmedizin als bewhrtes Zahnheilmittel. Eine Reihe tetranortriterpenoider Bitterstoffe mit
entzndungshemmender und adstringierender Wirkung wurde aus der Pflanze isoliert.
O
H3COOC
COOCH3
O
O
O
OCH3
O
OC
O
HO
O
O
O
H3COOC
H
OR
OCOCH3
Nimbin
H3COOC
Nimbinin
OH
H3COOC
Salanin
H3COOC
OH
O
Azadirachtin
143
5. Terpene
.7 Tetraterpene, Carotinoide
Die Carotinoide werden nur in hheren Pflanzen, wo sie in den Chloroplasten und Chromoplasten vorkommen,
und Mikroorganismen biosynthetisiert. Schlsselverbindung der Biogenese ist das in hheren Pflanzen und
Pilzen aus zwei Geranylgeranyldiphosphat gebildete 15-cis-Phytoen [15-cis,7,8,11,12,7',8',11'12'-Octahydro,'-carotin] mit der zentralen Doppelbindung. Von der Mitte aus werden durch Dehydrierung ber die
Zwischenstufen cis-Phytofluen (5 konjugierte Doppelbindungen), trans-Phytofluen, -Carotin (7 konjugierte
Doppelbindungen) und Neurosporin [7,8-Dihydro-,-carotin] symmetrisch zustzlich Doppelbindungen
eingefhrt. Endpunkt dieser Dehydrierungskaskade ist das tiefrote Lycopin, der rote Farbstoff der Tomate,
Hagebutte, Wassermelone und anderer Frchte. Vom Lycopin leiten sich die Carotine und die Xanthophylle ab.
K-K
15-cis-Phytoen
K-K
Lycopin (,Carotin)
K-K Kopf-Kopf-Addition
Die Carotinoidbiosynthese wurde vor allem bei Mutanten der Schlauchpilze Neurospora, bei Purpurbakterien
Rhodopseudomonas und Grnalgen Chlorella studiert. Man hat auch Lycopersin, das im Gegensatz zum cis-15Phytoen eine zentrale Einfachbindung besitzt, frher als Schlsselverbindung der Biogenese angesehen. Gegen
diese Auffassung sprechen jedoch Befunde, wonach Lycopersin nicht in allen carotinsynthetisierenden Zellen
gefunden wurde.
144
5. Terpene
Im Unterschied zu den Carotinoiden hherer Pflanzen gibt es eine Reihe bakterieller Carotinoide, die meist
lngere Polyenketten als Strukturmerkmal aufweisen und an beiden Moleklenden polare Gruppen tragen.
Diese Verbindungen haben gerade die richtige Lnge, um eine Phospholipid-Doppelschicht zu vernieten und
fungieren mglicherweise als membranstrkende Faktoren der Bakterienmembran, hnlich den Hopanoiden und
Sterinen.
HO
OCH3
36
HO
OH
38
OH
HO
OH
HO
36
Etwa 600 verschiedene Carotinoide sind bekannt, sie gehren zu den hufigst verbreiteten natrlichen
Pigmenten. In den Granula der Chloroplasten der hheren Pflanzen liegen sie in Form von Chromoproteinen
(vgl. 11. Proteine) vor und sind durch bestimmte Lsungsmittelsysteme spezifisch extrahierbar. Die biologische
Funktion der Carotinoide in den Pflanzen beruht vor allem auf ihrer Beteiligung als Begleitpigmente an der
Photosynthese. Carotinoide sind fr die charakteristischen Farben vieler Blten, Bltter, Wurzeln und Frchte
verantwortlich. Man unterteilt sie in die reinen Kohlenwasserstoffe, Carotine, und die sauerstoffhaltigen
Xanthophylle oder Phylloxanthine . Im Tierreich finden sie sich vor allem bei niederen Meerestieren, wie z.B.
Seesternen und Crustaceen. Carotinoide kommen auch in Insekten und Vgeln (z.B. in Flamingos) vor. Die in
anderen tierischen Organismen aufgefundenen Carotinoide enthalten meist nur 4 Isopreneinheiten (Diterpene,
5.4.1).
Gewhnliches Carotin ist ein Isomerengemisch, bis heute sind 6 verschiedene Carotine bekannt, -, -, -, -, und -Carotin. Der Unterschied zwischen diesen Isomeren ergibt sich aus den beiden Enden der Polyenkette.
Die carotinspezifischen Prfixe , , , , und charakterisieren die Endgruppen, entspricht dem Iononende, dem -Iononende, einem Trimethylcyclopentanderivat, und aromatischen Moleklenden
und der Struktur mit den isolierten Enddoppelbindungen des Lycopins. Die Vorsilbe apo bedeutet, da
jenseits des bezeichneten C-Atoms das Kohlenstoffgerst durch Wasserstoffatome ersetzt wird, retro-
145
5. Terpene
Carotinoide werden Verbindungen bezeichnet, deren Polyenkette durch eine exo-cyclische Doppelbindung an
den Cyclohexanring gebunden ist.
(R)--Carotin
[,-Carotin]
-Carotin
[,'-Carotin]
-Carotin
[,-Carotin]
-Carotin
[,-Carotin]
-Carotin
-Carotin enthlt einen - und einen -Iononring als Endstruktur (,-Carotin). -Carotin, der rote Farbstoff
von Mohrrben (ca. 85 % der Carotinoide) und Bltter, aber auch in Bakterien, Pilzen und tierischen
Organismen zu finden, besteht aus zwei -Iononeinheiten. -Carotin [Provitamin A] ist ernhrungs
physiologisch wertvoll, da es im menschlichen Organismus zum essentiellen Vitamin A umgewandelt wird.
Hierzu wird es oxidativ zu Retinal (Sehpigment) gespalten. Synthetisches -Carotin ist ein wichtiger
Lebensmittelfarbstoff und dient als Tierfutterzusatz fr Hhner, wo es fr befriedigende Dotterfrbung (EigelbFarbskala) und Farbe der Hhnchenhaut sorgt.
Xantophylle oder Phylloxanthine sind sauerstoffhaltige Derivate der Carotine und bewirken als gelbe Farbstoffe
die Herbstfrbung der Bltter. Cryptoxanthin kommt in gelbem Mais, Eidotter, Paprika, Orange, Mandarine,
Papaya und Krbissen vor, Capsanthin ist der charakteristische Farbstoff des roten Paprikas [Capsicum
annuum], Begleitpigmente sind das Capsarubin und das Cryptocapsin. Zeaxanthin [(3R,3'R)-,-Carotin-3,3'diol] bewirkt hauptschlich die gelbe Farbe der Maiskrner [Zea mays], woraus es 1939 von P. KARRER isoliert
wurde. Es ist ferner in anderen Pflanzen, im Eidotter, in Krustentieren, Fischen, den Federn von
Kanarienvgeln, Pilzen, Algen und Bakterien zu finden. Verestert kommt es in Blten und Frchten, z.B. von
Krokus, Safran, Hagebutte, Paprika, Orangen, usw. vor. Das Dipalmitat Physalein ist der rote Farbstoff von
Physalis-Arten (Pfaffenhtchen, Sanddorn, Judenkirsche). Zeaxanthin wird als Lebensmittelfarbstoff
verwendet. Violaxanthin [(5R,6S,5'R,6'S)-Diepoxyzeaxanthin] ist in Grnalgen [Chlorella] und hheren
Pflanzen wie z.B. dem Stiefmtterchen Viola tricolor, in Taraxacum, Tagetes, Tulipa, Citrus u.a. enthalten und
geht bei Belichtung ber die Monoepoxid-Verbindung Antheraxanthin in Zeaxanthin ber (lichtabhngiger
Xanthophyll-Zyklus). Im Dunkeln wird Violaxanthin wieder rckgebildet. Einige Carotinoide wirken bei
146
5. Terpene
Tieren als Provitamin und werden durch Spaltung zu Vitamin A umgewandelt. Canthaxanthin wurde frher als
Brunungsmittel verwendet. Auch der rote Farbstoff der Krebse und Hummern, das Astaxanthin [(3S,3'S)-3,3'Dihydroxy-,'-carotin-1,4-dion], gehrt in diese Reihe.
OH
Lutein [,-Carotin-3,3'-diol]
[Xanthophyll, Blattgelb]
HO
Kryptoxanthin
[3-Hydroxy--carotin]
O
HO
Capsanthin [3R,3'S,5'R)-3,3'-Dihydroxy,-carotin-6'-on]
OH
OH
HO
Zeaxanthin
[3R,3'R)-,-Carotin-3,3'-diol]
OH
Violaxanthin [3S,3'S)--Carotin(5R,6S)diepoxi-3,3'-diol]
HO
O
O
O
HO
Canthaxanthin
[,-Carotin-4,4'-dion]
O
COOH OH
8'-Apo-,-carotin-8'-sure
Capsorubin
O
O
OH
Carotine lassen sich in groem Mastab industriell aus Pflanzenmaterial extrahieren oder vollsynthetisch
herstellen. -Carotin wird grotechnisch (ca. 700 t/Jahr) durch WITTIG-Reaktion von Vitamin A-Aldehyd und
Vitamin A-Phosphoniumsalz oder durch Autoxidation des entsprechenden Ylids hergestellt. Dank der
technischen Synthese von -Carotin gibt es gelbe Pigmente fr Futter- und Nahrungsmittel, die die
cancerogenen Azofarbstoffe ersetzen. Es dient ferner als Konservierungsmittel und wird pharmazeutisch als
potentieller Arzneistoff zur Krebsprvention und -therapie eingesetzt.
Tetra- bis octacyclische "Terpene" wie z.B. das Trishomotetraterpen konnten aus dem aus dem Eozn
stammenden Messelschiefer extrahiert werden und stellen Dokumente mglicher prhistorischer Biosynthesen
(Cyclasen) dar.
Trishomotetraterpen
aus Messelschiefer
.8 Polyterpene
147
5. Terpene
Polyterpene [Polyprene] sind Polymere des Isoprens [C5H8], das wichtigste natrliche Polypren ist der
Kautschuk. Naturkautschuk ist das cis-1,4-Polyisopren, das einen Polymerisationsgrad von ca. 5.000 und eine
mittlere Molmasse von etwa 350.000 besitzt. Es kommt als Emulsion im Milchsaft [Latex] mancher tropischer
Bume wie des im Amazonasbecken wildwachsenden Kautschukbaums Hevea brasiliensis [Euphorbiaceae]
vor. Kautschuk ist bei Raumtemperatur amorph, bei niedriger kristallisiert er. Mit steigender Temperatur
tendieren die Molekle zur Ausdehnung in Richtung ihrer Lngsachse. Beim Ansuern, meist durch Zusatz von
Essigsure, koaguliert der Kautschuk zu festem Gummi, der zu Kugeln oder Platten geformt und in den Handel
gebracht wird. Naturkautschuk als vielfach ungesttigte Verbindung geht die blichen Olefinreaktionen wie
Addition von Wasserstoff, Halogen und Halogenwasserstoff ein und neigt zur Autoxidation. Beim trockenen
Erhitzen wird er in Isopren und Dipenten gespalten. Durch Vakuum-Pyrolyse alter Autoreifen gelang es
kanadischen Forschern, etwa 60 % der Reifenmasse in Form flchtiger Kohlenwasserstoffe abzudestillieren.
Die kondensierte Phase, die aus aliphatischen und aromatischen Kohlenwasserstoffen bestand, enthielt als
Hauptkomponente 15 % rac-Limonen. Gegenber Licht und Luftsauerstoff ist Naturkautschuk nicht besonders
widerstandsfhig. Durch Abbau der Kette und teilweise Cyclisierung geht die Elastizitt verloren und es
entstehen harzige Produkte.
Unter Einwirkung von Chlor entsteht Chloropren oder Allopren, das auerordentlich widerstandsfhig ist und
zum Beschichten von sureempfindlichem Material und zur Herstellung von Schuhsohlen Verwendung findet.
Addition von Schwefel ( 3 %) oder schwefelhaltigen
den
Gummi
elastisch
(Hei-
Vulkanisation).
Das trans-Isomer Guttapercha, das vor allem aus dem Milchsaft des tropischen Palaqium-Baumes
[Palaquium balata, Sapotaceae] gewonnen wird, ist ein nicht-elastisches 1,4-Polypren-Polymer mit der
Molmasse in der Grenordnung von 100.000 und wurde frher als Material fr flusurefeste Flaschen und
Behltnisse und als Isoliermaterial verwendet. Chicle ist das kautschukartige Polyterpen aus dem eingedickten
Milchsaft des Sapatillbaums [Achras sapota] und lieferte frher den Grundstoff fr die Kaugummiherstellung.
Die Sporopollenine, spezifische Wandstoffe von Pilzsporen und Pollenkrnern, zeigen einen sehr hnlichen
chemischen Aufbau wie Guttapercha.
Kautschuk
Guttapercha
Dolichol ist ein Isoprenoid-Alkohol, der Bestandteil der Lipid-Membranen von Nervenzellen ist. Eine
Erhhung des Dolichol-Gehalts ist ein Hinweis auf eine pathologische Vernderung. Dolichylphosphate sind
Phosphat-Ester langkettiger Polyisoprenoid-Alkohole und kommen praktisch in allen Membranen
eukaryotischer Zellen vor (auer denen der Mitochondrien und Plastiden) und dienen als bertrger und
148
5. Terpene
Transportmolekl von Oligosacchariden. Die Zahl der cis-Isopreneinheiten n betrgt bei hheren Eukaryonten
13 - 17.
O
O
OCH2 OH
n
18
Dolichol
Dolichylphosphat, n = 13 - 17
5.10.1 Vitamin A
Vitamin A1 [Vitamin A, all-trans-Retinol, Axerophthol] und Vitamin A2 [3,4-Dehydroretinol] sind zwei primre
Diterpenalkohole (Zur Synthese und Chemismus vgl. 3.4.2, zur biologischen Wirksamkeit vgl. 18. ).
5.10.2 Vitamin E
Vitamin E [Tocopherol, Antisterilittsl, Fertilittsvitamin und Weizenkeiml] ist eine Gruppe von fettlslichen
Vitaminen, die in tierischem und pflanzlichem Gewebe verbreitet ist (vgl. 18.
149
5. Terpene
HO
-Tocopherol
O
H
H
OH
HO
HO
R=
O
-Tocopherol
Synthetisches -Tocopherol erhlt man durch Reaktion von Trimethylhydrochinon mit Phytylbromid.
HO
Br-CH2
HO
ZnCl2
CH3
H
OH
H3C
C
H2
CH2CH2CHCH2
O
3
-Tocopherol
Die Oxidation von -Tocopherol fhrt zum entsprechenden Chinon oder ber Phenoxyradikale zum dimeren
Chinomethid.
O
HO
Oxidation
OH
R
oder
Aus Getreidepflanzen und vor allem aus Palml wurden seit 1960 Tocotrienole isoliert und blicherweise auch
zum Begriff Vitamin E zusammengefat. Im Unterschied zu den Tocopherolen weisen sie isolierte Doppelbindungen in der isoprenoiden Seitenkette auf und stellen mglicherweise Intermediate der TocopherolBiosynthese dar. Besonders hohe Gehalte weisen z.B. die Samenle von Weizen, Soja und Mais auf.
R1
R1
R2
R3
CH3
CH3
H
H
CH3
H
CH3
H
CH3
CH3
CH3
CH3
HO
R2
O
R3
Tocotrienole
-Tocotrienol
-Tocotrienol
-Tocotrienol
-Tocotrienol
Seit ca. 40 Jahren werden Vitamin E-Produkte fr den Humanbereich industriell aus natrlichen Quellen
hergestellt, fr die Tiernhrung wird fast ausschlielich synthetisches Vitamin E verwendet. Nach Schtzungen
werden derzeit weltweit etwa 1.000 t natrliches Vitamin E gewonnen.
5.10.3 Vitamin K
Vitamin K wird als antihmorrhagischer Faktor bezeichnet, kommt in allen Pflanzen reichlich vor und wird
auch von der Darmflora produziert. Vitamin K1 [2-Methyl -3-phytyl-1,4-naphthochinon, Phyllochinon], wurde
in grnen Pflanzen entdeckt DAM, MCKEE, KARRER, FIESER], Vitamin K2 [2-Methyl-3-difarnesyl-1,4-naphthochinon, Menachinon-6], spter auch Menachinon-7, in verdorbenem Fischmehl [DOISY]. Vitamin K enthlt
150
5. Terpene
einen 1,4-Naphthochinonring mit isoprenoider Seitenkette als Chromophor. Vitamin K2 gehrt zu den Naphthochinonen mikrobieller Herkunft, die heute als Menachinone [MK] bezeichnet werden. Die einzelnen
Menachinone unterscheiden sich nach Anzahl der Isopren-Einheiten der Seitenkette, neben Vitamin K2
[Hexaprenyl-menachinon, MK-6] werden von Mikroorganismen weitere Menachinone mit 4 - 11 IsoprenEinheiten und isolierten, trans-konfigurierten Doppelbindungen produziert. Zustzlich kommen in
Mikroorganismen 2-Desmethyl-Menachinone [DMK] und partiell hydrierte Menachinone [MK-n-H2] vor.
O
O
CH3
O
CH3
H
O
CH3
CH3
H
O
CH3
CH3
Menachinone (MK-n)
Desmethylmenachinone (DMK-n)
Vitamin K2 (MK-6), 6 Isopreneinheiten
Phyllochinon
Vitamin K1, 4 Isopreneinheiten
Phyllochinon ist ein unentbehrlicher Bestandteil des Photosyntheseprozesses bei Pflanzen, bei manchen
Mikroorganismen sind Menachinone anstelle der Ubichinone Bestandteile des Primrakzeptor-Komplexes der
Elektronentransportkette.
Die Hydrochinonform von Vitamin K1 wird durch elektrophile Substitution des 2-Methyl-1,4-dihydroxynaphthalins durch Phytol gewonnen.
OH
Phytol
+
HO
HO
OH
KHSO4
1,4-Hydrochinon
- H2O
OH
Vitamin K1 Hydrochinon
151
5. Terpene
.11 Literatur
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L.F. FIESER, M. FIESER, Steroide, Verlag Chemie, Weinheim (1961). J.B. PRIDHAM, Terpenoids in Plants,
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153
6. Steroide
6. Steroide
.1 Struktur, Vorkommen und Nomenklatur
Steroide sind Verbindungen, die das Ringsystem des Cholesterins [ = Cholesterol] besitzen und sich nach Zahl
der Doppelbindungen, Art, Zahl und Position funktioneller Gruppen, Anzahl der Methylgruppen, der Alkylseitenkette und der Konfiguration von Bindungen unterscheiden. Sie sind blicherweise fest [griech. steros =
fest], aufgrund ihrer starren Moleklgestalt besitzen sie gute Kristallisierbarkeit und fhren zur Bildung
definierter Aggregate mit anderen Moleklen oder zu oligomeren Einschluverbindungen (6.6 Gallensuren) in
Lsung. Spezifische Komplexbildung von Steroiden mit Proteinen ist vor allem fr die Hormonwirkung
mancher Steroide verantwortlich. Zahlreiche biologisch wichtige Steroidverbindungen kommen im tierischen
Organismus, in Pflanzen und Pilzen, in Membranen, als Vitamine, als Gallensuren (6.6), als Steroidsapogenine
(6.7), als herzaktive Substanzen (6.8) und Krtengifte (6.9), als mnnliche und weibliche Sexualhormone
(6.12), als Hormone der Nebennieren (6.13) und als Steroidalkaloide.
Die Struktur aller Steroide leitet sich vom Gonan bzw. Steran ab, einem perhydrierten 1,2-Cyclopentanophenanthren, in der Regel sitzen noch zwei angulre Methylgruppen (C-18, C-19) an C-10 und C-13 und eine
Seitenkette an C-17. Die Ringe werden mit A, B, C und D bezeichnet, im tetracyclischen Kohlenwasserstoff
Gonan, das in der Natur nicht vorkommt, sind die Ringe B und C und die Ringe C und D jeweils transverknpft, der entsprechende Kohlenwasserstoff mit beliebiger Stereochemie wird als Steran bezeichnet. Die
Grundgerste einiger Steroide sind in Formel 6.1 wiedergegeben.
12
17
16
9
10
14
8
A
13
11
15
H
H
A/B - trans
6
4
Steran (beliebige Stereochemie)
Gonan (B/C und C/D trans)
Perhydro-1,2-cyclopentanophenanthren
Androstan (Androgene):
R=H
Pregnan (Gestagene, NNR-Hormone): R = C2H5
Cholan (Gallensuren):
R = CH(CH3)CH2CH2CH3
Cholestan (Zoosterine):
R = CH(CH3)CH2CH2CH2CH(CH3)2
Ergostan (Mycosterine):
R = CH(CH3)CH2CH2CH(CH3)CH(CH3)2
Stigmastan (Phytosterine): R = CH(CH )CH CH CH(C H )CH(CH )
3
2
2
2 5
3 2
A/B - cis
R
H3C
H
H3C
Natrlich vorkommende Steroide weisen entweder cis- oder trans-Verknpfungen fr die Ringe A und B auf, B
und C sind stets trans-verknpft, C und D zeigen meist trans-Verknpfung. Als Bezugspunkt fr die
Bezeichnung von cis,trans-Isomeren wird die angulre Methylgruppe an C-13 gewhlt, die ebenso wie die C-
154
6. Steroide
17-Seitenkette in den natrlichen Steroiden grundstzlich im Halbraum oberhalb der Ringebene stehen;
Substituenten, die sich auf derselben Seite des Ringsystems befinden wie die C-13-Methylgruppe, also oberhalb
der Ringebene, nennt man nach L.L. Fieser -stndig, diejenigen auf der anderen Seite -stndig. Im Beispiel
5-Cholestan (der C-5-Wasserstoff ist unterhalb der Papierebene angeordnet) sind alle Ringe trans-verknpft,
die Alkylsubstituenten nehmen die -Position ein.
H3C
CH3
H3C
H3C
Bezugspunkt
CH3
-Halbraum
R
H
CH3
H3C
H
H
-Halbraum
5-Cholestanol
HO
5-Cholestanol
Je nach Verknpfung der Ringe unterscheidet man zwischen der 5-Reihe (A/B, B/C und C/D trans-verknpft)
und 5 -Reihe (A/B cis-, B/C und C/D trans-verknpft) (Tab. 4.1). Viele natrliche Steroide besitzen jedoch in
Ring A oder B Doppelbindungen und sind daher mehr oder weniger stark eingeebnet. Die 3-Hydroxygruppe ist
meist -stndig, Verbindungen mit einer 3-OH-Gruppe (z.B. Gallensuren) werden als Epi-Steroide
bezeichnet.
H3C
CH3
H3C
CH3
H
H
H
H
H
H
H
5-Reihe
5-Reihe
Da ein System anellierter Cyclohexanringe wie das der Steroide bei grtmglicher Zahl von Sessel-Konformationen thermodynamisch stabil ist, gibt es fr jede Position des Steroidgerstes eine eindeutige Beziehung
zwischen konfigurationeller ( oder ) und konformationeller (a oder e) Orientierung eines Liganden (Tab. 42).
Tabelle 6-1. Stellung der Substituenten an den Verknpfungsstellen der Ringe bei Steroiden und verschiedenen
Triterpenen (= Doppelbindung)
Verbindung
5/10 (A/B)
/
/
/
=
/
/
/
=
/, / oder =
/, / oder =
/
8/9 (B/C)
/
=
/
/
/
/
/
/
/
/
/
13/14 (C/D)
/
/
=
/
/
/
/
/
/
/
/
155
6. Steroide
/
=
/
/
Usarigenin
Digitanole
Batrachotoxin
Ecdysone
/
/
/
=
/
/
/
/
Fehlende C-Atome werden durch das Prfix Nor- angegeben, z.B. 19-Nor-Steroide fr die fehlende Methylgruppe in 10-Stellung, oder A-Nor-Steroide fr Steroide mit einem fnfgliedrigen Ring A. Das Prfix Homowie z.B. D-Homo- bezeichnet Ringerweiterungen im Ring D, Seco- entsprechend Ringspaltungen wie in
Vitamin D als B-Seco-Steroid.
.2 Cholesterin
(-)-Cholesterin [Cholesterol, griech. chole = Galle, 5-Cholesten-3-ol] ist das wichtigste Steroid der
Wirbeltiere, kommt in allen Teilen des tierischen Krpers vor, konzentriert vor allem im Gehirn und
Rckenmark. Der menschliche Krper enthlt etwa 300 g Cholesterin in freier Form oder als Fettsureester, 1.4
- 3.3 g werden im menschlichen Blut gefunden. Obwohl es selbst keine nennenswerten physiologischen
Aktivitten besitzt, nimmt es als das Ausgangsmaterial fr alle brigen Steroide im tierischen Organismus eine
zentrale Stellung im Steroidstoffwechsel ein.
Cholesterin wird hauptschlich in Form tierischer Nahrungsmittel aufgenommen, aber auch im Krper
synthetisiert. Mit zunehmendem Alter tritt Strung des Cholesterinhaushalts ein, Ablagerung an
Arterienwnden fhren zur Arterienverkalkung [Arteriosklerose]. Es ist Hauptbestandteil der menschlichen
Galle, woraus es bereits 1775 von CONRADI isoliert wurde, und wird auch in Ausscheidungen der Haut
gefunden. Die meisten Gallensteine bestehen aus Cholesterin und werden auf mangelnden Cholesterinabbau in
der Leber zurckgefhrt. Cholesterin enthlt eine 3--OH-Gruppe und eine 5,6-Doppelbindung im B-Ring,
wodurch die Mglichkeit der cis/trans-Isomerie (A/B) verloren geht und der Cyclohexenring B in einer
Halbsesselform vorliegt.
H3C
CH3
H3C
CH3
H3C
H
H
HO
Die Biosynthese des Cholesterins ist mit den Namen K. BLOCH, F. LYNEN, A. ESCHENMOSER, G. POPJAK und
J.W. CORNFORTH verbunden; es konnte gezeigt werden, da alle C-Atome aus Acetat stammen. Durch KopfKopf-Dimerisierung von Farnesylpyrophosphat entsteht der all-trans-Triterpenkohlenwaserstoff Squalen und
durch Epoxidierung Squalenoxid. Cyclisierung fhrt zu tetracyclischen Methylsterolen, die noch drei Methylgruppen mehr besitzen als die Steroide (vgl. 6.6). Bei den Tieren und Pilzen tritt das Lanosterin (Steroid des
156
6. Steroide
Wollfetts) als Zwischenprodukt auf. Durch Abspaltung von Methylgruppen und eine Reihe von HydrierungsDehydrierungsschritten entsteht daraus das Cholesterin.
H3C
H3C
1. Epoxidierung
2. Cyclase
- H+
H3C
CH3
HO
H3C
Squalen C30
Lanosterin C30
CH3
3 Methylgruppen
abgespalten
D
Cholesterin C27
HO
Erst die biogenetische Isoprenregel [L. RUZICKA, 3.1] fhrte zum Verstndnis der Steroid-Biosynthese und der
Verwandschaft von Terpenen und Steroiden. Nimmt man an, da sich Squalen mit lauter (E)-konfigurierten
C=C-Bindungen zu einer Konformation wie in Abb. 6-1 faltet, dann fhrt eine kationisch initiierte,
antiperiplanar verlaufende Cyclisierung zu einer Sessel-Boot-Sessel-Boot-Konformation des resultierenden
tetracyclischen Kations. Eine Reihe von WAGNER-MEERWEIN-Umlagerungen, die zur Ausbildung des DRinges, zu einer 1,2-Hydridverschiebung, zu zwei 1,2-Methylwanderungen sowie zur Eliminierung eines
Protons fhren, geben das C-Skelett des Lanosterins.
Sessel-BootSessel-Boot
Faltung
R
Squalen
H+
- H+
Lanosterin
+
+
R
R
Erst nach 80 Jahren Forschung [1932] stand die Strukturformel von Cholesterin fest [ROSENHEIM und H.
WIELAND]. Die Klrung der Stereochemie gelang durch Rntgenstrukturanalyse [D. CROWFOOT-HODGKIN,
Nobelpreis 1964], NMR-Spektroskopie und chiroptische Methoden (u.a. die Anwendung der Oktantenregel).
1951 gelang die Totalsynthese [ROBINSON und R.B. WOODWARD] von Cholesterin. Vor allem durch
157
6. Steroide
Untersuchungen am Cholesterin [DIELS, A. WINDAUS] sowie an den Gallensuren [H. WIELAND] gelang die
Aufklrung des Kohlenstoffgersts der Steroide. Die Dehydrierung von Cholesterin mit Selen bei 350 C gibt
unter Abspaltung der Methylgruppen und der Seitenkette den DIELS-Kohlenwasserstoff [frher 17-Methylcyclopenta[a]phenanthren].
DIELSscher Kohlenwasserstoff
17-Methyl-1,2-cyclopentenophenanthren
Se, 350 C
Cholesterin
HO
Von den im tierischen Organismus vorkommenden Zoosterinen [Zoosterole] ist bei den Wirbeltieren
[Vertebratae] sicher Cholesterin der wichtigste Vertreter. In den Faeces findet man das 5--Stereoisomere des
Cholestanols, das von Darmbakterien gebildete Koprostanol. Zoosterine werden vor allem aus Wollfett und
Fischl, auerdem aus dem Rckenmark von Rindern und Schweinen gewonnen. Wirbellose [Invertebratae]
enthalten noch weitere Sterine wie z.B. das 24-Dehydrocholesterin in betrchtlicher Menge.
H
H
H
HO
24-Dehydrocholsterin
HO
Koprostanol
H
Die Doppelbindung in 5-Stellung im Cholesterin lt sich katalytisch je nach Bedingungen zu Isomerengemischen hydrieren. Die Reduktion in saurem Medium fhrt in die 5-Reihe, 5-Verbindungen dagegen
erhlt man bei der Reduktion des ,-ungesttigten Ketons 1, das durch OPPENAUER-Oxidation von
Cholesterin entsteht. Die epimeren Alkohole Cholestanol und Koprostanol lassen sich durch Erhitzen mit Basen
isomerisieren.
OH-
H2 / Pd
H
HO
HO
HO
H
H
OPPENAUER
Oxidation
Cholestanol (5)
OH-
Raney - Ni
H2 / OH-
3epi-Cholestanol
HO
HO
H
Koprostanol (5)
3epi-Koprostanol
158
6. Steroide
In der A/B-trans-Reihe ist die 3-OH-Verbindung, in der A/B-cis-Reihe die 3-OH-Verbindung die stabilere.
Grund dafr ist die hhere Stabilitt der Verbindungen mit quatorialen Substituenten. Aus den gleichen
Grnden entstehen bei der NaBH4-Reduktion von 3-Ketosteroiden jeweils die 3-Hydroxyverbindungen mit
quatorialer Stellung der OH-Gruppe.
NaBH4
O
3-Hydroxy-Reihe (3 e)
HO
(e)
NaBH4
O
3-Hydroxy-Reihe (3 e)
HO
(e)
Die thermodynamisch weniger stabilen axialen 3-Alkohole bzw. deren Ester (2) in der A/B-trans-Serie
knnen durch Inversion der 3-Hydroxygruppe mit Diazodicarbonsureester/Triphenylphosphan und einer
Carbonsure nach MITSUNOBU dargestellt werden.
H
EtOOC
O C R
O
N
COOEt
- EtOOC-NH-NH-COOEt
+
(C6H5)3P
P(C6H5)3
O
H
- (C6H5)3P=O
O
H
R C
R
CO O
.4 Phytosterine
Phytosterine [Phytosterole] sind Sterole aus Pflanzen und Mikroorganismen, wobei solche aus niederen
Pflanzen wie Algen und Pilzen oft noch als Mycosterine bezeichnet werden. Sie besitzen die gegenber den
C27-Zoosterinen eine (Ergostan-Reihe, C28) oder zwei weitere Methylgruppen (Stigmasteran-Reihe, C29) in der
C-17-Seitenkette und meist noch weitere Doppelbindungen. (-)-Ergosterin [Ergosterol, 5,7,22-Ergosta trien-3ol, Provitamin D2] wurde erstmals aus Mutterkorn isoliert [TANRET, 1989], ist als wichtigstes Mycosterin in
vielen Algen, Pilzen, Flechten und fetten len zu finden und ist das Hauptsterin der Hefe, aus der es leicht zu
gewinnen ist. Stigmasterin [Stigmasterol, 5,22-Stigmastadien-3-ol] wurde ursprnglich aus der CalabarBohne isoliert, wird aber heute aus dem unverseifbaren Anteil von Sojal gewonnen. Sitosterine sind im
Getreide enthalten, -Sitosterin [ -Sitosterol, Stigmast-5-en-3-ol] im Weizenkeiml. Campesterin
159
6. Steroide
[Campesterol, 5-Ergosten-3-ol] kommt zusammen mit Sitosterin und Stigmasterin als eine der
Hauptkomponenten in der Sterinfraktion mehrerer Pflanzen- und Saatle vor und wurde in Mollusken
gefunden. In Algen ist neben Ergosterin noch das Fucosterin [Fucosterol, 5,24(28)-Stigmastadien-3-ol]
enthalten, das eine weitere Methylgruppe in der Seitenkette besitzt. Brassicasterin [Brassicasterol, 5,22Ergostadien-3-ol] kommt relativ hufig in der Sterinfraktion von Rapssaat- und Senfsaatl vor.
H
HO
HO
HO
-Sitosterin
Stigmasterin
Ergosterin
H
H
HO
Campesterin
HO
HO
Fucosterin
Brassicasterin
Phytosterine sind etwa mit 0.3 % in Pflanzenlen zu finden und stellen bei einer Weltproduktion von 40 Mio t
Pflanzenlen (1982) ein Rohstoffpotential von etwa 120.000 Jahrestonnen dar. Bei der Zellstoffgewinnung
nach dem Sulfitverfahren sind in den Talllen und Talllseifen abtrennbare Neutralstoffe, deren Hauptanteil bis
zu 50 % Phytosterine sind. Natrliche Phytosterine knnen selbst als Gemische als Rohstoffe fr die
Herstellung von Steroidpharmaka gentzt werden. In den siebziger Jahren wurden mikrobiologische Verfahren
entwickelt, mit denen sich die unterschiedlichen Seitenketten zu einheitlichen Endprodukten wie
Androstendion und Androstadiendion abbauen lassen.
Vitamin D ist von der Struktur hier eigentlich kein Steroid, wird aber als Cholesterinabkmmling hier gefhrt.
Man unterscheidet das Calciferol [Vitamin D2], das den aktiven Bestandteil von Vitamin D-Prparaten darstellt,
und das Cholecalciferol [Vitamin D3, auch Ergocalciferol], das beim Menschen etwas besser wirkt als D2.
Durch UV-Licht werden 5,7-Didehydrosterine [Provitamin D] im Organismus hauptschlich in Prvitamin D
umgewandelt, das durch Erhitzen in Vitamin D bergeht. Das Provitamin des tierischen Organismus ist das 7Dehydrocholesterin [Provitamin D3, Cholesta-5,7-dien-3-ol], das in der Leber aus Cholesterin gebildet wird.
Weitere Provitamine sind pflanzliches Ergosterin und andere 5,7-Didehydrosterine. Provitamin D reichert sich
in der Fettschicht der Haut an und wird durch UV-Strahlung (Sonnenlicht) durch photochemische
elektrocyclische Ringffnung des B-Ringes in das Trien-B-Secosteroid Prvitamin D [Prcalciferole]
umgewandelt. Diese lassen sich thermisch in einer sigmatropen Umlagerung zum eigentlichen Vitamin D
160
6. Steroide
(Calciferol) berfhren. Aus 7-Dehydrocholesterin entsteht Cholecalciferol (Vitamin D3), aus Ergosterin das
Ergocalciferol (Vitamin D2). Fischle (und das, obwohl Fische eigentlich nie mit UV-Licht in Kontakt
kommen) und Eigelb sind die besten Quellen fr Vitamin D3, in geringen Mengen findet es sich in Milch und
Butter.
R
h
konrotatorische
Ringffnung
OH
60 C / Cyclohexan
Provitamin D3
7-Dehydrocholesterin
(282 nm)
HO
Prvitamin D3
Prcalciferol
(262 nm)
[1,7]-H-Shift
antarafacial
CH3
H3C
H3C
CH3
R=
H3C
Cholecalciferol
Vitamin D3
Cholecalciferol
Vitamin D3
9,10-Seco-5,7,10(19)cholestatrien-3-ol
H3C
Ergocalciferol
Vitamin D3
9,10-Seco-5,7,10(19),22ergostatetraen-3-ol
HO
Nach 25-Hydroxylierung in der Leber und 1-Hydroxylierung in der Niere entsteht ais Vitamin D3 die eigentlich
aktive Form eines Hormons, das Vitamin D-Hormon [Calcitriol, Calcitropes Hormon, 1,25-Dihydroxycholecalciferol, (1S,3R,5Z,7E)-9,10-Secocholesta-5,7,10(19) -trien-1,3,25-triol]. Dieses bindet an verschiedene
Rezeptoren und reguliert die Transkription zahlreicher Gene.
OH
OH
.6 Gallensuren
Gallensuren sind Abbauprodukte der Steroide und besitzen in der C-17-Seitenkette eine Carboxylgruppe, die
durch Oxidation in der Leber entsteht. Zustzlich enthalten sie ein, zwei oder drei Hydroxylfunktionen in 3-, 6-,
7- und/oder 12-Position, die fast ausschlielich -konfiguriert sind. Stammkrper sind die natrlich nicht
vorkommende Cholansure (C24) und die Koprostansure (C27), sehr selten kommen noch C28-Gallensuren
vor. Die Gallensuren gehren der 5-Reihe an, d.h. die Ringe A und B sind cis-verknpft.
161
6. Steroide
COOH
COOH
H
H
Cholansure
Koprostansure
Gallensuren mit ihrem hydrophoben und dem hydrophilen Strukturteil grenzflchenaktiv und zur Mizellenbildung befhigt. Sie spielen bei der Emulgierung und Verdauung von Fetten eine Rolle und erleichtern die
Resorption vieler Arzneimittel.
Die Gallensuren werden mit der Gallenflssigkeit in den Darm abgegeben, jeder Mensch erzeugt pro Tag ca.
20 g an Gallensuren. Bei den Sugetieren kommen ausschlielich Cholansurederivate vor, in der
menschlichen Galle berwiegt die Chenodesoxycholsure [3,7-Dihydroxy-5-cholan-24-sure] neben
Cholsure [3,7,12-Trihydroxy-5-cholan-24-sure] und Desoxycholsure [3,12-Dihydroxy-5-cholan24-sure], Lithocholsure [3-Hydroxy-5-cholan-24-sure] findet man in Spuren. Cholsure und
Desoxycholsure lassen sich in greren Mengen aus Ochsengalle, Hyodesoxycholsure [3,6-Dihydroxy-5cholan-24-sure] aus Schweinegalle isolieren. Chenodesoxycholsure ist ein Hauptbestandteil der Galle von
Gnsen, Hhnern und vielen Sugetieren. Die 7-Hydroxygruppe der Ursodesoxycholsure besitzt gegenber
Chenodesoxycholsure -Konfiguration. In der Galle von Amphibien und Reptilien sind C27- und C28-Suren
enthalten. C24-Steroidcarbonsuren der 5-Reihe sind aus kalifornischem Erdl isoliert worden, so da
zumindest ein Teil des Erdls tierischen Ursprungs ist, da eine A/B-cis-Verknpfung des Steroidgersts bei
Pflanzen bisher nicht gefunden wurde.
COOH
HO
Name
Cholsure
Desoxycholsure
Lithocholsure
Chenodesoxycholsure
Hyodesoxycholsure
OH
OH
H
H
H
OH
H
H
OH
H
H
H
H
H
OH
Die eigentlichen Gallensuren liegen als Na-Salze der gepaarten oder konjugierten Gallensuren vor und
werden aus letzteren durch alkalische Hydrolyse erhalten. Sie sind sureamidartig an Glycin H2NCH2COOH als
Glykocholsure oder an Taurin H2NCH2CH2SO3H als Taurocholsure gebunden, wobei die stark sauren TauroKonjugate hufiger sind, lediglich bei einigen pflanzenfressenden Sugetieren berwiegen die GlykoKonjugate.
N
H
SO3H
COOH
O
H
Glykocholsure
N
H
O
H
Taurocholsure
162
6. Steroide
Desoxycholsure bildet mit geradkettigen Fettsuren oder mit hydrophoben Alkoholen, Estern, Ethern oder
Kohlenwasserstoffen Choleinsuren, gut kristallisierende Einschluverbindungen, die als Salze in verdnnter
Lauge unzersetzlich lslich sind. Dabei bilden jeweils 2 Desoxycholsure-Molekle einen ca. 0.7 nm langen
Kanal, fr den Einschlu von einem Molekl Palmitinsure (Lnge ca. 2.4 nm) sind 4 solche Kanalabschnitte
und somit 8 Molekle Gallensuren erforderlich. Damit fungiert die Desoxycholsure als Lsungsvermittler fr
den Transport von Stoffwechselprodukten und Fremdstoffen.
In der Galle von Fischen und Amphibien werden anstelle der konjugierten Gallensuren Schwefelsureester
von Gallenalkohlen gefunden, z.B. in der Galle von Haifischen (z.B. Scymus borealis) und anderen
Knorpelfischen das Scymnolsulfat.
OH
CH2OSO3
HO
CH2OH
H
H
HO
Scymnolsulfat
OH
.7 Steroid-Sapogenine
Zahlreiche Saponine, im allgemeinen pflanzliche Glykoside hydrophober Alkohole, die in wriger Lsung
schumen, geben bei der Hydrolyse als Sapogenin (Aglykon) Triterpenalkohole (Triterpen-Sapogenine) oder
Steroidalkohole, Steroid-Sapogenine. Zu den wenigen tierischen Steroid-Saponinen zhlen die Gifte der
Seesterne. Die neutralen Steroid-Saponine sind oral ungiftig, knnen bei parenteraler Applikation jedoch die
Erythrozytenmembran zerstren und die Blutgerinnung hemmen. Sie sind fr Fische stark toxisch, weshalb die
Eingeborenen Afrikas und Sdostasiens saponin hltige Pflanzensfte fr den Fischfang verwenden.
Charakteristisch fr die meisten Steroid-Sapogenine ist die Spirostan-Struktur mit der Spiroketal-Einheit. Die
Verbindungen gehren der 5-, 5- oder 5-Reihe an, die Methylgruppe an C-25 kann axial (25S, NormalReihe) oder equatorial (25R, Iso-Reihe) angeordnet sein. Zur 5-Reihe gehrt Diosgenin [(25R)-Spirost-5-en3-ol], das in getrockneten Wurzelknollen tropischer Schlingpflanzen wie der mexikanischen Yamswurzel
[Dioscorea] und in Solarium-Arten sowie in Trillium erectum gefunden wird. Es liegt in Dioscorea als
brechreizerzeugendes Glykosid mit zwei Moleklen Rhamnose und einem Molekl Glucose vor [Dioscin]. Das
(25S)-Diastereomere des Genins heit Yamogenin. Die kartoffelhnlichen Wurzelknollen wildwachsender
Dioscorea-Arten werden in Mexiko, China, Sdafrika und Indien gesammelt. Diosgenin wird technisch als
natrliches Ausgangsprodukt fr industrielle Partialsynthesen von in Antikonzeptionsmitteln eingesetzten
Gestagenen (6.
) gewonnen. Bis in die sechziger Jahre deckte Diosgenin als Rohstoff etwa 80 % der Welt-
163
6. Steroide
Steroidproduktion ab, von den 1986 eingesetzten 2.300 t Steroiden als Synthese-Ausgangssubstanzen entfielen
noch etwa 25 % auf Diosgenin. Je nach dem pflanzlichen Ursprung werden Diosgenin-Glykoside mit
verschiedenen Saccharidteilen gefunden:
H
Dioscin
Gracillin
Trillarin
Trillin
2 x Rhamnose, 1 x Glucose
1 x Rhamnose, 2 x Glucose
2 x Glucose
1 x Glucose
R ax
O
Dioscorea tokoro
Disocorea tokoro
Trillium erectum
Trillium erectum
25
R eq
H O
Diosgenin
HO
H
H
H
H
5
Spirostan
R ax = CH3, R eq = H Normal-Reihe (25S)
R ax = H, R eq = CH3 Iso-Reihe (25R)
25
25
25
O
O
HO
OH
HO
HO
Tigogenin
(25R)-5-Reihe
HO
HO
H
Digitogenin
Sarsasapogenin
(25S)-5-Reihe
Hecogenin
(25S)-5-Reihe
Digitonin [Digitin] besteht aus 5 Monosaccharid-Einheiten und dem Aglykon Digitogenin. Es wirkt giftig durch
Zerstrung der Erythrocyten (Hmolyse), die Aktivitt wird allerdings von Cholesterin und anderen Steroiden
mit A/B-trans-Verknpfung aufgehoben. Digitonin bildet in alkoholischer Lsung mit Steroiden mit 3konfigurierter OH-Gruppe und A/B-trans-Ringverknpfung schwerlsliche Moleklverbindungen und wird zur
quantitativen Bestimmung von Cholesterin verwendet und zur Isolierung und Reinigung von Steroiden
eingesetzt. Gitogenin [2,3-Spirostandiol, Digin] ist das Sapogenin des Digitalisglykosids Gitonin, dessen
Zuckerkomponente aus je einer Glucose und Xylose sowie zwei Moleklen Galactose besteht.
164
6. Steroide
CH2OH
O
O
OH
CH2OH
O
OH
O
HO
O
HO
OH
HO
OH
HOH2C
HO
HOH2C
O
HO
Digitogenin
O
O
Digitonin
OH
H
OH
HO
HO
OH
Gitogenin
HO
Die herzwirksamen Glykoside besitzen starke Wirkung auf den Herzmuskel und regen in geringer Menge die
Herzttigkeit an [Cardiotonika], in greren Mengen wirken sie toxisch. Diese Substanzen kommen als
Glykoside z.B. in verschiedenen Fingerhut-Arten [Digitalis], in afrikanischen Strophanthus-Arten [Apocynaceae], in Oleander [Nerium oleander], im Frhlingsteufelsauge [Adonis vernalis] und im Maiglckchen
[Convallaria majalis] vor. hnliche Aglyka findet man in Wehrsekreten mancher Kfer [Chrysomelidae], die
aus den Futterpflanzen stammen, und interessanterweise auch als Inhaltsstoffe der Hautdrsen von Krten (4.9
Bufadienolide) sowie in der Meerzwiebel [Urginea (Scilla) maritima]. Die pharmakologische Wirkung dieser
Verbindungen ist bereits 1.500 v. Chr. erwhnt worden; sie zhlen zu den ltesten Heilmitteln, die man kennt.
Bereits seit dem Mittelalter ist die Giftigkeit des Roten Fingerhuts, Digitalis purpurea, bekannt und seit 200
Jahren wird Digitalis zur Herztherapie verwendet. Die aktiven Prinzipien afrikanischer und sdamerikanischer
Pfeilgifte besitzen ebenso Strukturen dieses Typs. Diese Steroide verbessern den Wirkungsgrad des Herzens
und werden in Form der Glykoside zur Behandlung von Herzinsuffizienz eingesetzt. Problematisch wegen der
Toxizitt ist die sehr enge therapeutische Breite, dennoch werden Herzglykosidprparate sehr hufig als
Arzneimittel verordnet.
Die Abspaltung der 3-OH-Zuckerreste gelingt durch Hydrolyse unter milden Bedingungen mit verdnnten
Suren, Alkoholzusatz beschleunigt die Reaktion deutlich. Allgemein werden Glykoside mit 2-Desoxyzuckern
leichter gespalten als solche mit 2-Hydroxyzuckern. Die Aglyka der Glykoside sind durch einen ungesttigten
Lactonring an der C-17--Position charakterisiert, der fr die Wirksamkeit erforderlich ist. Mit diesem
Strukturelement unterscheiden sich die Cardenolide von den Bufadienoliden (6.9). Cardenolide, deren
Lactonring gesttigt ist, werden als Cardanolide bezeichnet. Die Aglyka selbst sind zwar fr die
pharmakologische Wirkung verantwortlich, zeigen jedoch aufgrund der raschen Metabolisierung keine
165
6. Steroide
nennenswerte Aktivitt. Die in 3-Stellung der Steroidgenine gebundenen Zucker verzgern jedoch die
Metabolisierung und sind fr die Pharmakokinetik dieser Glykoside verantwortlich.
Die Cardenolide besitzen die Struktur des Cardanolids, Stammsubstanz ist das Digitoxigenin [3,14Dihydroxy-5-card-20(22)-enolid], das Genin verschiedener Glykoside (Tab. 6-3). In Digitoxin [Digitalin] ist
es mit einem aus drei Moleklen Digitoxose [2,6-Didesoxy-D-ribo-hexose] bestehenden Trisaccharid
glykosidisch gebunden.
O
O
O
O
17
Cardanolid
Digitoxin
1
14
Digitoxose
Digitoxose
Digitoxose
OH
O
HO
O
O
Digitoxigenin
OH
OH
OH
Digitoxin ist zusammen mit Digoxin das wichtigste therapeutisch genutzte Digitalis-Glykosid und wird allem
aus dem Roten Fingerhut Digitalis purpurea, dem Wolligen Fingerhut D. lanata, dem Grobltigen Fingerhut
D. ambigua und dem Gelben Fingerhut D. lutea [Scrophulaceae] gewonnen. Es ist tdlich giftig, die letale
Dosis TDL0 (Mensch) betrgt 175 g/kg p.o.
Mit Digoxigenin gelingt eine spezifische Markierung von Nucleinsuren, Glykokonjugaten und Proteinen und
der Nachweis ber Antikrper-vermittelte Enzymreaktionen. Fr die Markierung werden z.B. Nukleinsuren
enzymatisch ber einen Spacer (Formel 6-2) mit dem Steroid verbunden.
O
O
O
O
H
C
H
C
H2 H
C N
(CH2)5
H
N
HO
CH2
HN
CH2
O
O
OH
O
LiO
P
OLi
CH2
O
O
3
HO
166
6. Steroide
Cardenolide kommen vor allem in den Pflanzenfamilien der Scrophulariaceen, Liliaceen, Ranunculaceen,
Asclepiadaceen und Apocynaceen vor, die einzelnen Genine besitzen gegenber Digitoxigenin zustzliche
Sauerstoffunktionen. Die Hydroxygruppe in 16-Stellung kann eine Formyl- oder Acetylgruppe tragen. Allen
diesen Cardiotonika ist die cis-Verknpfung der Ringe A und B sowie C und D und eine 14-Hydroxygruppe
gemeinsam. Charakteristisch fr die glykosidisch gebundenen Zuckerreste der herzwirksamen Cardenolide ist
das hufige Auftreten seltener Desoxyzucker.
Genin
Glykosid
Zucker
Digitalis purpurea
Digitoxigenin
Digitoxigenin
Gitoxigenin
Digitoxigenin
Gitoxigenin
Digoxigenin
Digoxigenin
Digitoxigenin
Digitoxigenin
Oleandrigenin
Strophanthidin
Ouabagenin
Purpureaglykosid A
Digitoxin
Purpureaglykosid B
Lanatosid A
Lanatosid B
Deslanosid*
Digoxin*
Thevetin
Dig-Dig-Dig-Glc
Dig-Dig-Dig
Dig-Dig-Dig-Glc
Dig-Dig-AcDig-Glc
Dig-Dig-AcDig-Glc
Dig-Dig-Dig-Glc
Dig-Dig-Dig
The-Glc-Glc
The
Ole
Cym-Glc()-Glc()
Rha
Digitalis lanata
Thevetia neriifolia
Neriifolin
k-Strophanthosid
Ouabain
(= g-Strophanthin)
Convallaria majalis
Strophanthidin
Convallatoxin
Rha
Strophanthidin
Convallosid
Rha-Glc
Strophanthidol
Convallotoxol
Rha
Cheiranthus cheiri
Strophanthidol
Cheirotoxin
Lyx
Adonis vernalis
Adonitosigenin
Adonitoxin
Rha
Dig = Digitoxose; The = Thevetose; Ole = Oleandrose; Cym = Cymarose; Rha = Rhamnose; Lyx = Lyxose; Glc
= Glucose; * Spaltprodukt.
Nerium oleander
Strophantus komb
Strophantus gratus
Ein weiterer, wichtiger Vertreter der 5-Cardenolide ist das Gitoxigenin [3,14,16-Trihydroxy-5-card20(22)-enolid], das aus dem Digitalisglykosid Gitoxin stammt und eine Hydroxygruppe an C-16 trgt.
Verbindungen der 5-Reihe sind wenig oder kaum herzwirksam. 5-Derivate sind das Uzaragenin und das
Corotoxigenin, Genine aus Glykosiden aus der sdafrikanischen Uzarawurzel [Gomphocarpus-Art], aus Samen
von Oleander [N. oleander] und Strophantus Boivinii.
O
OH
OCH
OH
HO
H
OH
HO
HO
HO
Gitoxigenin
Uzarigenin
Corotoxigenin
167
6. Steroide
Ein therapeutisch wichtiges Glykosid ist das hauptschlich in Strophanttus komb [Apocynaceae]
vorkommende k-Strophanthosid. Durch Totalhydrolyse erhlt man das Aglykon Strophanthidin [3,5,14Trihydroxy-19-oxo-card-20(22)-enolid, Corchorin]. Auf enzymatischem Weg gelingt auch der stufenweise
Abbau der Zuckerreste zu k-Strophanthin und Cymarin [k-Strophanthinol ]. Strophanthin ist das aktive
Prinzip der Pfeilgifte aus Strophanthus-Samen, 0.07 mg bewirken bei einer 20 g schweren Maus bereits
Herzstillstand. Strophanthidin ist auerdem das Aglykon verschiedener Glykoside des Maiglckchens
Convallaria majalis. Convallatoxin ist ein Rhamnosid des Strophanthidins, Convallosid ein Glucosid des
Convallatoxins. Beide Verbindungen finden sich in Maiglckchen und werden gegen Herzinsuffizienz
verwendet.
O
k-Strophanthosid
OCH
OCH
OH
H
OH
-Glucose--Glucose-Cymarose-O
CH3
OH
OH
OH
Strophanthidin
Cymarin (k-Strophanthinol)
k-Strophanthin
Convallatoxin
OH
OH
Zum Aufbau des 14-Lactonringes von Cardenoliden geht man zweckmigerweise von 14-Hydroxy-20pregnanon aus, das mit Lithiummethoxyacetylid umgesetzt wird. Saure Isomerisierung von 5 und anschlieende
Allyloxidation mit SeO2 ergeben das Cardenolidsystem 8.
O
HO
O
C
LiC
COEt
OH
OH
OEt
H+
COCH3
H
H2O
OH
14-Hydroxy20-pregnanon
OH
O
O
SeO2
OEt
O
OH
OH
Zur Partialsynthese von Digoxigenin und seinem 12-Epimeren geht man vom Desoxycholsureimidazolid 9 aus,
das durch Bestrahlung (254 nm) nach dem Iwasaki-Verfahren zum 20(22)-Methylenpregnan 10 fhrt. Die
Konfigurationsumkehr an C-3 lt sich nach Mitsunobu durchfhren. Das resultierende Monoacetat 11 wird
durch Photooxidation, Hydroperoxid-Reaktion und Reduktion mit NaI zum Allylalkohol 12 umgesetzt.
168
6. Steroide
Oxidation zu 13, Wittig-Reaktion, Umsetzung mit Singulett-Sauerstoff und anschlieende Reaktion mit
Triethylamin als Base gibt das Cardenolid 16. Nach PCC-Oxidation wird das entstandene Keton 17 durch
Belichtung in den Seco-Aldehyd 18 (NORRISCH-Typ-I-Spaltung) und damit ber den "Remote-OxidationsProze" [P. WELZEL] die 14-Hydroxygruppe eingefhrt. Es resultieren Digoxogenin und 12-Epidigoxigenin
(Formel 4-3).
HO
HO
N
CO
N
O
EtOC N
10
HO
Ph3P / HOAc
H
HO
HO
COEt
254 nm
H
HO
HO
CH2OH
1. h / O2
MnO2
CH=O
2. NaI
12
AcO
13
H
H
11
O O
H^O
HO
- +
OCH3
OCH3
1
CH3OCH-P(C6H5)3
Et3N
O2
15
14
H
HO
O
h
16
CH
PCC
17
18
HO
HO
O
1. H / H2O
2. KOH / CH3OH
HO
HO
H
Digoxigenin
HO
HO
12-Epidigoxigenin
H
.9 Bufadienolide
Bufadienolide besitzen im Gegensatz zu den Cardenoliden als Strukturmerkmal einen zweifach ungesttigten Lactonring als C-17-Substituent und arbsorbieren aufgrund des konjugiert-ungesttigten Chromophors bei
169
6. Steroide
lngeren Wellenlngen (273 nm). Die Ringe A, B, C und D sind cis-verknpft. Sie kommen in den Hautdrsen
der Krten [Bufonidae] und in Scilla-, Bowiea- [Liliaceae] und Helleborus-Arten [Ranunculaceae] vor. Bei den
Bufadienoliden der Krten unterscheidet man die Bufogenine von Bufotoxin, deren 3-Suberylarginyl-Ester.
Beide leiten sich vom Bufalin [3,14-Dihydroxy-5,14-bufa-20,22-dienolid, Tab. 4-4] ab, die einzelnen Bufadienolide besitzen zustzliche Sauerstoffgruppen. Cinobufagin ist das Haupt-Bufadienolid der ostasiatischen
Krte Bufo bufo gargarizans, deren Haut in der chinesischen Medizin zur Behandlung der Wassersucht
eingesetzt wird. In der europischen Krte Bufo vulgaris ist vor allem Bufotalin enthalten, die aus der
brasilianischen Krte Bufo marinus isolierten Verbindungen Marinobufagin und Resibufogenin enthalten eine
14,15-Epoxygruppe. Manche Bufogenine wirken stark lokalansthetisch und wurden bereits im antiken China
zur Herztherapie und als Ansthetika verwendet. In der heutigen Medizin jedoch sind sie von pflanzlichen
Herzglykosiden verdrngt worden. Bufotoxin stellt einen Ester des Suberylarginins mit Bufogenin B dar. Die
physiologische Wirksamkeit hnelt den Bufadienoliden, bemerkenswert hingegen ist seine starke
lokalansthetische Wirkung, die ein Mehrfaches der des Cocains betrgt. Die Krtengifte lassen sich aus den
Ohrspeicheldrsen der Krten durch Ausdrcken gewinnen.
O
O
Bufotoxin
Arginin
N2H
OCOCH3
H
H
HOOC
N
H
NH
O
H
HN
HO
O
H
Bufogenin B
Korksure
Substituenten in Stellung
5
14
15
Bufalin
-OH
Bufotalin
-OH
Herkunft
16
-OH
Marinebufagin -OH
--O-
Bufo marinus
Resibufogenin
--O-
Bufo marinus
Cinobufagin
--O-
-OAc
Bufo bufo
HO
Bufalin
HO
H
3,14-Dihydroxy-5,14bufa-20,22-dienolid
170
6. Steroide
Die pflanzlichen Bufadienolide liegen 3-glykosidisch gebunden vor. In der Weien Meerzwiebel [Urginea
(Scilla) maritima] kommen je nach der Zuckerkomponente die Glykoside Proscillarin A, Scillaren A und
Glucoscillaren A vor. Nur durch enzymatische Hydrolyse ist das Proscillaridin-Genin Scillarenin [3,14Dihydroxy-bufa-4,20,22-trienolid] erhltlich. Die surekatalysierte Hydrolyse ergibt das Anhydroderivat
Scillaridin A. Die Meerzwiebel wurde bereits im Altertum als Arzneimittel verwendet. Das Hellebrigenin aus
der Christrose [Helleborus niger] liegt als Glykosid [Hellebrin] vor und ist identisch mit dem Bufotalidin aus
den Hautdrsen der Krten.
O
OCH
OH
OH
OH
HO
Glucose-Rhamnose-O
Hellebrin
Scillaridin A
Scillarenin
OH
.10 Withanolide
Mehr als hundert pflanzliche C28-Steroide aus Blttern von Withania-, Dunalia-, Datura- und Nicandra-Arten
[Solanaceae] werden unter dem Begriff Withanolide zusammengefat, die sich vom Stammkohlenwasserstoff
Ergostan ableiten und hnlich wie Carden olide und Bufadienolide einen fnf- oder sechsgliedrigen Lactonring
enthalten. Im Gegensatz zu den beiden Steroidgruppen, die berwiegend als Glykoside vorliegen, kommen
Withanolide jedoch in freier Form vor. Am lngsten bekannt ist Withaferin A [(22R)-4,27 -Dihydroxy-1-oxo5,6-epoxywitha-2,24-dienolid] aus Withania somnifera und Acnistus arborescens, das bakteriostatische und
tumorhemmende Wirkung besitzt. Weitere Vertreter sind Withanolid D und Withanolid E.
HO
O
O
O
H
H
O
OH
OH
O
H
HO
O
Withaferin A
Whitanolid E
Ergostan
HO
.11 Steroidalkaloide
Als Steroidalkaloide bezeichnet man stickstoffhaltige Steroide, die vorwiegend als Ester [Esteralkaloide] oder
Glykoside [Glykoalkaloide] in hheren Pflanzen, jedoch auch in einigen Tieren gefunden werden. Pflanzliche
Steroidalkaloide sind vor allem in Nachtschatten-, Lilien-, Hundsgift- und Buchsbaumgewchsen zu finden,
171
6. Steroide
tierische kommen u.a. in Amphibien vor. Einige Steroidalkaloide werden als Ausgangssubstanzen fr die
Synthese von Steroidhormonen eingesetzt. Struktur und Chemismus dieser Verbindungen werden unter den
Alkaloiden abgehandelt.
.12 Steroid-Sexualhormone
Die Sexualhormone [Keimdrsenhormone, Geschlechtshormone oder Sexagene] sind verantwortlich fr die
Ausbildung der Geschlechtsorgane, der sekundren Geschlechtsmerkmale und fr die Geschlechtsfunktionen
des tierischen und menschlichen Organismus. Die Bildung der eigentlichen Sexualhormone, der mnnlichen
Keimdrsenhormone, Androgene, bzw. der weiblichen Sexualhormone, Estrogene und Gestagene, erfolgt in
den Hoden bzw. Ovarien unter der stimulierenden Wirkung der gonadotropen Hormone [Proteohormone] des
Hypophysenvorderlappen [Biologisch aktive Proteine] und wahrscheinlich in geringem Umfang auch in der
Nebennierenrinde. Die Unterscheidung in mnnliche und weibliche Sexualhormone ist manchmal, da sie in
beiden Geschlechtern auftreten knnen. Entscheidend fr viele Funktionen ist das Verhltnis der einzelnen
Hormone zueinander.
Die Steroidhormone leiten sich strukturell vom tetracyclischen Kohlenwasserstoff Gonan (vgl. 6.1) ab, die
Biosynthese verluft von Cholesterin ausgehend unter Abbau der C-17-Seitenkette. Je nach Zahl der C-Atome
unterscheidet man die C19-Androgene (Androstanderivate), die C18-Estrogene (Estranderivate) und die C21Gestagene (Pregnanderivate). Aufgrund ihrer lipophilen Struktur knnen die Steroidhormone ber die Zellmembran in das Zellinnere eindringen und dort mit spezifischen Rezeptoren eine Genexpression,
wahrscheinlich ber die Proteinsynthese, auslsen.
Die Androgene [griech. andros = Mann] werden gewhnlich als mnnliche Geschlechts- oder Keimdrsenhormone bezeichnet, selbst wenn sie auch im weiblichen Organismus vorkommen. Ihrer Struktur liegt die des
5-Androstans [frher Testan] zugrunde, ein Dimethyl-perhydrocyclopenta[a]phenanthren mit jeweils transverknpften Ringen. Zu den wichtigsten Androgenen gehren Testosteron, Androsteron, Dihydrotestosteron
und das Androstendion. Sie werden im Sperma, im Blut und Harn gefunden und teils an Glucuronsuren, an
Schwefelsure oder Eiwei gebunden ausgeschieden. Testosteron [17-Hydroxyandrost-4-en-3-on] wird auf
Veranlassung der gonadotropen Hormone in den Leydigschen Zellen [Interstitialzellen] des Hodens freigesetzt
und wurde erstmals 1935 [LAQUEUR] aus Stierhoden isoliert. Fr die biologische Wirkung von Testosteron ist
die Doppelbindung an C-4 ausschlaggebend, die Wirksamkeit ist etwa 7mal besser als die von Androsteron
ohne diese Doppelbindung. Es bewirkt die Ausbildung der Geschlechtsmerkmale des Mannes, frdert die
Entwicklung der Muskulatur und des Knochenaufbaus, das Wachstum von Haaren, Stimmbndern, Penis,
172
6. Steroide
Prostata und Samenblase. Testosteron ist unerllich fr die Funktion der akzessorischen Geschlechtsdrsen
und fr die Aufrechterhaltung von Potenz und Libido. Der erwachsene Mann erzeugt ca. 7 mg Testosteron/Tag,
im Organismus der Frau werden etwa 0.3 mg/Tag produziert. Androsteron [3-Hydroxy-5-androstan-17-on]
ist das wichtigste Abbau- und Ausscheidungsprodukt des Testosterons, das 1931 als erstes Androgen aus
Mnnerharn isoliert wurde [BUTENANDT und TSCHERNING]. Der Strukturbeweis gelang RUZICKA durch
Synthese des Acetates aus Cholesterinacetat. Bei Androsteron sind Keto- und Hydroxyfunktion gegenber
Testosteron vertauscht, auerdem fehlt die Doppelbindung im A-Ring. In der Prostata wird Testosteron durch
eine Reduktase zu 5-Dihydrotestosteron, dem aktiven Androgen der Prostata, reduziert. strogene hemmen
diese 5Reduktase-Aktivitt und werden bei Prostatakarzinomen eingesetzt. Androstendion [3,17-Dioxoandrost-4-en] ist ebenfalls ein Abbauprodukt der Androgene.
O
OH
OH
H
O
HO
O
H
Testosteron
Androsteron
5a-Dihydrotestosteron
Androstendion
Androgene weisen neben der geschlechtsspezifischen auch anabole Wirksamkeit auf [anabole Steroide], d.h.
sie frdern den Eiweiaufbau, vergrern die Muskelmasse, bewirken eine Erhhung der Stickstoffretention
und werden zur Kastrationsbehandlung eingesetzt. So regenerieren sich bei kastrierten mnnlichen Nagetieren
bei Androgentherapie die Samenblschen. Als Wirksamkeitstest fr Andorgene diente frher der sog.
Hahnenkamm- oder Kapaunentest: Die Androgenzufuhr bewirkt bei kastrierten Hhnen die Vergrerung des
vorher degenerierten Kammes, einem sekundren Geschlechtsmerkmal der Tiere.
Testosteron ist oral unwirksam, intramuskulr werden meist lnger wirksame Ester appliziert. Synthetische
Abwandlungsprodukte des Testosterons werden zur Entwicklung oral wirksamer Androgene, zur Trennung von
androgen und anabol wirksamen Komponenten, zur Entwicklung von Anabolika und zur Auffindung von
Substanzen mit antiandrogener Wirkung synthetisiert.
Die meisten Anabolika, die als aufbauende Mittel zur Muskelentwicklung eingesetzt werden und stark
reduzierte androgene Wirksamkeit besitzen, leiten sich strukturell vom Testosteron ab, wie z.B. 19-Nortestosteron, Metandienon oder Stanozalol. Anabole androgene Steroide wurden als Dopingmittel erstmals 1976
verboten und stellen die Gruppe der hufigsten verwendeten Dopingmittel dar. 1984 wurde auch die
Anwendung von krpereigenem, jedoch exogen zugefhrtem Testosteron verboten. Bei den Olympischen
Spielen 1994 in Atlanta wurden massenspektrometrisch innerhalb von 17 Tagen 1.900 Routineproben von
Sportlern genommen und analysiert. Anabolika werden auerdem bei Unterernhrung und in postoperativer
Behandlung verabreicht. Verwandte mnnlicher Sexualhormone wie z.B. Cyproteron [6-Chlor-17-hydroxy1,2-cyclopropa[1,2]pregna-4,6-dien-3,20-on]
und
Cyproteronacetat
[6-Chlor-17-acetoxy-1,2-
173
6. Steroide
CO-CH3
OH
O-COCH3
Cyproteron
Cl
Cyproteronacetat
Cl
Die Entdeckung, da trchtige, Ratten bei Cyproteronapplikation scheinbar nur noch weibliche Junge zur Welt
brachten, und die folgerichtige Interpretation dieses Befundes als antiandrogenen Effekt zog in der ganzen Welt
mit dieser Substanz biologische Untersuchungen an androgenabhngigen Organsystemen nach sich.
Estrogene [strogene, lat. oestrus = Brunst], weibliche Geschlechtshormone, werden nach ihrem Hauptbildungsort auch Follikelhormone bezeichnet. Sie sind verantwortlich fr die Entwicklung der weiblichen
Geschlechtsorgane und fr die Regulation des ersten Abschnittes des weiblichen Menstruationszyklus. Sie
regulieren die Ausschttung der gonadotropen Hormone und stimulieren die Lipidsynthese. Zu den im
menschlichen Organismus zirkulierenden Estrogenen gehren Estradiol, Estron und das Estriol, ein Stoffwechselprodukt mit nur geringer estrogener Aktivitt. Charakteristische Strukturmerkmale sind die phenolische
C-3-OH-Gruppe und der aromatische A-Ring, der das Fehlen der 10-Methylgruppe bedingt. Estradiol
[stradiol, Estra-1,3,5(10)-trien-3,17-diol], das wirksamste Estrogen, wird in den Ovarien, wahrscheinlich in
den reifenden Follikeln, und whrend der Schwangerschaft in der Plazenta produziert und lst die Proliferation
des Endometriums, der Uterus-Schleimhaut, als erste Phase der Menstruation aus. Gemeinsam mit dem
Peptidhormon Relaxin bewirken die Estrogene die Erweiterung des Geburtskanals. Estradiol wird zur
Behandlung von Menstruationsbeschwerden und zur Therapie bei klimakterischen Beschwerden verwendet,
und nach der Menopause zur Behandlung von Brustkrebs und Osteoporose. Allgemein finden Estrogene
therapeutische Anwendung bei Estrogenmangelerscheinungen der Frau, wie z.B. bei Sterilitt und Frigiditt.
174
OH
6. Steroide
OH
OH
H
HO
HO
Estradiol
HO
Estron
Estriol
Estradiol wurde 1935 aus Ovarien [DOISY] isoliert, drei Jahre vorher wurde es bereits durch Reduktion des
Estrons [SCHWENK und HILDEBRANDT, 1932] gewonnen, Estron [stron, 3-Hydroxy -estra-1,3,5(10)-trien-17on] wurde erstmals 1929 aus Schwangerenharn [BUTENANDT, DOISY] isoliert. Spurenweise kommt es wie auch
Estriol [striol, Estra-1,3,5(10) -trien-3,16,17-triol] in einigen Pflanzen vor (z.B. im Palmkernl) und wird
heute technisch durch Partialsynthese aus Diosgenin, Sitosterin u.a. Steroiden bzw. vollsynthetisch hergestellt.
Im Harn werden die Estrogene als etherunlsliche Konjugate mit Schwefelsure oder Glucuronsure (vgl. 5.
Kohlenhydrate) ausgeschieden. Estriol ist ein Abbauprodukt der eigentlichen Estrogene Estradiol und Estron
und kommt mit diesen in Ovarien, Placenta, Schwangeren-Harn und Nebennieren vor. Im Harn trchtiger
Stuten wurden auerdem strker ungesttigte strogene wie Equilin [3-Hydroxy-estra-1,3,5(10),7-tetraen-17on], Equilenin [3-Hydroxy-estra-1,3,5,7,9-pentaen-17-on] und Estra-5,7,9-trien-3-ol-17-on nachgewiesen, im
menschlichen Urin tritt Equilenin nur in pathologischen Fllen auf.
O
H
HO
H
HO
Equilin
H
HO
Equilenin
Estra-5,7,9-trien-3-ol-17-on
Die Wirkung der Estrogene ist nicht sehr spezifisch, als Voraussetzung fr estrogene Wirkung gengt wahrscheinlich die Anwesenheit von zwei Hydroxygruppen in einem bestimmten Abstand im Wirkmolekl. Der
gleiche OH-Abstand wie in Estradiol ist auch bei Nicht-Steroid-Verbindungen gegeben, so wird zur
Erleichterung
von
Hormonmangelbeschwerden,
zur
Bekmpfung
von
Prostatakrebs
und
zur
Wachstumsanregung von Rindern synthetisches Diethylstilbstrol [Stilbstrol] verwendet. Hexstrol ist die
entsprechende Verbindung mit der hydrierten Ethylenbindung, Tri-p-anisylchlorethylen [TACE] ein im letzten
Jahrzehnt eingefhrtes strogen. hnlich sind verschiedene natrlich vorkommende Stilbenderivate wie z.B.
Rhaponticin oder manche Isoflavone wie Genistein estrogen wirksam. Estrogene in Futterpflanzen werden fr
das Auftreten von Fertilittsstrungen bei Weidetieren verantwortlich gemacht. Estrogen wirksame
Verbindungen sind auch im Moor sowie in lschiefern [Ichth-Estron] enthalten.
Inzwischen kennt man eine ganze Reihe von sowohl nichtsteroiden Synthesechemikalien als auch Naturstoffen,
die estrogenhnliche Wirkung besitzen und Einflu auf das Hormonsystem ausben. Kommen solche
Verbindungen in die Nahrungskette bzw. in die Umwelt, kann es zu Schdigungen der menschlichen
Gesundheit und Vernderungen des Reproduktionsverhaltens von Tieren fhren. Viele Pestizide, Herbizide und
175
6. Steroide
Fungizide sowie Phenole besitzen unerwnschte bzw. Verdacht auf unerwnschte Estrogenwirkung. Zu den
natrlich
vorkommenden
werden
Phytoestrogenen
z.B.
Citral,
Cumestrol,
Genistein,
Quercetin,
Tetrahydrocannabiol und Luteolin gezhlt, die in einer Vielzahl von Testsystemen estrogene Wirkung zeigten.
Estrogene beeinflussen sowohl die Kurz- als auch Langzeitaktivitt des Gehirns und wirken auf Lernen und
Gedchtnis. Klinische Studien zeigten eine Korrelation zwischen verbesserter Hirnleistung und dem Estrogenspiegel im Blut. Estrogengaben knnen damit auch das Risiko einer Alzheimerschen Erkrankung senken.
Estrogene werden bei oraler Gabe schlecht resorbiert und auerdem rasch abgebaut, therapeutisch werden
daher lnger wirksame Ester des Estradiols eingesetzt. Oral gut wirksame Estrogene wurden durch Einfhrung
einer Ethinylgruppe in 17-Stellung erhalten und finden Verwendung in Ovulationshemmern (vgl. 4.12.4).
Estra-1,3,5(10)-trien-3,16,17 -triol [Epi-Estriol] wirkt als Antagonist, das 17-Estradiol [-Estradiol]
hemmt die Sekretion des Hypophysenvorderlappens. Verschieden basisch substituierte Stilben-Derivate wirken
als Antiestrogene, dazu gehren Tamoxifen, das zur Behandlung von Mammakarzinomen eingesetzt wird.
OH
C2H5
OH
OH
C2H5
C2H5
H
C2H5
HO
C2H5
HO
HO
Hexstrol
Stilbstrol
-Estradiol
Tamoxifen
(CH2)2N(CH3)2
Die Gestagene, auch Schwangerschaftshormone oder Gelbkrperhormone genannt, sind die zweite Gruppe der
weiblichen Geschlechtshormone. Sie werden whrend der Schwangerschaft [Graviditt] gebildet und
verhindern einen weiteren Eisprung. Als Gestagene, die fr die Vorbereitung der Uterusschleimhaut
[Endometrium] fr die Aufnahme des befruchteten Eies verantwortlich sind und deren Abstoung verhindern,
wirken das Progesteron [Gelbkrperhormon, Luteohormon] und das Pregnenolon. Das wichtigste
Schwangerschaftshormon, Progesteron [Pregn-4-en-3,20-dion], wird nach der Ovulation vom Gelbkrper
[Corpus luteum] der Ovarien sezerniert, ein Carotin-hltiges Gewebe, das sich nach dem Eisprung bildet und
etwa 2 Wochen bis zu seiner Rckbildung arbeitet. Im Falle einer Schwangerschaft wird das Corpus luteum
jedoch erst im 4. Schwangerschaftsmonat rckgebildet und die Progesteronproduktion anschlieend von der
Placenta bernommen. Die Progesteron-Bildung wird bei der Frau durch das Peptidhormon Lutotropin
gesteuert, bei manchen Tierarten ist Prolactin beteiligt (vgl. 10.
eines Abortus eingesetzt und zur Regulation bei Zyklusstrungen. Es ist Bestandteil von Ovulationshemmern
und
findet
Anwendung
in
der
tierischen
Reproduktion
(zur
Auslsung
der
Brunst
und
zur
176
Zyklussynchronisation
in
der
Tierhaltung).
6. Steroide
Pregnenolon
[3-Hydroxy-pregn-5-en-20-on]
entsteht
biosynthetisch aus Cholesterin und ist eine Vorstufe des Progesterons und der Androgene. In der Leber wird
Progesteron zum Pregnandiol [Pregnan-3,20-diol] abgebaut, das als Glucuronid ausgeschieden wird und
whrend der Schwangerschaft aus dem Urin der Frau isoliert werden kann. Verminderte Ausscheidung kann
auf eine drohende Fehlgeburt hinweisen.
18
20
20
CO-CH3
CO-CH3
20
H
OH
19
17
17
Progesteron
HO
HO
Pregnenolon
Pregnandiol
Die Gestagene wirken nach parenteraler Applikation nur kurz und werden bei oraler Applikation nur schlecht
resorbiert, Progesteron selbst ist oral appliziert inaktiv. Durch chemische Modifizierung werden geeignete
Verbindungen erhalten, die vor allem als Kontrazeptiva (6.12.4) Verwendung finden.
Da die Produktion der gonadotropen Hormone der Hypophyse durch die zirkulierenden Steroide beeinflut
wird, lt sich durch Estrogen- und Gestagengaben die Ausschttung bestimmter Proteohormone unterdrcken.
Wird die Hypophysenttigkeit gebremst und kein Zwischenzellstimulierendes Hormon [Interstitialzellen stimulierendes Hormon ICSH] produziert, wird die Ovulation verhindert, man kann eine Pseudoschwangerschaft
erzeugen und damit die Befruchtung verhindern [Kontrazeptiva, Antibabypille]. Zur Blockierung der Peptidhormonsynthese
in
der
Hypophyse
gesellt
sich
noch
die
Verdickung
und
Auflockerung
der
Gebrmutterschleimhaut, die zustzlich das Vordringen der Spermien und die Fruchteinbettung verhindert.
Eine acyclische Dauertherapie fhrt zur kompletten Ausschaltung der Menstruation, jedoch auch zu
unerwnschten Epithelvernderungen und zur Rckbildung von Krperschleimhuten. Daher wird
blicherweise eine cyclische Behandlung gewhlt, d.h. man gibt bzw. enzieht die Hormone in den natrlichen
Zeitabstnden des Menstruationszyklus. Beim Absetzen des Hormons kommt es damit zur Abstoung des
Endometriums und zu einer Entzugsblutung. Um innerhalb dieses knstlichen Zyklus eine ausreichende
Endometrium-Umwandlung
zu
induzieren
und
Zwischenblutungen
zu
vermeiden,
werden
meist
Kombinationsprparate aus Estrogenen und Gestagenen angewandt. "Minipillen" dagegen enthalten nur
Gestagene und mssen acyclisch stndig eingenommen werden.
Wegen ihrer raschen Metabolisierung in den Verdauungsorganen wirken diese Ovulationshemmer oral nur
uerst schwach. Eine Wirkungssteigerung und verzgerte Metabolisierung weisen die von INHOFFEN und
HOHLWEG 1938 eingefhrten 17-Ethinylderivate von Estrogenen und Gestagenen auf. 17-Ethinyl-estradiol
177
6. Steroide
bzw. dessen 3-Methylether Mestranol z.B. ist ein hochpotentes Estrogen, das bis heute der estrogene
Bestandteil von Ovulationshemmern geblieben ist. Mit 17-Ethinyl-testosteron konnte das erste oral wirksame
Gelbkrperhormon
hergestellt
werden.
Spter
gewannen
DJERASSI
und
COLTON
17-Ethinyl-19-
nortestosterone wie Norethisteron [17-Ethinyl-19-nortestosteron] und Norethisteronacetat [17-Ethinyl-19nortestosteronacetat], die als gestagene Komponenten in Ovulationshemmern klinisch verwendet wurden.
OH
OH
OH
C
CH
CH
OCOCH3
CH
H
HO
H3CO
17-Ethinylestradiol
Mestranol
CH
H
O
Norethisteron
Norethisteronacetat
Nebennierenrinden-Hormone [Corticoide, Corticosteroide oder Cortine] werden in der Rinde der Nebennieren
[Cortex glandulae suprarenalis, NNR], zwei erbsengroen und lebenswichtigen Organen ber den Nieren,
unter dem Einflu des adrenocorticotropen Hormons [ACTH, Corticotropin] gebildet. ber 30 verschiedene
natrliche Nebennierenrinden-Hormone wurden identifiziert, aber nur wenige zeigen ausgeprgte Hormonwirkung, unter denen sich die die wirksamen Corticoide Cortison, Cortisol, 11-Dehydrocorticosteron,
Corticosteron, Cortexolon und Cortexon befinden, die anderen sind meist Biosynthese-Zwischenstufen oder
Abbauprodukte. Corticosteron und Cortisol machen ca. 60-95 % dieser Hormone aus. Cortinmangel fhrt zur
Bronzefrbung der Haut, zu Muskelschwche und Erhhung des Harnstoffgehalts im Blut. Bei Ausfall der
Nebennieren tritt innerhalb von wenigen Tagen der Tod ein. Cortin-berfunktion ergibt bei Kindern vorzeitige
geschlechtliche Entwicklung. Bei krperlichem oder seelischem Stre ist die Ausschttung von NebennierenHormonen besonders gesteigert, wobei Adrenalin, Noradrenalin und Cortin ausgeschieden werden. Alle drei
Hormone sind lebensnotwendig, die Bildung von Cortin ist jedoch wichtiger, da es nur von den Nebennieren
abgegeben wird, whrend Adrenalin und Noradrenalin auch aus anderen Organen abgegeben werden.
Bei hohen Dosen haben die Corticoide oft andere pharmakologische Eigenschaften, und es tritt die
entzndungshemmende und antiallergische Wirkung in den Vordergrund.
Alle Corticoide sind C21-Steroide der Pregnan-Reihe, besitzen eine ,-ungesttigte Carbonylgruppe im A-Ring
und eine Ketolseitenkette in C-17. Je nach Wirkung unterscheidet man Glucocorticoide, fr die eine zustzliche
11-Sauerstoff-Funktion typisch ist, und Mineralocorticoide. Erstere steuern den Kohlenhydrat- und
Zuckerstoffwechsel, stimulieren die Glucogenese und erhhen dadurch den Blutzuckerspiegel, letztere
regulieren den Mineralstoffwechsel und Elektrolythaushalt.
178
6. Steroide
Androgen wirken die Androcorticoide, zu denen Androstendion, Adrenosteron und Testosteron (vgl. 6.12.1)
gehren, die zwar hauptschlich als Keimdrsenhormone in den Hoden, aber zum Teil auch in der
Nebennieren-Rinde gebildet werden. Weibliche Analoge sind die Estrocorticoide (Estrogene).
6.13.1 Glucocorticoide
Die Glucocorticoide sind vor allem wegen ihrer entzndungshemmenden, antiallergischen, antirheumatischen
und immunsuppressiven Wirkung von Bedeutung. Die antiinflammatorische Wirkung der Corticoide wird jetzt
in der Therapie zahlreicher Krankheiten wie z.B. Rheumaerkrankungen, Asthma, Hepatitis, Nephrose und
verschiedene Blutkrankheiten genutzt. In der Dermatologie sind lokal wirksame Corticoide bei der Behandlung
von Hautkrankheiten unentbehrlich. Physiologisch vorkommende Glucocorticoide sind Cortison, Cortisol,
Corticosteron
und
11-Dehydrocorticosteron.
Cortisol
[11,17,21-Trihydroxy-pregn-4-en-3,20-dion,
Hydrocortison] besitzt die strkste glucocorticoide Wirkung, Corticosteron [11,21-Dihydroxy-pregn-4-en3,20-dion], das in der Nebennieren-Rinde durch zweifache Hydroxylierung aus Progesteron entsteht, und 11Dehydrocorticosteron [21-Hydroxy-pregn-4-en-3,11,20-trion] zeigen bereits eine gewisse mineralocorticoide
Aktivitt. Cortison [17,21-Dihydroxypregn-4-en-3,11,20-trion] wird seit ber 40 Jahren zur Behandlung
gegen Gelenksrheumatismus [Polyarthritis] verwendet. Trotz der Nebenwirkungen lassen sich durch gezielte
Dosierung und gezielte chemische Modifikation die unerwnschten Wirkungen soweit zurckdrngen, da die
Cortisonbehandlung heute erheblich risikormer ist als frher. Es wurde 1935 erstmals von Kendall aus
tierischen Nebennierenrinden isoliert, zur Gewinnung von 0.2 g Cortison bentigte man damals die Organe von
20.000 Rindern. Die erste Totalsynthese gelang WOODWARD und SARETT [1949-1952] aus Desoxycholsure.
Spter wurde die Struktur des Cortisons vielfach synthetisch modifiziert um Antirheumatica und
Antiphlogistica zu erhalten, bei denen gleichzeitig die ungewnschte glucocorticoide und mineralocorticoide
Wirkung zurckgedrngt ist.
OC
OC
CH2OH
R
HO
CH2OH
O
R = OH: Cortisol
R = H: Corticosteron
R = OH: Cortison
R = H: 11-Dehydrocorticosteron
6.13.2 Mineralocorticoide
Den Mineralocorticoiden fehlt die C-11-Sauerstoffunktion der Glucocorticoide, sie regulieren den Wasser- und
Mineralstoffhaushalt des Organismus. Natrlich vorkommende Mineralocorticoide sind die Corticoide
Cortexon [21-Hydroxy-pregn-4-en-3,20-dion, Desoxycorticosteron, Desoxycorton] und Cortexolon [17,21Dihydroxy-pregn-4-en-3,20-dion], und als wirksamstes Mineralocorticoid das erst 1953 aus Nebennieren-
179
6. Steroide
durch
das
synthetisch
gewonnene
17-Spirolacton
Spironolacton
gehemmt,
das
bei
O
OC
CH2OH
OC
CH2OH
CH2OH
O=HC
O
HO
H
H
O
R = H: Cortexon
R = OH: Cortexolon
Aldosteron
S-COCH3
Spironolacton
.14 Ecdysone als Hormone in Insekten und Krebsen und als Phytoecdysteroide in Pflanzen
Ecdysone sind eine Klasse von Steroiden mit Hormonwirkung bei Insekten [Ecdysteroide]. Sie lsen bei den
Insekten Hutungsprozesse aus und sind als Verpuppungs- oder Hutungshormone fr die Entwicklung der
einzelnen Larvenstadien verantwortlich. Im Gegensatz zu den Juvenilhormonen (9.
Larven- als auch die Puppenhutung zum fertigen Insekt [Imago]. Das erste Hutungshormon -Ecdyson
[(22R)-2,3,14,22,25-Pentahydroxy-5-cholest-7-en-6 -on] wurde von A. BUTENANDT und P. KARLSON 1954
aus den Prothoraxdrsen von Puppen des Seidenspinners Bombyx mori [Bombycidae] isoliert, 25 mg konnten
aus 500 kg Puppenmaterial gewonnen werden. Charakteristisch fr die Ecdysone ist die 14-Hydroxygruppe.
Das etwa doppelt so stark wirksame -Ecdyson [20-Hydroxyecdyson, Ecdysteron] wurde ebenso aus Insekten
isoliert und ist identisch mit dem Hutungshormon der Krebse [Crustecdyson]. In ca. 1.000mal hheren
Konzentrationen wurden Ecdysone in Pflanzen [Phytoecdysteroide], vor allem in Farnen, Eiben, Eisenkraut und
Fuchsschwanzgewchsen, mit Wirkung als Insektenhormone nachgewiesen. Aus Conifere podocarpus wurde
das Ponasteron isoliert.
180
6. Steroide
OH
OH
HO
R=
OH
-Ecdyson
-Ecdyson
HO
OH
OH
HO
HO
OH
OH
HO
H
Ponasteron A
O
OH
Lemmasteron
1979 erschien ein Bericht ber ein pflanzliches Wachstumshormon, das aus Pollen von Raps [Brassica napus]
isoliert wurde. Die Konstitution wurde durch Rntgenstrukturanalyse geklrt und die Verbindung Brassinolid
bezeichnet. Brassinolide sind damit Pflanzenhormone mit Steroidstruktur, die in Konzentrationen von
10g/Pflanze das Pflanzenwachstum frdern. Bemerkenswert sind die 22R-Hydroxygruppe und das siebengliedrige B-Ring-Lacton, das bisher noch in keinem anderen natrlichen Steroid gefunden worden ist. Auch
hier wurden entsprechende Analoga gefunden.
R
OH
OH
HO
H
HO
R = CH3
R=H
R = C2H5
Brassinolid
28-Norbrassinolid
Brassinon
Whrend man die herzwirksamen Glykoside berwiegend aus pflanzlichem Material gewinnt, werden Steroidhormone heute ausschlielich partial- oder totalsynthetisch gewonnen. Viele Syntheseabwandlungsprodukte
sind aufgrund ihrer strkeren Wirkung (z.B. Corticoide), ihrer spezifischeren Wirkung (z.B. Anabolika) oder
ihrer besseren oralen Wirksamkeit (z.B. 17-Ethinylderivate) fr den therapeutischen Einsatz besser geeignet
als die natrlichen Verbindungen.
6.16.1 Partialsynthesen
Fr Partialsynthesen dienen meist billige pflanzliche Steroid-Rohstoffe als Ausgangsverbindungen, vor allem
das in groer Menge in Mexiko aus Dioscorea-Wurzeln isolierte Spiroketal Diosgenin (z.B. Formel 6-8).
Wesentlich teurer ist aus dem Rckenmark von Rindern und Schweinen oder dem Wollfett der Schafe
gewonnene Cholesterin (z.B. Formel 4-19). Ferner werden Gallensuren (z.B. Desoxycholsure, 4.8.2),
pflanzliche Saponine (6.7), das Steroidalkaloid Solasidin (aus Sojabohnen oder Zuckerrohrwachs) und die
181
6. Steroide
Phytosterine Stigmasterin (Formel 6-5) und Sitosterin (Formel 6-6) eingesetzt. Letzteres kommt auerdem in
grerer Menge im Neutralanteil des bei der Papierherstellung anfallenden Tallls vor.
Rohstoffquelle
Diosgenin
Solasodin
Hecogenin
Stigmasterin und Sitosterin
Sarsasapogenin
Gallensuren
Cholesterin
Lanosterin
Ergosterin
Dioscorea-Arten (Mexiko)
Solanum marginatum (thiopien/Ostafrika)
Agave sisalana (Kenia)
Sojabohne, Zuckerrohrwachs und Talll
Yucca
Rindergalle
Rckenmark von Rindern, Wollfett von Schafen, Fischle
Wollfett von Schafen
Hefen
Die Seitenkette des Diosgenin lt sich nach MARKER (6.12.2.1) abbauen und fhrt zum wichtigen
Zwischenprodukt Dehydropregnenolonacetat, das sich zu Progesteron umwandeln lt. Aus Pregnenolon ist
weiters Androstenolonacetat erhltlich (Formel 4-4), ein wichtiges Zwischenprodukt fr die Synthese von C19Steroiden wie z.B. Testosteron (4.12.1.1) und der Estrogensynthese (Formel 4-7). Androstenolon ist auch durch
oxidativen Abbau von Cholesterin zugnglich.
zu Prednison
- Einfhrung oder Abspaltung, Oxidation oder Veresterung von Hydroxygruppen, z.B. 11--Hydroxylierung
von
Progesteron durch Rhizopus nigricans zur Cortisonsynthese (Formel 4-12), Hydroxylierungen in 16- (
Mikrobiologische Umwandlungen zeichnen sich hufig durch eine hohe Selektivitt aus und knnen in
geeigneten Fermentern in groen Mengen angesetzt werden. Zur Durchfhrung einer mikrobiologischen
Synthese wird z.B. das Ausgangssteroid in einem mit Wasser mischbaren organischen Lsungsmittel gelst und
zur Kulturlsung geeigneter Mikroorganismen zugegeben. Nach erfolgter Umwandlung wird das Steroid mit
einem organischen Lsungsmittel extrahiert. Industrielle Bedeutung haben vor allem
182
6. Steroide
- Hydroxylierungen in 11- ( oder , z.B. Formel 4-12), 16 ( oder ), 17- oder 21-Stellung (Corticoid
synthesen),
- Einfhrung einer Doppelbindung in 1-Position (1,4-Diene, Formel 4-8),
- Hydrierung einer Carbonylfunktion zur Hydroxygruppe (4.12.1.1) sowie
- Abspaltung der C-17-Seitenkette (Formel 4-9).
6.16.3 Totalsynthesen
Steigende Preise fr Rohstoffe von Partialsynthesen und Fortschritte auf dem Gebiet stereospezifischer
Synthesen bewirkten die Entwicklung einer Vielzahl von Steroidtotalsynthesen. Vor allem strogene werden
zu einem nicht unbetrchtlichen Anteil heute totalsynthetisch gewonnen. Bei diesen Totalsynthesen kann man
z.B. von Ein- oder Zweiringsystemen ausgehen und die anderen Ringelemente ankondensieren (z.B. AB
ABC ABCD), oder in einer biomimetischen Cyclisierung analog der Squalencyclisierung alle vier Ringe in
einem Reaktionsschritt aufgebaut. Im folgenden sollen exemplarisch verschiedene dieser Strategien dargestellt
werden.
Die erste Totalsynthese eines Steroids war die Synthese des Equilenins von BACHMANN [1939], ausgehend
vom Zweiringsystem AB und sukzessiver Kondensation von Ring C und D.
O
COOH
O
H3CO
H3CO
H3CO
Von 2-Methyl-cyclopenta-1,3-dion als Ring-D-Baustein geht eine Synthese von CRISPIN und WHITEHURST
sowie von HUGHES ans SMITH aus. Durch MICHAEL-Addition wird das cyclische Keton an Methylvinylketon
angelagert und in Gegenwart von L-Prolin eine asymmetrische Aldolreaktion zum CD-Ringsystem
durchgefhrt. Alkylierung und Cyclisierung fhrt zum Steroidgerst.
O
O
O
L-Prolin
H+ /
+
O
O
O
HO
O
O
C
C
A
H3CO
H3CO
Das gleiche Cyclopentadion wird in einer auf TORGOV und WINDHOLZ zurckgehenden Synthese
surekatalysiert auf einen Allylalkohol addiert (TORGOV-Reaktion), der durch Grignardreaktion aus einem 6Methoxy-1-tetralon als AB-Element entsteht. Mikrobiologische asymmetrische Reduktion bringt die richtige
183
6. Steroide
Konfiguration der natrlichen Steroide fr die Atome C-13 und C-17, Cyclisierung ein Ausgangsprodukt fr die
Darstellung von Estrogenen und 19-Nortestosteronen.
O
O
O
OH
VinylmagnesiumA
bromid
H3CO
TORGOV-
H3CO
Reaktion
H3CO
OH
OH
H
HO
H3CO
H3CO
Fr die Totalsynthese von Estrogenen ist Estradiolmethylether, der wie oberhalb aus 6-Methoxy-1-tetralon
dargestellt wird, das wichtige Zwischenprodukt mit dem Steroidskelett. Entmethylierung gibt stradiol,
OPPENAUER-Oxidation und Ethinylierung Mestranol, Entmethylierung des Estron-3-methylethers gibt Estron,
das zu Ethinylestradiol ethinyliert werden kann.
O
H+
O
H3CO
H3CO
O
OH
1. NaBH4
H2
H3CO
2. BIRCHReduktion
H3CO
Eine groartige Syntheseleistung unter schrittweisem Aufbau des Ringsystems stellt die WOODWARD-Totalsynthese dar. Diese Methode besitzt allerdings heute nur noch theoretisches Interesse. Ausgehend von der
primr entstehenden Androstan-17-carbonsure sind die meisten anderen Steroidderivate zugnglich (Formel
6-13).
Eine moderne diastereoselektive Synthese sei am Beispiel von Estron demonstriert (AB ABD ABCD).
6-Methoxy-1-tetralon wird mit Vinylmagnesiumchlorid zum Allylalkohol 63 (vgl. TORGOV-Reaktion)
umgesetzt. Unter milden Bedingungen kann der D-Ring an das AB-Ringsystem zu 64 angelagert werden.
Umsetzung mit HCl/CH3OH ergibt das Estrogenringskelett 65 als Racemat. Die katalytische Hydrierung wird
durch die 18-Methylgruppe gesteuert. Im natrlichen Estron steht C-18 -stndig (nach vorne) und das 14-HAtom -stndig
184
6. Steroide
OH
H+
LiAlH4
1. NaOH
C
2. HCl
H3CO
H3CO
O
HO
Zn
C
H3CO
H3CO
H
HCOOR
Ac2O
O
OK
O
H
HO
H
O=HC
2.
CH2=CH-CN
1. HCOOEt
Pd / SrCO3
H2
1. OsO4
2. Aceton
- HCOOH
- H2O
CH3
HN
C6H5
NC
Triton B
O
HC
HC
N
C6H5
C6H5
O
C
NaOH
1. CH3MgBr
Ac2O
HIO4
O
NaOAc
2. NaOH
HOOC
O
O
CHO
COOCH3
CHO
C
CHO
B
Piperidin /
Eisessig
COOCH3
COOCH3
HOAc
O
COOCH3
H
Diastereomerentrennung
CrO3
HO
Pt / H2
2. CH2N2
Benzol
1. Oxidation
H
O
()-Androstan17-carbonsuremethylester
185
6. Steroide
O
O
OH
HCl
H2C=C-MgCl
H3CO
H3CO
O
H3CO
63
64
6-Methoxy-1-tetralon
O
H
O
H+
- H2O
OH
H+
H3CO
H3CO
H3CO
65
H2 / Pd
66
OH
H
1. CrO3
K / NH3
H
H3CO
2.
H
NH3Cl
H3CO
67
68
H3CO
()-Estron
Ein Aufbau des Steroidgersts in einer Stufe als biomimetische Cyclisierung in Anlehnung an die Squalencyclisierung liegt den folgenden Synthesen zugrunde. Betrachtet man als Beispiel die Cyclisierung von Squalenoxid,
kann man diesen Proze als trans-antiparallele elektrophile Addition an die olefinische Doppelbindung
auffassen. Allerdings bedingt die enzymatische Reaktion eine selektive Protonierung am Epoxid und ebenfalls
eine selektive ffnung dieses Oxirans. Nun gelang unter nichtenzymatischen Bedingungen, geeignete
Bedingungen zu finden, in denen aus all-trans-Doppelbindungen eine all-trans-Cyclisierung stattfindet. Die
Umsetzung des Tetraenacetals mit SnCl4 in Pentan ergibt ein Gemisch von zwei kristallinenen tetracyclischen
D-Homosteroid-Epimeren, die stereochemisch ausschlielich zur all-trans-Reihe gehren. Bei dieser Reaktion
bilden sich sieben Asymmetriezentren und trotzdem entstehen nur zwei von 64 mglichen Racematen.
4-all-transRacemat
H
O H
H
SnCl4
4-all-transRacemat
HO
H
O
+
O H
HO
Diese Stereoselektivitt wird nach STORK-ESCHENMOSER durch die Annahme erklrt, da die energetisch
bevorzugte Konformation im bergangszustand die Sesselkonformation ist.
186
R1 = HO
R2 = H
R2 = HO
R1 = H
6. Steroide
O
H
HO
R1
R2
Bei Cyclisierungen zu Dekalin-Derivaten konnte allgemein nachgewiesen werden, da jeweils aus einer transDoppelbindung trans-Dekalin und aus einer cis-Doppelbindung cis-Dekalin als racemische Produkte entstehen
[JOHNSON].
H
O
CHO
HCOOH
trans-Dekalin
Racemat
O
SO2
NO2
H
H
O
HCOOH
CHO
cis-Dekalin
Racemat
O
SO2
NO2
H
Mit dieser Methode gelingt z.B. die Synthese des ()-Dehydroprogesteron. Der Aufbau des Tetraengersts
startet mit der Umlagerung eines Vinylallylethers 69 zu einem ,-ungesttigten Aldehyd 70. Anlgerung von 2Propenyllithium und Angliederung von Propargylmagnesiumbromid ergibt 73. Umsetzung mit Methyllithium
zum Acetylid fhrt durch nucleophile Substitution des Bromids 75 und anschlieende Abspaltung der
Carbonylschutzgruppen zu einem Trien-diketon 77. Intramolekulare Aldolkondensation ergibt ein Tetraen 78,
das unter den Bedingungen, die oben diskutiert wurden, mit einer Lewissure zu einem Vierringsystem 79
cyclisiert werden kann. Reakton mit OsO4 zum cis-Diol und Pb(OAc)4-Spaltung zur Tetracarbonylverbindung
80 fhrt nach anschlieender Aldolcyclisierung zu rac-16-Dehydroprogesteron (Formel 6-15).
187
[3,3]sigmatrope
Umlagerung
6. Steroide
SOCl2
Li
Cl
HC C-CH2-MgBr
HO
69
70
71
73
72
O
1.
O O
CH3Li
Br
H+
O O
1. NaOH
75
CLi
74
2. CH3Li
2. Na / NH3
76
O
77
O
O
O
H
H
CHO
SnCl4
1. OsO4
H
H
CH3NO2
79
78
HO
2. Pb(OAc)4
80
H+
O
H
KOH
()-16-Dehydroprogesteron
WITTIG-Olefinierung des Phosphorans 81 mit Aldehyd 82 ergibt das Dienin 83. Nach Abspaltung der Schutzgruppen, intramolekularer Aldolkondensation und anschlieender Addition von Methyllithium resultiert das
Zwischenprodukt 86, aus dem die Darstellung von Progesteron und Androsteron mglich ist. Die Cyclisierung
erfolgt durch Abspaltung des tertiren Alkohols und nucleophilen Angriff an der Dreifachbindung mit dem
Trifluoracetatanion. Die Cyclisierung mit Trifluoressigsure ergibt eine all-trans-Konfiguration (87) unter
Ausbildung des fnfgliedrigen Ringes. Die Ozonolyse ergibt Ringspaltung im A-Ring und das 17-Keton 88, die
folgende Aldolkondensation fhrt zum rac-Androsten-3,17-dion.
188
6. Steroide
O
B|
H+
+
+
P(C6H5)3
O
O
O=HC
81
83
82
84
O
O
OCOCF3
O
C CF3
H
CH3Li
NaOH
CF3COOH
Pentan
140 C
85
HO
86
H+
87
1. O3
KOH
2. Zn / HOAc
CH3OH
O
O
()-Androsten-3,17-dion
88
Zum Progesteron gelangt man durch Cyclisierung von 86 mit Trifluoressigsure und Ethylencarbonat 89 als
Nucleophil, wobei nach der Hydrolyse das all-trans-Produkt 90 entsteht. Das aus dem Enol resultierende 20Keton 91 weist zu 67% die thermodynamisch stabilere 17-Konfiguration auf. Ozonolyse und anschlieende
basische Cyclisierung liefert rac-Progesteron.
O
H
O
O
H
10 % K2CO3
CF3COOH
HO
H+
O
1. O3
2. Zn
3. KOH / CH3OH
H
O
()-Progesteron
Die Problematik fr die technische Anwendbarkeit dieser Synthesen ist im Auftreten von Racematen
begrndet; abgesehen vom Aufwand der Trennungsoperationen selbst ist damit immer auch der Verlust von 50
% Substanz verbunden, was die Wirtschaftlichkeit der Verfahren beeintrchtigt.
Eine der erfolgreichsten enantioselektiven Totalsynthesen ist die von (R)(+)-Norgestrel, einem Gestagen, das
als Kontrazeptivum (6.12.4) angewandt wird. In diesem Fall wird das erste chirale Zentrum durch eine stereo-
189
6. Steroide
selektive mikrobiologische Reduktion erzeugt. Ausgehend von 6-Methoxy-1-tetralon wird mit Vinylmagnesiumchlorid ber den Allylalkohol in einer MICHAEL-Reaktion mit 2-Ethylcyclopentan-1,3-dion 92 ein
Zwischenprodukt 93 erhalten, das an C-14 und C-17 zwei prochirale Zentren besitzt. Durch Reduktion der C17-Ketonfunktion mit Saccharomyces uvarum, die sowohl regio- als enantioselektiv verluft, werden C-13 und
C-17 in 94 chiral. Die nach der Acetylierung erfolgende Cyclisierung produziert keine neuen
Asymmetriezentren. Hydrierung der 14-Doppelbindung erfolgt von der sterisch weniger gehinderten -Seite,
d.h. die zwei Asymmetriezentren steuern die Einfhrung eines weiteren asymmetrisch substituierten
Kohlenstoffs in 96. Reduktion mit Lithium in Ammoniak ergibt die thermodynamisch stabilere transVerknpfung (9,8) des B/C-Ringes und BIRCH-Reduktion des aromatischen A-Ringes in 98. OPPENAUEROxidation und Angriff des Lithiumacetylids, ebenfalls von der weniger gehinderten -Seite, ergeben nach der
Spaltung des Methylvinylethers und Isomerisierung der 5(10)-Doppelbindung stereochemisch einheitlich
(R)(+)-Norgestrel (Formel 6-17).
OH
Saccharomyces
uvarum
1. Ac2O
1.
MgCl
2. NaOH
O
3.
2. TosOH
CH3O
CH3O
O
93
CH 3O
94
92
OAc
OH
OAc
Pd(CoCO3)
KOH
H2
CH3OH
Li
NH3
H
H
CH3O
CH 3O
95
CH3O
96
97
OH
LiC CH / THP
Al(iso-C3H7)3
H
CH3O
H2N
NH 2
98
99
CH3O
OH
OH
H
H+
H
(+)-Norgestrel
CH3O
100
190
6. Steroide
anschlieend mit (-)-S--Methylbenzylamin 103 zwei diastereomere Produkte 104 und 105 ergibt, die getrennt
werden knnen. Abspaltung der chiralen Hilfsgruppe aus 104 ergibt 106. Ausgehend von 106 wird das
Steroidgerst aufgebaut. Umsetzung mit 2-Methylcyclopentan-1,3-dion ergibt ber die nucleophile Substitution
des Methylethers und Eliminierung des tertiren Alkohols, die Mglichkeit der Cyclisierung durch Angriff der
Enolether-Doppelbindung am Keton in 107. Von den zwei mglichen Konformationen im bergangszustand ist
B die stabilere. In A findet eine sterische Wechselwirkung zwischen dem Keton und der Seitenkette am
chiralen Zentrum statt. Die Reaktion von B bedingt aber, da die sptere C-18-Methylgruppe nach oben, also stndig (in 108) ist. Die Reduktion von 108 mit LiAlH4 erfolgt von der sterisch weniger gehinderten -Seite
zum -Alkohol 109. Anschlieende Hydrierung erfolgt, bedingt durch die -stndige Methyl- und
Hydroxygruppe, von der -Seite zu 110. Spaltung des Vinylethers 110 und Oxidation ermglicht durch eine
intramolekulare Aldolkondensation den Aufbau des B-Ringes in 112. Erneute Hydrierung und sauer
katalysierte Abspaltung der Carbonylschutzgruppe mit anschlieender Aldolkondensation ergibt das (+)-19Norandrost-4-en-3,17-dion.
191
6. Steroide
C6 H5
O
O
MgCl
O
103
OH
H
NH2
H3C
102
101
C6H5
C6H5
H3C
H3C
H
N^H
NH
HO
O
OH
104
105
C6H5-CHO / CH3OH
NaHCO3 /
O
O
CH3O
O
O
O
HO
O
O
HOAc
/ 8h
Toluol
107
106
O
Hauptprodukt 108
H
n-Bu
OH
LiAlH4
OH
O
1. H+
Ph / H2
108
KOH
O
2. CrO3
H
R
111
110
109
O
H
O
H
O
H
Reduktion
H+ /
H
112
113
(+)-19-Norandrost-4-en-3,17-dion
Eine andere enantioselektive Variante des Aufbaus des C-Ringes erfolgt durch Reagenzienkontrolle mit einem
chiralen Katalysator. Die Anlagerung von 2-Methylcyclopentan-1,3-dion an das ungesttigte Keton 114 ergibt
das Triketon 115. Dieses wird unter Verwendung von L-Prolin als Hilfsreagenz zu 116 cyclisiert. Der
Mechanismus erfolgt ber ein Enamin, in dem das chirale Amin einen diastereomeren bergangszustand mit
einer bestimmten Konformation stabilisiert. Die Hydrierung von 116 wird von der Methylgruppe in -Stellung
192
6. Steroide
gesteuert. Lactonbildung und Umsetzung mit der Grignard-Verbindung 119 ergeben mit 120 ein hnliches
Zwischenprodukt, wie es auch in der vorher beschriebenen Synthese auftritt.
COOH
COOH
COOH
O
NH
NH
N
+
HOOC
OH
O
O
HOOC
HOOC
HOOC
116
115
114
OH
OH
OH
O
O
MgCl
Pd / H2
- H2O
O
HOOC
H
H
119
117
118
120
.18 Literatur
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7. Eicosanoide
7. Eicosanoide
7.1 Arachidonsure-Metabolismus
Mehrfach-ungesttigte Fettsuren dienen im Organismus als Vorstufen einer Vielzahl reaktiver Regulationsstoffe, die sich von der Arachidonsure, (5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14-Eicosatetraensure (2.1.3), und wahrscheinlich auch weiteren mehrfach-ungesttigten C20-Fettsuren ableiten. Mit ihren 20 C-Atomen werden sie
als Eicosanoide zusammengefat. Arachidonsure wird auf zwei Wegen, dem Cyclooxygenase- und dem
Lipoxygenase-Weg enzymatisch metabolisiert, wobei kaskadenartig eine Reihe biologisch aktiver Metaboliten
entstehen (Abb. 6-1). Die Aufklrung von Struktur und Funktion der Eicosanoide geht im wesentlichen auf
Arbeiten von S. BERGSTRM, B. SAMUELSSON, und J.R. VANE (Medizin-Nobelpreise 1982) zurck.
Arachidonsure
Cyclooxygenase-Weg
Lipoxygenase-Weg
Hydroperoxysuren (HPETE)
Leukotriene (LTA-E)
Hepoxiline (A, B)
Prostacyclin (PGI)
Trioxiline (A, B)
Lipoxine (LPA, LPB)
Durch Cyclooxygenase entstehen cyclische Metaboliten, Primrprodukte sind die Endoperoxide, die
anschlieend enzymatisch zu Prostaglandinen, Thromboxanen bzw. Prostacyclinen umgewandelt werden.
Durch Lipoxygenasen entstehen acyclische instabile, mehrfach-ungesttigte Hydroperoxysuren, die weiter zu
Leukotrienen, Hepoxilinen, Trioxilinen und Lipoxinen metabolisiert werden. Die Prostaglandine,
Thromboxane, Prostacycline und die Leukotriene nehmen eine Mittelstellung zwischen klassischen Hormonen
und Transmittersubstanzen ein und werden als "lokale Hormone" bezeichnet wurden.
7.2 Cyclooxygenase-Weg
Bei der Bildung der Endoperoxide werden durch Cyclooxygenase [COX] zwei Molekle Sauerstoff radikalisch
unter Bildung des Endoperoxids PGG2 an Arachidonsure angelagert. Aus PGG2 entsteht durch die Peroxidase194
195
7. Eicosanoide
Cyclooxyxenase und mglicherweise weitere Enzyme und verhindert die Umwandlung von Arachidonsure zu
Prostaglandinen (7.2.2), Thromboxanen (7.2.3) und Leukotrienen (7.3.1)
COOH
O.
O
R
O.
OH
H
O
H
Arachidonsure
R
H+ + e-
R'
R'
.O
R
R'
R'
.
O.
R'
R''
PGG2
O-OH
PGH2
OH
Endoperoxide werden durch Wasser oder Alkohole zu den Levuglandinen [LG] zersetzt. Diese Ketoaldehyde
[LGE2, LGD2] gehen unter Wasserabspaltung in die stabileren Anhydroderivate 1 und 2 ber.
O
O
O
R'
R'
R'
+
R''
OH
HC
O
O
HC
R''
R'
R''
O
OH
R'
+
R''
HC
O
OH
HC
- H2O
R''
O
7.2.2 Prostaglandine
Prostaglandine sind eine Familie hormonhnlicher Sbustanzen und stellen gemeinsam mit den Leukotrienen
sicher die pharmakologisch bedeutsamste Gruppe der Eicosanoide dar. Sie besitzen im tierischen Organismus
eine Reihe regulatorischer Aktivitten, ihre Entdeckung erfolgte 1935 durch den schwedischen Physiologen
U.S. VON EULER und durch GOLDBLATT als saure, lipidlsliche Substanz in der Prostatadrse und in Samenblschen von Schafen und Menschen. Prostaglandine sind nahezu ubiquitr im Gewebe und Organen von
Sugetieren in sehr geringen Konzentrationen [0.001 - 1 g/g] vorhanden, hhere Konzentration [100 - 300
g/g] erreichen sie in der Samenflssigkeit. Mit bis zu 1.5% des Trockengewichtes kommen sie in
Hornkorallen der Karibik vor und sind auch in hheren Pflanzen nachgewiesen worden.
Prostaglandine beeinflussen in geringsten Konzentrationen den Blutdruck und wirken auf die Kontraktion
glatter Muskulatur ein. Sie beeinflussen die Herzfrequenz und das Schmerzempfinden, stimulieren die
Uterusmuskulatur und frdern die Bildung von cyclischem AMP. Sie werden in der Gynkologie zur Einleitung
der Wehen und zum klinischen Schwangerschaftsabbruch eingesetzt. Die Prostaglandine E [PGE] lhmen die
Unteruskontraktion, wirken geferweiternd, lindern Bronchialasthma und dienen zur Behandlung von
Erkrankungen des peripheren Gefsystems. Prostaglandine F [PGF] hingegen stimulieren die Uteruskontraktion, erhhen den Blutdruck und bewirken Fruchtaustreibung. PGE-Analoga sind aufgrund ihres cyto-
195
196
7. Eicosanoide
protektiven Effektes zum Schutz des Magen-, Herz- Leber- und Gehirngewebes gegenber aggressiven
Agenzien interessant geworden. Durch Dimethyl-PGE2 knnen auch Leber- und Nierenzellen vor Nekrosen
geschtzt werden, wie sie z.B. durch CCl4 verursacht werden.
Prostaglandine knnen Antagonisten bestimmter Hormone sein, so wird in der Tierzucht wird PGF2 zur
Zyklus-Synchronisation bei Massentierhaltung eingesetzt und vereinfacht die knstliche Besamung. Da der
medizinische Bedarf an Prostaglandinen mengenmig gering ist, wird er auch durch Extraktion von GorgoniaKorallen [Plexaura homomalla] der Karibik, die in Symbiose mit PGA2-produzierenden Mikroorganismen
leben, abgedeckt.
Die Strukturaufklrung der Prostaglandine gelang 1962 durch Gaschromatographie, Massenspektroskopie und
Rntgenstrukturanalyse [S. BERGSTRM]. Sie lieen sich mittels Elektrophorese reinigen und PGE1 und PGF1
in kristalliner Form isolieren. Ihr Grundgerst ist das der Prostansure, einem Cyclopentanderivat mit zwei
trans-konfigurierten Seitenketten.
COOH
-Seitenkette
20
-Seitenkette
1
9
10
Prostansure
11 12
Je nach Art und Zahl der Sauerstoffunktionen sowie der Doppelbindungen unterscheidet man ber 20
verschiedene, natrliche Prostaglandine, deren Bezeichnungen sich von der Struktur des Cyclopentanringes und
der Seitenketten ableiten.
O
HO
HO
O
O
HO
PGA
PGB
PGC
PGD
HO
PGE
PGF
PGG und P GH
Die Zahl der Doppelbindungen in den Seitenketten wird durch einen Index nach der Grundbezeichnung
angegeben, so hat z.B. PGE1 eine Doppelbindung (in der -Seitenkette), PGA2 zwei Doppelbindungen in der und -Seitenkette, PGF3 drei Doppelbindungen in C-5-, C-13- und C-17-Position. Der Suffix oder bei den
PGFs gibt an, ob die Hydroxygruppe an C-9 cis- (= ) oder trans-stndig (= ) zur -Seitenkette steht.
O
HO
(CH2)6-COOH
C5H11
HO
OH
H
OH
PGA2
(CH2)3-COOH
C5H11
C5H11
HO
PGE1
HO
(CH2)3-COOH
(CH2)3-COOH
HO
OH
PGF2
OH
PGF3
Formel 7-1. Beispiele der Strukturformeln fr PGE1, PGA2, PGF2 und PGF3.
Prostaglandine E als -Hydroxyketone sind empfindlich gegenber Suren und Alkali und neigen zu
Umlagerungen zu PGA und PGB und Epimerisierungen an C-15 (3) und C-8 (4); Prostaglandine werden
allgemein rasch metabolisiert (-Oxidation, -Oxidation, PGE-9-Ketoreduktase, 613-Prostaglandin-Reduktase,
196
197
7. Eicosanoide
O
COOH
OH
COOH
H+, OHO
PGA2
OH-
PGB2
OH
COOH
PGE2
OH-
HO
O
OH
H
O
COOH
COOH
HO
OH
C-15-Epimer 3
HO
OH
C-8-Epimer 4
Die ersten Stufen der Prostaglandin-Biosynthese sind die Addition von Sauerstoff an Arachidonsure und
anschlieende Cyclisierung zu den Endoperoxiden. Aus PGH entsteht durch Isomerisierung das PGE2, dessen
Reduktion zu PGF2 fhrt (vgl. 6.5).
O
HO
COOH
Isomerisierung
Reduktion
COOH
PGH2
HO
OH
PGE2
HO
OH
PGF2
7.2.3 Thromboxane
In den Blutplttchen [Thrombocyten] entstehen aus den Endoperoxiden PGG2 oder PGH2 durch die
Thromboxan-Synthetase die Thromboxane, die Acetale [TXA-Typ] oder Halbacetale [TXB-Typ] darstellen. Sie
wurden 1969 erstmals von VANE aus Tierlungen isoliert, kommen in allen Geweben vor, am besten untersucht
ist die Funktion in Thrombocyten. Das chemisch labile TXA2 bewirkt Blutplttchenaggregation, verengt die
Herzkranzgefe verengt [vasokonstriktorische Wirkung] und geht durch Hydrolyse in stabiles TXB2 ber.
HO
PGG2 oder
PGH2
ThromboxanSynthetase
COOH
O
O
COOH
H2O
HO
OH
O
OH
7.2.4 Prostacycline
197
198
7. Eicosanoide
Als weiterer Cyclooxygenase-Metabolit der Arachidonsure entsteht aus den Endoperoxiden das chemisch
instabile Prostacyclin PGI2. Es senkt den Blutdruck, entspannt die Blutgefe und verhindert die Blutplttchen
aggregation. PGI2 wird bei der Nierendialyse und bei Herz-Lungen-Operationen zur Prophylaxe gegen Blutplttchenverlust eingesetzt. Prostacyclin ist der physiologische Gegenspieler von TXA2 und erweitert die
Herzkranzgefe [vasodilatatorisch].
COOH
ProstacyclinSynthetase
PGG2 oder
PGH2
Prostacyclin PGI2
HO
OR
7.3 Lipoxygenase-Weg
Durch 5-, 12- oder 15-Lipoxygenasen entstehen auf dem Lipoxygenase-Weg aus Arachidonsure als Primrprodukte mehrfach ungesttigte 5-, 12- bzw. 15-Hydroperoxysuren HPETE [Hydroperoxyeicosatetraensuren]
(Abb. 6-2).
Arachidonsure
5-Lipoxygenase
12-Lipoxygenase
15-Lipoxygenase
COOH
OOH
COOH
COOH
HOO
5-Hydroperoxyeicosatetraensure
5-HPETE
OOH
12-HPETE
15-HPETE
Aus 5-HPETE entsteht das Epoxid Leukotrien A4 [LTA4] (Halbwertszeit 3.5 min), aus dem die Leukotriene B
[LTB] und Leukotriene C [LTC] gebildet werden. Abspaltung einzelner Aminosurereste von LTC fhrt zu den
Leukotrienen D [LTD] und Leukotrienen E [LTE] (Formel 7-2).
Leukotriene werden in den Leukocyten gebildet und als Mediatoren u.a. fr allergische und entzndliche
Erkrankungen mitverantwortlich gemacht. LTC4 und LTD4 entfalten eine starke spasmogene Wirkung an den
Bronchiolen von Affe und Mensch. Die Leukotriene sind etwa 1.000 mal aktiver als Histamin. Bei den nach
Stimulierung der Mastzellen freigesetzten Mediatoren [slow reacting substance of anaphylaxis SRS-A] handelt
es sich um ein Gemisch, das neben der Hauptkomponente LTD4 noch LTC4 und LTE4 enthlt.
198
199
7. Eicosanoide
O
COOH
5-HPETE
Glutathion-S-transferase
-GlutamylOH
OH
transpeptidase
COOH
COOH
C5H11
OH
R = H2C O
HC C NH
CH2
COOH
HN C CH2
CH2
CH
H2C
H2C O
H
HC C N
COOH
HC COOH
H2N
H2N
COOH
LTE4
LTD4
LTC4
NH2
CH2
Zur Mitte der 80er Jahre sind die Hepoxiline, Trioxiline und Lipoxine bekannt geworden, die sich von 12HPETE und 15-HPETE (Abb. 7-3) ableiten. Die Hepoxiline (von: Hydroxyepoxid) sind als Mediatoren an der
Insulinwirkung beteiligt und werden in den LANGERHANSschen Inseln gebildet. Unter Einwirkung einer
Epoxid-Hydratase entstehen aus ihnen die Trihydroxyderivate Trioxiline. Die Lipoxine sind konjugierte Tetraene und regulieren die Leukocytenfunktion, Lipoxin B4 z.B. ist ein Suppressor der Killerzellen.
12-HPETE
15-HPETE
OH
OH
COOH
COOH
COOH
HO
OH
Hepoxilin A3
Hepoxilin B3
Hepoxilin A4
OH
Epoxid-Hydratase
HO
OH
COOH
OH
COOH
COOH
HO
HO
Trioxilin A3
HO
OH
HO
Trioxilin B3
OH
Lipoxilin A4
199
200
7. Eicosanoide
Clavulone sind eine ungewhnliche Familie von Prostanoiden aus der Koralle Clavularia viridis, die auf nichtradikalischem und nicht-Endoperoxid-Biosyntheseweg gebildet werden. Hybridalacton ist ein marines
Eicosanoid aus Laurencia hybrida.
AcO
AcO
H
O
H OAc
H
COOCH 3
O
OAc
Clavulon I
COOCH 3
O
O
C2H5
Clavulon II
Hybridalacton H
H
1967 wurde die erste Synthese eines Prostaglandins publiziert (JUST, SIMONOVICH). Das therapeutische
Potential dieser Verbindungen gab Anla zu einer Vielzahl berhmter Synthesearbeiten (z.B. E.J. COREY, R.B.
WOODWARD, etc.) und Versuchen zur Entwicklung leistungsfhiger Partial- und Totalsynthesen.
Eicosanoide lassen sich in kleinem Mastab enzymatisch oder partialsynthetisch aus Arachidonsure herstellen.
a) Bei Inkubation von Arachidonsure mit Samenblschen vom Schaf, die Cyclooxygenase enthalten,
entsteht ein Gemisch aus PGG2 und PGH2, das sich chromatographisch auftrennen lt.
b) Gibt man katalytische Mengen bestimmter Metallionen zu, degradiert dieses Gemisch zu PGE2 oder
PGF2.
c) Inkubiert man gleichzeitig mit Blutplttchen-Mikrosomen, entsteht Tromboxan TXA2 neben PGD2.
d) Die Inkubation mit Rinderaorta-Mikrosomen fhrt zu Prostaglandin PGI2.
Der partialsynthetische Zugang zu Prostaglandinen ist vom PGA2-Derivat 5 mglich, das in den GorgonienKnollen (bis zu 1.5 %) vorkommt. Epoxidierung gibt ein Gemisch der - und -10,11-Epoxide 6. Reduktive
Ringffnung mit CrII gibt den 11-Alkohol 7, dessen enzymatische Hydrolyse zu PGE2 fhrt.
200
201
7. Eicosanoide
O
O
COOCH 3
H2O2
COOCH 3
OH-
HO
CrII
O
OAc
OAc
15-O-Acetyl-PGE2-methylester 5
O
O
Esterase
COOCH 3
COOH
PGE2
HO
HO
OAc
OH
Ausgehend von PGE-Derivat 7 ist PGF2 durch Reduktion der Ketogruppe erhltlich. 7 wird zu 8 silyliert, das
reduzierende NaBH4 mu wegen der sperrigen -TMS-Gruppe von der -Seite angreifen, wodurch 9-Alkohol
9 entsteht. Die Abspaltung der Schutzgruppe ergibt PGF2.
O
O
COOCH 3
HO
COOCH 3
(CH3)3SiCl
NaBH4
SiMe3
OAc
OAc
15-O-Acetyl-PGE2-methylester 7
HO
COOCH 3
PGF2
SiMe3
OAc
Von den vielen Totalsynthesen ist vor allem die von E.J. COREY hervorzuheben, die im kg-Mastab
durchfhrbar ist. DIELS-ALDER-Reaktion von Methoxymethylcyclopentadien 10 mit 2-Chloracrylnitril ergibt
die racemischen Bicycloheptene 11a und 11b. Verseifung liefert die enantiomeren Ketone 12, die nach BAYERVILLIGER-Oxidation die Lactone 13 ergeben. Die Iodlacton-Cyclisierung beginnt mit dem Angriff von Iod an
die Doppelbindung, wonach das Carboxylatanion nucleophil am Alken angreifen kann (14). Die ffnung des
Lactons zur Sure ermglicht die Racematspaltung mit (+)-Ephedrin zu 15.
201
202
7. Eicosanoide
CH3O
CH3O
CH3O
KOH
Cl
CuII
11a
NC
10
m-CPBA
12a
NC
Cl
CH3O
CH3O
CN
KOH
Cl
12b
11b
OCH3
CH3O
OCH3
I2
OCH3
I
O
(+)-Ephedrin
15
O OH
OH
O
O
13a
14
OH
In Formel 7-5 ist die gesamte Totalsynthese von PGF2 wiedergegeben. Iodlacton-Cyclisierung von 15,
Acetylierung und Dehalogenierung des entstandenen Iodacetats mit Tributylzinnhydrid fhrt zum "COREYLacton" 16. Etherspaltung und Oxidation fhrt zum "COREY-Lactonaldehyd" 17. (E)-Selektive HORNEROlefinierung von 17 mit Dimethyl-2-oxoheptylphosphonat gibt 18, Reduktion mit Zn(BH4)2 ein Gemisch der
15- und 15-Alkohole. Neuere Verfahren unter Verwendung des chiralen Aluminiumhydridreagenz (S)BINAL-H 19 ergeben fast ausschlielich das (15S)-Derivat. Abspaltung der Acetylgruppe, Schutz der 11- und
15-Hydroxygruppe als Tetrahydropyranylether (20) und milde Reduktion liefert ein Hemiacetal, dessen
WITTIG-Reaktion mit 5-Carboxypentyltriphenylphosphoran die (Z)-Doppelbindung in 21 gibt. PGF2 wird
anschlieend
durch
saure
Entschtzung
erhalten,
Oxidation
von
O
COOH
1. KI / I2, KHCO3
2. Ac2O
OCH3
3. (n-C4H9)3SnH
1. BBr3
2. CrO3 / Py
17
OCH3
HO
15
CH=O
CH3COO
CH3COO
16
1.
O
Al
O
(CH3O)2P(O)-CH-CO-n-C5H11
OC2H5
19
2. K2CO3
3. Dihydropyran, H+
CH3COO
18
HO
1.(i-C4H9)2AlH
2.(C6H5)3P=CH(CH2)3COO-
COOH
DMSO
THPO
(15S)-20
THPO
THPO
THPO
21
HO
202
H3O+
COOH
Prostaglandin PGF
20
und
anschlieende
203
7. Eicosanoide
C6H5CH2O
*
*
H
+
AlCl3
OCH2C6H5
* *
C
22
(1S)-24
23
R*
OH
O
C6H5CH2O
C6H5CH2O
CH2
OH
CH=O
25
26
OH
Schutzgruppe
27
Von Interesse ist eine biomimetische Synthese [COREY, 1984], die von mehrfach ungesttigten Alkoholen
ausgeht.
Neue Verfahren zur Prostaglandinsynthese umgehen einen schrittweisen Aufbau des Zielmolekls durch
Kombination passend gewhlter Moleklfragmente. 1984 gelang NOYORI und SUZUKI mit der sog.
Dreikomponenten-Kopplung in einer Eintopfreaktion die beiden Seitenketten gleichzeitig in (R)-4-Hydroxy-2cyclopentenon als Cyclopentan-Synthon einzufhren. Am Cyclopent-2-enonring ist ein nucleophiler Angriff am
-C-Atom und ein elektrophiler am -C-Atom mglich, wobei sich Organokupferverbindungen als Nucleophile
und Aldehyde als elektrophile Komponenten eignen. Der optisch aktive Cyclopentenonbaustein 29 lt sich u.a.
aus D-Weinsure 28 herstellen.
O
HO
H
H3C OCH3
COOH
C
H
H3C OCH3
OH
H+
COOH
C
O
OH
OTos
OTos
NaI
1. LiAlH4
OH
2. TosCl
28
O
SCH3
LiCH
SCH3
O
O
O
SCH3
SCH3
29
R+
R-
RO
R-
HO
R+
RO
RO
203
204
7. Eicosanoide
Der Aufbau von PGE1 gelingt durch Reaktion des Enons 30 mit dem Vinylkupferreagenz 31, das aus 1-Iod-3oxy-1-octen mit Lithium und Kupferiodid hergestellt wird. Im zweiten Schritt reagiert das entstandene THPEnol mit dem Aldehydester 32 zum PGE1-Derivat 33. Die -Seitenkette in 33 ist -stndig angeordnet, da der
THP-Ether 30 des Cyclopentenons den Angriff des Kupferreagenz von der Oberseite induziert. ber den
Mesylester wird die C-7-OH-Funktion eliminiert (34), Reduktion der Doppelbindung ergibt die -stndige
Seitenkette in 35. Die THP-Schutzgruppen werden mit Essigsure und der Ester mit Schweineleberesterase zu
PGE1 gespalten (Formel 6-6).
OH
O
COOCH3
1. RLi-CuI-(n-C4H9)3P 31
CH3SO2Cl
2. RCHO 32
DMAP
THPO
THPO
THPO
30
33
O
O
Zn, CH3COOH /
(CH3)2CHOH
COOCH3
COOCH3
CH3COOH
oder (n-C4H9)3SnH /
(t-C4H9O)2
THF / H2O
THPO
THPO
THPO
THPO
34
35
COOH
COOCH3
Leberesterase
PGE1
HO
HO
OH
R =
(C4H9)3P
OH
36
CuI
RCHO = OHC
Li
31
COOCH3
32
OTHP
Ein einfacher Zugang zu (-)-PGE2 geht von Enon 37 aus, das in einer Eintopfreaktion zu Methylester 40 fhrt.
Entschtzung und Reduktion gibt (-)-PGE2-Methylester, der enzymatisch in (-)-PGE2 bergefhrt werden kann.
O
Li
1.
OTBDMS
CuI-Bu3P, Bu3P
CO2CH3
38
- 78C, THF
TBDMSO
37
2. I
CO2CH3
OTBDMS
40
39
TDBMS = (CH3)3CSi(CH3)2-
Ein
allgemeiner
Zugang
zu
primren
Prostaglandinen
erffnet
sich
durch
die
Reaktion
des
204
205
7. Eicosanoide
enzymatische Esterspaltung gibt PGE2. Die Reduktion des PGE2-Derivats 43 mit Diisobutylaluminiumhydrid
fhrt zu PGF-Baustein 45. Partielle Hydrierung und Abspaltung der Schutzgruppen liefern PGF2-Methylester.
R1
R2
1. RLi-CuI /
(n-C4H9)3P
R3SiO
40
COOCH3
2. RCHO
R3SiO
41
OSiR3
42
1. C6H5CSCl
DMAP
COOCH3
2. (n-C4H9)3SnH
(t-C4H9O)2
R3SiO
R1 = OH, R2 = H
R1 = H, R2 = OH
OSiR3
43
(i-C4H9)2AlH /
2,6-(t-C4H9)2-4-CH3C6H2OH
HO
H2 / Pd / BaSO4
Chinolin
COOCH3
Benzol Cyclohexan
COOCH3
44
R3SiO
R3SiO
OSiR3
(i-C4H9)2AlH /
2,6-(t-C4H9)2-4-CH3C6H2OH
HO
OSiR3
45
H2
Lindlar-Kat.
COOCH3
46
R3SiO
RCHO = OHC
OSiR3
CH3COOH / H2O / THF
(CH2)3 COOCH3
HO
R I =
COOCH3
OSiR3
SiR3 =
Si(CH3)2-t-C4H9
OH
PGF2-Methylester
OH
Strukturell abgewandelte Prostaglandine knnen eine andere Wirkung oder eine lngere Wirkungsdauer als die
Naturprodukte besitzen. So besitzt z.B. der Methylester von Methyl-PGE2 aufgrund langsamer Metabolisierung
eine bis 100fach strkere Antifertilittswirkung als PGE2.
Ein rationeller Zugang zu Prostacyclinen ist durch intramolekulare Alkoxymerkurierung von 5,6-DidehydroPGF2-Derivat 47 zu 49 mglich. Abspaltung der Silylschutzgruppe und Hydrolyse des Methylesters ergibt
Prostacyclin PGI2. Unter den gewhlten Reduktionsbedingungen im protischen Medium verluft die Demerkurierung des Vinylquecksilber-trifluoroacetats mit NaBH4 nicht wie normalerweise radikalisch und die (5Z)Geometrie bleibt erhalten.
205
206
7. Eicosanoide
COOCH3
COOCH3
COOCH3
O
Hg(OCOCF3)2
NaBH4
OH
OH
HgO
CCF3
(C2H5)3N
CH3ONa / CH3OH
n-C5H11
n-C5H11
R3Si
O
R3SiO
5,6-Didehydro- OSiR3
PGF2 47
R3SiO
48
COOCH3
(n-C4H9)4NF
OSiR3
OH-
49
COOH
OSiR3
H
O
O
H2O / THF
PGI2
n-C5H11
HO
HO
50
HO
OH
HO OH
HO
BzOCH2
52
PhCOCl / Py
HO
HO
-Methylglucosid OCH3
D-Glucose
MesO
MesO
HOCH2
CH3OH / H+
HO
HO
BzO
BzOCH2
MesCl / Py
O
HO
HO
BzO
51
OCH3
OBz
BzO
OCH3
CH3O
OH
CH3O
53
54
O
N
O
I2 / THP
OH
CH3O
55
206
OCH3
N CH
H3C
OCH3
H3C
HO
ZnCu / NaI
O
Bu3SnH
TXB2
H2O
OH
CH3O
56
OH
CH3O
57
Bz = C6H5CO
207
7. Eicosanoide
1985 gelang es W.C. STILL et al., Thromboxan A2 TXA2 ausgehend von kuflichem Thromboxan B2 zu
synthetisieren. Dazu wurde zuerst aus TXB2 ein 1,15-Macrolacton 58 hergestellt, das in die 10Bromverbindung umgewandelt werden konnte. Durch modifizierte MITSUNOBU-Cyclisierung gelingt der
Oxetan-Ringschlu (59), aus dem sich das Brom reduktiv entfernen und durch schonende Hydrolyse das Salz
bzw. die freie Sure TXA2 herleiten lie.
HO
OH
Br
Br
COOH
O
HO
OH
59
58
Thromboxan B2 TXB2
TXA2
HO
7.4.6 Leukotriensynthesen
Der aus verschiedenen Zuckerderivaten oder durch enantioselektive Synthesen zugngliche (5S)-Epoxyaldehyd
60 spielt bei der Synthese von Leukotrienen nach E.J. COREY eine zentrale Rolle.
O
HO
HO
OH
HO
OH
D-Mannitol
HO
OH
OHC
CHO
O
CHO
COOR
O
(5S)-60
OH
O
H
HO
H
HO
O
HO
OH
Zur stereochemisch einheitlichen Einrichtung des C-5 wird bei einer chemoenzymatischen Synthese von
Leukotrien B4 Bckerhefe zur Reduktion eines -Ketothioacetals eingesetzt.
OH
O
COOR
H
S
H
Bckerhefe
COOR
S
207
208
7. Eicosanoide
Die Biosynthese der Prostaglandine, Prostacycline und Thromboxane ber den Cyclooxygenase-Weg (7.2) ist
in Abb. 6.4 und die der Leukotriene ber den Lipoxygenase-Weg (7.3) in Abb. 7-5 schematisch nochmals
dargestellt.
O
COOH
COOH
Arachidonsure
PGG2
OOH
O
COOH
O
OH
PGH2
COOH
O
COOH
O
O
COOH
OH
HO
OR
Thromboxan A2
HO
OH
Prostacyclin PGI2
PGE2
HO
COOH
HO
OH
PGF2
OH
COOH
O2
Arachidonsure
5-HPETE
OH
COOH
COOH
C5H11H
C5H11
LTA4
Cys Gly
LTC4
Glu
OH
OH
COOH
COOH
C5H11H
Cys Gly
LTD4
208
C5H11H
Cys
LTE4
209
7. Eicosanoide
7.6 Literatur
E.J. COREY, N.M. WEINSHENKER, T.K. SCHAAF und W. HUBER, J. Am. Chem. Soc. 91, 5675 (1969).
W. BARTMANN, Prostaglandine, Angew. Chem. 87, 143 (1975).
I. ERNEST, Eine Prostaglandin-Synthese: Strategie und Wirklichkeit. Angew. Chem. 88, 244 (1976).
J.S. BINDRA, R. BINDRA (Hrsg.), Prostaglandin Synthesis. Academic Press, London (1977).
A. MITRA, The Synthesis of Prostaglandines. J. Wiley-Interscience: New York (1977).
P. CRABBE, Prostaglandin Research, in: Organic Chemistry, Vol. 36, Academic Press, New York (1977).
F. BERTI, B. SAMUELSSON und G.P. VELO (Hrsg), Prostaglandins and Thromboxanes. Plenum Press, New York
(1977).
E.J. COREY, M. SHIBASAKI und J. KNOLLE, Simple, stereocontrolled-synthesis of thromboxane B2 from
D-glucose, Tetrahedron Lett. 19, 1625 (1977).
209
210
7. Eicosanoide
854 (1984).
C.N. SERHAN, M. HAMBERG UND B. SAMUELSSON, Lipoxins: Novel series of biologically active compounds
formed from arachidonic acid in human leukocytes. Proc. Natl. Acad. Sci. 81, 5335 (1984).
E.J. COREY, C. SHIH, N.-Y. SHIH und K. SHIMOJI, Tetrahedron Lett. 25, 5013 (1984).
E.J. COREY und XUE-MIN CHENG, Prostanoids, in The Logic of Chemical Synthesis, S. 250 - 309, John Wiley
& Sons, New York, Chichester, Brisbane, Toronto, Singapore (1989).
J.M. BAILEY (Hrsg.), Prostaglandins, Leukotrienes, Lipoxins, and Paf, Proceedings of the XIth Intern.
Washington Spring Symposium at the George Washington University, held in Washington, D.C., May 1991,
Plenum (1991).
E.J. COREY, Die Logik der chemischen Synthese: vielstufige Synthesen komplexer "carbogener" Molekle
(Nobel-Vortrag), Angew. Chemie 103, 469 (1991).
K.C.NICOLAOU, E.J. SORENSEN, Prostaglandin F2 and Prostaglandin E2, in Classics in Total Synthesis,
VCH, S. 65, Weinheim-New York-Basel-Cambridge-Tokyo (1996).
210
211
8. Juvenilhormone
8. Juvenilhormone
8.1 Struktur, Vorkommen und Bedeutung der Juvenilhormone
Die
Juvenilhormone
(Jugendhormone)
sind
glandulre
Hormone
der
Insekten,
die
deren
Larvenentwicklung steuern. Sie besitzen eine offenkettige isoprenoide Struktur und gehren als
fettlsliche Substanzen eigentlich zu den Lipoiden. Erstmals wurde 1965 in etherischen Extrakten aus
den Abdomina des mnnlichen Riesenseidenspinners Hyalophora cecropia [Lepidoptera, Saturniidae],
Juvenilhormon-Aktivitt gefunden, das aktive Prinzip isoliert und seine Struktur als die von JH-1
(=Juvenilhormon 1) vorgeschlagen [RLLER et al.]. Wenig spter ist aus dem gleichem Insekt JH-2
isoliert worden, JH-3 wurde 1973 aus einer Organkultur der Corpora allata des Tabakschwrmers
Manduca sexta [Lepidoptera, Sphingidae] isoliert. Heute sind insgesamt fnf Strukturen dieser Art (JH1, JH-2, JH-3, JH-0 und iso-JH-0) aus Insekten bekannt, die sich alle von der Farnesolsure ableiten.
COOCH3
COOCH3
JH-1
O
JH-2
O
H
COOCH3
COOCH3
JH-3
O
H
JH-0
O
H
COOCH3
H3C
iso-JH-0
COOCH3
Farnesolsure
Die Juvenilhormone werden bei den Insekten von den im Kopf befindlichen Corpora allata
ausgeschttet. Zum Unterschied zu den eigentlichen Hutungshormonen, die die Entwicklung und
Hutung bis zum Imago kontrollieren und Steroidstruktur besitzen, frdern die Juvenilhormone nur die
Larvalhutung (also Raupe Raupe), hemmen jedoch die Entwicklung der Imagines. Eine erhhte
Zufuhr in bestimmten Entwicklungsphasen bewirkt Tod oder Sterilitt.
Eine in amerikanischem Zeitungspapier und spter im Harz der amerikanischen Balsamtanne Abies
balsamea entdeckte Substanz inhibierte die Metamorphose von Pyrrhocorris apterus und wurde als ein
Sesquiterpenester, Methyltodomatuat [Juvabion, "paper factor"], identifiziert. Spter isolierten
tschechische Wissenschaftler ein Dehydrojuvabion, in der Folge wurde aus norwegischen Nadelhlzern
Juvabiol und Isojuvabiol mit JH-Aktivitt isoliert, japanische Autoren beschrieben die Identifizierung
zweier isomerer Suren vom Dihydrojuvabioltyp. Aus Ocimum basilicum wurden die beiden hochaktiven
aromatischen Juvenoide, Juvocimen I und Juvocimen II isoliert. Synthetisches Juvocimen II war im
8. Juvenilhormone
212
biologischen Test ungefhr 3000mal aktiver als natrliches JH-1. 1984 wurde aus Samen von Psoralea
cordifolia das Bakuchiol isoliert, das gegenber Dysdercus koenigii JH-Aktivitt aufwies.
Die biologische Wirkung synthetischer Juvenoide wird zur Zeit intensiv untersucht mit dem Ziel, potente
und gleichzeitig fr andere Tiere und Mensch wenig toxische Insektizide zu entwickeln.
COOCH3 HO
Juvabion
Juvabiol
COOH
COOCH3 HO
COOCH3 HO
Dehydrojuvabion
Dihydrojuvabiolsure
O
OCH3
Juvocimen I
OCH3
Juvocimen II
OCH3
Bakuchiol
Die erste nicht-stereoselektive Synthese, die gleichzeitig den Strukturbeweis darstellte, wurde von
DAHM, TROST und RLLER (Formel 8-1) beschrieben und beruht auf der konsequenten dreimaligen
Anwendung der HORNER-Reaktion (= WADSWORTH-EMMONS-Reaktion) mit jeweils anschlieender
chromatographischer Trennung der geometrischen Isomeren. Die Synthese ergibt alle der mglichen
Stereoisomeren des JH-1, das (2E,6E,10Z)-Isomere war identisch mit natrlichem JH-1.
213
O
(CH3O)2PCH2COOCH3
8. Juvenilhormone
COOCH3
37%
1. NaOCH3
2. NaOH
3. H+
1. LiAlH4
2. PBr3
Frakt. Destillation
O
CH2-Br
COOCH3
17%
O
O
COOCH3
O
1. (CH3O)2PCH2COOCH3
30%
O
2. LC - Trennung
1. LiAlH4
2. PBr3
COOCH3
39%
COOCH3
CH2-Br
COOCH3
30%
O
1. (CH3O)2PCH2COOCH3
COOCH3
O
2. LC - Trennung
18%
COOCH3
Cl
COOOH
COOCH3
40%
+
COOCH3
JH-1
18%
Formel 8-1. Synthese von JH-1 nach DAHM, TROST und RLLER.
Andere nicht-stereoselektive Synthesen bedienten sich der JULIA-Synthese und der WITTIGCarbonylolefinierung von Phosphoniumyliden zum Aufbau einzelner Doppelbindungen. Die Alkylierung
von Acetyliden, partielle Hydrierung und Isomerentrennung mittels Sulenchromatographie und
fraktionierter Destillation fhren bei der Synthese der Hoffman-LaRoche zu allen Stereoisomeren von
()-JH (Formel 8-2).
1. HC
CH / NaNH2 / NH3
CH
2. Lindlar-Katalysator
PBr 3
1. COOCH3
CH2
Br
2. NaOH
OH
OH
1.
O
(Z/E)
OH
2. Fraktionierte
Destillation
1. HC
O
CH / NaNH2
2. Lindlar-Katalysator
3. H+
OH
8. Juvenilhormone
214
Auf die Strukturaufklrung der JHs folgte eine groe Zahl von Synthesen, die vor allem die mgliche
Anwendung von Juvenilhormonen und Juvenilhormon-Mimiks [Juvenoide] als Agrochemikalien und
Pflanzenschutzmittel zum Ziel hatten. Es handelte sich hauptschlich um Methoden zur stereoselektiven
Darstellung trisubstituierter Olefine und chiraler Epoxide mit eindeutiger Stereochemie. Die
Notwendigkeit stereoselektiver Synthesen wird bei der Bewertung der biologischen Aktivitten der
einzelnen Stereoisomeren von JH-1 ersichtlich. Das natrlich vorkommende (2E,6E,10Z)-JH-1 zeigt die
hchste Wirksamkeit bei Injektion in Mehlwurm-Puppen [Tenebrio molitor].
Zur stereoselektiven Darstellung des jeweils dreifach-substituierten Olefingersts dienten wie in 8.2.1
wiederum Acetylensynthesen, Alkylierung mit OrganokupferReagenzien, JULIA-Umlagerung, WITTIGOlefinierung und HORNER-Reaktion. Zustzlich diente u.a. die Geometrie-Vorgabe der Endprodukte
durch cyclische Synthesevorstufen.
Die Darstellung chiraler Epoxide und damit auch der Juvenilhormone war fr die Bestimmung der
absoluten Konfiguration des Naturstoffes und zur Bewertung der Wirksamkeit der einzelnen
Enantiomeren wichtig. 1970 gelang die Isolierung von 1.4 mg JH-1 aus C. hyalophora und durch
Aufnahme der ORD-Spektren die Drehwertbestimmung fr das Naturprodukt. Mittels theoretischer
Betrachtungen und anschlieender stereoselektiver Synthesen wurde die Konfiguration mit (10R,11S)
vorgeschlagen und 1971 besttigt. Diese erste Synthese von optisch einheitlichem JH-1 bediente sich der
Racemattrennung
von
-Chlor--methylbuttersure
durch
TLC-Trennung
ihrer
1-(1-
Sowohl optisch reiner (S)(-)- als auch (R)(+)-10,11-Dihydroxyfarnesolsuremethylester lassen sich durch
Metabolismus entsprechender (')-Epoxyderivate durch die Pilze Helminthosporium sativum bzw.
Colletotrichum nicotianae gewinnen. Beide Ester knnen durch eine Reihe von Folgereaktionen jeweils
in optischen Reinheiten bis zu 90% in die Enantiomeren von JH-3 umgewandelt werden.
215
8. Juvenilhormone
Das (+)-Isomere von JH-3 Ethylester wurde bei Seidenspinner-Larven [Bombyx mori, Lepidoptera,
Bombycidae] getestet und erwies sich etwa 50mal aktiver als das (-)-Isomere, wobei die geringe
Wirksamkeit des nicht-natrlichen Isomeren vielleicht auf Verunreinigungen mit dem aktiven Isomeren
zurckzufhren ist. Bei Anwendung von synthetischem Juvenilhormon und JH-Mimiks fand man
auerdem beim Seidenspinner eine Verlngerung des Larvenlebens und damit einen begleitenden
Anstieg der Akkumulation von Seidenprotein. Man zchtet daher heute B. mori nicht auf
Maulbeerblttern, sondern auf synthetischer Dit unter oraler Applikation von JH-Mimiks, und erhlt bei
0.3 g/Larve dieser Verbindungen 20-30% mehr Seide.
Die insektizide Wirkung vieler Juvenoide wurde vor allem gegen den Reisstengelbohrer Chilo
suppressalis [Lepidoptera] und den Moskito Culex pipiens getestet, wobei sie jedoch meist keine
besondere Insektizidwirkung zeigten. So hat z.B. der synthetische Insektenwuchsregulator ZR-515
(Altosid, Zoecon Corp.) einen ID50 auf Larven des Gelbfiebermoskitos Aedes aegypti [Diptera] von
0.00014 ppm, whrend ()-JH-1 nur 0.15 ppm Wirkung zeigte.
8.4 Literatur
216
8. Juvenilhormone
K. MORI, Synthetic Chemistry of Insect Pheromones and Juvenile Hormones, in Recent Developments
in the Chemistry of Natural Carbon Compounds (R. BOGANR, V. BRUCKNER und CS.
SZANTAY, Hrsg.), Vol. IX, Akadmiai Kiad, Publishing House of the Hungarian Academy of
Sciences, Budapest (1979).
9. Pheromone
217
9. Pheromone
9.1 Pheromone - intraspezifische Signalstoffe
In der Natur werden Informationen hufig durch chemische Substanzen, Signalstoffe auch Botenstoffe, engl.:
semiochemicals, griech.: semeon = Zeichen, Signal] bermittelt. Die durch diese Stoffe gesteuerten Wechselbeziehungen reichen vom subzellulren Bereich ber das mehrzellige Individuum bis zur komplex zusammengesetzten Bioznose. Dabei knnen chemische Signale innerhalb des produzierenden Organismus wirken (z.B.
Hormone), oder aber zwischen Individuen verschiedener Arten (interspezifisch = zwischenartlich) oder derselben Art (intraspezifisch = innerartlich).
Empfngerart daraus einen Vorteil erlangt. Erfhrt jedoch der Signalsender gegenber dem Empfnger einen
Vorteil, zhlen diese Stoffe zur Kategorie der Allomone. Pheromone [griech.: pherein = tragen, hormon =
anregen] hingegen sind Signalstoffe zwischen Individuen einer Art (Abb. 7-1). Sie werden von einem Tier oder
einer Pflanze ber ein Medium abgegeben, wirken auf ein Empfngerindividuum der gleichen Art ein und rufen
beim Partner eine Kette genetisch festgelegter Verhaltensweisen oder physiologischer Reaktionen hervor.
Pheromone stellen ein phyllogenetisch altes Kommunikationsmittel dar. Sie werden in Protozoen, Arthropoden,
in hheren Tieren wie Fischen, Kriechtieren und Sugetieren gefunden und auch bei der Gattung Mensch
diskutiert. Vor allem in der Klasse Insekten [Hexapoda] sind Pheromone weit verbreitet und dienen u.a. zur
Erkennung und Auffindung des Geschlechtspartners und zur Steuerung des Kopulationsvorganges, zur Aggregation und Rekrutierung, zur Markierung von Nest- und Futterpltzen, zum Auslsen von Wehr- und Alarmverhalten, zur Steuerung der Populationsdichte, zur Regulierung des Sozial- und Kastenwesens soziallebender
Insekten und als Eiablagestimulantien. Dementsprechend werden sie als Sexuallockstoffe, Sexualpheromone,
Aggregationspheromone, Rekrutierungspheromone, Spurpheromone, Territorialmarkierungsstoffe, Alarmpheromone und Wehrsekrete, Kniginnensubstanzen, Kastenerkennungsstoffe, Eiablagepheromone, etc. bezeichnet.
Signalstoffe
Botenstoffe
semiochemicals
intraspezifische Botenstoffe
Pheromone
physiologisch
verhaltensauslsendes
wirksame
Signal
Verbindung
Primer
Releaser
interspezifische Botenstoffe
Allelochemicals
vorteilhaft fr vorteilhaft fr
den Sender den Empfnger
Allomone
Kairomone
9. Pheromone
218
Pheromone sind vielfach biogenetische Abkmmlinge von Fettsuren (z.B. die langkettigen Ester-, Alkoholoder Aldehydpheromone bei Schmetterlingen), knnen jedoch auch als Vorstufen mit der Nahrung aufgenommen werden. Sie gehren fast ausschlielich zu den sensorisch wirkenden Releaserpheromonen, die eine
unmittelbare Verhaltensauslsung im Empfngerindividuum bewirken, whrend die Primerpheromone eine
langandauernde, physiologische nderung im Empfnger stimulieren.
Weibliche Schmetterlinge und Motten [Lepidoptera] verwenden zur Anlockung ihrer arteigenen Mnnchen
Sexuallockstoffe. Das erste in seiner Struktur aufgeklrte Sexualpheromon war Bombykol [(10E,12Z)-10,12Hexadecadienol], der Lockstoff des weiblichen Seidenspinners Bombyx mori, der von A. BUTENANDT in
20jhriger Arbeit aus ber 500.000 Weibchen in seiner Struktur aufgeklrt wurde [1959]. Mehr als 100
verschiedene Sexuallockstoffe, vorwiegend aliphatische geradkettige Alkohole, deren Acetate, Aldehyde, einige
Ketone, Kohlenwasserstoffe und Epoxyverbindungen wurden inzwischen in ber 220 verschiedenen Arten
identifiziert (Stand 1986) und deren Struktur aufgeklrt (Formel 9-1). Die Artenvielfalt der Ordnung
Lepidoptera fhrt zwangsweise dazu, da Schmetterlinge Substanzgemische mit definierter Zusammensetzung
[Pheromonkomplexe] als Pheromone verwenden, um deren Artspezifitt zu gewhrleisten und Kreuzattraktion
mit Fremdarten zu vermeiden.
OCOCH3
OCOCH3
OCOCH3
CHO
OCOCH3
CH2OH
10
OH
11
12
O
Formel 9-1. Beispiele einiger Komponenten der Sexuallockstoffe weiblicher Schmetterlinge [Lepidoptera]:
1 Saateule Agrotis segetum, 2 Trichoplusia ni, 3 Seidenspinner Bombyx mori, 4 Apfelwickler Laspeyresia
pomonella, 5 Isia isabella, 6 Schwammspinner Lymantria dispar, 7 Kohleule Mamestra brassicae, 8 , 9
Antheraea pernyi, 10 Orgya pseudotsugata, 11 Frostspanner Operophtera brumata, 12 Boarmia selenaria.
9. Pheromone
219
Die Pheromone der Kfer [Coleoptera], der grten Insektenordnung, sind eine strukturell inhomogene
Verbindungsklasse. Die Sexualpheromone der Kfer knnen sowohl von Weibchen als auch von den Mnnchen
produziert werden. Vor allem bei Borkenkfern [Scolytidae] sind die Aggregationspheromone und art- und
geschlechtsspezifischen Lockstoffe eingehend untersucht. Man findet darunter hufig terpenoide Verbindungen,
die Umwandlungsprodukte von aus der Nahrung stammenden Terpenen sein knnen. Formel 9-2 zeigt die
chemischen Strukturen einiger Kferpheromone und deren Produzenten.
OH
17
O
C
O
13
OH
14
19
15
O
O
COOCH3
OH
H
OH
COC2H5
16
23
20
18
H
H
28
22
CHO
COOH
HO
21
H
24
O
29
25
O
O
26
H
27
HO
Formel 9-2. Chemische Strukturen einiger Kferpheromone, produzierende Art und Familie: 13 Lasioderma
serricorne [Anobiidae], 14 Stegium paniceum [Anob.], 15 Rhyzoperta dominica [Bostrichidae], 16
Acanthoscelides obtectus [Bruchidae], 17 Hylotrupes bajulus [Cerambycidae], 18 Diabrotica virgifera
[Chrysomelidae], 19 und 20 Anthonomus grandis [Curculionidae], 21 Anthrenus flavipes [Dermestidae], 22
Trogoderma granarium [Derm.], 23 Costelytra zealandica [Scarabaeidae], 24 Popillia japonica [Scar.], 25
Dendroctonus brevicomis [Scolytidae], 26 Kupferstecher Pityogenes chalcographus [Scol.], 27 Ips cribricollis
[Scol.], 28 Buchdrucker Ips typographus [Scol.], 29 Ips pini [Scol.].
Zu den Hautflglern [Hymenoptera] gehren u.a. die artenreiche Familie der Ameisen, der Bienen, Wespen und
Hummeln. Viele Insekten aus dieser Ordnung sind soziallebend und staatenbildend und verwenden zur
Aufrechterhaltung ihrer Sozialordnung Signalstoffe und Pheromone.
Die Ameisen [Formicidae] gehren in vielen Lndern zu den wichtigsten Herbivoren und Granivoren und
konkurrieren mit anderen Tieren um Pflanzen und Frchte. Sie stellen in den meisten terrestrischen Lebensrumen die wesentlichen Ruber anderer Insekten und Invertebraten dar. Ihre Sozialorganisation erfordert ein
komplexes und effektives Kommunikationssystem, das vorwiegend aus chemischen Signalen besteht. In einer
9. Pheromone
220
Vielzahl von Drsen produzieren Arbeiterinnen Signalstoffe, mit denen sie Artgenossen ber Futterquellen,
drohende Gefahren, ber neue Nestpltze und Territorien, die soziale Rangordnung und die Erkennung von
Nestgenossen informieren.
Spurfolgeverhalten wird u.a. durch artspezifische Duftspuren ausgelst. 4-Methylpyrrol-2-carbonsuremethylester ist als erste Spursubstanz aus der Giftdrse der Blattschneiderameise Atta texana isoliert worden. 2,5Dimethylpyrazin ist das Spurpheromon von Tetramorium caespitum, 3-Ethyl-2,5-dimethylpyrazin das von
Manica rubida, Atta rubropilosa, A. sexdens und einer Myrmica-Art. 6-Methylsalicylsuremethylester ist das
Pheromon von Tetromorium impurum.
OH
N
H
COOCH3
COOCH3
4-Methylpyrrol2,5-Dimethylpyrazin 3-Ethyl-2,56-Methylsalicylsure2-carbonsuremethylester
dimethylpyrazin
methylester
4-Methyl-3heptanol
Faranal
(Z,Z,Z)-Allofarnesen
(E,E)-!-Farnesen
(Z,E)-Homofarnesen
(Z,E)-!-Farnesen
(Z,Z)-Homofarnesen
Dihydroisocumarine wurden 1992 von BESTMANN et al. als neue Klasse von spuraktiven Substanzen im
Enddarm mehrerer Arten der Unterfamilie Formicinae identifiziert. Unterschiedliche Gemische von 3,4-Dihydro-8-hydroxy-3-methylisocumarin [Mellein],
9. Pheromone
221
O
O
O
OH
HO
OH
OH
Mellein
OH
30
OH
31
O
33
32
(S)(+)-4-Methyl-3-heptanon ist das Alarmpheromon der Blattschneiderameise Atta texana und lst Alarmverhalten aus. Dendrolasin [3-(4,8-Dimethylnona-1,3-dienyl)-furan] ist der aus Lasius fuliginosus isolierte
Alarmstoff, der auch in Pflanzen vorkommt. 34 ist ein Wehrsekret aus Iridomyrmex-Arten, (-)-Invictolid ist das
Kniginnenpheromon der Feuerameise Solenopsis invicta.
O
O
CH3
O
OH
Alarmpheromon
von Atta texana
34
Dendrolasin
Invictolid
Zu den Hautflglern gehren weltweit etwa 16.000 Wespen- und 20.000 Bienenarten, deren Sozialverhalten
vom solitren Insekt bishin zum komplexen Kastensystem der Honigbienen reicht. Die Knigin der Honigbiene
Apis mellifera produziert (E)-9-Oxodec-2-ensure als Kniginnensubstanz, einem Distanzlockstoff fr Drohnen
whrend des Hochzeitsfluges, die als Primerpheromon (7.1) gleichzeitig die Entwicklung der Ovarien der
Arbeiterinnen unterdrckt. Bienenarbeiterinnen produzieren (E)-10-Hydroxydec-2-ensure als Bestandteil des
Weiselzellensaftes [Gelee royale]. Isopentylacetat wird als Hauptkomponente des Alarmpheromon-Cocktails
aller vier Apis-Arten sekretiert. Das Nassanoff-Sekret ["Sterzelduft"] von A. mellifera enthlt u.a. Citral,
Geraniol, Nerol, Farnesol, Geranium- und Nerolsure. cis-2-Methyl-5-hexanolid wurde in den Holzbienen
Xylocopa hirutissima nachgewiesen.
O
COOH HO
COOH
CO-CH 3
O
(E)-9-Oxodec-2-ensure
Kniginnensubstanz der
Honigbiene Apis mellifera
10-Hydroxy-(E)-2-decensure
Gelee royale
CH=O
Isopentylacetat
Alarmpheromon
von Apis mellifera
Citral
O
COOH
CH2OH
Nerol
COOH
CH2OH
Geraniol
Nerolsure
Geraniumsure
2-Methyl5-hexanolid
Die sdamerikanische staatenbildende Biene Lestrimelitta limao holt sich Nektar und Pollen aus den Nestern
verwandter Bienenarten. Dazu geben die Ruber whrend der Attacke groe Mengen an Citral ab, das die
eigenen Genossen stimuliert, ihre Opfer durch dieses Pheromonberangebot hingegen verwirrt und wehrlos
macht.
9. Pheromone
222
Erstaunlich wenig ist ber die Alarmpheromonzusammensetzung von Wespen bekannt. Bei Vespula vulgaris
sind N-3-Methylbutylacetamid sowie Isovaleraldehyd die wirksamen Komponenten, im Gift der zu den
Faltwespen gehrenden Hornisse Vespa crabro konnte bislang nur 2-Methyl-3-buten-2-ol als wirksame
Alarmsubstanz nachgewiesen werden.
O
OH
CH=O
N
H
N-3-Methylbutylacetamid Isovaleraldehyd
aus Vespula vulgaris
2-Methyl-3-buten-2-ol aus
der Hornisse Vespa crabro
9.2.4 Fliegenpheromone
Fr ber 20 Fliegenarten [Diptera] wurden Pheromone identifiziert und deren Struktur aufgeklrt. In vielen
Fllen handelt es sich um langkettige, gesttigte oder olefinische Kohlenwasserstoffe, die erst bei Kontakt mit
dem Informationspartner wirksam werden. Aus der Cuticula weiblicher Hausfliegen [Musca domestica] wurde
Muscalure [(Z)-9-Tricosen] als Pheromon identifiziert (Formel 7-3). Einfach-ungesttigte Kohlenwasserstoffe
mit ungeradzahliger C-Zahl , Kettenlngen von C23 bis C33 und Doppelbindungen in 5-, 9-, 11-, 13- und 14Position wurden im Epidermisgewebe anderer Musciden-Arten nachgewiesen. Die Weibchen der Tsetsefliegen
verwenden dimethyl- und trimethylverzweigte Kohlenwasserstoffe mit Kettenlngen C35 und C37 als
Kontaktpheromone, die Arrestant-Wirkung auf die Mnnchen besitzen, die Kontaktzeit mit dem Geschlechtspartner verlngern und Kopulationsversuche induzieren. Nur das meso-Isomere des Dimethylpentatriacontans
ist aktiv. Bei den Fruchtfliegen findet man Spiroketale als Pheromone, 2-Methyl-6-vinylpyrazin (Formel 7-3) ist
das Sexpheromon der Mnnchen der Papaya-Fruchtfliege Toxotrypana curvicauda. n-Heptadecan ist ein
Attraktivstoff weiblicher Pilzfliegen Lycoriella mali, Heptacosadien induziert das Balzverhalten der Taufliege
Drosophila melanogaster. Hexanal wurde in mnnlichen Fleischfliegen Sarcophaga bullata nachgewiesen und
wirkt auf Entfernungen bis 45 cm attraktiv. (5R,6S)-6-Acetoxy-5-hexanolid wirkt als Eiablagepheromon der
Moskitos Culex pipiens fatigans. Die Weibchen der Kirschenfruchtfliege Ceratitis cerassi kennzeichnen die von
ihnen besetzten Kirschen mit einem -Glucosid und halten damit Artgenossinen ab, ihre Eier an gleicher Stelle
abzulegen. 3-Methyl--himachalen sowie 9-Methylgermacren B werden von Mnnchen verschiedener
brasilianischer Sandfliegen Lutzomyia longipalpis als Pheromon produziert.
9. Pheromone
223
OAc
O
C10H21
Tsetsefliegen-Pheromone
b-Glucosid
SO3H
N
H
OH
Eiablagepheromon
der Kirschenfruchtfliege Ceratitis cerassi
3-Methyl-himachalen
9-Methylgermacren B
Die Weibchen der kleineren pine sawfly Microdiprion pallipes locken mit (1S,2S,6S,10R)- und (1S,2R,6R,10R)1,2,6,10-Tetramethyldodecylpropanoat die arteigenen Mnnchen.
OCOC2H5
(1S,2S,6S,10R)
(1S,2R,6R,10R)
Tetramethyldocecylpropionat
OCOC2H5
9.2.5. Termitenpheromone
Termiten [Isoptera] sind eine vorwiegend in den Tropen vorkommende Ordnung sozialer, meist flgelloser und
blinder Insekten. hnlich wie die Ameisen verstndigen sich Termiten durch chemische Signalstoffe. TermitenSoldaten verfgen ber ein spezifisches Alarmsekret sowie ber ein erstaunliches Potential chemischer Waffen,
die auf den Gegner, meist Ameisen, geschmiert, verspritzt oder injiziert werden. Man findet u.a. klebrige
Mischungen von Terpenen, langkettige Alkane und Alkene (C21 - C35), oder Kontaktgifte auf der Basis von
Nitroalkenen, Vinylketonen, Ketoaldehyden, etc. Als Hauptkomponente des Spurpheromons der Termite Reticulitermes flavipes wurde (3Z,6Z,8E)-3,6,8-Dodecatrien-1-ol beschrieben, das auch bei anderen subterran
lebenden Termitenarten Spurfolgeverhalten auslst. Das macrocyclische Diterpen (E,E,E)-Neocembren ist das
Spurpheromon mehrerer Nasutitermes-Arten.
OH
(E,E,E)-Neocembren
9. Pheromone
224
Weibchen bestimmter Blattlaus-Arten [Homoptera] bedienen sich zur sexuellen Reproduktion eines Sexualpheromons aus den Hinterbeinen, aus der Platterbsen-Blattlaus Megoura viviae [Aphididae] wurden Nepetalacton und Nepetalactol als die aktiven Pheromonkomponenten identifiziert. - und -Pinen dienen der gleichen
Art als Alarmpheromon, (E)--, (Z,E)-- und (E,E)--Farnesen wurden in Sekreten der grnen Pfirsichblattlaus
Myzus persica als Alarmpheromon nachgewiesen, Germacren A in der Zierlaus Therioaphis maculata. Die
Honigtau-verbreitenden Schmierluse Pseudococcus comstocki und Planococcus citri [Pseudococcinidae]
verwenden das Acetat des 2,6-Dimethyl-1,5-heptadien-3-ols bzw. 2,2-Dimethyl-3-isopropenyl-cyclobutylmethanol als Sexualpheromon (Formel 7-4).
OH
Nepetalacton
!-Pinen
Nepetalactol
"-Pinen
(E)-"-Farnesen
CH2OH
O-COCH3
Schmierlauspheromone
Germacren A
Aus der der Deutschen Schabe Blatella germanica [Blattidae] wurden die Kontaktpheromone 3,11-Dimethylnonacosan-2-on und 29-Hydroxy-3,11-dimethylnonacosan-2-on isoliert, die erwachsene Mnnchen zum
Balzverhalten anregen. Das Sexualpheromon der weiblichen Amerikanischen Schabe Periplaneta americana
wurde vor mehr als 20 Jahren als Gemisch der Sesquiterpene Periplanon A und Periplanon B identifiziert [C.J.
PERSOONS, 1976] und die Strukturen von C.W. STILL und M.A. ADAMS als Germacrenderivate besttigt. Die
ursprngliche Struktur von Periplanon A wurde 1986 [H. HAUPTMANN] berichtigt und durch Synthese und
Biotests besttigt. Das Sexualpheromon der mnnlichen Grnen Stinkwanze Nezara viridula [Pentatomidae] ist
(Z)-(1'S,3'R,4'S)-(-)-2-(3',4'-Epoxy-4'-methylcyclohexyl)-6-methylhepta-2,5-dien, das attraktiv auf Weibchen
wirkt.
O
O
OH
Kontaktpheromone der
Deutschen Schabe
Blatella germanica
O
O
O
Periplanon A
Periplanon B
9. Pheromone
225
9.3 Arachnidenpheromone
Auch die Spinnentiere [Arachnidaea] verwenden Pheromone zur chemischen Kommunikation. So wurde
Lardolure [1,3,5,7-Tetramethyldecylformiat] 1982 als das Aggregationspheromon der Milbe Lardoglyphus
konoi, einem Vorratsschdling, isoliert und durch Synthese die (1R,3R,5R,7R)-Konfiguration zugewiesen. Der
Faltersexuallockstoff (Z)-9-Tetradecenylacetat wird von sdamerikanischen Bolaspinnen produziert und als
Allomon eingesetzt. Sie locken damit Falter "unter Vorspiegelung falscher Tatsachen" in ihre Nhe, um sie
dann mit Hilfe eines gezielt geschleuderten Klebefadens zur Strecke zu bringen.
COCH3
O
O-CHO
(Z)-9-Tetradecenylacetat, Allomon
sdafrikanischer Bolaspinnen
Lardolure, Aggregationspheromon
von Lardoglyphus konoi
Reife weibliche Gameten [Geschlechtszellen] zahlreicher Algen geben bei der geschlechtlichen Vermehrung
Kohlenwasserstoffe als Lockstoffe [Gamon] in das Wasser ab, die mnnliche Gameten chemotaktisch anlocken.
Als solche sind die Verbindungen gleichzeitig Regulationsstoffe niederer Pflanzen (18.2.1). Die von den Eiern
von Fucus serratus sekretierte und die Spermien anlockende Substanz Fucoserraten ist (3E,5Z)-1,3,5-Octatrien.
Spermatozoen von F. vesiculosus antworten maximal auf Fucoserraten und (3Z,5Z)-1,3,5-Octatrien. Ectocarpen
[6-(1-Butenyl)-1,4-cycloheptadien] ist ein Inhaltsstoff von Seegras [Dictyopteris] sowie der weibliche Sexuallockstoff der Braunalge Ectocarpus siliculosus. In Phaeosporales findet man ebenso Ectocarpen, in
Desmorestia zustzlich Desmaresten und Viridien; Multifiden und Aucanten sind Inhaltsstoffe der Braunalge
Cutleria multifida. Dabei ist (+)-Multifiden noch in einer Konzentration von 6.10-12 M wirksam, das
Enantiomere hingegen um mehrere Zehnerpotenzen weniger. Im etherischen l der Braunalge Dictopteris
phagiogramma ist das strukturell verwandte Dictopteren enthalten. Das Sesquiterpen Sirenin wird vom Flagellatenpilz Allomyces gebildet. Chemische Signalstoffe von Algen wurden in Deutschland vor allem von L.
JAENICKE und Mitarb. untersucht.
Fucoserraten
Ectocarpen
Desmaresten
Desmaresten
Multifiden
9. Pheromone
226
9.5 Sugetierpheromone
Am besten sind Sugetier-Signalstoffe bei Nutztieren wie Schwein, Rind, Schaf und Ziege untersucht.
Auerdem sind Pheromone bei einer Reihe von Wildtieren, z.B. Antilopen, beschrieben, vergleichende
Untersuchungen beim Gorilla sind bekannt. Biologisch sind Pheromone bei hheren Tieren eher von geringer
Bedeutung, da deren Sinnesorgane fr visuelle und akkustische Reize besser entwickelt sind als bei niederen
Tieren und sich diese Reize auch schneller ausbreiten. Dennoch spielen Pheromone vor allem bei systematisch
hheren Tieren mit weitgehend saisonal gebundenem Fortpflanzungsverhalten bei der Fortpflanzung eine Rolle.
Pheromone, die von Tarsaldrsen von Antilopen abgegeben werden, haben Alarmwirkung.
Bekannt als Pheromone sind 16-Steroide wie Androstenon und Androstenol beim mnnlichen Schwein und
Mensch. Bei Anwendung des als "Dosen-Eber" bezeichneten Pheromonprparates in der Veterinrmedizin und
Tierzucht kommt es zustzlich bei der Sau zur Freisetzung von Ocytocin zur Kontraktion von Eileiter und
Uterus und die Trchtigkeitsrate kann erhht werden. Bei dem im menschlichen Achselschwei nachgewiesenen Steroid handelt es sich um eine endogene Substanz und keinesfalls um ein mikrobielles Abbauprodukt. Selbst wenn menschliche Pheromone in der Evolution konserviert blieben, ist fraglich, ob sie heute
noch eine biologische Bedeutung besitzen. Offensichtlich hat die Pheromonwahrnehmung auch eine genetische
Basis, die mit dem Histokompatibilittskomplex [MHC, LHA] in Zusammenhang steht.
O
H
Androstenon
3-Oxo-5-androst-16-en
HO
H
Androstenol
3-Hydroxy-5-androst-16-en
N
S
2-sec-Butyl-4,5-dihydrothiazol
O
O
3,4-Dehydro-exo-brevicomin
Sendeorgane der Insektenpheromone sind meist pheromonproduzierende Drsen, die sich durch eine groe
morphologische und histologische Vielfalt auszeichnen. Sie variieren von einfachen einzelligen Strukturen bis
zu komplexen Aggregaten mit Reservoir. Modifikationen der Intersegmentalmembran zwischen dem 8. und 9.
Abdomensegment findet man bei weiblichen Schmetterlingen als Pheromondrsen. Bei Ameisen ist eine
Anzahl exokriner Drsen wie Rektalampulle, Enddarm, Giftdrse, Tarsaldrse, Dufourdrse, Tergaldrsen,
227
9. Pheromone
Mandibeldrse, Pavan'sche Drse, Tibialdrse, Sternal- und Pygidialdrse der Ort der Synthese bzw. Emission
der verschiedenen Pheromone. In den Tarsaldrsen von Honigbienen wird das foot print-Pheromon produziert,
das mit den Fen der Bienen zur Markierung von Nest und Futterquellen ausgebracht wird. Im Stachelrinnenpolster der Apis-Arten wird das Alarmpheromon sekretiert. Das Sekret der NASSANOFF-Drse [Sterzelduft]
enthlt einen Lockstoff fr Arbeiterinnen und wird beim Schwrmen eingesetzt. Das Pheromon der weiblichen
Hausfliege wurde in der Cuticula identifiziert, weitere einfach-ungesttigte Kohlenwasserstoffe wurden im
Epidermisgewebe anderer Musciden-Arten nachgewiesen.
Spezielle olfaktorische Zellen, die bei den Insekten meist in den Antennen sitzen, stellen die Empfngerseite
dieses Kommunikationssystems dar. In diesen Sinneszellen findet man spezifische Rezeptoren, die mit
Pheromonen reagieren und zur Auslsung eines elektrischen Potentials und damit zu einem Sinnesreiz fhren.
Diese Rezeptorreaktion lt sich mittels Kapillarelektroden elektrophysiologisch ableiten (Abb. 7-2) und der
Reiz quantifizieren [Elektroantennogramm EAG, Elektrosensillogramm ESG]. Bei Insektenarten, die Sexualpheromone verwenden, findet man oft einen aufflligen Antennendimorphismus zwischen Mnnchen und
Weibchen.
Elektroden
Duftquelle
Pheromon
Luft
Elektroden
Computer
Verstrker Recorder
Sexuallockstoffe sind fr das Auffinden der Geschlechtspartner vorallem fr die in der Dunkelheit fliegenden
Schmetterlinge und Motten von vitaler Bedeutung. Die whrend der Lockzeit [calling] von den ruhenden
Weibchen abgegebenen Sexpheromone werden ber Entfernungen von mehreren hundert Metern von den
anfliegenden Mnnchen gerochen. Zur Ortung der Weibchen ist leichter Wind erforderlich, der im Gegenwindanflug die Geruchsorientierung ermglicht. Die Pheromonmenge in der Drse eines Falterweibchens betrgt im
Schnitt einige bis wenige hundert Nanogramm (1 ng = 10-9 g). Zur Abgrenzung der einzelnen
Schmetterlingsarten ist aufgrund der geringen Strukturvarianz der Falterlockstoffe der Einsatz definierter
Substanz- und Isomerengemische, sog. Pheromonkomplexe, erforderlich. Einzelne Komponenten knnen dabei
Inhibitoren fr verwandte Arten darstellen oder gleichzeitig die Funktion eines Allomons (vgl. 9.3 und Abb. 91) erfllen.
Eine groe Zahl von Kferpheromonen ist chiral, meist trgt nur ein bestimmtes Enantiomer oder ein definiertes
Verhltnis der optischen Antipoden die biologische Wirksamkeit. Prinzipiell knnen die anderen Stereoformen
zur Wirksamkeit beitragen, synergistisch wirken, unwirksam sein oder als Inhibitor fungieren. exo-Brevicomin
9. Pheromone
228
25 ist eine Komponente des Sexuallockstoffs des weiblichen Borkenkfers Dendroctonus brevicomis, die
physiologische Aktivitt ist allein an die (1R,5S,7R)-Konfiguration gebunden. Frontalin als Aggregationspheromon von Kiefernborkenkfern sorgt fr eine effektive Besiedlung eines als Brutsttte ausgesuchten
Baumes, indem es das optimale Geschlechterverhltnis steuert. Aus Mnnchen von Dendroctonus brevicomis
wurde reines (1S,5R)-(-)-Frontalin (67 in Formel 7-10) identifiziert, die Weibchen des in Amerika beheimateten
D. frontalis [southern pine beetle] hingegen produzieren eine 85:15-Mischung des (S)-1- und des (R)-1Enantiomer. Bei dem Kommunikationssystem koniferenbefallender Borkenkfer wird vor allem auch die
Beziehung Insekt-Wirtspflanze deutlich. Borkenkfer sind beim Einbohren in Wirtsbume den Dmpfen
toxischer Monoterpene, die im Harz der Bume vorkommen und einen Teil deren Verteidigungssystems
darstellen, ausgesetzt. Mit der Atmung werden diese Stoffe nun von den Kfern aufgenommen und zu
Lockstoffen metabolisiert, mit denen Artgenossen zur gemeinsamen Attacke stimuliert werden. Das aus
weiblichen Tieren des Japan-Kfers Popillia japonica isolierte Sexualpheromon ist (R,Z)-5-(1-Decenyl)dihydro-2(3H)-furanon 24, die Zugabe von nur 1 % des (S,Z)-Isomer setzt bereits drastisch die Aktivitt der
(R,Z)-Verbindung herab.
Spurfolgeverhalten bei Ameisen wird blicherweise durch artspezifische Duftspuren ausgelst, es sind jedoch
auch koloniespezifische und individuenspezifische Wegmarkierungen nachgewiesen worden. Die Spursubstanz
aus der Giftdrse der Blattschneiderameise Atta texana wirkt noch in der unsagbar kleinen Konzentration von
80 fg/cm Spur (1 fg = 10-15 g); 1 mg dieses Pheromons wrde eine aktive Spur ergeben, die dreimal um den Erdball reicht. Von den vier stereoisomeren Formen des Leptogenys diminuta-Pheromons 4-Methyl-3-heptanol ist
nur das (3R,4S)-Isomere spuraktiv (Abb. 7-3) und wirkt noch in einer Grenzkonzentration von etwa 50 fg/cm
Spur.
3S,4S
3R,4S
3S,4R
R
S
OH
4-Methyl-3-heptanol
Leptogenys diminuta
Formicidae: Ponerinae
3R,4S
3R,4R
3R,4S
Soziale Insekten wie Ameisen, Bienen und Wespen setzen artspezifische Alarmstoffe zur Verteidigung ihrer
Kolonien und zur Alarmierung der Nestgenossinnen ein. Solche Alarmpheromone mssen kurzzeitig eingesetzt
werden und sind daher meist leichtflchtige Substanzen. (S)-(+)-4-Methyl-3-heptanon, das Alarmpheromon von
Atta texana, lst bis zur Entfernung von ca. 5 cm vom Auftragungsort am Boden Alarmverhalten aus. In etwas
grerer Entfernung wirkt es hingegen attraktiv. Undecan in Kombination mit Ameisensure lsen bei
afrikanischen Weberameisen Massenangriffsverhalten aus. Sklaventreiberameisen der Gattung Formica
229
9. Pheromone
besitzen in ihren Dufourdrsen groe Mengen C10 - C16-Acetate, die whrend der Raubzge die
sklavenraubenden Insekten ["slavemaker"] erregen und anlocken.
Whrend die europischen Rassen der Honigbiene Apis mellifera vergleichsweise friedlich sind, liegt die
Hemmschwelle fr das Auslsen von aggressivem Verhalten durch Alarmstoffe bei den afrikanischen
Unterarten deutlich niedriger. Wespen versprhen ihre Alarmpheromone mit dem Gift und markieren damit
chemisch einen Aggressor. Interessant ist, da Wespen (und wahrscheinlich auch Bienen) auch auf artfremde
Geruchstoffe aggressiv reagieren. Die Wirksamkeit der Alarmpheromone von Bienen und Wespen kann auer
durch aufwendige quantitative Verhaltenstests auch kalorimetrisch durch Messung der Stoffwechselrate, hervorgerufen durch gesteigerte lokomotorische Aktivitt, bestimmt werden.
Das in mnnlichen Fleischfliegen Sarcophaga bullata nachgewiesene Hexanal wirkt auf Entfernungen bis 45
cm attraktiv.
Sowohl die Aufklrung der vielfltigen Strukturen der Insektenpheromone als auch die Prfung der
biologischen Wirksamkeit und Erstellung von Struktur-Aktivittsbeziehungen gaben Anla zur Erarbeitung
einer Flle neuer prparativer Methoden und vorallem zur Entwicklung neuer stereoselektiver Synthesen. Die
Verhaltensdiskriminierung durch Isomere und Diastereomere konnte oft erst durch Synthese und Bioassays
aufgezeigt werden. Ebenso war der Einsatz von Pheromonen als nichttoxische und umweltfreundliche
Pflanzenschutzmittel (vgl. 7.8) Triebfeder fr die Entwicklung einer Flle von Darstellungsmethoden fr diese
Naturstoffe. Beispielhaft sollen hier nur einige nach nach strukturellen Gesichtspunkten geordnete
Synthesewege skizziert werden.
Unter den "nicht-cyclischen" Insektenpheromonen findet man lineare und verzweigte, gesttigte und
ungesttigte Verbindungen, Kohlenwasserstoffe und substituierte Verbindungen. Verzweigungen und
Substituenten knnen zu Chiralitt fhren.
Der klassische Fall fr achirale, "nicht-cyclische" Pheromone sind die Sexuallockstoffe der Schmetterlinge und
Motten. Zur Darstellung der meisten mono- und bisolefinischen Falterpheromone findet die Acetylensynthese
sowie die WITTIG-Reaktion Anwendung. Die Mglichkeit der Alkylierung terminaler Acetylene und der
selektiven partiellen Hydrierung gibt einen allgemeinen Zugang sowohl zu (Z)- als auch (E)-monoungesttigten
Alkenolen, Alkenalen und Alkenylacetaten. (Z)-Alkene erhlt man dabei durch partielle katalytische Hydrierung
dreifach-ungesttigter Vorstufen, Alkene mit (E)-Konfiguration durch homogene partielle Hydrierung. Formel
9. Pheromone
230
7-6 zeigt die Darstellung von (Z)- und (E)-9-Dodecenylacetat [Z-9-DDA und E-9-DDA], hufig vorkommende
Pheromonkomponenten von Tortriciden [Wickler] und Noctuiden [Eulenfalter].
HBr
HO
(CH2)8 OH
CH2CH3C
Br
(CH2)8 OH
(CH2)8 OTHP
CLi
AcCl/HOA c
CH2CH3C
Br
Na/NH3
(CH2)8 OCOCH3
H3CH2C
H
C
H
C
(CH2)8 Cl
H2-Katalysator
oder P2-Nickel
CH3CH2
H
C
H
C
AcCl/AcOH
CH3CH2 C
H
(CH2)8 OCOCH3
H
C
OH-
CH3CH2
H
C
H
C
OH-
CH3CH2 C
H
(CH2)8 OH
H
C
PCC
CH3CH2
H
C
H
C
(CH2)8 OCOCH3
(CH2)8 OH
PCC
CH3CH2 C
H
(CH2)7 CH=O
H
C
(CH2)7 CH=O
Formel 9-6. Darstellung von (Z)- und (E)-9-Dodecenylacetat, -Dodecenol und -Dodecenal durch
Acetylensynthese.
Die (Z)-selektive WITTIG-Olefinierung von Aldehyden mit basischen Yliden unter "lithiumsalzfreien"
Bedingungen eignet sich speziell zur Darstellung von (Z)-Schmetterlingspheromonen.
NaN[Si(CH3)3]2
CH3(CH2)n
CH2
P(C6H5)3
Br
O=CH
CH3(CH2)n
CH
(CH2)m COOCH3
P(C6H5)3
- O=P(C6H5)3
CH3(CH2)n
H
C
H
C
CH3(CH2)n
H
C
H
C
LiAlH4
(CH2)m COOCH3
CH3(CH2)n
H
C
H
C
CH3(CH2)n
H
C
H
C
Ac2O/Py
(CH2)m CH2OH
PCC
(CH2)m CH=O
2. PCC
9. Pheromone
231
H3C
H
C
C
H
H
C
1. Reduktion
C
H
H3C
COOH
H
C
2. Acetylierung
H
C C
H
BrMg
C
H
(CH2)6 OTHP
36
CH2 OCOCH3
CuCl2/Li2CuCl4
Sorbinsure 35
H3C
H
C
C
H
H
C
H3O+
C
H
H
C
H 3C
C
H
H
C
C
H
(CH2)7 OH
Codlemone (Codlelure) 4
37
(CH2)3
COO
, e
(CH2)7-COOH
- CO2
38
Linolensure
Unter den Signalstoffen der Schmetterlinge finden sich auch einige chirale Oxirane, die aufgrund ihrer
langkettigen Strukturen hier ebenso als "nicht-cyclisch" abgehandelt werden. Disparlure [(+)-(7R,8S)-7,8Epoxy-2-methyloctadecan 6] ist der Sexuallockstoff des Schwammspinners Lymantria dispar [Lymantriidae],
einem gefhrlichen Forstschdling. Von den beiden Enantiomeren besitzt nur das (+)-Disparlure biologische
Aktivitt. Eine von K. MORI's Synthesen geht von Weinsure 39 als chirales Synthon aus, andere Autoren
verwenden Zucker oder Zuckerderivate als Ausgangsverbindungen.
CH2-OTos
COOH
(CH3)2CH(CH2)4
CH2
H
OH
9 Stufen
[(CH3)2CH(CH2)2]2CuLi
H
HO
CH
OCH3
OCH3
CH
CH2 COOCH3
H3CO
HO
COOH
CH2
(2S,3S)-Weinsure 39
COOCH3
(CH3)2CH(CH2)4
BCl3
HO
CH
(CH2)4CH(CH3)2
O
O
O
(CH2)6CH3
CH
ThpO
(CH2)9CH3
HO
(+)-(7R,8S)-Disparlure 6
Eine weitere Mglichkeit der Einfhrung der beiden Stereozentren in die Epoxidstruktur 6 bietet die asymmetrische Epoxidierung [SHARPLESS-Oxidation, 1980] eines geeigneten (Z)-Allylalkohols 40 mit D-(-)Weinsurediethylester [(-)-DET, 41]. Durch die Titan-katalysierte Reaktion werden in hoher optischer Ausbeute
gleichzeitig zwei chirale Zentren aufgebaut.
9. Pheromone
232
C10H19
C10H19
(CH3)3C-OOH, Ti(O-iPr)4
O
OH
(-)-DET 41
OH
(+)-Disparlure 6
Bicyclische Ketale findet man hauptschlich als Sexual- und Aggregationspheromone von Kfern. Sie sind alle
chiral und besitzen zumindest zwei Chiralittszentren. Das bicyclische (1R,5S,7R)-exo-Brevicomin 24 ist die
aktive Komponente des Sexuallockstoffs des weiblichen Borkenkfers Dendroctonus brevicomis. Ausgehend
vom (2S,3R)-(-)-Weinsurediethylester 53 erhlt man durch Methylierung, Reduktion, Tosylierung und
Substitution durch Cyanid das Dinitril 54. Verseifung und nachfolgende Umsetzung mit Thionylchlorid ergibt
den Dimethylester 55. Selektive Verseifung einer Esterfunktion liefert eine Carbonsure, die mit B2H6 zum
Alkohol 56 reduziert werden kann. Die Ethylgruppe im Brevicomin wird nun durch Tosylierung und Reduktion
zu aufgebaut, wobei gleichzeitig der Methylester zu 57 reduziert wird. Durch Substitution mit LiBr besitzt man
nun ein Alkylierungsreagenz 58, welches mit Acetessigester 59 zu 60 umgesetzt, verseift und decarboxyliert
werden kann. Als Produkt wird ein Methylketon erhalten, welches ber die zwei Hydroxylgruppen das
bicyclische Ketal bilden kann. Durch Abspaltung der Methylgruppen, Chrom-Oxidation zum Formylester und
Hydrolyse erfolgt die Ketalbildung zu 24.
H2C
COOC2H5
HO
H3CO
OH
OCH3
CN
H
1. MeOH / HCl
OCH3
2. SOCl2 / MeOH
H
H3COOC
COOCH3
H3CO
H2C
COOC2H5
CN
H
H3COOC
OH
H3CO
OH
H3CO
1. TosCl
Br
H3CO
2. LiBr
H
OCH3
OCH3
OCH3
O
EtOOC
OCH3
O
OEt
H
O
NaH
O
H3CO
(+)-exo-Brevicomin
24
Frontalin [1,5-Dimethyl-6,8-dioxabicyclo[3.2.1]octan, 67] wurde 1969 aus ber 6.500 Hinterenden des
mnnlichen D. brevicomis extrahiert und identifiziert und dient als zweite chirale bicyclische Komponente
diesen und anderen Dendroctonus-Arten als Pheromon. Die biologische Aktivitt wird der (1S,5R)-(-)-Form
zugeschrieben. Ausgehend vom furanosiden Bisketal 61, das aus D-Glucose erhalten wird, selektiver
Abspaltung einer Schutzgruppe, Periodatspaltung und Reduktion erhlt man 62. Die Einfhrung einer
Schutzgruppe am primren Alkohol durch Benzylierung ergibt, nach Spaltung des Acetals und anschlieender
9. Pheromone
233
Reduktion, das Triol 63. Isopropylidierung der ,-Hydroxygruppen, die Spaltung des Benzylethers (64) und
Periodatspaltung fhren zum Aldehyd 65 (Formel 7-10), welcher die beiden Stereozentren aufweist, die im
Frontalin bentigt werden. WITTIG-Reaktion zu 66 olefiniert, anschlieende Hydrierung und sauer katalysierte
Deacetalisierung liefert (1S,5R)-(-)-Frontalin 67.
O
O
D-Glucose
O
HO
OO
62
61
C6H5CH2O
OH
OH
OH
HO
HIO4
O
OH
O
64
63
O
CHO
H 3C
O
CH
OO
OH
OH
P(C6H5)3
67
(1S,5R)-(-)-Frontalin
O
65
66
9. Pheromone
234
O
OH
O
O
MeONa
MeOH
MgBr
1.
O
2. NaH
OTos
OTos OTos
73
O
1. MeMgCl, THF
CuI
2. H2 / Pd
O
74
75
OH
OH
OH
1. LiAlH4
2. Hs-(CH2)3-SH, BF3
76
3. PCC
OH
1. Ac2O
2. Raney - Ni
3. LiAlH4
4. Pb(OAc)4
77
78
OH
H2 / Pd-C
CO2Et
79
(-)-Invictolid 80 + C-2-Epimer
Formel 9-12. Synthese von (-)-Invictolid, dem Kniginnen-Pheromon der Feuerameise Solenopsis invicta.
Etwa 20 Verbindungen mit Dioxa-Spirostruktur findet man unter den Insektenpheromonen. Dabei handelt es
sich um intramolekulare Vollketale, die beiden Sauerstoffatome gehren jeweils verschiedenen fnf- oder
sechsgliedrigen Ringen an. In einigen Fllen bildet das zentrale Ketal-C-Atom das einzige Chiralittszentrum,
zustzliche Zentren knnen durch Alkylsubstituenten dazukommen. Die Verbindungen gehren fnf verschiedenen bicyclischen Systemen an und kommen meist als Diastereomeren gemische in den Insekten vor. Als
ein "Bouquet" aller Anomeren wurde Chalcogran im Kupferstecher Pityogenes chalcographus nachgewiesen.
1,7-Dioxaspiro[5.5]undecane sind Hauptkomponenten des Pheromonkomplexes der Olivenfliege Dacus oleae,
die entsprechenden 2,8-dimethylsubstituierten Vertreter wurden im Pheromonbouquet der Andrena wilkellaBienen nachgewiesen.
Die beiden (+)-(S)- und (-)-(R)-1,7-Dioxaspiro[5.5]undecane 87 der Olivenfliege besitzen C2-Symmetrie, die
Chiralitt wird nur durch die Spiroringverknpfung bewirkt. REDLICH und FRANCKE verwendeten das aus DGlucose als chiral pool erhltliche deoxygenierte Zuckerderivat 81 als Startmaterial. Hydrolyse und PeriodatSpaltung gibt 2,4-Dideoxy-D-glycero-pentopyranose 82, Thioacetalisierung und Acetonidbildung 83. Kettenverlngerung nach COREY-SEEBACH und Desulfurierung, Schutzgruppenabspaltung und Spiroketalisierung
ergibt ein Diastereomerengemisch aus 85 und 86, das sich chromatographisch trennen lt. Die beiden
Diastereomeren knnen durch Tosylat-Eliminierung und anschlieende katalytische Hydrierung in das (+)-(S)bzw. das (-)-(R)-Isomere 87 berfhrt werden.
9. Pheromone
235
CH 2OH
S
H2C
OTHP
1. HCl
O
1. HS-(CH 2)3-SH
OH
2. NaIO4
Cl
O
2. Aceton
OH
82
81
83
OTHP
S
O
CuCl2, CuO
OH
O
HO
Aceton
85
86
1. TosCl, Py
84
2. Al2O3, Et2O
3. H2/ Pd-C, NEt 3
O
O
O
(+)-(S)-87
(-)-(R)-87
Mit den synthetischen Insektenpheromonen besitzt man Verbindungen, mit denen das Verhalten von
Schadinsekten manipuliert werden kann. Man kann sie an bestimmte Stellen oder in Fallen locken und sie dort
gezielt bekmpfen oder vernichten. Vor allem verschiedene Schmetterlingsarten, die als Schdlinge kologische
Bedeutung haben, knnen mit synthetischen Sexuallockstoffen bekmpft werden. Die Aggregationspheromone
der Borkenkfer wiederum sind heute ein wichtiges Werkzeug im Waldschutz. Da die Pheromone im
allgemeinen nichttoxische Verbindungen darstellen, kann mit ihrem alternativen Einsatz als Pflanzenschutzmittel die Umweltbelastung durch toxische Insektizide reduziert werden. Dazu sind im Prinzip drei Techniken
denkbar:
-
Beim Monitoring sind ber ein bestimmtes Areal verteilte, mit synthetischem Duftstoff bekderte
Insektenfallen geeignet, die Populationsentwicklung eines Schdlings zu berwachen und den Einsatz von
Insektiziden im Hinblick auf Ort, Zeit und Menge zu optimieren.
- Bei der Verwirrungstechnik werden z.B. Schmetterlingsmnnchen durch ein berangebot an synthetischen
Weibchenpheromone verwirrt, ihre Orientierung gestrt und die Partnerfindung unterbunden. Diese Methode
hat sich vor allem zum Schutz von Baumwolle und im Weinbau bewhrt.
- Massenfang: Synthetische Lockstoffe werden z.B. im Forstschutz erfolgreich zum Massenfang, also zur
mglichst vollstndigen Entfernung einer ganzen Generation in Befallsarealen, von Borkenkfern in baumstammhnlichen Fallen angewendet.
236
9. Pheromone
9.9 Literatur
237
9. Pheromone
238
10. Aminosuren
10. Aminosuren
Aminosuren sind Carbonsuren mit einer Aminofunktion, Aminocarbonsuren, wobei in der Natur
speziell die -Aminosuren als Bausteine der natrlichen Proteine eine Rolle spielen. Aminosuren sind
bifunktionelle kristalline Verbindungen, die oberhalb 200C, teils unter Zersetzung, schmelzen. Sie
zeigen amphoteres Verhalten [griech. amphoteros = beidseitig], die Aminofunktion als Protonenakzeptor
und die Carboxylgruppe als Donator knnen jeweils ein Proton aufnehmen bzw. abgeben. Damit haben
sie sowohl basischen als auch sauren Charakter und knnen ein Betain, ein zwitterionisches, inneres Salz
bilden. Von daher erklren sich die physikalischen Eigenschaften wie hoch schmelzend, gut
kristallisierbar, gut wasserlslich und schwerlslich in organischen Lsungsmitteln.
NH3
R
CH
+ H+
Aminosure
in saurer Lsung
pH = 11
NH3
NH2
- H+
COOH
CH
COOH
CH
NH2
- H+
R
COO
CH
COO
+ H+
in neutraler Lsung
pH = 7
in alkalischer Lsung
pH = 1
In saurer Lsung wandern protonierte Aminosuren im elektrischen Feld zur Kathode, im basischen als
Anionen zur Anode (Elektrophorese, 1.2.3 und Abb. 1-7). Das Gleichgewicht zwischen ungeladener
Aminosure und Betain liegt in neutraler wriger Lsung weitgehend auf der Seite des Zwitterions.
Daraus folgt, da sich Aminosuren gut in Wasser lsen, jedoch unlslich in Ether und Benzol sind, wo
normalerweise Amine und Carbonsuren gut lslich sind.
Die einfachste Aminosure ist Glycin, -Aminoessigsure, die in wriger Lsung in vier Formen
vorliegen kann. Die Eigenschaften ndern sich mit dem pH-Wert, whrend das Verhltnis zwischen
Neutralmolekl und Betain pH-unabhngig ist. Beim Isolelektrischen Punkt IP findet keine Wanderung im
elektrischen Feld statt, gleichzeitig resultiert ein Minimum der Lslichkeit in Wasser. Der IP ist meist
verschieden vom Neutralpunkt pH = 7 und strukturabhngig, gegeben durch das Verhltnis der Surebzw. Base-Dissoziationskonstanten KS und KB.
Alle Aminosuren und Proteine haben letzten Endes ihren Ursprung in Pflanzen und Bakterien, da der
tierische Organismus nicht imstande ist, bestimmte essentielle Aminosuren aus anorganischen Stickstoffverbindungen aufzubauen. So wandeln Mikroorganismen wie Nitritbakterien und Nitratbakerien
239
H3N CH2COOH
pH 11
9
7
5
3
1
10. Aminosuren
2 quiv.
Base
H2NCH2COOp Ka1
pH = 9.6
Isoelektrischer
Punkt IP, pH = 6.0
pKa2
pH = 2.4
1.0
Mol
2.0
NaOH
im Boden Ammoniak in Nitrit bzw. Nitrit zu Nitrat um, und Nitrite und Nitrate werden von Pflanzen zu
Aminosuren und Proteine umgesetzt. Andere Bodenbakterien wandeln organischen Stickstoff in NH3
um. Gewisse Bakterien im Verein mit Pflanzen knnen atmosphrischen Stickstoff in Aminosuren berfhren. Die Symbiose Rhizobium/Leguminose (z.B. Sojabohne, Klee, Luzerne) ist fr die Landwirtschaft
besonders wichtig, doch tragen auch Blaualgen (Cyanobakterien) erheblich zur biolobischen StickstoffFixierung in Reisfeldern (allein oder in Symbiose mit dem Algenfarn Azolla) bei. Einige Bodenorganismen knnen auf nicht symbiontischem Wege Stickstoff in Ammoniumionen umwandeln, andere
sind imstande, Nitrit und Nitrat zu Stickstoff und Ammoniak zu reduzieren.
Nitrition
N2 zur Luft
Bodenorganismen
Nitrosomonas
Clostridium
N2 (Luft)
+ Kohlenhydrate Azotobacter
Nitrobacter
Nitration
Bodenorganismen
-Aminosuren
niedermolekulare
organ. Stickstoffverbindungen
tierische und mikrobiologische Organismen
Proteine
Rhizobium auf
Leguminosen
N2 (Luft)
240
10. Aminosuren
Die proteinogenen Aminosuren bilden die Grundbausteine der Proteine. Aminosuren mit nur einer
NH2- und COOH-Gruppe bezeichnet man als neutrale Aminosuren, Diaminocarbonsuren, deren
isoelektrischer Punkt im Basischen liegt, entsprechend als basische Aminosuren. Saure Aminosuren
sind solche mit zwei Carboxylfunktionen, ihr isoelektrischer Punkt liegt im Sauren. Aminosuren mit
weiteren funktionellen Gruppen werden hufig als funktionelle Aminosuren bezeichnet. Essentielle
Aminosuren mssen ber die Nahrung zugefhrt werden (Tab. 10-1).
Die meisten Aminosuren haben Trivialnamen, zur Kurzbezeichnung dienen nach Empfehlungen der
IUPAC/IUB Drei-Buchstaben-Symbole (1 Gro- und zwei Kleinbuchstaben, vgl. Tab. 10-1). Hhere
Homologe der verbreitetsten Aminosuren werden als Homo- (z.B. Homoserin, Hse), niedrigere als Nor(z.B. Norleucin, Nle) bezeichnet. Zur Bezeichnung von unverzweigten Aminosuren ohne eingefhrten
Trivialnamen beginnt das Drei-Buchstaben-Symbol mit A fr Monoaminosuren und A2 fr
Diaminosuren. Es folgt der auf zwei Buchstaben abgekrzte Name der entsprechenden Carbonsure
(z.B. A2pm3 fr 2,2'-Diaminopimelinsure, 2,6-Diaminoheptandisure).
20 Aminosuren sind im genetischen Code verankert und bilden als proteinogene Aminosuren die
Grundbausteine der Proteine. Darber hinaus werden noch einige seltene Aminosuren in Proteinen
gefunden bzw. nachtrglich proteinogene in den Proteinen modifiziert. Mit Ausnahme von Glycin sind
alle proteinogenen Aminosuren chiral und linksdrehend. Von den zwei mglichen Enantiomeren trifft
man in den Proteinen nur solche mit L-Konfiguration [relative Konfiguration] an. In der FISCHERProjektion (5.2.1), bei der die C-Kette senkrecht und das C-Atom mit der niedrigsten Positionsnummer
oben steht, ist die Aminogruppe der L-Aminosuren links, die der D-Aminosuren rechts angeordnet
(Formel 10-1). Dabei entspricht die L-Konfiguration der (S)-Konfiguration nach CAHN-INGOLD-PRELOG
[CIP-Regeln, absolute Konfiguration], ausgenommen L-Cystein, das aufgrund der Priorittsregeln der
(R)-Konfiguration entspricht. Isoleucin und Threonin besitzen ein weiteres Chiralittszentrum und
kommen natrlich hauptschlich nur als ein Diastereomer, (2S,3S)-Isoleucin und (2S,3R)-Threonin, vor.
COOH
COOH
H2 N
H
R
L-Aminosure
NH2
R
D-Aminosure
241
10. Aminosuren
L-Aminosuren racemisieren, wobei die Racemisierungsgeschwindigkeit von der Temperatur, vom pH-
Wert und anderen Faktoren (z.B. Anwesenheit von Metallionen) abhngt. Die Racemisierung erfolgt auch
in fester Form. Die Tatsache der optischen Aktivitt natrlicher Aminosuren erlaubt eine Altersbestimmung von Fossilien und Datierung archologischer Funde. Mit dem Tod eines Lebewesens wird
die Racemisierung der enthaltenen Aminosuren in Gang gesetzt. Die Bestimmung der Abnahme der
optischen Drehung erlaubt damit eine Altersbestimmung von Fossilien, bzw. bei bekanntem Alter die
Ermittlung der durchschnittlichen Temperatur. Im Tiefseebereich, wo Fundstcke bei konstanter
Temperatur gelagert bleiben, ist die Methode relativ sicher. Die Altersbestimmung anhand des
Racemisierungsgrades der Aminosuren kann auch dann eingesetzt werden, wenn das Material fr eine
Altersbestimmung mithilfe der Carbon-Methode (C14-Methode) zu alt ist (>40.000 Jahre).
CH C
O
H2N
OH
H2N
CH C
H2N
OH
Glycin
CH C OH H2N
CH C OH H2N
CH C OH
CH2
CH OH
CH2
OH
SH
CH3
CH2
Serin
Cystein
Threonin
CH2
CH3
H2N
CH C OH
Alanin
S
CH3
O
H2N
CH C
OH
H2N
CH C
O
OH H2N
CH C
OH H2N
CH CH3
CH2
CH CH3
CH3
CH CH3
CH2
CH3
CH3
Leucin
Isoleucin
Valin
CH C
O
OH
H2N
CH2
CH C
OH
Methionin
CH2
O
C
OH
HN
O
H2N
Phenylalanin
O
CH C OH
CH2
CH2
CH2
NH
NH2
Prolin
Tyrosin
H2N
H2N
CH C OH
CH2
H2N
CH2
CH2
CH2
CH C OH
CH C
H2N
OH
NH2
Asparaginsure
OH
CH2
C O
CH2
NH
OH
CH C
O
NH2
H2N
CH C
CH2
CH2
CH2
CH2
C O
OH
NH2
OH
Asparagin
NH2
O
O
Arginin
Lysin
H2N
CH C
OH
CH2
Glutaminsure
H2N
CH C
Glutamin
OH
CH2
HN
N
NH
Tryptophan
Histidin
Glycin [Gly, 2-Aminoessigsure, frher Glycokoll, griech. glykos = s und kolla = Leim] wurde 1820
als erste Aminosure aus Gelatine-Leim [BRACONNT] durch Hydrolyse isoliert. L-Alanin [Ala, 2-Aminopropionsure] kommt in fast allen Proteinen vor, Naturseide enthlt etwa 25 % L-Alanin. Valin [Val, 2Amino-3-methylbuttersure] kommt in nahezu allen Proteinen vor und ist fr die Funktion des NervenMuskelapparats wichtig. Bei unzureichender Valin-Versorgung beobachtet man berempfindlichkeit und
Bewegungsstrungen. Lysin [Lys, 2,6-Diaminohexansure] wurde aus Caseinhydrolysat isoliert und ist
bereits 1914 als Wachstumsfaktor bei Sugetieren erkannt worden [Th.B. OSBORNE, L. MENDEL], beim
Fehlen resultiert Zwergwuchs. Es wird grotechnisch aus Caprolactam gewonnen und hat aufgrund seiner
242
10. Aminosuren
Essentiellitt heute eine Schlsselstellung in der Nahrungsmittel- und Futtermittelindustrie. L-Arginin
[Arg, 2-Amino-5-guanidinovaleriansure] soll den Ammoniakspiegel im Blut senken und wird bei
Leberkoma empfohlen. Der Name Asparaginsure [Asp, Aspartinsure, 2-Aminobernsteinsure] leitet
sich vom Spargel [Asparagus officinalis] ab. Asparagin [Asn] ist das Sureamid der Asparaginsure. Das
Mononatriumsalz der Glutaminsure [Glu, 2-Aminoglutarsure] wirkt geschmackverstrkend, steigert die
geistige Leistungsfhigkeit und wird als Geschmacksverstrker fr Speisen eingesetzt. Glutamin [Gln] ist
das Monosureamid der Glutaminsure, wurde aus Weizenkleber [lat. glutinum = Leim] isoliert und
schmeckt je nach Konfiguration bitter oder s.
O
H2NOC
H2N
O
OH
HO
bitter
(S)-Glutamin
CONH2
NH2
s
(R)-Glutamin
Phenylalanin [Phe, 2-Amino-3-phenylpropionsure] ist der Ausgangsstoff fr die Bildung der Nebennierenrindenhormone L-Adrenalin und L-Noradrenalin und des Schilddrsenhormons Thyroxin und wird
zu dem fr die Hautbrunung verantwortlichen Melanin abgebaut. Daher fhrt Phenylalaninmangel zu
Strungen der Schilddrsen- und Nebennierenrindenfunktion, zu Blutunterdruck und Pigmentmangel.
Etwa 2/3 des Phenylalaninbedarfs kann beim Menschen allerdings durch das Oxidationsprodukt Tyrosin
abgedeckt werden. Fehlt im Stoffwechsel die Tyrosinase [Phenylalaninoxygenase], die Phenylalanin in
Tyrosin umwandelt, kommt es zur Phenylketonurie. Dabei entsteht aus Phenylalanin die Phenylbrenztraubensure, die im Harn ausgeschieden wird. Dies ist eine genetisch bedingte Erbkrankheit bei
Neugeborenen (ca. jedes 10.000. Neugeborene in Deutschland), die zu irreparablen Gehirnschden fhrt,
wenn die Babys nicht rechtzeitig auf phenylalaninarme Kost umgestellt werden. Heute lassen sich
Stoffwechselbedingungen und der Phenylalanin- und Tyrosinspiegel mit ein bis zwei Tropfen Blut mittels
Isotopenverdnnung
und
Massenspektrometrie
in
krzester
Zeit
bestimmen,
so
dass
die
243
10. Aminosuren
COOH
COOH
COOH
Oxygenase
NH2
NH2
NH2
HO
Melanin
HO
Tyr
Phe
OH
3,4-Dioxyphenylalanin, Dopa
COOH
bei Phenylketonurie
O
Phenylbrenztraubensure
Serin [lat. sericum = Seide] wurde 1865 durch CRAMER im Seidenhydrolysat entdeckt. L-Cystein wurde
1810 in Harnstein [griech. kystis = Harnblase] entdeckt und kommt als Baustein in Haaren, Federn, Huf,
Nagel, Wolle und in der Hornsubstanz der Haut vor (Keratine). Es ist oft in Enzymen am Katalysemechanismus beteiligt. Cystein ist die zentrale Verbindung des Schwefel-Stoffwechsels, viele SchwefelDerivate leiten sich von ihm ab. Cystin ist das Oxidationsprodukt des Cysteins und bewirkt durch
Disulfidbrcken die Vernetzung von Peptidketten. Die kovalente Bindung zwischen verschiedenen
Peptidkettenabschnitten wirkt stabilisierend auf die Raumstruktur der Protein-Makromolekle. Cystin
kommt in zahlreichen Pflanzen vor und ist hauptschlich in Keratinen enthalten. Die essentielle
Aminosure Methionin lt sich biologisch durch Serin und Cystein gewinnen, so da ein Groteil des
Methioninbedarfs durch Cystein gedeckt werden kann.
Auf der Vernetzung von Peptidketten durch Disulfidbrcken beruht das Prinzip der Dauerwelle
(Kaltwelle). Die Cysteinbrcken des Keratins (11.
durch Salze der Thioglykolsure, der Thiomilchsure, oder durch Glycerinmonothioglykolat reduziert.
Bei der Reduktion geht die Struktur des Haares verloren, es quillt und ist mechanisch verformbar. Nach
dem Formen wird mit Wasser gesplt und anschlieend mit Oxidationsmitteln wie H2O2 und anderen
Peroxo-Verbindungen und die Disulfidbrcken zurckgebildet (fixiert).
H
CH(NH2)COOH
HS-CH2-COOH
H2 C
H
C
COOH
2
-
HOOC-CH2-S-S-CH2-COOH
HS
NH2
CH(NH2)COOH
H
H
244
10. Aminosuren
sie wichtig beim Auftreten von Allergien. Dabei wird Histidin decarboxyliert und Histamin in Freiheit
gesetzt (Antihistaminika = Antiallergiemittel).
O
NH2
N
COOH
N
H
CHO
N-Formylkynurenin
H2
C CH2
N
H
NH2
Histamin
Nomenklatur
Dreibuchstabenbezeichnung
Einbuchstabenbezeichnung
essentiell/
nicht essentiell
Neutrale Aminosuren
Glycin
Aminoessigsure
frher auch Glycocoll
Alanin
2-Aminopropionsure
Valin
2-Amino-3-methylbuttersure
Leucin
2-Amino-4-methylvaleriansure
Isoleucin
2-Amino-3-methylvaleriansure
Gly
ne
Ala
Val
Leu
Ile
A
V
L
I
ne
e
e
e
2,6-Diaminohexansure
Lys
2-Amino-5-guanidinovaleriansure Arg
K
R
e
e
2-Aminobutandisure
2-Aminobernsteinsure
2-Amino-3-aminocarbonylpropionsure
2-Aminopentandisure
2-Aminoglutarsure
2-Amino-4-aminocarbonylbuttersure
Asp
ne
Asn
oder Asp-NH2
Glu
ne
ne
Gln
oder Glu-NH2
ne
Phe
Tyr
F
Y
e
e
Ser
Thr
Cys
(Cys)2
Met
Pro
Trp
His
S
T
C
ne
e
ne
M
P
W
H
e
ne
e
e
Basische Aminosuren
Lysin
Arginin
Saure Aminosuren
Asparaginsure
Aspartinsure
Asparagin
Glutaminsure
Glutamin
Funktionelle Aminosuren
Phenylalanin
Tyrosin
Serin
Threonin
Cystein
Cystin
Methionin
Prolin
Tryptophan
Histidin
2-Amino-3-phenylpropionsure
2-Amino-3-(4-hydroxyphenyl)propionsure
2-Amino-3-hydroxypropionsure
2-Amino-3-hydroxybuttersure
2-Amino-3-mercaptopropionsure
2-Amino-4-methylthiobuttersure
2-Carboxypyrrolidin
Freies Histidin wird von verschiedenen Pflanzenarten als Gegengift gegen Schwermetalle gebildet und
ermglicht ihnen das berleben im Schadstoffmilieu exponierter Standorte. Alyssum lesbiacum z.B.
produziert es proportional zum Nickelgehalt der Nhrlsung bis zu mehreren Grenordnungen ber den
Normalgehalt und komplexiert damit das Metall.
245
10. Aminosuren
Der Tagesbedarf der essentiellen Aminosuren Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Phenylalanin,
Threonin, Tryptophan und Valin betrgt zwischen 0.2 - 1.2 g/kg Krpergewicht. Im Nahrungsprotein
(Fleisch, Fisch, Eier, Milch, Mehl) sind etwa 1 - 7 g essentielle Aminosuren/100 g Protein enthalten. Bei
Mangel essentieller Aminosuren in der Nahrung lassen sich mehr Stickstoffverbindungen in Harn und
Fces nachweisen, was bedeutet, da Krperproteine schneller abgebaut als synthetisiert werden.
Zum Nachweis der Essentiellitt von Aminosuren kann man die Alge Spirulina platensis in einer reinen
13
CO2-Atmosphre als einzige Kohlenstoffquelle wachsen lassen und sie anschlieend an Hhner
verfttern. Sowohl in den gelegten Eiern als auch im Gewebe der Tiere findet man, da sie entweder a)
das vollstndig markierte Moleklgerst intakt enthalten (z.B. Phenylalanin), bzw. b) die unterschiedliche
13
C-Verteilung fr einen Abbau der markierten Algen-Aminosuren und de novo-Synthese spricht. Damit
konnte gezeigt werden, da Prolin zumindest fr Hhner als essentiell einzustufen ist.
Neben den 20 genetisch festgelegten proteinogenen Aminosuren, die zu den Bausteinen der Proteine
gehren, konnten in Pflanzen und Mikroorganismen ber 500 weitere, seltenere Aminosuren
nachgewiesen werden, die als nicht-proteinogene Aminosuren bezeichnet werden. Unter diese Definition
fallen auch die D-Formen vieler proteinogener -Aminosuren. Oft sind die bergnge flieend, wenn es
sich um Hydroxylierungs- oder Methylierungsprodukte entsprechender proteingebundener Aminosuren
oder Homologe handelt (z.B. Ornithin, Hydroxyprolin), die ebenso in Proteinen gefunden werden.
Eine Auswahl nicht-proteinogener Aminosuren ist Tab. 10-2 zu entnehmen. D-Alanin ist als Bestandteil
der Teichonsuren (
), des Coenzym A (
sure [GABA] kommt in Hefen und Bakterien vor, findet sich in relativ hohen Konzentrationen im
Gehirn und ist an neuronalen Vorgngen beteiligt. Diaminopimelinsure [A2pm3, 2,6-Diaminoheptandisure] ist ebenso ein wichtiger Bestandteil der Bakterienzellwnde und biogenetischer Vorlufer von
Lysin in Pflanzen und Bakterien.
246
10. Aminosuren
Tetraiod-L-thyrosin] sind Derivate des Tyrosins und als Schilddrsenhormone [Thyroidhormone] zum
Groteil gebunden an Thyreoglobulin. Diiodtyrosin ist auerdem im Skelett von Gorgonien (Korallen),
Schwmmen, u. dgl. nachzuweisen. Es entsteht aus 3-Iod-L-tyrosin und ist Vorstufe der Biosynthese der
Thyroidhormone Thyroxin und 3,5,3'-Triiod-L-thyrosin. Letztere greifen regulativ in den Energiestoffwechsel ein und senken bei Schilddrsen-berfunktion den gesteigerten Grundumsatz.
In hheren Pflanzen werden ungewhnliche Aminosuren vor allem in Zeiten besonderer Stoffwechselaktivitt gefunden. Zahlreiche nicht-proteinogene Aminosuren wurden aus Pflanzen der Familie der
Fabaceen isoliert. Einige dieser seltenen Aminosuren der hheren Pflanzen wirken toxisch. Dazu
gehren das aus Canavalia-Arten isolierte und im Klee vorkommende Canavanin, das insektizid und
antifungisch wirkt, das aus Mimosa-Arten isolierte Mimosin und das in Sapindaceen vorkommende
2Methylencyclopropylglycin.
247
10. Aminosuren
Struktur
Vorkommen
COOH
D-Alanin
H2N
-Alanin
H2N
Teichonsuren
Pantothensure
COOH
-Aminobuttersure
H2N
COOH
Bakterien
COOH
HOOC
L,L-Diaminopimelinsure
Bakterienzellwnde
NH 2
NH 2
I
3,5-Diiodthyrosin
Iodgorgosure
Thyroxin
NH 2
H2
C CH COOH
HO
I
HO
NH 2
H2
C CH COOH
O
I
NH 2
H2
C CH COOH
HO
NH 2
H2 H2
H
N O C C CH COOH
H2N
L-Canavanin
Thyreoglobulin
HO
L-Dopa
Thyreoglobulin
Gorgonien
Klee
NH
HO
Mimosin
NH 2
H2
N C CH COOH
aus Mimosa-Arten
NH 2
-Methylencyclopropylglycin
COOH
COOH
Hypoglycin A
NH 2
NH 2
1-Aminocyclopropan1-carbonsure ACC
COOH
COOH
N
Azirinomycin
Streptomyces aureus
L-Azaserin
N N
COOH
O
aus Streptomyceten
NH 2
H
N
COOH
Azetidin-2-carbonsure
H
N
Sarkosin
in hheren Pflanzen
COOH
Actinomyceten
Betanin
N
COOH
O
P
COOH
Phosphinothrycin
Streptomyceten
OH
NH 2
NH 2
D-Cycloserin
Streptomyceten
O
N
H
__________________________________________________________________________________
Nicotinamin aus Nicotiana tybycum wirkt aufgrund seiner groen Tendenz zur Eisenkomplexierung als
Neutralisationsfaktor in Tomatenmutanten. Bestatin, [(2S,3R)-(3-Amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl)-Lleucin], ist ein von Streptomyces olivoreticuli produziertes Dipeptid, das als Proteaseinhibitor und
Immunmodulator wirkt. Selenocystein, das Selenanaloge der Thioaminosure Cystein, wurde
248
10. Aminosuren
ursprnglich als Selenkomponente eines bakteriellen Enzyms entdeckt und ist heute als Bestandteil von
mehreren Enzymsystemen nachgewiesen. Als eigentliche Selenoproteine werden nur solche Proteine
bezeichnet, deren Selenkomponente sequenzspezifisch, d.h. durch DNS-Codierung, aufgebaut werden
und nicht durch Substitution im Schwefelstoffwechsel.
Struktur
Vorkommen
COOH
COOH
N
H
Nicotinamin
NH 2
Nicotiana tabacum
COOH
H
H2C C COOH
Selenocystein
Glycin-Reduktase
HSe NH 2
NH 2
COOH
Selenocystathionin
Streptomyceten
Se
HOOC
NH 2
NH 2 O
COOH
Bestatin
N
H
OH
NH 2
Baustein der
-Lactamantibiotika
Thiovalin
COOH
SH
H H
S
H2N
Aminopenicillansure
Strukturteil der
Penicilline
N
O
COOH
O
Alliin
NH 2
Knoblauch
S
COOH
O
Propenylcysteinsulfoxid
NH 2
Kchenzwiebel
S
COOH
_____________________________________________________________________________________
Das S-Allylcysteinsulfoxid Alliin ist ein Inhaltsstoff des Knoblauchs und der Zwiebel und wird durch das
Enzym Alliinase in das antibiotisch wirksame Diallylthiosulfinat Allicin gespalten. Wasserdampfdestillation bildet daraus das Diallyldisulfid als Hauptbestandteil des Knoblauchls. Aus dem isomeren S(1-Propenyl)-L-cysteinsulfoxid entsteht bei Verletzung des Gewebes in der Zwiebel durch Einwirken der
Alliinase das zu Trnen reizende Propanthial-S-oxid. In verschiedenen tierischen und pflanzlichen Zellen
entsteht aus L-Arginin durch molekularen Sauerstoff L-Citrullin und Stickstoffmonoxid NO, das je nach
Syntheseort physiologisch bis pathophysiologisch wirken kann.
O
NH2
Diallyldisulfid
Allicin
NH2
HN
NH
Alliin
S
COOH
H2N
NH2
HON
(CH2)3 CH COOH
NH
NH
(CH2)4 COOH
H2N
H2N
L-Arginin
(CH2)3 CH COOH
N-Hydroxy-L-arginin
L-Citrullin
249
10. Aminosuren
NH2
O
HOOC HC
COOH
NH
N
HO
H
N
COOH
NH2
O
Tricholomsure
OH
NH2
Connatin
Coprin
Die klassische Farbreaktion zur Charakterisierung von Aminosuren ist die Ninhydrinreaktion zur
Anfrbung von Chromatogrammen oder chromatographischen Fraktionen. Zwei Molekle Ninhydrin, das
Hydrat des Indan-1,2,3-trions, reagieren mit Aminosuren entsprechend Formel 9-3 zu einer intensiv
blau-violett gefrbten (max = 570 nm) indigoiden Verbindung, die die quantitative photometrische
Bestimmung erlaubt und fr die qualitative und quantitative Analyse Anwendung findet. Die
Ninhydrinreaktion gelingt selbst mit Spuren von Aminosuren, allerdings auch mit Aminen und
Ammoniak. Prolin und Hydroxyprolin mit ihren sekundren Aminogruppen geben einen gelben Farbstoff,
ebenso besitzt - bei Umsetzung in stark saurer Lsung - das Reaktionsprodukt von Tryptophan eine
andere Struktur.
250
10. Aminosuren
O
O
H2O
OH
O
OH
Indan-1,2,3-trion
Ninhydrin
O
R
OH
H2N
CH COOH
-Aminosure
OH
- H2O
- CO2
COOH
O
O
H
O
H2O
N
- RCH=O
O
- H+
NH2
O
Eine Flle neuerer Farb- oder Fluoreszenzreagenzien wurde zur Derivatisierung von Aminosuren
entwickelt, die aufgrund einer ausgeprgten UV-Absorption oder Fluoreszenz der Produkte zu hherer
Nachweisempfindlichkeit fhren. o-Phthaldialdehyd [OPA] reagiert in Kombination mit 2-Mercaptoethanol mit Aminosuren zu Isoindolderivaten, Fluorescamin zu einem Pyrrolinon. Dansylchlorid [1-Dimethylaminonaphthalin-5-sulfonylchlorid] und Dabsylchlorid [4-(Dimethylamino)azobenzol-4-sulfonylchlorid] liefert mit Aminosuren stark fluoreszierende Sulfonamidderivate. Als weitere Fluoreszenzreagenzien fr Aminosuren sind 4-Fluor-7-nitro-benzofurazan [7-Fluoro-4-nitro-2-oxy-1,3-diazol,
NBD] und 9-Fluorenylmethyl-carbonylchlorid [FMOC-Cl] genannt, das Fluorenaminosurederivate
erzeugt, die sowohl fluoreszieren als auch im UV absorbieren. Whrend mit der OPA-Methode sich nur
primre Aminosuren derivatisieren lassen, reagiert FMOC-Cl mit primren und sekundren und lt sich
auch leicht in Analyseautomaten verwenden. Reaktionen von Aminosuren mit Phenylisothiocyanat
[PITC] gibt Phenylthiocarbamylderivate (vgl. EDMAN-Abbau von Proteinen, 11. ).
251
10. Aminosuren
CH2 CH2 OH
CHO
HS
CH2 CH2 OH
H2N
CHO
o-Phthaldialdehyd OPA
O
+ H2N
R
O
OH
COOH
Fluorescamin
O
N
+ H2N
O
CHR
COOH
Dansylchlorid
Cl
S
NH
O
CHR
COOH
NH2
N
SO2Cl
+ H2N
CHR
COOH
CHR
COOH
SO2 CH
Dabsylchlorid
O2N
O2N
H2N
HN
N
N
CHR
COOH
N
O
7-Fluor-4-nitrofurazan NBD
+ H2N
R
O
O
H2C O
H2C O
NH R
Cl
9-Fluorenylmethoxycarbonylchlorid FMOC-Cl
R1
O
N
S
R1
H
N
N
R2
+ HN
R
Phenylisothiocyanat PITC
ist. Hier ist der Elektrolyt auf pH = 9.7 gepuffert, von den aufgetragenen Aminosuren bleibt Lysin (IP =
COOH
252
10. Aminosuren
9.7) an der Startlinie. Dagegen tragen die Substanzen 2, 3 und 4 bei pH = 9.7 eine negative Ladung und
wandern zum Pluspol.
Hochauflsende Flssigchromatographie [HPLC] unter Verwendung von Umkehrphasen [reversedphase] ist heute als Standardprozedur fr die Trennung von Aminosuren etabliert. Eine hhere Detektierbarkeit gegenber der Detektion im UV/Vis-Bereich und Verbesserung der Analysenzeiten wird durch
Derivatisierung mit fluoreszierenden oder UV-absorbierenden Gruppen (Vorsulen- und NachsulenDerivatisierung) erreicht. Chirale Phasen wie z.B. auf Kieselgel kovalent gebundene Cyclodextrine (vgl.
1.
) sind hervorragend geeignet zur Auftrennung in die optischen Antipoden und Analyse derivatisierter
D,L-Aminosuren.
10.4. Synthesen
Aminosuren werden heute in groem Mastab industriell produziert. Der Start fr die industrielle
Aminosuresynthese geht auf die Entdeckung der L-Glutaminsure im Seetangextrakt [1908], einem
traditionellen japanischen Suppenbestandteil, zurck. Bereits ein Jahr spter wurde das Mononatrium-LGlutamat als Gewrzmittel eingefhrt. Alle proteinogenen Aminosuren besitzen heute industrielles
Interesse. Der jhrliche Umsatz betrgt mehr als 1 Milliarde US-$, davon entfallen mehr als 25.000 t
Produktionsmengen auf Glutaminsure, 25.000 t auf Lysin, und auf Methionin ber 1,000.000 t.
Aminosuren werden in letzter Zeit zunehmend zu Nahrungs- und Futtermitteln zugesetzt und als
Additiva fr Kosmetika, synthetische Polymeren und Detergenzien eingesetzt. Wirkstoffe in Pflanzenschutzmitteln und vor allem eine Reihe von Pharmawirkstoffen werden ausgehend von -Aminosuren
hergestellt. Medizinisch dienen Gemische von Aminosuren u.a. zur Bereitung von Infusionen zur knstlichen Ernhrung und besitzen als Chemotherapeutika Bedeutung. N-Acetyl-Cystein wirkt als
Mukolytikum und erleichtert die Entfernung des Schleims aus den Bronchien bei Erkltungen. Methionin
und Lysin finden in der Tierproduktion Anwendung. Whrend fr die tierische und menschliche
253
10. Aminosuren
Ernhrung natrliche L-Aminosuren bentigt werden, werden bei Methionin L- und D-Formen gleichermaen verwendet. Weitere Anwendung finden Natriumacylglutamat als Seife und Poly--glutamat als
Beschichtungsmaterial von Kunstleder-Folien.
Die Gewinnung von Aminosuren aus Proteinhydrolysaten lohnt sich dann, wenn ein leicht zu
beschaffendes Protein besonders reich an der entsprechenden Aminosure ist und/oder die Aminosure
sich besonders leicht isolieren lt. Aufgrund ihrer Schwerlslichkeiten lassen sich Glutaminsure, Cystin
und Tyrosin aus Proteinhydrolysaten gewinnen, reines Threonin (etwa 160 t/Jahr) und Tyrosin (ca. 50 t)
z.B. aus Eiwei-Hydrolysaten. Aus Gelatinehydrolysat wird vor allem Hydroxyprolin isoliert.
Durch Totalsynthese werden Glycin, die racemischen sowie die L-Aminosuren Alanin, Methionin,
Phenylalanin, Serin, Tryptophan und Tyrosin in betrchtlicher Menge produziert. Im Unterschied zu den
aus Proteinhydrolysaten oder durch mikrobielle Verfahren gewonnen Aminosuren fallen bei Totalsynthesen Racemate an, so da sich oft eine Racematspaltung anschlieen mu. Wo Wirtschaftlichkeit
eine hohe Prioritt besitzt, ist die Rckfhrung des anderen Enantiomeren in den Proze unerllich.
-Aminosuren erhlt man direkt durch nucleophile Substitution des Halogens von -Halogencarbonsuren, wie man sie durch HELL-VOLHARDT-ZELINSKY-Reaktion ber die Surehalogenide erhlt, mit
Ammoniak.
O
R
Br2 / P
OH
NH3
R
CH2 C
CH
Br
R
Br
CH
R
OH
Br
CH
NH2
C
O
NH4
Racemisches Prolin lt sich durch Sureamid-Abbau und Bromierung aus Adipinsure herstellen.
H2
C NH2
H2
C COOH
H2SO4 / HN3
H2C
H2C
SCHMIDT-Abbau
C COOH
H2
Adipinsure
H2C
H2C
C COOH
H2
Br2 / P
HELL-VOLHARDTZELINSKY-Reaktion
H2
C NH2
H 2C
OH-
NH
H 2C
CH
Br
COOH
COOH
()-Prolin
An die Natur angelehnt ist die reduktive Aminierung von -Ketosuren. Die katalytische Hydrierung des
Ketimins mit Wasserstoff/Platin kann in Gegenwart von NH3 als "Eintopfverfahren" durchgefhrt
werden.
254
10. Aminosuren
NH
NH2
H2 / Pt
NH3
COOH
COOH
COOH
()-Alanin
Brenztraubensure
-Aminosuren lassen sich durch Addition von NH3 an ,-ungesttigte Carbonsuren darstellen.
NH2
NH3
COOH
COOH
()-Aminobuttersure
Ein klassisches Verfahren ist die Phthalimidomalonestersynthese, eine Modifikation der GABRIELSynthese. Durch Alkylierung des Malonesters 3 mit Alkylhalogenid R-Hal entsteht ber 4 jede
gewnschte Aminosurestruktur 5. So wird aus Isobutylchlorid als Alkylierungsreagenz Leucin
hergestellt, Lysin entsteht bei Verwendung von 1,4-Dibrombutan.
O
O
COOC2H5
COOC2H5
Br CH
1. RO-
N CH
2. RHal
COOC2H5
COOC2H5
Phthalimidkalium
Brommalonsureester
O
COOC2H5
N
COOH
H2O / H+
COOC2H5
COOH
+
CH
CO2
2 EtOH
COOH
NH2
Bei der Acylaminomalonat-Synthese ist der N-Acetylaminomalonester 8 die Schlsselsubstanz, der wie
bei der Malonestersynthese alkyliert werden kann. Hydrolyse des Alkylierungsprodukts 9 ergibt
racemische -Aminosuren 5.
COOEt
COOEt
COOEt
COOEt
H2 / Ni
HONO
ON
Ac2O
H2N
COOEt
COOEt
Malonsureester
H
N
COOEt
COOEt
N-Acetylaminomalonsureester
8
6
H3O+,
COOEt
1. NaOEt
EtOOC
CH3CO
2. R-Br
COOH
- CO2
HN
NH2
COCH3
hnlich der Cyanhydrinsynthese ist die STRECKER-Synthese, wobei von einem der Aminosure-Seitenkette R entsprechenden Aldehyd R-CH=O 10 ausgegangen wird. Durch Umsetzung mit einem Gemisch
aus Blausure und Ammoniak entstehnt ein -Aminonitril 11, dessen Hydrolyse zur -Aminosure 5
fhrt.
R
H
10
NH2
HCN
NH3
C
NH2
NH
O
R
C
H
H2O
COOH
11
255
10. Aminosuren
Synthetisch besonders ntzlich sind Hydantoine, die aus -Aminonitrilen und Kohlendioxid bzw. aus
Aminosuren und Kaliumcyanat entstehen. Als Harnstoffderivate knnen sie unter milden Bedingungen
zu Aminosuren hydrolysiert werden, was die Ausbeute der industriellen STRECKER-Synthese
betrchtlich erhht. Zur Darstellung der wirtschaftlich bedeutsamen Glutaminsure wird aus Acrylnitril
durch Hydroformylierung -Cyanopropionaldehyd 12 hergestellt. Mittels STRECKER-Synthese und
anschlieender CO2-Addition entsteht daraus ein Hydantoinderivat 13, dessen schonende Hydrolyse ()Glutaminsure ergibt.
O
HN
CO / H2
NH2
1. HCN / NH3
NaOH
NH
CN
CN
Co(CO)5
Acrylnitril
NC
2. CO2
HOOC
12
13
COOH
()-Glutaminsure
Die Umsetzung des obigen Cyanoaldehyds 12 zum Hydantoin 14 und anschlieende Reduktion fhrt
wiederum zu einem Aldehyd 15; die weitere Umsetzung mit Phenylhydrazin 16, anschlieende
Umlagerung [FISCHER'sche Indolsynthese] und Hydrolyse des Hydantoins 18 wird bei der industriellen
Synthese von Tryptophan angewendet.
O
O=HC
NC
CN
NH NH2
1. H2 / Ni
HCN
(NH4)2CO3
HN
HN
NH
NH
2. H2O
16
12
14
15
O
O
O
HN
NH
H+
OH
HN
H2O
HN
NH
O
H
17
NH
N
H
18
()-Tryptophan
Methionin wird in einer "Eintopfreaktion" durch Addition von Methylmercaptan an Acrolein und
Umsetzung mit Blausure und Ammoniumcarbonat ber ein Hydantoinderivat 20 erhalten. Da der
Nhrwert von (R)-Methionin erstaunlicherweise gleich hoch ist wie der der (S)-Form, wird nach der
kommerziellen Synthese blicherweise keine Racematspaltung durchgefhrt.
O
CH 3S
O
CH 3SH
CH 3S
Acrolein
19
HCN
(NH 4)2CO3
CH 3S
HN
NH
O
COOH
NH 2
()-Methionin
Thiomethylethyl-hydantoin 20
Threonin entsteht durch Addition von Methanol und Brom an trans-Crotonsure und nachfolgender
nucleophiler Substitution des Broms in 21 mit Ammoniak und anschlieender Hydrolyse. Dabei entsteht
ein Gemisch aller vier Stereoisomeren.
256
OCH3
CH3OH
Br2
COOH
10. Aminosuren
OCH3
NH3
CON(Et)2
Br
trans-Crotonsure
CON(Et)2
Br
21
OCH3
OCH3
COOH
22
H3O+
COOH
NH2
NH2
23
()-Threonin
Die ERLENMEYER-Synthese als Variante der PERKIN-Reaktion geht von Benzoylglycin [Hippursure] aus,
das durch Dehydratisierung ein Azlacton 24 [4H-oxazol-5-on] gibt. Die KNOEVENAGEL-Kondensation
mit Benzaldehyd 25, Hydrierung zu 27 und anschlieende Hydrolyse fhrt zu ()-Phenylalanin.
O
O
H2C
HN
O
OH
- H2O
H2C
OH
Ac2O
H2C
OH
CO
CH=O
C
O
25
C
C6H5
C6H5
C6H5
Azlacton 24
N-Benzoylglycin [Hippursure]
H
C6H5
O
C
CH2 C
C6H5
H2 / Kat.
CH2 CH
OH-
26
NH2
C6H5
27
C6H5
COOH
H2O
()-Phenylalanin
Analog entsteht aus Benzaldehyd 25 mit Hydantoin 28 das entsprechende Benzylidenhydantoin 29 und
konsequenterweise wieder Phenylalanin.
O
H2C
25
OH-
H2 / Pd
()-Phenylalanin
NH
HN
H2O
NH
HN
NH
HN
O
O
Hydantoin 28
30
29
Nach I. UGI lassen sich Isonitrile, Ketone, sekundre Amine und Carbonsuren in der sog.
Vierkomponenten-Reaktion, die aus der PASSERINI-Reaktion entwickelt wurde, zu -Dialkylaminosuren
umsetzen. Mehrkomponentenreaktionen dieser Art finden u.a. in der Kombinatorischen Synthese (
) Anwendung.
R2
1
C
R3
R4
O +
NH + R6
R5
R1
R2
COOH
C
R6
C
R3
R4
R2
R4
H2O
C
R5
HO
C
R3
N
R5
Zur enantioselektiven Synthese bietet sich zuweilen die Modifikation leicht verfgbarer natrlicher
Aminosuren an, ohne das Chiralittszentrum zu verndern. Als Beispiel soll die Partialsynthese des
Enzymhemmers L-Vinylglycin 33 aus L-Methionin durch Pyrolyse des N-geschtzten Sulfoxides 31
dienen.
257
10. Aminosuren
6N HCl,
COOMe
S
148C / 3 Torr
COOMe
H
H
NH CO
NH CO
COOH
H
CH2 C6H5
NH3.HCl
CH2 C6H5
32
31
33
Bei Synthesen, die zugleich das Chiralittszentrum aufbauen, unterscheidet man enantiodifferenzierende
und diastereodifferenzierende Synthesen. Im Fall der enantiodifferenzierenden Synthese wird
Asymmetrie im prochiralen Edukt von einem externen optisch aktiven Hilfsreagenz induziert, fr den
zweiten Fall ist entweder bereits ein Stereozentrum vorhanden oder es wird ein optisch aktives Hilfsreagenz im Edukt "eingebaut" und bewirkt intern asymmetrische Induktion. Das Hilfsreagenz wird nachtrglich wieder abgespalten. Bei beiden Methoden werden die Unterschiede in den freien Aktivierungsenergien (G*) diastereotoper bergangszustnde ausgentzt.
Zur Gruppe mit enantiodifferenzierenden Reaktionen zhlt die asymmetrische Hydrierung prochiraler Aminoacrylsurederivate mit Hilfe lslicher Rh-Katalysatoren [z.B. Wilkinson-Katalysator] mit optisch
aktiven Diphosphinliganden. Eines der ersten chiralen Diphopshine war das von H.B. KAGAN entwickelte
DIOP, weitere Verbesserungen stellten DIPAMP und BINAP dar. DIPAMP wird im Monsanto-Proze
zur Darstellung von L-Dopa verwendet (85% ee).
OCH3
OCH3
OCH3
Ph
PPh3
HO
HO
H2
PPh2
Rh-DIPAMP
OCH3
PPh2
PPh3
Ph
AcHN
DIOP
BINAP
DIPAMP
N-Acetyl-Acrylsure
Ph2P
NH-Ac
AcHN
COOH
N-Acetyl-Dopa
PPh2
NH-Ac
H2
Rh
R
(R)-Komplex
H
COOH
COOH
C
H2
COOH
R = H, 85% ee
P
C6H5
C6H5
W ILKINSON-Katalysator
258
10. Aminosuren
O
H2N
OCH3
OH
OH
(CH3)3O+BF4-
HN
- H2O
N
N
NH
NH2
CH3O
H
H
L-Alanin
OCH3
CH3O
LDA
40
39
41
H
OH
OCH3
N
H , H2O
R-X
N
CH3O
L-Alanin
H2N
NH2
HO
42
Viele Reaktionen zur Darstellung von chiralen -Aminosuren sind letztlich Derivatisierungen von
Glycin oder Glycinderivaten in -Position, andere sind Homologisierungen von Serin-Templaten in der
-Stellung, die elektrophile Aminierung von Enolaten, die asymmetrische STRECKER-Synthese und die
asymmetrische Hydrierung von Dehydroaminosuren.
Die meisten Aminosuren werden mikrobiologisch mit Wildtypen und Mutanten von Mikroorganismen
durch Fermentation gewonnen. Daneben werden Aminosuren auch mit Hilfe immobilisierter Mikroorganismen (z.B. L-Aspartinsure in Japan), ganzer Zellen oder isolierter mikrobieller Enzyme
produziert.
In einem fermentativen Verfahren werden z.B. Mutanten von Mikroorganismen eingesetzt, die ein
gewisses berproduktionspotential besitzen und aus einer C-Quelle (z.B. Glucose) und einer N-Quelle in
Ausbeuten bis zu 60 g/l Aminosuren produzieren. Fr die Herstellung von (-)-Glutaminsure wird z.B.
Corynebacterium glutamicum und Brevibacterium flavum verwendet.
Unter Verwendung intakter Zellen oder isolierter oder an polymere Trger gebundener Enzyme kann man
bei enantiodifferenzierenden Reaktionen einen hohen Enantiomerenberschu erzielen. Die Umsetzung
von Indol, Brenztraubensure und Ammoniak mit -Tyrosinase/Pyridoxalphosphat liefert L-Tryptophan.
259
10. Aminosuren
O
OH
COOH
+
O
Enzym
Brenztraubensure
N
H
PLP
+
NH3
Indol
H2N
N
H
L-Tryptophan
Alanin wird aus Fumarsure gebildet. Unter Verwendung einer Zellsuspension von E. coli und durch die
in ihr enthaltene Aspartase wird Asparaginsure erzeugt. Durch Einwirkung von Aspartat-Decarboxylase wird durch Decarboxylierung L-Alanin erhalten.
10.5 Racematspaltung
Bei vielen Totalsynthesen und industriellen Prozessen fallen racemische Aminosuren an, die eine
anschlieende Racematspaltung erfordern. Vor allem von der pharmazeutischen Industrie wird heute eine
hchstmgliche Enantiomerenreinheit gefordert, um mgliche inhibitorische Effekte oder Nebenwirkungen durch "biologisch-falsche" Enantiomere bei therapeutischen Anwendungen auszuschlieen.
Im gnstigsten Fllen gelingt die Racematspaltung bereits durch Kristallisation, so gelingt die Herstellung von (S)-Glutaminsure durch Animpfen der bersttigten wrigen Lsung mit (S)-Glutaminsurekristallen. Die zurckbleibende (R)-Sure aus den Mutterlaugen wird racemisiert und wieder in den
Proze zurckgefhrt. Andernfalls mssen Trennungen von diastereomeren Derivaten oder kinetische
Racematspaltungen durchgefhrt werden oder enzymatische oder chromatographische Methoden mit
chiralen Sorbenzien angewandt.
Als diastereomere Salze zur Racematspaltung haben sich die Salze der freien Aminosuren mit optisch
aktiven Suren wie z.B. Camphersure, Weinsure und die der acylierten Aminosuren mit optisch
aktiven Basen wie z.B. Brucin oder Strychnin bewhrt. Grotechnisch wird Lysin aus dem bei der Kunstfaserproduktion anfallendem Caprolactam 73 gewonnen. Zur Racematspaltung wird das -Aminocaprolactam 76, das als Zwischenstufe auftritt, mit einem Mol (S)-Pyrrolidin-Carbonsure 77 versetzt, worauf
das (S,S)-Salz 78 ausfllt und mit Natronlauge zu (S)-Lysin hydrolysiert wird.
CO-Cl
H
N
260
O
CO-Cl
10. Aminosuren
O
N
HNO3 / H2SO4
COCl2
H2 / Raney-Ni
NO2
75
74
73
H
H
N
COOH
N
H
OH-
(S)-Lysin
H2N
NH2
77
76
N
H
COO
78
Vollstndige Enantiomerentrennung von (R)- und (S)-Aminosuren gelingt mittels optisch aktiver
Kronenether [CRAM], die mit Aminosuren Komplexbildung eingehen, und Verteilung in einem Zweiphasen-System mit anschlieender Extraktion, die die Reindarstellung optisch-einheitlicher Aminosuren
erlaubt.
Unter den enzymatischen Methoden hat vor allem der Einsatz von Aminoacylasen Bedeutung erlangt, die
Racemate acylierter Aminosuren stereospezifisch hydrolysieren.
R1
Aminoacylase
CO
NH
CH
COOH
R1
COOH + NH2 CH
COOH
In einem industriellen Proze wird eine trgerfixierte Aminoacylase [E.C.3.5.1.14] zur stereospezifischen
Hydrolyse einer N-Acetyl-L-Aminosure zu Aminosure und Acetat ausgenutzt. Die N-Acetyl-D-Aminosure im racemischen Gemisch wird nicht hydrolysiert und kann in den Proze rckgefhrt werden. Da
die freie L-Aminosure relativ leicht von der acetylierten abgetrennt werden kann, bietet die
enzymatische Hydrolyse eine elegante Methode zur Racematspaltung bei Aminosuren. Die Acylase
stammt aus Nieren oder Aspergillus oryzae. Nach diesem Verfahren werden industriell L-Methionin, LPhenylalanin, L-Valin und L-Alanin produziert. Ein kontinuierlicher Proze (Abb. 10-4) kann auch mit
lslichen Enzymen erreicht werden, wenn eine geeignete Ultrafiltrationsmembran verwendet wird, die
das Enzym physikalisch am Verlassen des Reaktionsraumes hindert.
261
10. Aminosuren
Die freie Aminogruppe reagiert mit Sureanhydriden oder Surechloriden bei Basenzugabe unter Bildung
des Acylamids, unter drastischen Reaktionsbedingungen kommt es jedoch zur Azlactonbildung.
H2
C
O
(CH 3CO) 2O
(CH3CO) 2O
H2 N
H3 C
CH2 COOH
HN
CH2 COOH
- H2 O
oder
CH3COCl
O
H3C
Azlacton
Aminosuren lassen sich, wenn das N-lone pair der Aminogruppe durch Acetylierung oder Salzbildung
blockiert ist, mit Alkoholen oder mit 2,2-Dimethoxypropan verestern. In Gegenwart von HCl entstehen
die stabilen protonierten Aminosureester. Im Unterschied zu diesen Hydrochloriden sind die freien
Aminosureester oft nicht stabil.
O
O
1. SOCl2
NaOH
H3N
H3C
CH2 COO
C HN
CH2 COOH
H3C
(CH3CO)2O
CH2 COO
CH2 COOCH3
CH3OH
trock. HCl
H3N
C HN
2. CH3OH
H3N
CH2 COOH
HCl
(Gas)
1. HCl (aqu.)
H3N
OCH3
CH2 COO
H3N
CH2 COOCH3
2.
OCH3
An der Aminogruppe geschtzte Alkylester knnen in die entsprechenden Hydrazide und Azide
umgesetzt werden. Azide, Anhydride, aktivierte Ester und in sehr begrenztem Umfang auch Halogenide
N-geschtzter Aminosuren werden als aktivierte Carboxylderivate bei der Peptidsynthese (11.
eingesetzt.
O
CH
NH2
HONO
X HN
OC2H5
O
H2N
X HN
CH
X HN
C
NH
NH2
CH
R
C
N3
X = Schutzgruppe
Die Reduktion von Aminosuren durch Lithiumborhydrid in nicht-wrigem Medium fhrt zu primren
Alkoholen.
R
R
LiBH4
H 2N
CH
H2N
COOH
CH
CH2OH
Die Aminogruppe von Aminosuren reagiert mit Aldehyden zu Azomethinen [SCHIFFsche Basen]. Im
Unterschied zu Aminen sind Azomethine kaum basisch und werden durch Suren leicht wieder in ihre
Ausgangskomponenten gespalten. Als SCHIFFsche Basen sind zahlreiche Verbindungen nativ an die Aminogruppe des Lysins von Proteinen gebunden (z.B. Retinal, Pyridoxal).
NH2
R
CH
COOH
- H2O
COOH
O=CH-R'
+ H2O
CH
CH
R'
262
10. Aminosuren
Die -Aminomethylgruppe von Lysin wird leicht durch Sauerstoff zur Aldehydgruppe ["Lysinaldehyd",
Allysin] oxidiert. Lysin bzw. das Oxidationsprodukt Lysinaldehyd kann aldolartige Verknpfungen von
Polypeptidstrngen bewirken, SCHIFFsche Base-Kondensation mit weiteren Lysin-Proteinstrngen geben
vielfach quervernetzte Proteine ("Elastine") und sind als Zwischenprodukte an der Biosynthese der
Kollagenfasern beteiligt.
NH2
NH2
O2, H2O
H2N
O=CH
Lysinaldehyd
COOH
COOH
- NH3
Wesentlich instabiler als die Kondensationsprodukte der Amine mit Aldehyden sind die Reaktionsprodukte mit 1,2-Diketonen, die unter Abspaltung der Carboxylgruppe der Aminosure ablaufen. Ein
Spezialfall ist die Ninhydrinreaktion (10.3.1).
CH
COOH
H+
CNO-
COOH
CH
NH
NH2
Das C-2-Asymmetriezentrum von Aminosuren ist relativ labil, daher racemisieren sie beim Erhitzen in
alkalischem Medium und in starken Suren (vgl. Altersbestimmung von Fossilien, 10.1). Besonders leicht
racemisieren funktionelle Aminosuren am -Kohlenstoff (z.B. Serin, Cystein). Die Carbanionen der bei
Peptidsynthesen hufig verwendeten N-Alkoxycarbonylaminosuren sind dagegen durch Mesomerie
stabilisiert und deren Racemisierung erschwert.
Die Anwesenheit der nucleophilen Aminogruppe neben einer Carbonylgruppe gibt Anla fr zahlreiche
Cyclisierungen, durch Angriff an der Carbonylgruppe von Aminosureestern werden 2,5-Diketopiperazine gebildet. Letztere reagieren nicht mit Ninhydrin, einige natrlich vorkommende Diketopiperazine
besitzen antibiotische Wirkung.
R1
H
N
N
H
H2N
CH
COOR
- 2 R2-OH
R1
R1
2,5-Diketopiperazine, Dioxopiperazine
CH2
CH
NH2 O
Peptid
O
R = Alkyl
N
H
CO
Peptid
Pyrrolid-5-carbonsure-2-on, Pyr,
Glu
Durch intramolekulare Cyclisierung von N-Benzyloxycarbonylaminosurehalogeniden entstehen 5substituierte Oxazolidin-2,4-dione, die nach ihrem Entdecker LEUCHsche Anhydride bezeichnet werden.
263
CH
HN
Cl
C O
10. Aminosuren
R
O
HN
CH2
Oxazolidin-2,4-dion
LEUCHsches Anhydrid
Durch besonders reaktionsfhige aromatische Verbindungen lassen sich Aminosuren N-arylieren. Eine
besondere Bedeutung hat die Umsetzung mit 2,4-Dinitrofluorbenzol als Grundlage der Endgruppenbestimmung von Proteinen nach SANGER. Die Arylierung mit 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsure [HABEEB]
oder Naphtho-1,2-chinon-4-sulfonsure [Aminosurereagenz nach FOLIN] erfolgt ber die Bildung von
MEISENHEIMER-Komplexen unter Abspaltung von Hydrogensulfit.
O2N
H2 N
COR2
CH
O2N
- HF
HN
CH
COR2
NO2
NO2
SANGER -Reagenz
NO2
NO2
O2N
SO3Na
H2 N
COR2
CH
O2N
HN
CH
- NaHSO3
R1
COR2
R
NO2
NO2
OH
O
+
H2N
COR2
CH
- NaHSO3
R1
SO3Na
CH
COR2
Acetyliert man Aminosuren in kochendem Pyridin, so fhrt dies unter spontaner Decarboxylierung zu
racemischen -Aminoketonen.
Pyridin,
R
CH
COOH
CH
COCH3
Ac2O
- CO2
H2N
COCH3
NH2
optisch aktiv
racemisch
Ebenso fhrt das Erhitzen in hochsiedenden Lsungsmitteln oder Bromierung mit N-Bromsuccinimid
NBS zur Decarboxylierung. Die entstehenden -Bromamine sind instabil und reagieren weiter zu
Aldehyden und Nitrilen.
CH
COOH
NBS
R
CH
CH2 NH2
CH
- CO2
NH2
COOH
- CO2
NH2
CH
NH
CH
Br
NH2
Nitrosierung und Zersetzung der entstandenen Diazoverbindungen mit Wasser fhrt zu -Hydroxycarbonsuren [VAN SLYKE-Bestimmung].
OH
NH2
R
CH
1. HNO2
R
COOH
2. H2O
CH
COOH
264
10. Aminosuren
Setzt man Aminosuren mit Anhydriden um, so entstehen Azlactone, deren -Wasserstoff unter Konfigurationserhalt substituiert werden kann.
H
H
O
R
COOH
H3C
NH2
Br
H3C
Azlacton
OR1 O
R1-OH
CH3
Br2
OR1
H2O
- CH3COOH
COOH
NH2
H3C
H3C
Chlorameisensureester geben mit aktivierten -Aminosuren cyclische Anhydride, die mit Wasser zu
Polyaminosuren reagieren.
H
H
25C
COCl
Cl
CH2 C6H5
COCl
- C6H5CH2Cl
NH2
H
H2N
COO
CH2 C6H5
H2O (Spuren)
HN
NH2
[CHR CO
NH]n COOH
Polyaminosure
- CO2
H
C
H R
N
H
COCl
2,4-Diketopiperazine
H
NH2
H
C
CH2 COOH
N
R H
H
C
COOH
CH
- NH3
NH2
R
R
H
C
(CH2)n
(CH2)n
Lactame
n = 2,3
COOH
HN
NH2
H2N
(CH2)5
COOH
O
H
H
N
(CH2)5 C
O
NH
(CH2)5 C
OH
x
Polyamid, Perlon
10.7.1 Biosynthesen
265
10. Aminosuren
Nur Mikroorganismen und Pflanzen knnen sich alle bentigten Aminosuren selbst synthetisieren, Tiere
knnen einige, essentielle Aminosuren, nicht synthetisieren, wie mit Ftterungsversuchen gezeigt
werden konnte (Kap. 10.1). Beim Menschen und bei den meisten untersuchten Tieren sind dies die
Aminosuren Valin, Leucin, Isoleucin, Threonin, Methionin, Lysin, Phenylalanin und Tryptophan. Bei
Insekten und Fischen sind daneben noch Arginin und Histidin essentiell.
Die -Aminogruppe kann durch reduktive Aminierung in 2-Oxosuren eingefhrt werden, NH4+ dient
dabei als Stickstoffquelle, bei bestimmten Mikroorganismen auch Luftstickstoff (Kap. 10.1.1). Aus Ketoglutarsure entsteht mit NH4+ durch NADPH-Reduktion L-Glutamat.
OOC
COO
NH4 +
NADPH
OOC
COO
NH2
L-Glutamat
-Ketoglutarat
OOC
COO
COO
PLP
Pyruvat
OOC
COO
COO
+
NH2
L-Glutamat
NH2
L-Alanin
Ketoglutarsure
Das C-Gerst der Aminosuren stammt vor allem von Komponenten des Citronensurecyclus wie z.B. 2Ketoglutarsure, Oxalessigsure, Fumarsure oder Produkten des Kohlenhydratstoffwechsels (Phosphoglycerinsure, Phosphoenolpyruvat, Erythrose-4-phosphat oder Ribose-5-phosphat).
Die aromatischen Aminosuren Phenylalanin, Tyrosin und Tryptophan entstehen auf dem ShikimisureWeg. Die Biosynthese des Histidins geht aus von 1-(5-Phosphoribosyl)-adenosinmonophosphat. Das C-2-
266
10. Aminosuren
Atom und das N-1-Atom des Imidazolringes stammen vom Purinylrest, alle anderen C-Atome von der
Ribose.
10.8 Literatur
267
10. Aminosuren
I. WAGNER und H. MUSSO, Neue natrliche Aminosuren, Angew. Chem. 95, 827 (1983).
B. HOPPE und J. MARTENS, Aminosuren - Produktion und Entdeckung, Chemie in uns. Zeit 18 73
(1984).
Laboratory Methodology in Biochemistry: Amino Acid Analysis and Protein Sequencing, CRC
Handbook
J. THEN, A. DOGHERTY, H. NEATHERWAY, R. MARQUARDT, H.-M. DEGER, H. VOELSKOW,
G. WHNER und P. PRVE, Production of phenylalanin from phenylpyruvate using resting cells of
E. coli, Biotechnology Letters 9, 680 (1987).
W.L. CODY und V.J. HRUBY, Unnatural amino acids: Synthesis and biological significance, Acta Univ.
Palacki. Olomouc. Fac. Med. 116, 495 (1987).
M.J.O. DONNELL, a-Amino acid synthesis, Tetrahedron 44, 5253 (1988).
J.H. ALTENBACH, Asymmetrische Synthesen von a-Aminosuren, Nachr. Chem. Techn. Lab. 36,
999 (1988).
R.M. WILLIAMS (Hrsg.), Synthesis of Optically Active -Aminoacids, (1. Aufl.), Pergamon
Press, Oxford (1989).
H.J. GAIS und H. HEMMERLE, Asymmetrische Synthesen mit Enzymen, Chemie in unserer Zeit
29, 239 (1990).
B. MICHOV, Elektrophorese. Theorie und Praxis. W. deGruyter, Berlin, New York (1995).
J. JONES, Synthese von Aminosuren und Peptiden. Basistext Chemie 6, VCH
Verlagsgesellschaft, Weilheim (1995).
268
11. Proteine
H2N CH C
1
H R O H
N C C
H
R2 O H R3 O
C
H
R
H
N
C N C C
H
CH
COOH
Die Peptidbindung als N-substituierte Sureamidbindung ist stark resonanzstabilisiert. Die Mesomerie
bedingt einen partiellen Doppelbindungscharakter (etwa 40 %) der Amidbindung, der Abstand zwischen
dem C- und dem N-Atom betrgt 0.132 nm (vgl. 0.125 nm der C=N-Doppelbindung gegenber 0.147 nm
einer CN-Einfachbindung). Die C=O-Doppelbindung besitzt damit auch 40 % Einfachbindungscharakter. Als Konsequenz ist die CN-Bindung der Amidgruppe in Peptiden relativ starr und nicht frei
drehbar. Die trans-Form ist im allgemeinen um 8 kJ/mol stabiler als die cis-Form, Ausnahme machen
Peptidbindungen, die von N-substituierten Aminosuren (Prolin, Hydroxyprolin) ausgehen. Die beiden
Formen der Amidgruppe lassen sich mit Hilfe der IR-Spektroskopie unterscheiden (Tab. 11-1).
268
269
11. Proteine
Bei homodeten cyclischen Peptiden mit kleiner Ringstruktur mu zumindest ein Teil der Peptidbindungen
in der cis-Form vorliegen. Bei cyclischen Dipeptiden [2,5-Dioxopiperazine] liegen alle Peptidbindungen
in der cis-Form vor, cyclische Tetrapeptide enthalten zwei cis- und zwei trans-Peptidgruppen.
cis-CO-NH
trans-.CO-NH
NH-Valenzschwingung
3180 ... 3195
3350
Amidbanden
I
1670 ... 1690
ca. 1650
II
1440 ... 1455
ca. 1550
III
1305 ... 1345
An der Bildung natrlich vorkommender Peptide und Proteine sind die 20 durch den genetischen Code
programmierten proteinogenen Aminosuren beteiligt. Die unterschiedlichen Reste R bedingen die
Variabilitt der Peptide und Proteine; bei einer Peptidkette aus 100 Aminosuren ergeben sich bereits
20100 Mglichkeiten der Verknpfung.
10.1.2 Nomenklatur
Nach der Zahl der Aminosurebausteine werden Peptide als Dipeptid, Tripeptid, Tetrapeptid, etc.
bezeichnet, kleinere Einheiten mit 2-10 Aminosure-Einheiten als Oligopeptide, 10-100 Einheiten als
Polypeptide, die Grenzen sind jedoch flieend. Daran schlieen sich
>10.000).
Peptide, die nur von Aminosuren gebildet werden, heien homomere Peptide. Heteromere Peptide sind
aus Aminosuren und Pseudoaminosuren aufgebaut. Zu ihnen gehren z.B. die Depsipeptide (Kap. 18.
), die alternierend amidartig und esterartig verknpfte Aminosuren und Hydroxycarbonsuren enthalten.
Cyclische Depsipeptide werden auch als Peptolide bezeichnet. Nach Art der Bindungen in den Peptiden
werden auerdem homodete und heterodete Peptide unterschieden. Homodete Peptide enthalten nur
Amidbindungen, heterodete Peptide daneben auch andere Bindungen, wie z.B. Disulfidbrcken.
Lineare Peptide sind unverzweigt, verzweigtkettige Peptide knnen durch Reaktionen der Seitenketten
gebildet werden. Innerhalb der cyclischen Peptide (Formel 10-2) unterscheidet man teilcyclische und
mono-, bi- bis polycyclische Peptide, Peptide, deren Aminosure-Ketten zum Ring geschlossen sind, oder
solche, die ber Disulfid-Brcken zum Ring geschlossen sind wie z.B. Insulin und Oxytocin (10.6.8).
Hufig enthalten Cyclopeptide ungewhnliche Aminosuren, optische Antipoden der normalen proteinogenen L-Aminosuren oder wie die Peptolide Hydroxycarbonsuren. Von Mikroorganismen ausgeschiedene Cyclopeptide haben oft antibiotische Wirkung (Actinomycine, Gramicidine, Polymyxine,
269
270
11. Proteine
Tyrocidine, etc., Kap. 10.6.8). Viele Cyclopeptid-Alkaloide sind starke Gifte (Amanitin, Phalloidin,
10.6.6.4). Ein polycyclisches Peptid-Enzym ist die Ribonuclease S (Kap. 11. ).
Gramicidin S
monocyclisch
Val Orn Leu D-Phe Pro Val Orn Leu D-Phe Pro
NH2
Bacitracin
teilcyclisch
homodethomomer
S
O
Leu D-Glu Ile Lys D-Orn Ile D-Phe His Asp D-Asp NH2
Oxytocin
teilcyclisch
heterodetthomomer
H Cys Tyr Ile Gln Asn Cys Pro Leu Gly NH2
Die Peptide werden fortlaufend nach ihren Aminosurenkomponenten, beginnend bei der aminoterminalen (N-terminalen) Sure, benannt. Die Reihenfolge der Aminosuren im Peptid heit die
Sequenz.
Serin
H2N
Glycin
H
N
N
H
N-Terminus
Tyrosin
O
C
HOH2C
C
O
Alanin
O
C
Leucin
H
N
N
H
CH2
[C6H4]-OH
COOH
C-Terminus
C
O
CH2
CH(CH3)2
Serylglycyltyrosylalanylleucin
[Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu]
Synthetisch sind Polymere zugnglich, die nur aus einer oder wenigen Aminosuren aufgebaut sind. Als
Homopolymere bezeichnet man Polymere einer einzigen Aminosure. Copolymere enthalten zwei oder
mehrere polymere Grundbausteine.
Proteine werden aufgrund ihrer Strukturtyps eingeteilt in die faserartigen Skleroproteine (10.7) und die
kugelfrmigen oder ellipsoiden Sphroproteine. Skleroproteine sind als Gerstsubstanzen im tierischen
Organismus bekannt. Hierzu zhlen die Kollagene (11.7.1) als Bestandteil des Sttz- und Bindegewebes.
Das Seidenfibroin (10.7.4) ist die Gerstsubstanz der Naturseide, nahe verwandt sind die -Keratine
(10.7.2), unlsliche Strukturproteine der Haare, Hufe, Horn, Schuppen, Federn, usw. Auch das Fibrin der
Blutgerinnung (10.7.5) besitzt -Keratinstruktur. Zu den Sphroproteinen zhlen die Albumine (
),
einfache Proteine, die in Krperflssigkeit und Pflanzenbestandteilen vorkommen. Sie sind nieder-
270
271
11. Proteine
molekular und meist gut kristallisierbar. Die sphrischen Globuline ( ) sind hhermolekular und lassen
sich in eine -, - und -Globulinfraktion auftrennen. Daneben unterscheidet man noch eine kleinere
Gruppe von pflanzlichen Proteinen, die Prolamine, Gluteline und Gliadine, die zusammen das Eiwei des
Getreides bilden.
Sitzen am Protein noch artfremde Gruppen [prosthetische Gruppen], so spricht man von zusammengesetzten oder konjugierten Proteinen oder Proteiden. Die prosthetische Gruppe kann kovalent an die
Seitenketten der Aminosuren, heteropolar oder koordinativ gebunden sein. So enthalten z.B. enthalten
Chromoproteide wie das Hmoglobin (
farbstoff als prosthetische Gruppe. Zu den Nucleoproteiden zhlen die stark basischen Protamine und die
Histone. Glykoproteide sind zusammengesetzt aus Eiweikomponente und einem Zucker, Lipoproteide
bestehen aus einem Lipidderivat und einem Protein. Das Proteom ist die Gesamtheit der Proteine, die zu
einem bestimmten Zeitpunkt in einem Organismus oder einer Zelle vorhanden sind. Es liefert zustzliche
Information ber die Entwicklung des Organismus und das funktionale Zusammenspiel der Gene.
Die Ladung eines Proteins wird durch dessen Gehalt an sauren und basischen Gruppen und den pH-Wert
der Lsung bestimmt, die Iminogruppe NH selbst neigt von pH 0 bis pH 14 nur geringfgig zur
Ionisation und Protonierung. Proteine besitzen daher ebenso wie die Aminosuren einen isoelektrischen
Punkt pI, bei dem sie im elektrischen Feld nicht wandern und ihre Lslichkeit in Wasser am geringsten
ist, und wirken als Ampholyte. Der isoelektrische Punkt der Proteine kann betrchtlich schwanken. Sie
wirken wie die Aminosuren als Puffer und lassen sich elektrophoretisch trennen.
pI
10.8
4.7 - 4.9
5.8
5.5 - 5.8
3.7 - 5.0
4.7 - 5.0
5.35
ca. 1.0
Die Proteine werden nach ihrer Lslichkeit in Albumine, Globuline und Histone eingeteilt (Tab. 10-3).
Albumine sind leicht wasserlslich, ihre Molmasse betrgt etwa 70.000. Globuline sind wasserunlslich,
gehen aber in verdnnten Salzlsungen, wie z.B. physiologischer Kochsalzlsung, und in verdnnten
271
272
11. Proteine
Suren und Laugen in Lsung. Durch einen hohen Arginin-Gehalt reagieren Histone basisch und sind mit
verdnnten Suren extrahierbar; durch Alkohole werden sie ausgefllt. Sie finden sich an Nucleinsuren
gebunden vor allem in den Zellkernen der roten und weien Blutkrperchen. Prolamine sind in Wasser
und Alkohol unlslich, jedoch lslich in 80 proz. Alkohol. Die Gluteline sind in verdnnten Laugen
lslich.
Die Lslichkeit eines Proteins wird durch den pH-Wert und die Salzkonzentration bestimmt. Die Lslichkeit globulrer Proteine erhht sich mit steigender Salzkonzentration bis zu einem Optimum [Einsalzeffekt], bei weiterer Erhhung der Salzkonzentration setzt die Lslichkeit wieder herab [Aussalzeffekt].
Die Polypeptidketten der Proteine sind in ihrer natrlichen wrigen Umgebung so angeordnet, dass die
polaren Aminosuren an der Oberflche sitzen (vgl. Tertirstruktur, Kap. 10.3.3). Die polaren Gruppen,
darunter vor allem die ionogenen, treten in Wechselbeziehungen mit dem Wasser, wobei jede Aminosure durchschnittlich 3 Molekle Wasser bindet. Die inneren (hydrophoben) Aminosuren sind im
allgemeinen nicht hydratisiert (solvatisiert). Es bilden sich verschiedene Hydratschichten um das Proteinmolekl, deren Wasser unterschiedlich gebunden ist. Dieses gebundene Wasser unterscheidet sich in
seinen thermodynamischen Eigenschaften von dem normalen "freien" Wasser der Umgebung. Die unterschiedliche Beweglichkeit des gebundenen und des "freien" Wassers lt sich anhand der Relaxationszeiten NMR-spektroskopisch verfolgen. Man rechnet durchschnittlich mit einer Hydrathlle von 0.2 bis
0.6 g Wasser pro g Protein. Diese Hydrathlle bleibt auch im kristallinen Zustand erhalten. Durch hohe
Salz- oder Wasserstoffionen-Konzentration wird die Hydrathlle teilweise abgebaut, da die Elektrolyte
selbst Wasser binden. Es kommt zum Ausfllen der Proteine infolge Aggregation [Aussalzeffekt]. Auch
die durch Ionenbeziehungen zusammengehaltenen Nucleoproteine enthalten nur wenig Wasser.
Bei den Polypeptiden und Proteinen werden mehrere Strukturebenen unterschieden. Unter Primrstruktur
wird die Sequenz der Aminosuren in der Peptidkette verstanden. Diese Definition schliet andere
kovalente Bindungen oder Wechselwirkungen als die Amidbindung aus. Die Mikrokonformation
bestimmter Teile der Polypeptidkette wird als Sekundrstruktur bezeichnet. Die Sekundrstruktur ist die
lokale rumliche Anordnung der Polypeptidhauptkette und beschreibt die geordneten Bereiche der Peptidkette, z.B. helikale, nichthelikale sowie Faltblattstrukturen. Die Definition erfat nicht die Konformationen der Seitenketten und Wechselwirkungen mit anderen Segmenten. Daneben knnen Peptide auch
ungeordnet als statistisches Knuel [random coil] vorliegen. Unter Tertirstruktur wird die Makrokonformation der gesamten Polypeptidkette verstanden. Sie umfat die gesamte rumliche Anordnung
272
273
11. Proteine
unter Bercksichtigung der Seitenketten der Aminosuren. Durch Bildung von Assoziaten aus mehreren
Untereinheiten selbstndiger Peptide kommt es zur Ausbildung der Quartrstruktur eines Proteins. Sie
beschreibt die gegenseitige rumliche Anordnung dieser Untereinheiten zueinander.
11.3.1 Primrstruktur
Die Primrstruktur beschreibt ausschlielich die Sequenz der Aminosuren und wird durch Angabe der
N- und C-terminalen Aminosure eindeutig bestimmt. Die Reihenfolge der Aminosuren steuert die
Faltung der Peptidkette, die die korrekte, aktive Konformation ergibt. Fr die Aufklrung der
Primrstruktur eines Proteins [Sequenzanalyse] sind, abhngig von der Zusammensetzung, folgende
Schritte erforderlich:
1.
2.
Gegebenenfalls ist die Spaltung in Einzelketten und deren Isolierung erforderlich, die Reduktion
von Disulfidbrcken, Blockierung der Mercaptogruppen mit nachfolgender neuerlicher Aminosureanalyse und Endgruppenbestimmung.
3.
Selektive Spaltung der Ketten, Isolierung der Fragmente mit anschlieender Aminosureanalyse,
Endgruppenbestimmung und abschlieender Sequenzbestimmung.
11.3.2 Sekundrstruktur
Die Sekundrstruktur beschreibt die sterische Anordnung der Aminosuren in der Peptidkette und ist
aufgrund des partiellen Doppelbindungscharakters der planaren CONH-Bindung letztendlich eine Folge
der Primrstruktur. Die CC- und die NC-Bindung hingegen knnen im wesentlichen frei um ihre
Achse rotieren, und diese Drehbarkeit ermglicht eine Vielzahl von Konformationen einer Peptidkette.
Bei einem Protein mit 170 Aminosuren sind damit Konformationen in der Grenordnung von 1080
mglich. Der Rotationswinkel um die CC-Bindung wird mit als Torsionswinkel N-C-C-N mit , der
um die NC-Bindung mit und der um die NCO-Bindung mit bezeichnet. und sind 0, wenn die
beiden planaren Amidgruppen in einer Ebene liegen.
C1a
CH
OH
OH
CH
C2
C3a
N
H
273
274
11. Proteine
Aus sterischen Grnden ist nicht jede beliebige Konformation und Winkeleinstellung erlaubt, es gibt
vielmehr energetisch bevorzugte Konformationen. Darberhinaus knnen durch nichtkovalente
Bindungen, insbesondere Wasserstoffbrcken, bestimmte Anordnungen stabilisiert werden.
Aus Rntgenuntersuchungen und Modellbetrachtungen entwickelten L. PAULING und E.J. COREY das
Faltblatt und die Helix als geordnete Sekundrstrukturen mit maximaler Stabilisierung durch Wasserstoffbrcken. In manchen Proteinen liegen etwa 75 % der Aminosuren in Form einer dieser Sekundrstrukturen vor.
RAMACHANDRAN (Nobelpreis 19
durchgerechnet. Diese RAMACHANDRAN-Diagramme (Abb. 10-1), die durch Auftragen von gegen
erhalten werden, lassen Bereiche erkennen, in denen unter Bercksichtigung noch tolerierbarer Abstnde
zwischen nicht miteinander verbundenen Atomen sich die wichtigsten geordneten Strukturen befinden.
III
(C) []
II
IV
VI
(N-C) []
Abb. 10-1. RAMACHANDRAN-,-Diagramm
Aufgrund ihrer Struktur werden Proteine in globulre (kugelfrmige) und fibrillre (fadenfrmige)
eingeteilt. Bei globulren Proteinen werden vor allem -Helixstruktur und Faltblattstruktur gefunden. In
ihrer reinen Form treten die Sekundrstrukturen nur bei den fibrillren Proteinen auf, deren wichtigste
274
275
11. Proteine
Vertreter die Skleroproteine (Kap. 11.7) sind. Tab.11-5 informiert ber die vorherrschenden
Sekundrstrukturen einiger globulrer Proteine.
Proteine
Myoglobin, Hmoglobine, Hmerythrin, Bacteriorhodopsin
Immunoglobulin, Superoxid-Dismutase, Concanavalin,
Pralbumin, Chymotrypsin, Bacteriochlorophyll-Protein
Malat-Dehydrogenase, Lactat-Dehydrogenase, AdenylatKinase, Phosphoglycerat-Kinase, Triosephosphat-Isomerase,
Carboxypeptidase, Enzyme der Glycolyse
Ribonucleasen, Lysozym, Ferredoxin
Nur eine einzige Wasserstoffbrcke wird von der Haarnadelbiegung gebildet, wodurch Knickstellen
meist an der Oberflche der Proteine entstehen.
O
R
HC
R
N
CH
HN
Haarnadelbiegung
C O
R HC
O
N
H
CH
R
11.3.2.1 Faltblattstrukturen
275
276
11. Proteine
Bei der Faltblattstruktur [pleated sheet, -Konformation, Abb. 11-2] werden die Polypeptidketten durch
senkrecht zu den Ketten stehende Wasserstoffbrcken zusammengehalten, die Winkel und besitzen
entgegengesetzte Vorzeichen (Tab.10-4). Die aus der Faltblattebene herausragenden lipophilen Reste R
ben zustzlich eine Anziehungskraft aufeinander aus. Bemerkenswert ist die Tatsache, dass solche
Aminosuren bevorzugt Faltblattstrukturen ausbilden, die eine geringe Tendenz zur Helixbildung zeigen
(Gly, Ser, Asp). Die Strukturen knnen innerhalb einer Kette oder auch zwischen verschiedenen
Polypeptidketten ausgebildet werden.
R H
C
R H
H
C
R
H
C
H
H
C
N
O R
C
H
R
H
O
N
CH
N
CH
O
CH
CH
N
CH
H
O R
CH
Wasserstoffbrcke R
R
O R
C
H
CO
C
N
C
H
C
H
HN
C
N
H
O
CH
CH
C
H
O
R
Die Ketten knnen parallel oder antiparallel nebeneinander angeordnet sein (Abb.11-3). Faltblattstrukturen sind im allgemeinen nicht flach, sondern rechtsgngig verdrillt.
276
277
C
C O
H N
C
O C
N H
C
C O
H N
H N
C O
C
N H
O
C
C O
H N
C
O C
N H
C
H N
C O
C O
C
H N
11. Proteine
b C
C O
H
N
C
C
O
N H
C
C
O
H N
C
C
C O
N
C
C
C O
N
C
N H
C
C
H
O
N
O
C
Abb. 11-3. Parallele (a) und antiparallele (b) Faltblattstruktur (nach PAULING und COREY).
11.3.2.2 Helixstrukturen
Die Spiralstruktur der Helix kommt dadurch zustande, dass die Winkel und das gleiche Vorzeichen
und fr jedes C-Atom bei einem Helixtyp jeweils den gleichen Wert besitzen. Eine Helix wird durch die
Zahl nr charakterisiert, wobei n die Zahl der Aminosureeinheiten pro Spiralengang und r die Anzahl der
Atome des durch die Wasserstoffbrcke gebildeten Ringes ist. Die intrachenaren Wasserstoffbrcken
werden z.B. zwischen der 1. und 3. [3,010-Helix], 1. und 4. [3,613-Helix] oder 1. und 5. Peptidbindung
[4,416-Helix] ausgebildet. Die Hhe h der Spirale pro Windung ergibt sich aus n . d, dem Anstieg der
Spirale pro Aminosurerest. Diese Steighhe pro Windung betrgt bei der 3,613-Helix 0.54 nm.
R
C
R
N
C
H
R
R
10
H
C
80
C
O
O
C
2
1
N
R
277
278
11. Proteine
Eine Helix kann sowohl von Peptiden aus L- oder von solchen aus D-Aminosuren gebildet werden, nicht
dagegen von Peptiden, die sowohl D- und L-Aminosuren enthalten. Die Seitenketten R der Aminosuren
stehen radial zur Achse der Schraube. Eine Helix kann rechts- oder linksgngig sein, Parameter der Helix sind in Tab. 11-4 angegeben. Am verbreitetsten ist die linksgngige -Helix.
Die -Helix ist die energetisch-stabilste Sekundrstruktur, wie von PAULING und COREY postuliert
wurde. Die linksgngige -Helix dreht aufwrts im Uhrzeigersinn, beendet nach jeweils 3.6 AminosureEinheiten eine Windung und besitzt eine "Ganghhe" von 5.4 A. Rechts- und Linksschraube sind
zueinander Enantiomere. Eine vom Beobachter weg rechtsgngige Helix wird nach CAHN-INGOLDPRELOG als P-Helix (P fr Plus) bezeichnet und besitzt P-Konfiguration, die vom Beobachter weg
linksgngige Helixschraube entsprechend als M-Helix (M fr Minus) mit M-Konfiguration.
Die Tendenz zur -Helixbildung hngt wesentlich von der Aminosuren-Zusammensetzung und Sequenz ab. Nach SCHERAGA lassen sich Aminosuren in
helixbildende (Val, Gln, Ile, Ala, Trp, Met, Leu, Glu),
indifferente (Lys, Tyr, Asp, Thr, Arg, Cys, Phe) und
helixbrechende Aminosuren (Gly, Ser, Pro, Asn)
einteilen. Eine Sonderstellung sowohl in der -Helix- als auch der Faltblattstruktur nehmen Prolin und
Hydroxyprolin ein, die als sekundre Amine Abweichungen von der Idealkonformation induzieren und
die Helix-Struktur durch einen Knick in der Peptidkette unterbrechen. Die Tendenz zur Helizitt lt sich
am besten an Polyaminosuren, die nur aus einer Aminosure bestehen, studieren. Polyalanin bildet bei
pH = 7 in wriger Lsung spontan eine Helix aus, bei Polylysin entstehen hingegen Zufallsstrukturen, die
erst bei pH = 12, wenn die Seitenketten ungeladen sind, spontan Helixbildung geben. Aus Polyisoleucin
entsteht aufgrund sterischer Hinderung keine Helix, ebenso nicht aus Polyprolin. Unter der Peptiden
besitzen Myosin 90 %, Hmoglobin 60 % und Albumin und Serumprotein 40 % helikale Anordnung.
In den fibrillren Proteinen der Kollagengruppe sind die Polypeptidketten in Form einer Tripelhelix
angeordnet. Damit zeigen Kollagene eine charakteristisches Rntgenbeugungsmuster, eine Helix aus drei
Polypeptidstrngen nach Art eines Seiles verdrillt (-Struktur nach RICK und CRICK). Dieser Helixtyp
gehrt wie die Doppelhelices der Nucleinsuren zu den mehrstrngigen oder Superhelices. Bei der
Tripelhelix winden sich drei linksgngige Polypeptidketten um eine gemeinsame Achse und bilden eine
rechtsgngige Superhelix (Abb. 10-5). Die Tripelhelix hnelt ihren Parametern der Polyprolin-Helix (vgl.
Tab. 10-4). Wie bei der einstrngigen Helix ragen die Seitenketten der Aminosuren der Tripelhelix nach
278
279
11. Proteine
auen. Aus Abb. 11-5 ist auerdem ersichtlich, dass fr die Aminosure im Inneren der Tripelhelix (jede
3. Position der Kollagen-Tripelhelix) kein Platz fr Seitenketten ist. Diese Position mu also von Glycin
(R = H) eingenommen werden. Entsprechend enthlt auch das Kollagen ca. 33 % Glycin.
R
R
R
R
A
HH
R
B
H
HH
R
HH
R
C
R
R
R
279
280
11. Proteine
11.3.3 Tertirstruktur
Die native, biologisch aktive dreidimensionale Struktur und Anordnung einer Peptidkette im Raum
bezeichnet man als Tertirstruktur. Nur durch die Ausbildung einer spezifischen Raumstruktur erreicht
die Natur die hohe Przision, mit der unterschiedliche biologische Funktionen der Proteine ablaufen.
Daher ist fr das Verstndnis der Proteinwirkungsweise neben der Kenntnis der Primr- und Sekundrstruktur auch die der Tertirstruktur von zentraler Bedeutung. Nach thermodynamischen berlegungen
soll die dreidimensionale Struktur eines nativen globulren Proteins im physiologischen Milieu die
Konformation des gesamten Systems mit der niedrigsten Freien Energie sein [ANFINSEN]. Die durch
Faltung der Peptidkette gebildete dreidimensionale Struktur eines Proteins wird von der Summe der
Wechselwirkungen der Aminosurereste determiniert. Damit charakterisiert die Primrstruktur die
Tertirstruktur vorallem durch Zwnge der Freiheiten der Drehung, die rigide planare Struktur der Peptidbindung, die erlaubten Winkel der CC- und CN-Bindungen aufeinander folgender Reste. Als stabilisierende Faktoren gibt es:
a) H-Brcken zwischen Peptidgruppen wie fr die Sekundrstruktur,
b)
c) Dipolkrfte zwischen polaren Gruppen und positiven und negativen Ionengruppen wie CO2- und
NH3+ und
d) VAN-DER-WAALS-Krfte zwischen den unpolaren Seitenketten und hydrophobe Wechselwirkungen
H
N
C
H
C
C
H
C
H
C
CH2
CH2
C
O 3 O
2
S
H
NH3
CH2 (CH2)4
N
CH
CH
S
1
C
C
O
Nach ihrer ueren Gestalt lassen sich die Proteine in fibrillre (faserfrmige) und globulre (kugel- oder
ellipsoidfrmige) Proteine aufteilen. Die fibrillren Proteine weisen einen hohen und meist einheitlichen
280
281
11. Proteine
Ordnungsgrad auf, sind dadurch meist schwer lslich und dienen vor allem im tierischen Organismus als
Strukturbildner. Die meisten Proteine, darunter alle Enzyme, gehren hingegen zu den globulren
Proteinen. Whrend Faserproteine relativ einfache Strukturen besitzen, sind globulre Proteine weit
komplizierter aufgebaut. Mit Kernresonanzspektroskopie und Rntgenstrukturdaten wird die Tertirstruktur von Polypeptidketten aufgeklrt. Die Analyse globulrer Proteine ist jedoch schwieriger als die
der Faserproteine. Frher wurde aus physikalischen Parametern wie der Viskositt, der Sedimentationsgeschwindigkeit und der Diffusion auf die Gestalt globulrer Proteine geschlossen. Ein wichtige Methode
zur Bestimmung der Figur von Proteinen ist die Methode der Molekular-Relaxation nach elektrischer
Polarisierung oder die Bestimmung der nderung optischer Eigenschaften wie z.B. der Doppelbrechung
in strmendem Medium. Sehr gute Aussagen erhlt man auch durch die Elektronenmikroskopie oder
durch Licht- oder Rntgenbeugung.
Die Polypeptidketten der globulren Proteine werden sich in wriger Lsung so anordnen, dass
mglichst viel Wechselbeziehungen zwischen den hydrophoben Aminosureresten eingegangen werden
knnen. Die groen apolaren Gruppen der Aminosuren Valin, Leucin, Isoleucin, Prolin und Phenylalanin werden sich also bevorzugt im Inneren des Molekls, die polaren Gruppen aber auen anordnen.
Bei den meisten globulren Proteinen haben etwa 40 % der Aminosurereste hydrophobe Seitenketten.
Bei den globulren Proteinen erfolgt also zunchst eine intramolekulare Stabiliserung durch Faltung der
Peptidkette. Wegen der heterogenen Aminosuresequenz knnen Abschnitte mit geordneten Strukturen
[Supersekundrstrukturen] und solche mit ungeordneten Strukturen abwechseln.
Das erste globulre Protein, das in seiner Struktur durch Rntgenstrukturanalyse aufgeklrt wurde, war
das Myoglobin [PERUTZ und KENDREW, 1959]. Myoglobin enthlt 8 Helixbereiche, die mit Grobuchstaben (A - H, Abb. 10-7) bezeichnet werden. Eine bestimmte Aminosure in diesem Bereich wird mit
einem Index angegeben, z.B. His F8 als Ligand der prosthetischen Gruppe. Die einzelnen Helixbereiche
werden entweder durch einen Knick an einer Aminosure oder durch nichthelikale Bereiche abgetrennt.
Die prosthetische Porphin-Gruppe ist zwischen zwei Helixbereichen eingebaut (E und F). In diese
"Hmtasche" ragen besonders viel hydrophobe Aminosurereste. Einzelne, krzere Helixbereiche
entsprechen in ihren Parametern nicht mehr denen einer reinen -Helix. In anderen globulren Proteinen
wie z.B. den Immunoglobulinen finden sich dagegen kaum helikale Bereiche.
D
C
B
E
G
Porphin
281
H2N
COOH
H
282
11. Proteine
Abb. 11-7. Schematische Darstellung der Tertirstruktur des Myoglobin mit helikalen (fett) und nichthelikalen Abschnitten und Bezeichnung der helikalen Bereiche.
Ein sehr gut mit Rntgenstrukturanalyse untersuchtes Protein ist die Carboxypeptidase A, ein Zn-haltiges
Metalloprotein. Charakteristisch fr dieses globulre Protein ist, da Helixstrukturen an der Oberflche
und ein greres Faltblatt aus 8 Elementen im Inneren des Molekls ausgebildet werden. Auch andere
Enzyme wie Lysozym oder Ribonuclease enthalten solche Faltblattstrukturen.
Bei greren Proteinen mit Ketten aus mehr als 150 Aminosuren kann es innerhalb der Ketten noch zur
Ausbildung von Domnen kommen. Darunter versteht man bestimmte Bereiche innerhalb der Peptidkette
mit autonomer Sekundrstruktur und spezifischen Funktionen (vgl. Immunoglobuline, 10.6.2).
11.3.4 Quartrstruktur
Manche globulren Proteine sind oligomer und bestehen aus zwei oder mehr getrennten Untereinheiten
[subunits], das bedeutet, die native Konformation eines globulren Proteins kann sich weiter durch
Zusammenlagern mehrerer Molekle sowie Metallionen oder prosthetische Gruppen stabilisieren. Die
Assoziation unter Ausbildung der Quartrstruktur kann durch Zusammenlagerung von gleichen oder aber
in ihrer Gre bzw. Funktion verschiedenen Proteinmoleklen eintreten. Proteine mit ungleichen
Untereinheiten werden als heteropolymere, solche aus gleichen, meist geradzahligen Untereinheiten als
homopolymere Proteine bezeichnet. Dazu gehren vor allem die allosterischen Enzyme, daneben aber
auch verschiedene aus Haptomer- und Effektomerprotein bestehende Toxine (vgl. 11.6.3). Hmoglobin
war das erste Protein, dessen komplette Tertir- und Quartrstruktur exakt aufgeklrt wurde [
].
Im allgemeinen bestehen alle Proteine mit einer Molmasse ber 100.000 aus mehreren Untereinheiten,
deren Anzahl zwischen 2 und ber 2.000 (z.B. Tabakmosaikvirus-Protein: 2.130) schwanken kann. Durch
geeignete Dissoziationsbedingungen lt sich hufig die Quartrstruktur ohne Zerstrung der Tertirstruktur abbauen.
Die isolierten Untereinheiten sind meist biologisch inaktiv, knnen aber durch Rekombination meist
wieder spontan zur biologisch aktiven Quartrstruktur assoziieren. Es sind zahlreiche Beispiele bekannt,
dass auch Untereinheiten verschiedenener Oligomerer zu biologisch aktiven Hybriden vereinigt werden
knnen (vgl. Enzymchimre, 11. ).
282
283
11. Proteine
11.4.1 Denaturierung
Unter Denaturierung versteht man den reversiblen oder irreversiblen Abbau der nativen Struktur eines
Proteins, also vor allem der Tertir- und Quartrstruktur. Bei irreversiblem Abbau erfolgt oftmals auch
der der Sekundrstruktur. Denaturierung ist an einer Vernderung der biologischen Aktivitt, der
optischen Eigenschaften, der Lslichkeit (Koagulation) sowie des hydrodynamischen Verhaltens
erkennbar. Sie kann physikalisch durch Erhitzen oder chemisch durch nderung des pH-Wertes, Zusatz
von organischen Lsungsmitteln, Zugabe von Harnstoff, Guanidin oder Detergenzien erfolgen (z.B.
Natriumdodecylsulfat
SDS,
Cetyltrimethylammoniumbromid
CTAB,
oder
nichtionische
Polyoxyethylenether POE). Bei der reversiblen Denaturierung werden nicht-kovalente Bindungen gelst,
bei der irreversiblen Denaturierung zustzlich auch kovalente Bindungen wie Disulfidbrcken. Durch die
Lsung nicht-kovalenter Bindungen denaturieren globulre Proteine mehr oder weniger zu ungefalteten
Zufalls-Konformationen [random coil-Struktur]. Manche knnen jedoch ihre ursprngliche native
Konformation wieder zurckgewinnen, da die Tertirstruktur die thermodynamisch stabilste
Konformation darstellt. Die Aufspaltung aller Disulfidbrcken bedingt die Zerstrung der Tertirstruktur.
Doch selbst nach totaler Denaturierung besitzt die Kette aufgrund ihrer Sequenz noch immer die
Information der originren Tertirstruktur, als Folge knnen selbst bei der Oxidation mehrerer mglicher
Mercaptogruppen zu Disulfidbrcken auch immer die "richtigen" oxidiert werden.
Durch Aggregation der denaturierten Proteinmolekle kann Hitzekoagulation irreversibel werden, z.B.
kann das Erhitzen bestimmter wasserlslicher Eiweistoffe unlsliche Derivate ergeben. Der bei der
reversiblen Denaturierung globulrer Proteine auftretende Phasenbergang von einer geordneten in eine
weniger geordnete Struktur lt sich durch Verfolgen spektroskopischer Parameter, sowie der Viskositt,
283
284
11. Proteine
100
80
60
40
20
0
2
pH
Abb. 11-8. Vernderung der Viskositt und Elliptizitt der Nuclease (nach SCHLECHTER, EPSTEIN und
ANFINSEN)
Die Amidgruppe ist gegenber Alkali relativ stabil, lngeres Erhitzen z.B. mit Ba(OH)2-Lsung im
Autoklaven fhrt jedoch zu vollstndig racemisierten Aminosuren. Wesentlich grere Bedeutung
besitzt die surekatalysierte Hydrolyse. Die einzelnen Peptidbindungen unterscheiden sich etwas
hinsichtlich ihrer Stabilitt in Abhngigkeit der Reste R der beteiligten Aminosuren. Zuerst werden
Bindungen gespalten, an denen Asparaginsure, Asparagin, Serin oder Threonin
beteiligt sind, am
schwersten lassen sich dagegen die Amidbindungen von Isoleucin, Leucin oder Valin spalten. Daher lt
sich surekatalysierte Hydrolyse partiell, wenn auch recht unspezifisch durchfhren. Man kann die
Bedingungen jedoch so auswhlen, dass hauptschlich Oligopeptidbruchstcke entstehen. Bei surekatalysierter Hydrolyse von Proteinen wird Tryptophan meist zerstrt, eine Totalhydrolyse lt sich mit
halbkonz. Salzsure bei 105 C erreichen.
Fr eine selektive hydrolytische Spaltung der Peptide wurden spezielle Methoden entwickelt (Abb. 10-9).
So wird durch Bromcyan BrCN im sauren Milieu bei Raumtemperatur die Peptidbindung spezifisch
hinter Methionin spezifisch gespalten (Formel 10-3). Bei hherer Temperatur reagiert in hnlicher Weise
auch Iodacetamid ICH2CONH2. Durch oxidative Bromierung mittels N-Bromsuccinimid [NBS] lassen
H-Ala-Gly-Lys-Asp-Arg-Leu-Tyr-Ser-Met-Lys-Val-Asp-Phe-Ile-Gly-OH
pH 2
Br-CN
N Bromsuccinimid
284
285
11. Proteine
sich Peptidbindungen hinter Tryptophan und deutlich langsamer hinter Tyrosin und Histidin spalten.
Primr erfolgt der elektrophile Angriff des Broms am Indol, anschlieend erfolgt auch hier die Hydrolyse
ber eine durch Cyclisierung entstandene Iminoverbindung.
Proteasen [Peptidasen] sind hydrolytisch wirkende Enzyme, die enzymatische Spaltung der
Peptidbindungen kann entweder vom Ende der Kette [Exopeptidasen, N-terminales Ende mit Aminopeptidasen, C-terminales Ende mit Carboxypeptidasen] oder selektiv im Inneren des Peptids [Endopeptidasen] erfolgen. Die Exopeptidasen haben Bedeutung fr die schrittweise Spaltung eines Peptids,
der Abbau durch Endopeptidasen fhrt zu Bruchstcken. Pepsin, Papain und Subtilisin sind relativ
unspezifische Endopeptidasen, zum selektiven Abbau der Proteine dienen vor allem Trypsin,
Chymotrypsin sowie das bakterielle Thermolysin.
H-Ala-Gly-Lys-Asp-Arg-Leu-Tyr-Ser-Met-Lys-Val-Asp-Phe-Ile-Gly-OH
Trypsin
Chymotrypsin
Thermolysin
Trypsin (aus Schweinepankreas) spaltet C-terminal ausschlielich nach den basischen Aminosuren
Lysin und Arginin, whrend durch Chymotrypsin vorzugsweise die Peptidbindungen nach den
aromatischen Aminosuren Tyrosin, Tryptophan und Phenylalanin, daneben aber auch nach Leucin und
anderen Aminosuren gespalten werden. Thermolysin spaltet die Amidbindungen von Leucin und
Isoleucin.
Wegen des komplexen Aufbaus der Proteine sind die Methoden, die zu ihrer Strukturaufklrung fhren,
unterschiedlich. blicherweise wird die Strukturaufklrung in drei Stufen durchgefhrt: Zunchst erfolgt
die Reindarstellung des Peptids oder Proteins, anschlieend wird die Aminosuresequenz durch
285
286
11. Proteine
Die direkte Sequenzanalyse oder Sequenzierung eines Proteins bedeutet die Ermittlung der
Primrstruktur, also der Sequenz der einzelnen Aminosure-Bausteine in der Polypeptidkette. Die erste
vollstndige Aufklrung der Primrstruktur eines Proteins gelang F. SANGER [1953], der nach 10jhriger
Arbeit mit Hilfe der DNP-Methode [11.5.2.1] die Primrstruktur des Rinderinsulins angeben konnte. Die
Sequenzanalyse erfolgt durch wiederholte Endgruppenbestimmung der bei der Hydrolyse anfallenden
Oligopeptide, deren Sequenzen sich gegenseitig berlappten. Die Gesamtsequenz ergibt sich durch
mosaikartiges Zusammensetzen der erhaltenen Informationen.
N
O2N
R1 O
NO2
CH C
R2
H
N
O
NaHCO3
CH C
H
R1
R2
R1
C
H
O2N
H
N
CH
H
N
H
CH
NO2
O2N
NO2
Eine gegenber der SANGER-Methode erhhte Empfindlichkeit bei der Detektion kann mit der DansylMethode [GRAY und HARTLEY, 1963] erreicht werden. Umsetzung des Peptids mit Dansylchlorid [1-
286
287
11. Proteine
Das wichtigste chemische Verfahren zur Bestimmung der C-terminalen Endgruppe ist die Umsetzung mit
wasserfreiem Hydrazin nach AKABORI. Alle Amidbindungen in der Kette werden zu Surehydraziden
gespalten, allein die freie Carboxylgruppe der C-terminalen Aminosure reagiert wegen Salzbildung nicht
mit Hydrazin und bleibt als freie Aminosure erhalten. Die abschlieende Behandlung mit SANGERReagenz gibt eine DNP-Aminosure und sonst DNP-Aminosurehydrazide, die sich aufgrund
unterschiedlicher therlslichkeiten trennen lassen. Durch Umsetzung mit Benzaldehyd knnen die
Surehydrazide auch als SCHIFFsche Basen abgetrennt werden.
R
NH CH
O
C
R
H
N CH
R1
R1
H
N CH COOH
O
C
Hydrolyse
NH2
CH COOH +
(n + 1) H2N CH
CO NH-NH2
H2N
NH2
H2N
NH2
R1
SANGER-Reagenz
O2N
N
H
CH
R
COOH + O2N
NO2
CH C
NH-NH2
NO2
oder Benzaldehyd
H
C
N
H
CH
NHN
H
C
1950 verffentlichte PEHR EDMAN das Grundprinzip des nach ihm benannten schrittweisen Abbaus eines
Peptides zur Sequenzanalyse. Beim EDMAN-Abbau wird die N-terminale Aminosure mit Phenylisothiocyanat [PITC] zu einem Phenylthioharnstoff-Derivat [PTC-Peptid] umgesetzt. Dieses cyclisiert zu
einem 2-Anilino-4H-thiazolin-5-on-Derivat [ATZ-Aminosure] unter gleichzeitiger Spaltung der nchsten
Amidgruppierung. Das dabei anfallende Restpeptid bleibt unversehrt und wird einem neuerlichen
Abbauzyklus unterzogen. In wrigem Milieu wird das instabile Thiazolinon-Derivat ber eine
287
288
11. Proteine
offenkettige Phenylthiocarbamoylaminosure zu einem stabileren Phenylthiohydantoin 3-Phenyl-2thioimidazolin-4-on [PTH-Aminosure] isomerisiert (Formel 10-7). Dadurch wird die Peptidkette mit
jedem Reaktionszyklus um eine Aminosure verkrzt, die abgespaltenen Aminosurederivate werden
blicherweise mittels Dnnschichtchromatographie, Gaschromatographie, Massenspektroskopie oder
HPLC identifiziert.
S + H2N
Isothiocyanat
R2
H
N
C6H5
H
N
O
H
N
H
C
H
N
CH
2
H
HCl - Gas
org. Lsungsmittel
R
R
Thioharnstoffderivat
PTC-Peptid
H
C6H5
C6H5
H
N
S
Thiazolinon
R2
N R1
verd. HCl
+
H2N
N R1
C
S
2
H R
C
O
ATZ-Aminosure
H
N
N
H
H
Thiazolidinderivat
H2O
R1
C6H5
H
N
H
N
H
C
R1
C COOH
N
C6H5
3-Phenyl-2-thioimidazolin-4-on
Phenylthiohydantoin
C
H
PTH-Aminosure
Phenylthiocarbamoylaminosure
Durch die Einfhrung der HPLC knnen bis zu 5 pmol Peptid bei geeigneter UV-Detektion nachgewiesen
werden. Die gesamte Reaktionsfolge des EDMAN-Abbaus wird heute automatisch im Peptid-Analysator
durchgefhrt (11.5.4).
Zur Aminosureanalyse im Picomolbereich bedient man sich neben der EDMAN-Methode weiterer
Abbaureagenzien, deren Vorteile oft in einer besseren Separierbarkeit bzw. Detektierbarkeit der Produkte
liegen. Solche sind z.B. 4-(Dimethylamino)azobenzol-4'-isothiocyanat [DABITC], ein farbiges Derivatisierungsreagenz, das rotgefrbte Aminosure-Derivate gibt, die selbst in unterem Picomolbereich visuell
sichtbar sind und zur Aminosurecharakterisierung mittels Dnnschichtchromatographie verwendet
werden. Andere Reagenzien sind Diphenylindonylisothiocyanat [ITC] oder vor allem ortho-Phthaldialdehyd [OPA] in Gegenwart von 2-Thioethanol. Dansylaminoisothiocyanat bildet fluoreszierende
Derivate und kann eine enorme Steigerung der Empfindlichkeit bei der Detektion bedeuten.
288
289
11. Proteine
PEHR EDMAN legte den Grundstein zur Konstruktion eines automatischen Sequenators, der vor mehr als
30 Jahren zusammen mit G. BEGG in Form eines Flssigphasen-Sequenzers [Sequenators] realisiert
wurde. Alle Reagenzien werden dabei in flssiger Form dosiert. Dadurch konnte Substanzbedarf und
Zeitaufwand fr eine Sequenzanalyse wesentlich reduziert werden. Ein dnner Proteinfilm in einem
rotierenden Glaszylinder stellt die Reaktionsoberflche dar, auf der nach Zugabe der flssigen Agenzien
die EDMAN -Reaktion abluft. Nach der Abspaltung der ATZ-Aminosure wurde sie mit Lsungsmittel
extrahiert, gesammelt, mit methanolischer HCl umgesetzt und die erhaltene PTH-Aminosure
dnnschicht- oder gaschromatographisch identifiziert. Spter konnte die Sensitivitt durch Einsatz der
HPLC bei der PTH-Aminosureanalyse stark erhht werden. Die Konvertierung zu den PTHAminosuren erfolgte jedoch noch manuell und wurde erst durch die Entwicklung des sog. Converters
verbessert. In Automaten dieser Art konnten bis zu 70 Aminosuren in einem Sequenzlauf vom NTerminus aus identifiziert werden.
Entscheidend fr die Anzahl der mglichen Abbauschritte ist die maximal erreichbare Ausbeute pro
Schritt. Bei einer durchschnittlichen Ausbeute von 98 % konnten EDMAN und BEGG vom Myoglobin des
Buckelwales die Sequenz der ersten 60 Aminosuren aufklren. Die Ausbeuten werden jedoch progressiv
mit fortschreitendem Abbau geringer, so dass lngere Peptidketten vorher selektiv chemisch oder
enzymatisch gespalten werden mssen. In der Regel werden Proteinsequenzen von maximal 20 - 40
Aminosuren analysiert. Aus den sich ber lappenden Partialsequenzen mu dann auf die Gesamtsequenz
289
290
11. Proteine
des Peptides geschlossen werden. Fr die Ermittlung der Sequenz einer Kette des IgM aus 576
Aminosuren muten dazu fast 600 Peptidfragmente untersucht werden.
In den frhen siebziger Jahren wurde ein Sequenzier-Automat nach dem Konzept eines FestphasenProteinsequenzers [R.A. LAURSEN, 1971] entwickelt. Solcher besitzt als Reaktionsgef fr die EDMAN Reaktion eine mit einem speziellen Gelmaterial gefllte Reaktorsule, an dem das Protein kovalent
gebunden ist und mit den Abbaureagenzien und Lsungsmitteln durchsplt wird. Obwohl dieser
Sequenatortyp gegen ber dem ersten aufgrund der kovalenten Proteinanbindung einen geringeren
Auswaschfehler ergibt, konnte er sich nicht als Standard durchsetzen.
Bei den Gasphasen-Proteinsequenzern, einer neuen Generation von Sequenatoren, werden flchtige
Basen (z.B. Triethylamin), welche die Kupplung des Phenylisothiocyanats an den N-Terminus
katalysieren, und flchtige Suren (Trifluoressigsure TFA) zur Katalyse der Abspaltungsreaktionen
gasfrmig in die Reaktionskammer eingeleitet. Die Probe wird auf einem kleinen Glasfaserfilter
appliziert. Dieser 1981 kommerziell auf den Markt gebrachte Sequenatortyp lste innerhalb weniger Jahre
alle Sequenatoren frherer Art in proteinchemischen Laboratorien ab und erlaubte erstmals Sequenzbestimmungen von Proteinen im Bereich von 100 pmol. Heute lassen sich mit den modernsten Maschinen
sowohl Gasphasen- als auch Pulsed-Liquid-Phase-Sequenzierungen, bei denen als Weiterentwicklung die
Trifluoressigsure (TFA) flssig [pulsed-liquid] zugegeben wird, im untersten Picomolmastab durchfhren [Mikrosequenzierung]. Es konnten noch PTH-Aminosuren in Mengen von 200 Femtomol
nachgewiesen werden. Schlielich wurde auch der letzte Schritt des Prozesses, nmlich die
Identifizierung, simultan durch on-line-Anschlu einer HPLC-Anlage automatisiert. Die in jedem Schritt
abgespaltene Aminosure wird z.B. in ein UV-detektierbares Derivat berfhrt und mittels HPLC
abgetrennt und detektiert. ber die Retentionszeit lt sich eine Zuordnung zur entsprechenden
Aminosure treffen. Da der Abbau nicht zu 100 % erfolgt, wird in den jeweils folgenden Abbauschritten
die Interpretation des Chromatogramms von Schritt zu Schritt schwerer. Moderne Auswertesysteme
bercksichtigen jedoch diesen unvollstndigen Abbau, Auswertungen von mehr als 60 Abbauzyklen sind
heute mit grter Sicherheit mglich geworden.
Proteinanalytische Mikromethoden sind vor allem dort unverzichtbar, wo nur kleinste Mengen an
Substanz identifizert werden, z.B. bei der Untersuchung von Virusprotein und Proteinen, die an der
Genregulierung beteiligt sind.
290
291
11. Proteine
CH
R2
O
C
H
N
R1
O
Fluoracetylierung
F3C
CH COOH
H
N
Veresterung
CH C
H
N
S1
S4
S2 +
R1
Deuterierung (LiAlD4)
F3C
Silylierung
H
CD2 N CH
S'1+
R2
CH
OCH3
S3 +
R2
H
CD2 N
CH
CD2
OSi(CH3)3
S'2+
Da grere Peptide zu viele Fragmentionen liefern, werden Polypeptide zuvor durch Hydrolyse in
mglichst viele verschiedene Oligopeptide gespalten, deren Trennung zweckmig nach Derivatisierung
durch Gaschromatographie erfolgt. Die Gesamtsequenz des Polypeptids lt sich dann nach dem
"Domino"-Prinzip aus den ermittelten Sequenzen der kurzen Oligopeptide zusammensetzen.
Trp-Ile
Trp-Ile-Thr
Ile-Thr-Lys
Thr-Lys
Thr-Lys-Glu
Kombination von Gaschromatographie und
Lys-Glu
Massenspektroskopie aus den Partialsequenzen
Glu-Glu
sich berlappender Oligopeptide
Glu-Glu-Tyr
Glu-Tyr
Glu-Tyr-Asp
Tyr-Asp
Tyr-Asp-Glu
Tyr-Asp-Glu-Ala
Asp-Glu
Asp-Glu-Ala
Glu-Ala
Ala-Gly-Pro
Gly-Pro
Pro-Ser
Ser-Ile
Ser-Ile-Val
Ser-Ile-Val-His
Ile-Val
Arg-Lys
Lys-AEtCys
Lys-AEtCys
Lys-AEtCys-Phe
291
292
11. Proteine
AEtCys-Phe
Trp-Ile-Thr-Lys-Glu-Glu-Tyr-Asp-Glu-Ala-Gly-Pro-Ser-Ile-Val-His-Arg-Lys-AetCys-Phe
Abb. 11-13. Ermittlung der Sequenz des C-terminalen Eicosapeptids von Actin (nach NAU, KELLEY und
BIEMANN).
Mit MS/MS-Experimenten und DADI-Massenspektrometrie [direct analysis of daughter ions], die den
Nachweis der konsekutiven Bildung von Moleklfragmenten erlauben, kann die Strukturanalyse
periodisch aufgebauter organischer Molekle erfolgen. Durch die Registrierung von Tochterionen lt
sich bei kleineren Oligopeptiden aus dem DADI-Spektrum direkt die Sequenz ableiten.
O
H
N
O
H
N
N
H
O
O
H
N
N
H
O
CF3
M+ 638
593
582
565
536
508
465
437
357
314
286
Durch weiche Ionisierung wie im Falle von FAB [fast atom bombardment] wird aus dem Massenspektrum von Oligopeptiden auer den Quasimoleklionen wenig weitere Strukturinformation durch
Fragmentierung erhalten. Durch stoinduzierte Fragmentierung des (M+H)+-Ions ist jedoch auch die
Sequenzanalyse mglich. (Abb. 10-15 zeigt das Tochterionenspektrum des (M+H)+-Ions des Tetrapeptids
Met-Arg-Phe-Ala).
292
293
11. Proteine
Abb. 10-15. Tochterionenspektrum des (M+H)+-Ions m/z = 524 des Tetrapeptids Met-Arg-Phe-Ala (nach
R. SCHUBERT).
Durch Elektrospray- [ESI] oder MALDI-Ionisierung [matrix assisted laser desorption ionisation] lassen
sich auch Moleklionen hhermolekularer Peptide mit Massen bis zu 100.000 Da nachweisen. Da
aufgrund der schonenden Ionisierung bzw. Desorption Ionen-Fragmentierungsprozesse unterdrckt
werden, mu durch Stoaktivierung [post source decay], also Fragmentinduktion "hinter der Ionenquelle", erst ein Zerfallsspektrum generiert und damit Strukturaussagen ermglicht werden. Auch die
mehrfach-geladenen intakten Moleklionen aus einer ESI-Quelle lasssen sich zum Zerfall anregen und
MS/MS-Spektren registrieren. Bei greren Peptiden fhrt die Leitersequenzierung unter Ausntzung der
EDMAN-Chemie zum Erfolg. Es werden Peptidleitern synthetisiert, ein Satz von Peptiden, die jeweils um
eine Aminosure verkrzt sind. Aus den Massendifferenzen lt sich die Proteinsequenz bestimmen.
In vielen Peptiden sind jeweils zwei Cystein-Molekle ber eine Disulfidbrcke zu Cystin verknpft. Die
Spaltung solcher S-S-Brcken kann reduktiv oder oxidativ erfolgen. Zur reduktiven Spaltung verwendet
man Mercaptoethanol oder Thioglykolsuresalze. Die Reaktion ist reversibel, durch Oxidation mit
Luftsauerstoff werden die Disulfidbrcken wiederhergestellt (vgl. Dauerwelle, 9.1.2). Die bei der
Reduktion entstandenen SH-Gruppen lassen sich mit Jodessigsure zu R-S-CH2-COOH fixieren. Die
oxidative Spaltung mit Perameisensure fhrt zu Sulfonsuren.
NH
NH
CH CO NH
CH2
S
S
CH2
CH CO NH
NH
HCOOH
CH CO
CH2
SO3H
NH
NH
SO3H
CH2
CH CO
NH
293
294
11. Proteine
Relativ kurze Peptide knnen in der Regel leicht mit HPLC gereinigt und direkt durchsequenziert werden.
Lngere Polypeptide mssen hingegen fragmentiert und die entstandenen Peptidmischungen getrennt
werden. In der Sequenzanalyse werden mit Peptidasen oder surekatalysiert kleine Bruchstcke
hergestellt [statistische Spaltung] und miteinander kombiniert. Ob spezifisch spaltende Enzyme oder
chemische Spaltung mit Bromcyan oder verdnnten Suren verwendet werden sollen, wird vom
jeweiligen Protein und der Trennbarkeit der entstehenden Peptidfragmente diktiert. Inzwischen sind
jedoch auch die Methoden der Sequenzanalyse von Desoxyribonucleinsuren so weit perfektioniert, dass
es bei lngeren Proteinen zur Ermittlung der Primrstruktur hufig einfacher ist, das entsprechende
Strukturgen des Proteins zu isolieren, dessen Nucleotidsequenz zu ermitteln und daraus die
Aminosuresequenz des Proteins abzuleiten. Auf diese Weise wurde z.B. die Primrstruktur der
Interferone bestimmt.
Vielfltige Anwendungen findet die Proteinsequenzierung dennoch noch immer bei der Herstellung neuer
Proteine in der Pharmakologie und Biotechnologie. Sie ist unverzichtbar fr viele moderne Projekte der
Biologie, Biochemie und Medizin. Im "Atlas of Protein Sequences" werden seit 1966 jhrlich die
aufgeklrten Primrstrukturen von Proteinen verffentlicht. Das bisher grte in seiner Primrstruktur
aufgeklrte globulre Protein ist ein monoklonales IfM-Immunoglobulin mit einer Molmasse von 935.000
[HILSCHMANN].
Proteine haben eine Vielzahl lebenswichtiger Aufgaben zu erfllen. Als Biokatalysatoren [Enzyme, Kap.
11] katalysieren sie Synthese und Aufbau von Zellbestandteilen, als Struktur und Funktionselemente sind
sie wesentlicher Bestandteil aller Zellen, der Membranen, des Sttz-, Muskel- und Bindegewebes. Als
Regulationsstoffe stimulieren sie wichtige Reaktionsablufe und spielen eine wesentliche Rolle bei der
Zelldifferenzierung. Zahlreiche Proteine und Peptide spielen eine Rolle bei der Genkontrolle und bei
neurobiologischen Prozessen. G-Proteine sind fr die Signaltransduktion verantwortlich. Die Immunoglobuline dienen bei Wirbeltieren zur Abwehr krperfremder Stoffe. Unter den immunologisch
wirksamen Proteinen besitzen die Antikrper eine groe therapeutische und diagnostische Bedeutung.
Bestimmte Proteine ermglichen den Transport und die Speicherung von Metallen oder Sauerstoff.
Strukturgebundene Membranproteine dienen fr den aktiven Transport durch biologische Membranen.
Bestimmte Peptide knnen Krankheitserreger sein oder ben eine toxische Wirkung auf andere
Organismen aus. Zu letzteren zhlen verschiedene tierische, mikrobielle oder pflanzliche Toxine.
11.6.1 Neuropeptide
294
295
11. Proteine
Proctolin ist ein aus fnf Aminosuren bestehendes Neuropeptid (Neurotransmitter) aus Insekten, das
z.B. bei der Schabe Periplaneta americana das Verdauungssystem und verschiedene Muskelsysteme
anregt, aber auch bei anderen Wirbellosen und sogar Sugetieren Wirkung zeigt.
Arg Tyr Leu Pro Thr
11.6.2 Immunoglobuline
Immunitt ist die spezifische Antwort des Krpers auf das Eindringen krperfremder Substanzen, ein
Bestandteil ist die Produktion von Antikrpern. Die Substanzen, die die Immunantwort auslsen,
bezeichnet man als Antigene. Antigene sind krperfremde, natrliche oder synthetische Makromolekle,
vor allem Proteine und Polysaccharide sowie Oberflchenstrukturen von krperfremden Partikeln. Sie
lsen in vivo eine Immunantwort aus, deren Bestandteil die Produktion von Antikrpern ist. Die
erforderliche Mindestmolmasse zur Antigenaktivitt hngt stark von der Struktur ab. Synthetische
Polypeptide mit einer Molmasse > 4 - 5.000 wirken schon immunogen.
Es lt sich jedoch auch eine Immunantwort gegen niedermolekulare Verbindungen auslsen, wenn diese
an ein Makromolekl gebunden sind. Diese meist kovalent gebundenen niedermolekularen Verbindungen
bezeichnet man als Haptene. Sowohl gegen die Antigene als auch die freien Haptene werden im
Organismus spezifisch reagierende lsliche Proteine, die Antikrper [humorale Immunantwort] oder aber
spezifisch reagierende Zellen mit plasmamembranbestndigen Antikrpern, die sog. sensibilisierten
Lymphozyten [zellulre Immunantwort], gebildet.
Die Immunoglobuline sind spezifische, krpereigene Abwehrproteine, die als Antikrper bezeichnet und
von bestimmten Lymphozyten nach Kontakt mit Antigenen gebildet werden. Die Gruppen des Antigenmolekls, die die spezifische Bindung an die Antikrper- oder antikrperhnlichen Strukturen an der
Oberflche der Lymphozyten bewirken, bezeichnet man als determinante Gruppen.
Die Immunoglobuline sind Glykoproteine mit einer Molmasse ber 150.000, die glykosidische Bindung
wird mit Heteropolysacchariden eingegangen. Sie kann z.B. N-glykosidisch an Asparagin oder
glykosidisch zu Serin oder Threonin erfolgen. Der Proteinanteil gehrt zur Gruppe der sphrischen
295
296
11. Proteine
Erste Hinweise auf die Struktur der Immunoglobuline konnten durch selektive Spaltung erzielt werden.
1958 konnten RODNEY und PORTER das Immunoglobulin G [IgG] enzymatisch mit Papain in zwei
Fragmente spalten, die im Molverhltnis 1:2 anfielen. Das eine Fragment war kristallisierbar (Fc), das
andere noch antigen-binden (Fab). EDELMAN gelang eine Spaltung des IgG durch Reduktion der
Disulfidbrcken in Gegenwart denaturierender Agentien wie Harnstoff. Bei dieser reduktiven Spaltung
wurden zwei schwere (heavy) und zwei leichte (light) Ketten (L- und H-Ketten) gebildet.
Durch Vergleich der Primrstruktur der Immunoglobulinketten von Wirbeltieren wurde wahrscheinlich
gemacht, dass die -Kette (Tab. 10-7) vor etwa 400 Millionen Jahren entstanden ist. Die -Kette soll vor
etwa 300 Millionen Jahren, die -Kette vor etwa 200 Millionen Jahren von der -Kette abgegrenzt
worden sein.
11.6.3 Lectine
Lectine sind krpereigene Proteine, jedoch sonst vorwiegend pflanzlicher Herkunft, die spezifisch
bestimmte Kohlenhydrate binden knnen (Tab. 11-8), aber weder Enzyme noch Antikrper sind. Da sie
auch an Zellen mit Glykokonjugaten wie z.B. Erythrozyten zu heften und sie zu agglutinieren vermgen,
wurden Lectine [lat. leggere = auswhlen] frher auch als Phytoagglutinine oder Hmagglutinine
bezeichnet. Die meisten Lectine sind Glykoproteine mit ein oder meist mehreren Polypeptidketten,
charakteristisch ist der hohe Anteil an Aspartinsure, Asparagin, Serin und Threonin. Einige Lectine
enthalten Metallionen. Lectine wurden ursprnglich in Pflanzen entdeckt, sind jedoch in allen lebenden
Organismen weit verbreitet (Tab. 10-8). So kommen agglutinierende Proteine auch in Pilzen, Schnecken,
296
297
11. Proteine
Fischeiern, Amphibien und anderen Tieren vor. 1985 sind Lectine in menschlichen Tumoren
nachgewiesen worden.
Blutgruppenspezifitt (S. )
-L-Fuc
-D-Gal
-D-Gal
-D-GalNAc
B
A
-Neu
L-Rha
In hheren Pflanzen sind Hunderte von Lectinen gefunden worden, lectinhaltig sind viele Fabaceen wie
Bohne, Erbse, Linse, Erdnuss, Sojabohne oder Paternostererbse, wo sie vor allem in den Samen lokalisiert
sind. Die Molmasse, der molekulare Aufbau und die Spezifitt gegenber Zuckern der LeguminosenLectine knnen sich erheblich unterscheiden, jedoch sind ihre Aminosuresequenzen weitgehend
homolog. Selbst zwischen taxonomisch entfernt stehenden Familien findem man Homologien, so ist das
Ricin homolog mit dem Trichosanthin, dem in der chinesischen Volksmedizin eingesetzten Wirkstoff aus
dem Krbisgewchs Trichosanthus kirilowii. Ausserdem ist Ricin mit dem Schleimpilz-Lectin Discoidin
homolog.
Das erste Lectin, dessen Sequenz und rumliche Struktur aufgeklrt werden konnte, ist das
kohlenhydratfreie Samenprotein Concanavalin A [Con A] aus der Schwert- oder Madagaskarbohne
[Canavalia ensiformis, jack bean]. Unter physiologischen Bedingungen existiert das Metalloprotein
Concanavalin A als Tetramer, bei einem pH < 6 vorzugsweise als Dimer. Jede Untereinheit besteht aus
237 Aminosuren und enthlt je ein Mn2+-, Ca2+-Ion und eine bindende Stelle fr Kohlenhydrate.
Aufgrund seiner Affinitt zu bestimmten Oligosacchariden kann Concanavalin als Hilfsmittel zum
Nachweis dieser Kohlenhydrate und zur Affinittschromatographie eingesetzt werden.
297
298
11. Proteine
Am lngsten bekannt ist das toxische Glykoprotein Ricin, das bereits 1888 [H. STILLMARK] aus RicinusSamen [Ricinus communis] isoliert werden konnte. Es besteht aus zwei Ketten (A-Kette: Molmasse
30.000, B-Kette: Molmasse 35.000), die ber eine Disulfidbrcke miteinander verbunden sind. Die als
Haptomer bezeichnete Untereinheit B ist fr die Anlagerung an bestimmte galactosehaltige Glykosidreste
an der Zelloberflche verantwortlich. Dadurch wird es der Untereinheit A [Effektomer] ermglicht, in die
Zelle einzudringen und dort die Proteinbiosynthese zu inhibieren. Neben dem toxischen Ricin ist im
Ricinussamen noch das hnlich gebaute, aber untoxische Ricinus-Agglutinin RCA I enthalten.
Die Lectine besitzen eine groe Bedeutung fr die Untersuchung dynamischer Prozesse der Zelloberflche. Durch die Bindung der Lectine an die Lymphozytenoberflche werden Mitose und Inmunoglobulinproduktion induziert. Bakterien heften sich ber ihre Lectine an Wirtszellen an. Lectinvermittelte
Adhsion scheint auch bei der Symbiosenlenkung bei Mikroorganismen und Pflanzen eine Rolle zu
spielen. Auch die Wurzelknllchenbildung zur N2-Fixierung bei Leguminosen luft unter Beteiligung von
Lectinen ab.
Von einigen Autoren werden die Lectine als Speicherprotein angesehen, es ist jedoch auch denkbar, dass
sie berhaupt keine Funktion besitzen, da auch lectinfreie Varianten existieren. Viele Lectine sind fr
hhere Organismen toxisch, auch die Gartenbohne Phaseolus vulgaris ist in rohem Zustand giftig.
In Zusammenhang mit der Rolle der intrazellulren Calciumionen als "second messenger" wurden Cabindende Proteine [intrazellulre Ca-Rezeptoren] interessant. Die wichtigsten Ca-bindenden Proteine
sind das Calmodulin in den nicht-muskulren Geweben und das Proponin C in der quergestreiften
Muskulatur.
Calmodulin reguliert die Aktivitt zahlreicher Enzyme (Kinasen, Phosphatasen). Aus Rinderhirn
isoliertes Calmodulin enthlt 148 Aminosuren, davon ca. 1/3 saure Aminosuren (Aspartin-, Glutaminsure). Bemerkenswert ist das Vorkommen der seltenen Aminosure Trimethyllysin, die terminale
Aminogruppe ist acetyliert. Die Flexibilitt wird durch Disulfidbrcken nicht eingeschrnkt. Calmodulin
enthlt 4 Ca-bindende Domnen, die Ca-Bindung fhrt zu Vernderungen der rumlichen Struktur.
Hinsichtlich der Struktur (ca. 50% Homologie) und Ca-Bindungsvermgen ist das Troponin C dem
Calmodulin nahe verwandt.
299
11. Proteine
Erst im vorigen Jahrzehnt wurde postuliert, dass gewisse schon lange bekannte Gehirnerkrankungen wie
z.B. die fr Schafe und Ziegen tdliche Scrapie-Krankheit und das Creutzfeldt-Jakob-Syndrom [CDJ] des
Menschen nicht durch die blichen Krankheitserreger, also Viren, Bakterien und Parasiten, sondern durch
proteinartige Erreger, sog. Prionen [proteinaceous infectious particle], verursacht werden. Auch die
Britische Rinderseuche BSE [bovine spongiforme Enzephalopathie] wird etwas spter als PrionenKrankheit klassifiziert. Mageblich zur Formulierung dieses neuen Erregertyps waren die fr ein Virus
untypische, besonders lange Inkubationszeit ["slow virus"], die Kleinheit des Objekts, die eine
elektronenmikroskopische Entdeckung verhinderte ["subviral"], das Unterbleiben einer Immunantwort
und die ausgesprochene Unempfindlichkeit gegenber chemischer und physikalischer Beeinflussung.
S.B. PRUSINER [Nobelpreis 1997] et al. fanden 1991 als Hauptkomponente des Erregerproteins die
vernderte Form eines natrlichen zellulren Proteins PRP-C [Prionprotein - zellulre Form] mit dem
Molekulargewicht 33.000 - 35.000. Mit der Kenntnis der Gensequenz konnte nachgewiesen werden, dass
jeder Organismus das Prion-Protein in der ungefhrlichen zellulren Form produziert. Chemische Unterschiede in der Aminosuresequenz konnten nicht gefunden werden, gleich ob das Material aus einem
infizierten oder gesunden Organismus stammte. Man geht davon aus, dass das in der zellulren, lslichen
PRP-C-Form im Organismus produzierte Protein im Erreger in der unlslichen sog. Scrapie-Form PRPSc akkumuliert wird. Die Umwandlung von PRP-C- zur PRP-Sc-Form wird durch Konformations- und
Sekundrstrukturnderung und Aggregation zu Oligomeren bewirkt. So besitzt PRP-C 45 % -Helixstruktur und praktisch keine Faltblattstruktur, das abnormale PRP-SC hingegen 45 % Faltblatt- und nur
noch 30 % -Helixstruktur. Die infektise PRP-Sc-Form kann mit einem natrlichen PRP-C dimerisieren
und nachfolgend der zellulren PRP-C-Form ihre eigene Form aufzwingen und so in einem katalytischen
Zyklus die infektisen Partikel vermehren. Diese Reproduktion Protein Protein verletzt damit das
zentrale Dogma der Molekularbiologie, wonach Nucleinsuren als Matrizen fr die Replikation
unerllich sind. Im Falle der Prionen-Erkrankungen knnte ein einziges Molekl fr die erblichen und
die spontanen Formen der Krankheiten verantwortlich sein.
Eine Vielzahl natrlicher Toxine besitzt Peptidstruktur. Dazu zhlen Schlangengifte, Gifte von Weichtieren, Skorpionen, Insektengifte, Toxine mancher Giftpilzarten und bakterielle Toxine. Im folgenden
sollen nur einige "klassische" Gifte abgehandelt werden, detaillierte Darstellungen verschiedener
Pflanzen- und Tiergifte sind im Kap. 15.(Alkaloide) zu finden.
299
300
11. Proteine
11.6.6.1 Schlangengifte
Die Schlangengifte enthalten neben Enzymen Peptide, die meistens aus etwa 60 bis 75 Aminosuren
bestehen und deren Peptidketten gefaltet und durch Cysteinbrcken fixiert sind. Sie weisen neurotoxische
und cardiotoxische Wirkungen auf. Die hnlichkeit der Sequenz der Neurotoxine und Cardiotoxine lt
vermuten, dass sich beide Gruppen aus einem gemeinsamen Vorlufer-Protein entwickelt haben.
Chemisch verwandt mit den Cardiotoxinen der Schlangen sind die Gifte der Skorpione. Neben den
spezifischen Toxinen sind in den Rohgiften Enzyme enthalten, z.B. Phospholipasen, Peptidasen,
Proteasen. Auch sie wirken stark giftig, indem sie zu Blutdruckabfall, Strung der Blutgerinnung oder zur
Zerstrung von Blutgefen fhren.
Die giftigeren Neurotoxine werden je nach ihrem Angriffsort in postsynaptische (Angriff an der postsynaptischen Membran am Acetylcholin-Rezeptor, -Typ) und prsynaptische Neurotoxine (Angriff an
der prsynaptischen Membran, -Typ) unterteilt. Besonders gut sind die Neurotoxine des -Typs untersucht, zu denen die Toxine der Giftnattern [Elapidae] gehren. Bei diesen Toxinen, die einen Nterminalen Isoleucin- oder Methionin-Rest enthalten, werden aufgrund von Unterschieden in der
chemischen Struktur wiederum zwei Typen (I und II) unterschieden [TU, YANG]. Neurorotoxine vom Typ
I sind Polypeptide der Molmasse 6.700 bis 7.000, die 61 - 62 Aminosuren mit 4 Disulfidbrcken
enthalten. Neurotoxine vom Typ II besitzen eine Molmasse > 7.800. Sie bestehen aus 71 - 74 Aminosuren mit 5 Disulfidbrcken. In einer australischen Giftnatter wurde daneben noch ein Neurotoxin
gefunden, das aus 119 Aminosuren aufgebaut ist. Seeschlangen [Hydropheidae] enthalten nur Neurotoxine vom Typ II. Die Peptidgifte der Ottern [Viperidae] und Nattern [Colubridae] besitzen hhere
Molmassen (16.000 - 21.000).
Neurotoxine der Typen I und II verschiedener Tierspezies und verschiedener geographischer Herkunft
hneln sich sehr in ihrer Struktur. Obwohl beim Typ II zwei zustzliche Cysteinreste vorhanden sind, ist
die Lage der anderen Cysteinreste bei Vertretern beider Typen nahezu identisch.
Die -Neurotoxine besitzen grere Molmassen (20.000 - 22.000) als die -Neurotoxine. N-terminal
befindet sich ein Aspartinsure- oder Asparagin-Rest.
Die uerst giftige Giftnatter Bungarus ulticinctus [Elapidae] produziert sowohl ein - als auch ein Neurotoxin [- und b-Bungarotoxin]. -Bungarotoxin, dessen Primrstruktur in Abb. 10-18
wiedergegeben ist, lagert sich an den Acetylcholin-Rezeptor an und hemmt die neuromuskulre
bertragung des Nervenimpulses.
300
301
11. Proteine
Abb. 10-18. Primrstruktur des -Bungaratoxins aus der Giftnatter Bungarus ultinctus.
Abb. 10-19 und Abb. 10-20 zeigt die Sequenz des Cobratoxins und des -Toxins aus Naja nivea.
Der Hauptbestandteil des Giftes von Klapperschlangen [Crotalidae] ist der Polypeptid-Komplex Crotoxin
mit einem MG von ca. 30.000. Als eigentliche Neurotoxine des Crotoxins betrachtet man das Crotactin
(enzymfrei) und das Crotamin, ein Polypeptid vom MG 10.000 - 15.000. Die Vergiftung fhrt lokal zu
Schmerzen, Rtung und Nekrose, systemische Folgen sind Mdigkeit, Kollaps und Schock bis zum Tod.
Erabutoxine sind tdlich giftige Polypeptid-Neurotoxine der Seeschlange Laticauda semifasciata mit
jeweils 62 Aminosureeinheiten.
Conotoxine sind Peptidgifte aus Kegelschnecken [Conidae] tropischer und subtropischer Meere. Die
Schnecken stechen zum Beutefang mit Hilfe harpunenartiger Giftzhnchen, die mit Neurotoxinen beladen
sind. Die Stiche sind sehr schmerzhaft, gefolgt von Taubheit, in schweren Fllen tritt Muskellhmung ein.
Todesflle beim Menschen infolge Herzversagen sind fr Conus geographus, C. textile und C. tulipa
bekannt. Bei den Conotoxinen kennt man ber 10 verschiedene Verbindungen mit 13 bis 27 Aminosuren.
H Glu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Gly Arg His Tyr Ser Cys NH2
Conotoxin G1
11.6.6.3 Bienengift
Das Bienengift enthlt verschiedene Enzyme [Hyaluronidase, Phospholipase A] sowie als Hauptbestandteil das basische Polypeptid Melittin. Am C-terminalen Ende sind vier von fnf basischen
Aminosuren positioniert, und die meisten Aminosuren mit hydrophoben Seitenketten sind zentral bzw.
301
302
11. Proteine
am N-terminalen Ende lokalisiert. Durch diese ungleichmige Verteilung der Aminosuren besitzt
Melittin den Charakter einer oberflchenaktiven Verbindung, die Erythrozyten hmolysieren kann.
Bei den Giften des Grnen Knollenbltterpilzes Amanita phalloides handelt es sich um bicyclische Heptapeptide [Phallotoxine] bzw. Octapeptide [Amatoxine], die sich hinsichtlich ihrer biologischen Wirkung
und ihrer chemischen Struktur unterschieden.
Die Phallotoxine wirken bereits nach relativ kurzer Zeit, die Gruppe der Amatoxine wirkt erst nach
einigen Tagen. Zu letzteren gehrt auch die toxischste Verbindung, das -Amanitin. -Amanitin dringt in
die Leberzellen ein und hemmt dort die DNS-abhngige RNS-Polymerase. Amatoxine und Phallotoxine
sind kochfest und recht stabil, sie werden auch durch Trocknen der Pilze nicht zerstrt und gehen nicht in
das Kochwasser ber. Ein sehr wirkungsvoller Test zum Erkennen Amatoxin-haltiger Pilze ist der
WIELANDsche Zeitungstest. Dabei wird Pilzsaft auf eine unbedruckte Stelle einer Zeitung gebracht und
mit Salzsure befeuchtet. In Gegenwart von wenigen Mikrogramm Amatoxin erscheint nach 5 bis 10
Minuten ein blauer Farbfleck, der das Produkt einer Farbreaktion von Komponenten aus dem Fichtenholzlignin des Papiers und dem Indolanteil der Pilzgifte darstellt.
Fr die Giftwirkung essentiell ist eine Sulfidbrcke, die durch Kupplung der Mercaptogruppe eines
Cysteins mit dem Indolrest des Tryptophans gebildet wird. Bei den Amatoxinen ist das S-Atom zum
Sulfoxid oxidiert. Wesentlich fr die Wirkung der Amatoxine ist die Anwesenheit von -hydroxyliertem
Isoleucin. Amanullin z.B. ist ungiftig.
302
303
O
H
H3C C
H
N
H
C
H
H
N
N
H
H2C
S
H
CH N
HC
H
C
R1
Name
R1
H
N
CH3
CH3
R3
Phalloidin
CH(OH) CH2OH
CH3
CH3
CH3
Phallisin
CH(OH) CH2OH
CH3
CH(OH) CH2OH
CH3
CH3
CH3
Phallicidin
R2
CHR1 CH2R2
O
H H
C
CH C N C
R3
CH(OH) CH3
CH3
O HC OH
Phallotoxine
R2
Phalloin
NH
OC
C
N
H2
C
H2C
NH
11. Proteine
COOH CH(CH3)2
H3C CH
HN
NH
CH3
O S
N
O C
C O
CH2
H2C
CO
H
N
CH2
O
C CH
H
N
CH
H
N
H2C
HC CH
OH
CH3
O C
N
H
COR
Amatoxine
C
O
CH2
Name
R1
R2
R3
-Amanitin
-Amanitin
OH
OH
NH2
OH
-Amanitin
OH
OH
OH
H
NH2
Amanullin
NH2
NH
Aus den Pilzen wurden, insbesondere durch die Arbeitsgruppen H. und TH. WIELAND, zahlreiche Giftstoffe, biologisch inerte Cyclopeptide und das gegen das Gift Phalloidin wirkende Cyclodecapeptid
Antamanid isoliert.
O H2C
C N CH
N
H
C O
H H
N C C N
O CH2
H2C
O
C N CH C N CH C N
H
H
O C O
H H
H H
C C N C C N C N
O CH2 O
O
Die Virotoxine stellen neben Phallotoxinen und Amatoxinen eine weitere Giftklasse der Knollenbltterpilze dar. Es sind monocyclische Heptapeptide mit dem Haupttoxin Viroisin.
O
C
H3C
H
N
H2
C
CH2OH
H
N
H
C
CH
NH
HN
H2
C
C R1
OH
2
CH R
C O
HO
HO
O
N
O
CH
H
N
CH2OH
C
H3C
C
H
C
O
NH
Viroisin
CHOH
303
304
11. Proteine
Den Peptidtoxinen des Grnen Knollenbltterpilzes hneln die Gifte der Schleierlinge [Gattung
Cortinarius], die frher als Speisepilze galten. Vertreter dieser Gifte sind die Cortinarine A, B und C.
Mit Viscotoxin wird das toxische Prinzip aus Misteln [Viscum album] bezeichnet. Es zhlt zu den
Thioninen, stark basischen pflanzlichen Polypeptiden, und besteht aus fnf basischen Polypeptiden mit
einem MG von ca. 5.000.
O
Phe N
H
CH
Val
CH2
Lys R
Orn
S
Gly
N
H
Thr
Leu
CH2
NH He
C
H
Die bakteriellen Toxine werden in Endo- und Exotoxine eingeteilt. Die Endotoxine entfalten ihre toxische
Wirkung erst nach dem Absterben oder durch Autolyse (z.B. im Darm) der Bakterien. Bei den
klassischen Endotoxinen handelt es sich um Lipopolysaccharide (Kap.
). Im Unterschied zu den
Endotoxinen werden die Exotoxine [auch Enterotoxine oder Ektotoxine] von den Bakterien in die
Umgebung abgegeben. Hierbei handelt es sich um toxische Proteine, die vor allem von gram-positiven
Bakterien produziert werden und meist die Darmwand angreifen. Hufig entstehen die eigentlichen
Toxine erst nach der Einwirkung proteolytischer Enzyme auf Protoxine, wie z.B. bei den hochtoxischen
Botulinustoxinen von Clostridium botulinum. Weitere prominente Vertreter sind u.a. das Tetanustoxin,
das Diphtherietoxin sowie die Enterotoxine (25.000 - 30.000 Da) von Staphylococcus aureus.
Das Tetanustoxin [Tetanospasmin] wird von dem grampositiven Stbchenbakterium Clostridium tetani
gebildet und verursacht den Wundstarrkrampf [Tetanus]. Dieses Toxin, das zweitstrkste bakterielle Gift,
ist ein Protein mit 150.000 Da und besteht aus zwei Untereinheiten, von denen sich eine an die Zellmembran bindet und die andere die eigentliche Toxinwirkung entfaltet.
304
305
11. Proteine
der Zelloberflche und sorgt fr das Eindringen des Fragments A in das Cytoplasma. Das Diphtherietoxin
hemmt die Proteinsynthese in der Zelle.
Eine interessante Struktur besitzt das Cholera-Enterotoxin. Das Protein (84.000 Da) besteht aus drei
verschiedenen Peptidketten (, , ) und weist die Zusammensetzung n (fr n = 4 bis 6) auf. Die
Peptidketten und sind ber eine Disulfidbrcke zur Untereinheit A verbunden, die b-Ketten nichtkovalent zur Untereinheit B. Die Zusammensetzung der Untereinheit B hngt von pH-Wert, von der
Ionenstrke oder der Temperatur ab. Fr die Auslsung der Cholera-Symptome ist die -Kette verantwortlich. Die Untereinheit B ist das Haptomer. Die Bindung des Choleratoxins erfolgt auch an
Rezeptoren verschiedener Glykoprotein-Hormone, wahrscheinlich weil die -Kette des CholeraEnterotoxins (103 Aminosuren) bei den ersten 42 N-terminalen Aminosuren Gemeinsamkeiten mit der
-Kette dieser Hormone aufweist.
Durch Behandlung der Exotoxine mit Formaldehyd geht die toxische, nicht aber die immunogene
Wirkung verloren. Derartige Toxoide werden deshalb als Impfstoffe eingesetzt. Auf antibiotisch wirkende
mikrobielle Peptide (Peptidantibiotika) wird in Kap. eingegangen.
Manteltiere [Tunicata], die einzigen Tiere, die Cellulose aufbauen (fr den Mantel) und Schwermetalle
akkumulieren knnen, produzieren eine Reihe ungewhnlicher Cyclopeptide und Cyclopeptolide mit oft
cytostatischer Wirkung. Hufigleben sie mit Algen in Symbiosen, so dass der eigentliche Produzent der
biologisch aktiven Inhaltsstoffe nicht entschieden werden kann. Viele dieser Cyclopeptide enthalten
anormale optisch-aktive Thiazolin- und Oxazolin-Aminosuren. 1982 wurden die Struktur des Dolastin 3
[G.R. PETTIT] aus dem Manteltier Dolabella auricularia publiziert, und 5 Jahre spter durch
Vertuaschung zweier Aminosuren korrigiert. Die cytostatischen Eigenschaften der Syntheseprodukte
erwiesen sich als weniger aktiv als ursprnglich berichtet. Weitere Vertreter dieser klasse wurden spter
aus dem Manteltier Lissoclinum patella isoliert. Die Didemnine A und B wurden aus dem Tunicat
Trididemnum solidum isoliert, wovon Didemnin B exzellente cytostatische Eigenschaften besitzt.
305
306
11. Proteine
O
Val
Leu
Pro
NH2
S
NH
N
H
NH
HN
R
Dolastin 3
N
O
OH
O
N
HN
O
O
NH
O
Ulicyclamid
NH
N
H
CH3O
O
O
R = H-(R)-MeLeu
Didemnin A
N
R = H-Lac-Pro-(R)-MeLeu Didemnin B
11.6.7 Plasmaproteine
Plasmaproteine sind ein Gemisch von ber 100 Proteinen, die zu etwa 7 - 8 % im Blutplasma
vorkommen. Unter den Plasmaproteinen des Menschen finden sich Albumine, Transferrin, Globuline,
Lipoproteine, Enzyme und die an der Blutgerinnung beteiligten Proteine. Plasmaproteine sind
berwiegend Glykoproteine, ihre Zusammensetzung bzw. Konzentration ist oft klinisch-diagnostisch von
Bedeutung. Plasmaprotein-Prparate haben auch Eingang in die therapeutische Praxis gefunden. Die
Entfernung des Fibrinogens und Prothrombins aus den Plasmaproteinen liefert die Serumproteine.
Viele Oligopeptide besitzen als Hormone und Regulatoren biochemischer und biologischer Prozesse
groe Bedeutung. In einem Teil des Zwischenhirns [Hypothalamus] wurden die ersten Neurohormone
entdeckt, die im tierischen und menschlichen Organismus als Hypothalamushormone aufgrund ihrer
biologischen Relevanz erwhnenswert sind. Sie steuern die Freisetzung der Hormone des
Hypophysenvorderlappens [HVL], welche wiederum die Produktion der Geschlechtshormone (5.
regulieren. Man unterscheidet die freisetzenden Liberine [RH, RF] und die inhibierenden Statine [IR, IF].
Die Konzentration dieser Peptidhormone ist uerst gering (ng-Bereich), zur Isolierung des ersten SchafsLH-RH muten die Zwischenhirne von 300.000 Schlachttieren aufgearbeitet werden.
Ein Beispiel fr diese Neurohormone ist das Tripeptid Thyroliberin aus Glu, His und Pro. Dabei liegt die
N-terminale Glutaminsure als Pyroglutaminsure [Pyrrolid-2-on-5-carbonsure] und das C-terminale
Prolin als Amid vor. Gonadoliberin [Gn-RH] ist ein Decapeptid, das ebenfalls keine N-terminale Amino-
306
307
11. Proteine
und C-terminale Carboxylgruppe besitzt. Bei Gn-RH-Mangel setzt die gonadotrope Hypophysenttigkeit
aus, was zu Strrungen der Fortpflanzungsfhigkeit fhrt.
HH
N
O
N
H
O CONH2
N
HN
Thyroliberin
N
Somatotropin [Wachstumshormon, somatotropes Hormon STH, human growth hormone HGH] frdert
das Knochenwachstum und den Proteinaufbau (anabole Wirkung) und wird heute gentechnologisch hergestellt. Prolactin [PRL, Luteotropin, Luteotropes Hormon, LTH, Mammotropes Hormon] ist ein bei
manchen Tieren gefundenes Peptidhormon aus dem Hypophysen-Vorderlappen, das im weiblichen
Organismus, nach vorhergegangener Konzeption, die Milch-Sekretion anregt, die Gewebevermehrung der
Brustdrsen und die Progesteronproduktion stimuliert. Die Aminosuresequenz des LTH beim Menschen
und anderen Sugern ist bekannt, das Schaf-Prolactin (MG 22.500) besteht aus 199 Aminosuren und drei
Disulfidbrcken.
Corticotropin [Adrenocorticotropes Hormon, ACTH] regt die Nebennieren zur Produktion und Sekretion
der Corticoide an, ist ein stark basisches Polypeptid und besteht aus 39 Aminosuren. Melanotropin
[Melanozyten-stiumulierendes Hormon, MSH] wird bei Tieren im Hypophysen-Mittellappen gebildet und
reguliert die Pigmentbildung der Haut. Von Bedeutung fr die biologische Wirkung des Corticotropins
sind die basischen Aminosuren in den Positionen 15 bis 18 (Lys-Lys-Arg-Arg), Speziesunterschiede
treten in den Positionen 25 bis 33 auf (Formel 11-9). Fr die biologische Aktivitt ist nur ein Teil des
Molekls erforderlich, sie tritt bereits vom N-terminalen Tridecapeptid an auf und steigt mit wachsender
Peptidkette.
Mensch
Schwein
Rind
Schaf
307
308
11. Proteine
H
Cys Tyr
Cys Tyr
Leu
Gln
S
Cys Asn
Phe
S
Oxytocin
Gln
Cys Asn
Vasopressin
Endorphine [endogene Morphine] sind kurzkettige Peptide, die an Schmerzrezeptoren des Zentralnervensystems ZNS angreifen [Opioide], und auf der Suche nach den krpereigenen Liganden fr den tierischen
Opiatrezeptor entdeckt wurden. Sugetiere werden ohne Zweifel ohne Morphin geboren, besitzen aber
dafr spezifische Rezeptoren. Man unterscheidet drei Kategorien dieser Peptide, die pentapeptidischen
Enkaphaline, die Endorphine (von denen das lngste -Endorphin aus 31 Aminosuren besteht) und die
Dynorphine. Die ersten aus Hirnen von Sugern isolierten waren die Enkephaline Methionin-Enkephalin
[Met-Enkephalin] und Leucin-Enkephalin [Leu-Enkephalin, KOSTERLITZ und HUGHES, 1975]. Eine
Vielzahl anderer Opioidpeptide sind seitdem charakterisiert worden. Offensichtlich ist fr die Wirkung
von Enkaphalinanalogen die phenolische OH-Gruppe des Tyrosins essentiell. Dieses Phnomen wird
auch mit Morphin und seinen Analogen beobachtet. Ende der 70er Jahre waren ebenso bereits mehrere
spezifische Opiatrezeptoren bekannt (-Opiatrezeptor, -Rezeptor, -Rezeptor) und dafr auch endogene
Liganden isoliert wie z.B. das Dynorphin fr den -Rezeptor.
308
309
11. Proteine
In den Langerhans'schen Inseln der Bauchspeicheldrse [Pankreas] wird in den -Zellen Glucagon
gebildet und in den -Zellen Insulin (vgl.
sekretiert. Schweineglucagon ist ein lineares Polypeptid aus 29 Aminosuren, das die Gluconeogenese
und den Blutzuckerspiegel steigert, whrend Insulin ihn senkt. Insulin besteht aus zwei Ketten, wovon die
A-Kette aus 21, die B-Kette aus 30 Aminosuren besteht (Molekulargewicht von menschlichem Insulin
M = 5.743). Die beiden Peptidketten sind ber zwei Disulfidbrcken miteinander verbunden.
NH2
NH2
NH2
H2N
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Asp Thr
1
10
15
20
25
29
Schweineglucag
H2N
A-Kette
NH2
NH2
NH2
Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Glu Leu Glu Asp Try Cys Asp
1
10
15
20
S
S
menschliches Ins
B-Kette
Phe Val Asp Glu His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arf Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys
5
10
15
20
25
Die von den Zellen nach aussen abgegebenen Proteine werden meist unmittelbar nach der Biosynthese
durch ein sog. Protein-Processing enzymatisch verkrzt, wobei im ersten Schritt aus Prpro-Proteinen
(z.B. Prprohormonen) durch Abspaltung von Extensionspeptiden (Signalpeptide, bestehen aus ca. 20
Aminosuren) die meist noch biologisch unwirksamen Proproteine (z.B. Prohormone) gebildet werden,
aus denen durch weitere Verkrzung die eigentlich funktionsfhigen Proteine entstehen. Biosynthetisch
entsteht Insulin durch enzymatische Abspaltung einer Schleife aus Proinsulin.
Carnosin [-Alanyl-histidin] ist ein Dipeptid, das im Muskel vorkommt und dessen Bedeutung noch nicht
eindeutig geklrt ist. Glutathion spielt als Coenzym in biologischen Redox-Systemen eine wichtige Rolle.
N
SH
H3N
N
H
O
N
H
OH
O
Carnosin -Alanylhistidin
O
H
N
HO
OH
N
H
NH2
OH
Glutathion
11.6.8 Peptidantibiotika
309
310
11. Proteine
Viele sind cyclisch aufgebaut oder enthalten seltene nichtproteinogene Aminosuren. Die meisten Peptidantibiotika werden in Bakterien, aber auch in Streptomyceten gefunden.
Typische Vertreter cyclischer Peptidantibiotika sind die von Bacillus brevis produzierten cyclischen
Peptide Gramicidin S und Tyrocidin A [
L-Val
L-Orn
L-Leu
D-Phe
L-Pro
L-Val
L-Orn
L-Leu
D-Phe
L-Pro
D-Phe
L-Leu
L-Orn
L-Val
L-Tyr
L-Glu
L-Asp
D-Phe L-Phe
Gramicidin S
L-Pro
Tyrocidin A
Depsipeptide sind Metaboliten aus Bakterien und Pilzen, die sich alternierend aus Aminosuren und
Hydroxycarbonsuren aufbauen und meist cyclische Struktur besitzen.
10.6.9 G-Proteine
M. RODBELL und A.G. GILMAN [Medizin-Nobelpreis 1994] konnten das G-Protein, ein GTP-bindendes,
regulatorisches Protein, das G-Protein, isolieren, das eine fehlende Komponente an der intrazellulren
Wirkung des extrazellulren Adrenalin-Hormonsignals darstellte. Mehrere Grundtypen von G-Proteinen
[Gs, Gi, GP, Go, Transducin, ras-Proteine] sind bekannt. Sie sind nicht nur an der Freisetzung von
cAMP, sondern auch an der Produktion anderer sekundrer Signalstoffe beteiligt. Bakterielle
Infektionskrankheiten wie Cholera und Keuchhusten sind mit chemischen Vernderungen von GProteinen verbunden, auch Erbkrankheiten sind bekannt, die mit defekten G-Proteinen einhergehen.
11.7 Skleroproteine
Die Skleroproteine oder Gersteiweie gehren zu den fibrillren Proteinen und haben vor allem im
tierischen Organismus Schutz- und Sttzfunktionen zu erfllen. Die bevorzugte Ausrichtung in der
Lngsrichtung (Faserbildung) bedingt die groe mechanische Festigkeit und geringe Lslichkeit. In
vielen Fllen sind die Polypeptidketten durch Disulfidbrcken (Keratine), Amidgruppen der Seitenketten
(Fibrin) oder verschiedene Strukturen, die von Lysinresten ausgehen (Formel 10-10), quervernetzt. Die
typischen Skleroproteine (Kollagengruppe, Keratine) sind enzymatisch sehr schwer abbaubar. Die
meisten weichen in ihrer Aminosurezusammensetzung auch deutlich von der anderer Proteine ab. So
kann das Keratin der Haare bis zu 20 % Cystein (Keratin der Haare) enthalten, Kollagen ist besonders
310
311
11. Proteine
reich an Glycin (27 %), Prolin (15 %) und Hydroxyprolin (14 %), und das Fibroin der Seide besteht
hauptschlich aus Glycin, Alanin und Serin.
Sekundrstruktur
Kollagen-Gruppe
0.28 - 0.29 nm
Tripelhelix
0.51 - 0.54 nm
-Keratin, Seiden-.Fibroin
0.65 - 0.70 nm
Faltblattstruktur
10.7.1 Kollagengruppe
Kollagen und das hnlich aufgebaute Elastin sind neben verschiedenen Proteoglykanen (vgl. Kap.
) die
Grundbausteine des tierischen Bindegewebes. Das faserartige Kollagen ist in Haut, Knochen, Knorpeln,
Sehnen und Bindegewebe enthalten und die im menschlichen und tierischen Organismus am hufigste
vorkommende Proteinklasse. Allen 17 bekannten Kollagentypen ist ein tripelhelicaler Aufbau
gemeinsam. Drei Polypeptidketten, von denen mindestens zwei identisch sind, bilden eine Tripelhelix in
Form eines starren Seils (Abb. 10-5). Die Lnge der Tripelhelix sowie Art und Lage nichthelicaler
Bereiche variieren zwischen den einzelnen Kollagentypen, hufig wiederkehrende Sequenzen sind -(GlyAS-Pro)n- und -(Gly-AS-4Hyp)n-.
Kollagen wird durch Erwrmen mit Wasser denaturiert und ist dann enzymatisch abbaubar. Lngeres
Kochen oder chemisch-thermische Verfahren bewirken die Bildung von Gelatine. Dies ist ein als
Nahrungsmittel ungeeignetes Protein, da die essentiellen Aminosuren fehlen. Gelatine bildet in Konzentrationen ber 0.4 % ein Gel, das durch die Ausbildung lokaler Tripelhelix-Strukturen [junction zones]
zustande kommt und beim Erwrmen in eine viskose Lsung bergeht. Gelatinehaltige Produkte kommen
als kalorienreduzierte Nahrungsmittel in den Handel und als Bindemittel in Lebensmittel. Gelatine
verleiht z.B. Gummibrchen den spezifischen Biss. Sie wird als geschmacksneutrales Hllmaterial fr
Pharmaka vewendet, in der Photographie diente Gelatine als Matrix fr lichtempfindliche Silbersalze.
11.7.2 Keratine
Die Keratine stellen bei den Wirbeltieren die Gerstsubstanz der Haare, Wolle, Hrner, Ngel und Federn
dar. Man unterscheidet Keratine vom - und -Typ, die des -Typs liegen vorwiegend als Helices, 311
312
11. Proteine
Keratine hingegen in Faltblattstrukturen vor. Beide Typen knnen ineinander bergehen. Das Dehnen des
Haares z.B. bewirkt einen bergang von -Keratin -Keratin). Zu den auch als harte Keratine
bezeichneten -Keratinen gehren vor allem die Keratine der Ngel, Federn und Schuppen.
Zu den -Keratinen gehrt das Keratin der Wolle. Die aus a-Helices gebildeten Fasern sind bis auf ihre
doppelte Lnge ausdehnbar und ungewhnlich elastisch, reissen aber relativ rasch. Mehrere -Helices des
Wollkeratins bilden eine Protofibrille. Aus (9+2) solcher Protofibrillen sind dann die Mikrofibrillen
zusammengesetzt, von denen wiederum viele eine Makrofibrille bilden (Abb. 10-24).
Die Myofibrillen der Muskelzellen enthalten in Wasser unlsliche Proteine, die sich aufgrund
unterschiedlicher Lslichkeit in Salzlsungen in Myosin, Actin und Tropomyosin auftrennen lassen.
Myosin ist ein fibrillres Protein mit einem Molgewicht von ca. 500 kDa, das aus, zwei schweren (200
kDa) und vier leichten Polypeptidketten (ca. 20 kDa) besteht. Die schweren Ketten bilden eine Superhelix
in Form eines langen -helikalen Stabes und zwei kugelfrmige Kpfe, an die jeweils zwei
unterschiedliche leichte Ketten gebunden sind. Es handelt sich um die lngsten bekannten
Poplypeptidketten, zusammen mit Actin bewirkt Myosin die Kontraktion der Muskeln.
Actin ist das zweite wichtige Muskelprotein und ein in der Natur weit verbreitetes Proteine. Es kommt
aber auch in fast allen eukaryotischen Nichtmuskelzellen vor, macht dort bis zu 10 % der lslichen
Proteine aus und ist an Bewegungsvorgngen und der Stabilisierung zellulrer Strukturen beteiligt.
Darber hinaus konnte Actin in pflanzlichen Zellen und in Prokaryoten nachgewiesen werden. Es besteht
aus einer Polypeptidkette mit 375 Aminosuren (MG 42 kDa). Die Aminosure-Sequenzen verschiedener
Actine stimmen weitgehend miteinander berein. Actin kann als monomeres G-Actin (globulres Actin)
und als filamentres F-Actin (fibrillres oder fdiges Actin in Gestalt einer langen Spirale) vorliegen.
Monomeres G-Actin (MG = 42.000 Da) polymerisiert zum F-Actin, welches einen Komplex mit dem
Myosin eingeht [Actomyosin]. Im Muskel bildet Actin die dnnen Filamente, die gemeinsam mit den
dicken Myosin-Filamenten die Muskelkontraktion bewirken.
Actomyosin, der Komplex aus Actin und Myosin, ist das eigentlich kontraktile Protein des Muskels. In
Gegenwart von ATP tritt eine Verkrzung der Actomyosin-Fden ein. Im entspannten Zustand ist die
Bildung des Actomyosins und damit der ATP-Verbrauch durch Regulatorproteine gehemmt, die sich bei
312
313
11. Proteine
11.7.4 Seiden-Fibroin
Die typischen Vertreter der Skleroproteine in der Faltblattstruktur sind die Seidenfibroine. Der kristalline
Teil des Seidenfibroins besteht aus sich wiederholenden Hexapeptideinheiten der Struktur -(Glu-Ser-GlyAla-Gly-Ala)n-, die eine antiparallele Faltblattstruktur ausbilden. Die Abstnde zwischen den Schichten
betragen 0.57 bzw. 0.35 nm, je nachdem, ob die Glycin- oder Alanin- bzw. Serinreste zusammenliegen
(Abb. 10-25). Durch die Faltblattstruktur sind die Seiden sehr reifest, aber nur wenig dehnbar. Einzelne
Seiden unterscheiden sich in der Gre ihrer kristallinen Bereiche. Bei der bekannten Seide des
Maulbeerseidenspinners [Bombyx mori] liegen etwa 60 % des Proteins in der Faltblattstruktur vor.
CH2R CH2R CH2R CH2R
H H H H H H H H
Fibrinogen ist ein lsliches Protein der Molmasse 340.000 und wird aus drei Paaren nicht identischer
Polypeptidketten gebildet. Im Verlauf der Blutgerinnung wird das zu 3 - 4 % im Blutplasma enthaltene
Fibrinogen in das unlsliche polymere Proteingel Fibrin durch das Thrombin [Fibrinogenase, eine SerinProtease], umgewandelt. Der erste Schritt ist die Verkrzung zweier Polypeptidketten des Fibrinogens
unter Abspaltung der Fibrinopeptide A und B. Die Fibrinopeptide bestehen bei den niederen Wirbeltieren
aus 40 - 45 Aminosuren und bei den Sugern aus 13 - 21 Aminosuren.
313
314
Frisch
entstandenes
Fibrin
ist
praktisch
unlslich.
11. Proteine
Die
Fibrinmonomeren
werden
durch
Die letzte Phase der Blutgerinnung ist die Quervernetzung der Fibrinomonomeren durch den aktiven
Faktor XIII (= XIIIa). Der Faktor XIIIa ist eine Aminoacyltransferase, die die Bildung einer
Amidbindung aus der -Aminogruppe eines Lysinrestes und der Amidgruppe eines Glutaminrestes unter
Abspaltung von Ammoniak katalysiert.
NH CH CO
NH CH CO
(CH2)4
(CH2)4
NH2
NH2
NH
Faktor XIIIa
- NH3
CO
(CH2)4
(CH2)4
NH CH CO
NH CH CO
Bei der Fibrinolyse wird das Fibrin durch die Protease Plasmin enzymatisch zu Polypeptiden und
Aminosuren abgebaut.
Einige Proteine enthalten nicht-aminosureartige Bausteine, die fr die biologische Aktivitt dieser
Proteine essentiell sind. Bei diesen Strukturuntereinheiten, die kovalent oder nicht-kovalent gebunden
vorliegen, kann es sich um Phosphorsure, um Kohlenhydrate, ein komplex gebundenes Metallatom,
Nucleinsuren, Lipide oder verschiedene Chromophore handeln. Solche Proteine werden als konjugierte
Proteine oder Proteide bezeichnet (Tab. 11-9).
Nichtprotein-
Bindung
Bestandteil
Phosphoproteine Phosphorsure
Metalloproteine
Metall
Ionenbeziehungen,
Kap.
Komplexbindung
Glycoproteine
Kohlenhydrate
N- oder O-glykosidisch
Kap.
Nucleoproteine
Nucleinsuren
Ionenbeziehungen
S.
314
315
Lipoproteine
Lipide
Chromoproteine verschiedene
11. Proteine
nicht-kovalent
Kap.
verschieden
Chromophore
(S.
), Hmoglobine (S.
),
11.8.1 Phosphoproteine
Zahlreiche Proteine, Glykoproteine als auch Lipoproteine enthalten kovalent gebundene Phosphorsure
oder Pyrophosphorsure. Es lassen sich drei Bindungstypen unterschieden,
- eine esterartige Bindung von Phosphorsure oder Pyrophosphorsure an Hydroxygruppen,
insbesondere des Serins,
- eine amidartige Bindung der Phosphorsure an die Imidazolreste des Histidins sowie
- die gemischte Anhydridbildung zwischen Phosphorsure und der Carboxylgruppen von
Aminodicarbonsuren.
O
O
N
O
OH
CH
CO
OH
CH2
CH2 OH
NH
NH
CH
CH2
CO
NH
CH
CO
Das wichtigste esterartig an Serin gebundene Phosphoprotein ist das Casein der Milch. Bei den Caseinen
(-, - und -Casein) handelt es sich eigentlich um Phosphoglykoproteine Die Bindungen sind relativ
leicht spaltbar, Serinester werden im Alkalischen unter -Eliminierung gespalten. Im Hhnereiwei
kommt vor allem Ovalbumin und Phosvitin, ebenfalls ein Phosphoglykoprotein vor. Es enthlt mehrere
(Ser-P)n-Sequenzen (n < 8).
11.8.2 Metalloproteine
die fr die biologische Aktivitt essentiell sind (Tab. 11-10). Viele dieser Metalloproteine haben
ungewhnliche physikalische Eigenschaften (Elektronenspektren, magnetische Eigenschaften), die auf
auergewhnliche Bindungslngen und -winkel zurckgefhrt werden (vgl. Abb. 11-27). Die essentielle
Rolle der Metalle fr die biologische Aktivitt vieler Proteine kann u.a. auch auf einer Beeinflussung der
Sekundr- oder Tertir- bzw. Quartrstruktur der Proteine beruhen.
315
316
11. Proteine
Als Liganden der komplexbildenden Metalle wirken z.B. die Mercaptogruppe des Cysteins, der
Imidazolrest des Histidins oder Carboxyl- und Aminogruppen sowie nicht-proteinartige Komponenten
wie Porphinderivate (Kap.
) oder sog. "labiler" Schwefel. Ferredoxine sind Proteine mit einer geraden
Anzahl von Eisen und "labilen" Schwefelatomen (2, 4, 6 oder 8 Atome). Sie dienen in Pflanzen und
Bakterien als Elektronenbertrger, z.B. bei der Stickstoffixierung oder der Photosynthese (S.
) und
sind wahrscheinlich phylogenetisch sehr alte Strukturen. Die Ferredoxine haben ein niedriges RedoxPotential und geben ein charakteristisches EPR-Spektrum. Sie werden nach der Anzahl der Eisenatome
pro Cluster in 2-, 3-, 4-Eisen-Cluster-Proteine eingeteilt (vgl. Strukturen a, b und c). Die biologische
Aktivitt wird durch die Reduktion des Fe(III)- zu einem Fe(II)-Atom erklrt. Bei den Fe4S4-Ferredoxinen
liegt die (-Cys-S-Fe)4S4-Gruppe cubanartig vor (c).
R
S
Fe
S
Fe
Fe
S
S S
S S
S
S
Fe
R
a 2-Eisen-Cluster
b 3-Eisen-Cluster
Fe
Fe
Fe
Fe
Fe SS
R S
c 4-Eisen-Cluster
10-19
Metalloprotein
Funktion
Fe
Hm-Proteine:
O2-Transport
Hmoglobin, Myoglobin
Peroxidasen, Cytochrome, Cytochrom-Oxidase
Enzyme
Nicht-Hm-Proteine:
Hmerythrin
Ferretin, Hmosiderin
Fe-Speicher
Transferrin
Fe-Transport
Ferrodoxin
Elektronenbertrger
Nitrogenase
Enzym (N2-Fixierung)
316
317
Cu
Zn
11. Proteine
Hmocyanin, Cytocyanin
Caeruloplasmin, Hepatocuprein
Superoxid-Dismutase (Cuprein)
Enzym
Plastocyanin
Elektronenbertrger in Pflanzen
Azurin
Elektronenbertrger in Bakterien
Tyrosinase
Enzym (Phenoloxidase)
Lysin-Oxidase
Enzyme
Alkohol-Dehydrogenase, PhosphoglyceraldehydDehydrogenase,
Co
Enzym
-Hydroxybutyrat-Dehydrogenase
Mo
Enzym
Oxidase, Aldehyd-Oxidase
Mn
Enzym
Lectin
O
H
H N
COOH
N
H
COOH
b)
Cd
O
S
n
Cd
S
Cd
Cd
S
n = 2 -22
a) Cadmiumkomplex von Phytochelatin-2 undb) Phytochelatin-3
= Carboxylatgruppen
) und
Myoglobin ( ).
11.7.6 Lipoproteine
318
11. Proteine
biologisch aktiv. Die durch Detergentien, Lipasen oder organischen Lsungsmitteln von den Lipiden
befreiten Enzyme zeigen oft keine Aktivitt mehr, knnen aber durch Zugabe von Lipiden wieder
aktiviert werden. Die Membranlipide sind also gewissermaen essentielle Cofaktoren dieser Enzyme.
Wahrscheinlich bewirken Lipide die Ausbildung einer bestimmten, fr die biologische Aktivitt
erforderliche rumliche Struktur dieser Proteine. Fr eine bestimmte membrangebundene (Ca2+-Mg2+)ATPase wurde z.B. eine Abhngigkeit der biologischen Aktivitt vom Phasenbergang der gebundenen
Phospholipide festgestellt.
Ein wichtiger Risikofaktor zur Entstehung der Artherosklerose ist die Hyperlipidmie, eine zu hohe
Lipidenkonzentration (Triacylglycerine und Cholesterin) im Blut. Diese Lipide sind im Blutplasma an
bestimmte Proteine gebunden. Die Plasma-Lipoproteine dienen zum Transport der Lipide und sind trotz
des hohen Lipidgehalts in Wasser lslich. Es wird angenommen, dass die weniger polaren Lipide
(Triacylglycerine, Cholesterinester) einen inneren, hydrophoben Bereich mit Teilen des Proteins bilden,
whrend die hydrophileren Bereiche des Proteins oder hydrophile Gruppierungen der Lipide an der
Oberflche angeordnet sind. Die menschlichen Plasma-Lipoproteine sind in 5 Hauptklassen aufgeteilt, in
Chylomicron, very-low-density-Lipoproteine, low-density-Lipoproteine, high-density-Lipoproteine und
very-high-density-Lipoproteine. Jede dieser Klassen stellt ein heterogenes, polydisperses System dar.
Protamine finden sich u.a. im Sperma verschiedener Fischarten, sind stark basisch, da sie bis zu 90 %
Arginin enthalten. Sie sind einfache Proteine des Zellkerns und mit Desoxyribonucleinsuren assoziiert.
11.8 Peptidsynthesen
11.8.2 Allgemeines
318
319
11. Proteine
Synthetische Peptide sind wichtige Werkzeuge der Biowissenschaften und besitzen Bedeutung in der
Immunologie. Struktur-.Aktivittsbeziehungen und die chemische Modifizierung (10.9.11) biologisch
aktiver Peptide stellen weitere Anwendungsgebiete dar.
Die Totalsynthese von Peptiden ist die wiederholte Verknpfung der a-Aminogruppe einer Aminosure
mit der Carboxylfunktion einer anderen Aminosure unter Bildung der Peptidbindung. Partialsynthese
bedeutet die synthetische Vernderung und chemische Modifizierung bereits bestehender Proteine. Bei
der Protein-Semisynthese (10.9.9) geht man von natrlichen Proteinen bzw. Proteinfragmenten aus, die
durch Kettenverlngerung oder Verknpfung zu neuen Proteinen umgewandelt werden. Durch
Kombinatorische Synthese (10.9.8) lassen sich ganze Bibliotheken von Peptiden synthetisieren und fr
Wirkstoff-Screenings einsetzen. Getrennt von diesen chemischen Methoden sind Synthesen anzusehen,
die auf Prinzipien der Molekularbiologie beruhen.
Die Bildung der Amidfunktion erfolgt durch den nucleophilen Angriff der Aminogruppe einer
Aminosure mit dem C-Atom der Carboxylgruppe einer zweiten Aminosure. Erschwerend ist, dass
jeweils zwei Amino- bzw. Carboxylgruppen in den Reaktanden vorliegen, von denen nur je eine an der
Reaktion beteiligt sein darf. Ausserdem muss die Carboxylgruppe fr den Angriff eines Nucleophils
durch geeignete Substituenten aktiviert werden. Dies fhrte zur Entwicklung spezieller Schutzgruppenund Verknpfungstechniken fr die Peptidsynthese.
H R2
H R1
X
N C CO
H N C COO
X
Y
H R2
N C C
N C COO
Aktivierende Gruppe
Z
H R1 O
Peptidbindung
Im allgemeinen erfolgt die Synthese eines Peptids durch a) Einfhrung entsprechender Schutzgruppen in
die Aminosurebausteine, b) Aktivierung der Carboxylatgruppe, c) Kupplungsreaktion sowie d)
abschlieende Abspaltung der Schutzgruppen.
11.8.3 Schutzgruppen
Um die Reihenfolge der Verknpfung der Aminosuren eindeutig zu determinieren, mssen alle unbeteiligten funktionellen Substituenten durch geeignete Schutzgruppen blockiert werden. Diese Schutzgruppen mssen
319
320
11. Proteine
sowohl unter den Bedingungen der Entstehung der Amidbindung als auch der Aktivierung der
Carboxylgruppe erhalten bleiben,
die Racemisierung der Aminosuren sowohl bei der Bildung als auch unter den Bedingungen der
Peptidsynthese weitgehendst ausschlieen.
Das lteste Verfahren von E. FISCHER [Nobelpreis 1902] erlaubte die schrittweise Kondensation von
Aminosuren durch Kupplung von Aminosurehalogeniden mit Aminosureestern zu einem Octapeptid.
Br
NH3 C CO NH C COOR
Br
C CO NH C COOH
NH2 C CO NH C COOH
(oder Peptide)
Als "Schutzgruppe" wurde die Aminofunktion der ersten Aminosure protoniert und damit gegen einen
elektrophilen Angriff geschtzt ist.
Die von BERGMANN und ZERVAS 1932 eingefhrte Benzyloxycarbonylgruppe (frher Carbobenzoxygruppe, Cbz, CbO oder Z) ist die gebruchlichste Schutzgruppe fr die Aminofunktion. Ihre Anbindung
erfolgt durch Umsetzen der Aminkomponente mit Benzylchloroformiat oder durch Umsetzung des
Natriumsalzes der Aminosure mit Cbz-N-Hydroxysuccinimid.
O
CH2 O C Cl
O
O
CH2 O C O N
O
Cbz-N-Hydroxysuccinimid
NH2 C CO Y
NH2 C COONa
O
CH2 O C NH C CO Y
O
CH2 O C NH C COOH
Cbz-geschtzte Aminosure
Die Benzyloxycarbonylgruppe kann als Urethan relativ leicht wieder abgespalten werden. Unter
alkalischen Bedingungen, wie sie z.B. fr die Entfernung von Ester-Carboxylschutzgruppen erforderlich
sind, sind die Urethane stabil. Besondere Bedeutung hat die surekatalysierte Hydrolyse mit HBr oder die
Entschtzung durch katalytische Hydrierung mit Pd/H2. Bei Cystein wird, um eine KatalysatorVergiftung zu vermeiden, Na/NH3 oder Triethylsilan Et3SiH/PdCl2 als Reduktionsmittel eingesetzt.
320
321
11. Proteine
O
CH2 O C
NH R
HBr / CH3COOH
H2 / Pd
- H2N-R
- H2N-R
CH3
CH2 Br
CO2
CO2
Noch leichter als die Benzyloxycarbonylgruppe ist die tert-Butyloxycarbonylgruppe [Boc oder tBoc]
durch surekatalysierte Hydrolyse abspaltbar. Zu ihrer Anbringung wird die Aminogruppe einer
Aminosure mit t-Butyloxycarbonylazid umgesetzt, bzw. der entsprechende Pentachlorphenylester, das
Fluorid oder der N-Hydroxysuccinimidester oder die Natriumsalze der Aminosuren mit 1-Boc-4dimethylaminopyridiniumchlorid. Die Boc-Gruppe kann bereits unter Bedingungen abgespalten werden,
unter denen die Cbz-Gruppe noch erhalten bleibt. Auf diese Weise kann z.B. Cbz an der permanent zu
schtzenden e-Aminogruppe des Lysins verbleiben, whrend Boc als temporre Schutzgruppe nach
jedem Reaktionsschritt von den Aminogruppen entfernt werden kann. Beide Alkyloxycarbonylgruppen
haben den Vorteil, dass praktisch keine Racemisierung auftritt.
O
O
O C N3
R1
H2N
COOR
O
- HN3
+
R1
COOR2
Weitere Urethanschutzgruppen sind die Cyan-tert-butyloxycarbonyl- [CyOC] und die 3,5-Dimethoxybenzyloxycarbonyl-Gruppe [DIMOZ], die sich bei Bestrahlung mit UV-Licht abspalten lt. Eine
hnliche photolabile Schutzgruppe wre die Nitroveratryloxycarbonyl-Gruppe [NVOC]. Ein NAcylderivat stellt die von WEYGAND [1952] eingefhrte Trifluoracetylgruppe [Tfac] dar, die sich infolge
des starken -I-Effektes der Fluoratome unter sehr schonenden Bedingungen auch im Alkalischen
abspalten lt, ebenso der Phthaloylrest [Phth], der durch Umsetzen mit N-Ethoxycarbonylphthalimid
entsteht. Die Schutzgruppe kann durch Hydrazinolyse in Chloressigsure entfernt werden. Durch
schwache Suren wie z.B. Trifluoressigsure lassen sich Biphenylisopropyloxycarbonyl- [Bpoc] und die
Dimethoxydimethylbenzyloxycarbonylgruppe
methyloxycarbonylgruppe
[Fmoc]
[Ddz],
abspalten.
Die
durch
schwache
Basen
Lslichkeitseigenschaften
die
der
9-Fluorenyl3-(3-Pyridyl)-
322
11. Proteine
OCH3
SO2
SO2
Mtr
Pmc
N-Carboxyaminosureanhydride [Oxazolidindione, LEUCHSsche Anhydride] entstehen aus den Surechloriden der N-Alkoxycarbonylaminosuren bzw. bei der Umsetzung von Aminosuren mit Phosgen.
Sie besitzen sowohl eine geschtzte Aminogruppe als auch eine aktivierte Carboxylgruppe. N-Carbonsureanhydride wurden von LEUCHS bereits zur Synthese von Polyaminosuren eingefhrt und von
HIRSCHMANN in grerem Umfang zur Synthese der Fragmente der Ribonuclease eingesetzt [1967].
O
O
R CH
Cl
HN
- Ph-CH2-Cl
HN
+ COCl2
- 2 HCl
C O CH2 Ph
R CH
NH2
OH
Die Hauptaufgabe dieser Schutzgruppen besteht eigentlichen darin, durch Substitution die
Ammoniumsalzbildung an der Carboxylgruppe durch die zweite Aminosure zu verhindern. Als
einfachste "Schutzgruppe" kann daher schon die Bildung des Carboxylatanions angesehen werden.
Als Sureschutzgruppen kommen nur Substituenten in Frage, die nicht zu einer Aktivierung der
Carboxylgruppe fhren und gleichzeitig auch wieder leicht abgespalten werden knnen. Praktische
Bedeutung haben daher nur verschiedene Ester wie z.B. t-Butylester, Benzylester und andere. Die tertButylgruppe wird durch sauer katalysierte Hydrolyse, die Benzylgruppe durch katalytische Hydrierung
abgespalten. 4-Nitrobenzylester bieten den Vorteil leichter Kristallisierbarkeit. Auch 4-Methoxybenzylester finden in der Peptidchemie Anwendung.
H
CH2
R C COOH +
NH2
H O
R C C O C(CH3)3
H3C
CH3
H O
H2O/H
H
NH2
R C C OH
NH2 + (CH ) COH
3 3
322
323
11. Proteine
Abk.
Struktur
Abspaltung
O
Benzyloxycarbonyl,
Carbobenzoxy
Cbz, Z, CbO
t-Butyloxycarbonyl
Cbz, Z, CbO
Dimethoxybenzyloxycarbonyl
DIMOZ
CH2 O
NH
Katalytische Hydrierung,
HF, HBr/Eisessig, Na/NH3 fl.
O
(CH3)3C O
CH 3O
CF3COOH/CHCl3,
HBr/AcOH, HF/H2O
NH
O
CH2 O
UV-Licht/H2O
NH
CH 3O
O
NC
Cyan-t-butyloxy
carbonyl
CyOC
Trifluoracetyl
Tfac, TFA
NH
K2CO3/H2O,
Triethylamin
NH
O
O
O
F3 C
O
O
Phthaloyl
2-Biphenyl-4-isopropoxycarbonyl
Phth
N
O
CH3 O
C O C NH
CH3
Bpoc
milde surekatalysierte
Hydrolyse, ClCH2COOH/CH2Cl2
CH3O
3,5-Dimethoxyphenylisopropoxycarbonyl
CH3 O
C O C NH
CH3
Ddz
milde surekatalysierte
Hydrolyse
CH3O
O
H2C O C NH
Fluorenyl-9-methyloxycarbonyl
Fmoc, FMOC
3-(3-Pyridiyl)allyloxycarbonyl
PALOC
Trichlorethoxycarbonyl
TClOC
N
O
Cl3C CH2 O C NH
p-Toluolsulfonyl
Tos
H 3C
O
C
O
NH
O
S NH
O
milde alkalische
Hydrolyse,
fl. NH 3, Ethanolamin,
Morpholin
Pd(0)-katalysierte Allylbertragung auf
Nucleophile
Zn/HOAc, Zn/CH3OH
Na/fl. NH3
NO2
2-Nitrophenylsulfenyl
NPS
2,4-Dinitrophenylsulfenyl
DNPS
S NH
NO2
O2N
S NH
Unter den Bedingungen der Peptidsynthese drfen die Carboxyschutzgruppen nicht zu einer Acylierung
fhren, da es sonst zu unerwnschten Nebenreaktionen (Selbstkondensation) kommt. Bei der backing-offMethode [10.9.4] werden Carboxyschutzgruppen eingesetzt, die unter den Bedingungen der Kupplungsreaktion (z.B. mittels der Methode der gemischten Anhydride) nicht acylierend wirken, aber unter
anderen Bedingungen unmittelbar oder nach chemischer Umwandlung mit Aminogruppen reagieren
knnen. So lt sich z.B. ein Cbz- oder Boc-geschtzter Hydrazidrest nach Abspaltung der Schutzgruppe
in einen sehr reaktiven Azidrest umwandeln.
323
324
X
11. Proteine
(AS)n CO NH NH2
(AS)n CO N3
Diese Schutzgruppen sollen meist einen permanenten Schutz whrend der gesamten Peptidsynthese
gewhren. Die stark basische Guanidingruppe des Arginins lt sich bereits durch Protonierung schtzen.
Der basische Charakter der Gruppe kann durch berfhrung in die Nitroguanidinogruppe reduziert
werden, die Abspaltung erfolgt hydrogenolytisch, durch Zn/H+ oder durch elektrolytische Reduktion.
N
NH
HN
C
NH
oder
HN
NO2
C
NH2
NO2
Von besonderer Bedeutung ist der Schutz der stark nucleophilen und leicht zu oxidierenden Mercaptogruppe des Cysteins. Schutzgruppe der Wahl ist die Benzylthiogruppe [DE VIGNEAUD, 1930], die durch
Natrium in flssigem Ammoniak abgespalten werden kann. Diese drastische Methode fhrt jedoch auch
zu teilweiser Aufspaltung der Peptidbindungen. Insbesondere durch die Probleme, die durch die Synthese
polycyclischer heterodeter Peptide (Insulinsynthese, Abb. ) auftraten, wurden ber 40 Schutzgruppen fr
die Mercaptogruppe in die Peptidsynthese eingefhrt, so die Trityl-, Benzhydryl-, Benzoyl- oder
Acetamidomethylgruppe -S-CH2-NH-CO-CH3. Die Tritylgruppe lt sich mit H+/Hg2+/I2 wieder
NH2
NH2
HOOC CH
CH2 SH
abspalten.
Die
Cl
gebruchliche
HOOC CH
CH2 S
2,2-Diethoxycarbonylethylgruppe
[DCE]
wird
ber
den
Die Methylthiogruppe des Methionins wird mit H2O2 zum Sulfoxid oxidiert und zur Wiederherstellung
letzteres mit Thioessigsure reduziert. Zum Schutz der -Aminogruppe des Lysins acyliert man mit 1Isopropyl-isobutylchloroformiat und spaltet den entstandenen Kohlensureester wieder mit HF/Anisol.
Die zweite Carboxylgruppe von Asparaginsure wird zweckmigerweise als t-Butylester geschtzt,
Serin wird blicherweise mit Benzylbromid zum Benzylether umgesetzt.
Zur Blockierung der Imidazolgruppe und der Iminogruppe des Histidins werden neben dem Benzylrest
die
2,2,2-Trifluor-1-benzyloxycarbonylaminoethyl-
[Z-TFA]
und
die
2,2,2-Trifluor-1-tert324
325
11. Proteine
Bei der Peptidverknpfung kommt es hufig durch die als Zwischenstufen auftretenden N-Acylaminosuren zur Azlactonbildung und damit zur Racemisierung. Im Azlacton [Oxazolon] ist das -H-Atom
acid, durch Deprotonierung entsteht ein planares aromatisches 6-System, das bei Reprotonierung zu
racemischen Produkten fhrt.
H
- H
- HX
N
R
H
+ H
N
R1
R1
R1
R1
- H
+ H
Unter den Methoden, die eine racemisierungsarme Aktivierung der Carboxylgruppe und Knpfung der
Peptidbindung ermglichen, hat sich besonders der Einsatz von Aziden, Imidazolen, aktivierten Estern,
gemischten Anhydriden und die Carbodiimid-Methode bewhrt.
10.9.3.1 Azid-Technik
Die Azid-Technik [CURTIUS, 1902] ist wohl die lteste Methode einer racemisierungsarmen Peptidsynthese. Carbonylazide zeigen eine geringe Tendenz zur Racemisierung und sind leicht ber die
Hydrazide und Reaktion mit salpetriger Sure erhltlich. Da mit wachsender Kettenlnge des Peptids die
Umsetzungsgeschwindigkeit des Esters mit dem Hydrazin immer geringer wird, wird in solchen Fllen
oft mit dem backing-off-Verfahren [10.9.2.2] gearbeitet.
R
NH2 NH2
HN
HONO
HN
OCH3
NH
HN
NH2
N3
HNH
Knpfung der neuen Peptidbindung
CH
Nachteilig ist, dass Sureazide thermisch nicht sehr stabil sind und zur CURTIUS-Umlagerung neigen.
Unter Abspaltung von N2 zum Nitren lagern sie sich leicht zu Isocyanaten um, die wiederum mit
Aminosuren reagieren.
O
R
O
N
C O
- N2
325
326
11. Proteine
11.9.3.2 Imidazol-Methode
O
O
- CO2
C
+
OH
- Imidazol
HN
Cbz
HN
N,N-Carbonyldiimidazol
Cbz
Imidazolid
NH2
O
H2
C
C
O
C
O
N
H
H2
C
OH
Pd, H2
N
H
HN
NH2
Cbz
L-Ala-L-Ala
Die Reaktivitt der Carbonylgruppe einer Estergruppierung lt sich durch elektronenziehende bzw.
leicht polarisierbare Gruppen in der Alkohol- bzw. Phenolkomponente des Esters erhhen. Solcherart
aktivierte Ester knnen durch Aminolyse leicht in die entsprechenden Sureamide berfhrt werden.
Diese Kupplungsmethode wurde mit den Thiophenylestern durch TH. WIELAND 1951 in die Peptidsynthese eingefhrt. Bedeutung in der Peptidsynthese haben neben S- und Se-Arylestern verschiedene OArylester (z.B. 4-Nitrophenyl- oder Pentachlorphenylester), O-Alkylester (Cyanomethylester) oder
Hydroxylaminderivate (N-Hydroxysuccinimidester) erlangt.
Gemischte Anhydride aus geschtzten Aminosuren oder Peptiden und Kohlensurehalbestern lassen sich
durch Umsetzen von Aminosuren mit Chlorameisensureester darstellen. Der Angriff der Aminogruppe
einer zweiten, N-geschtzten Aminosure erfolgt an dem C-Atom des Anhydrids, das die geringste
Elektronendichte besitzt und sterisch am wenigsten gehindert ist. Der Vorteil dieser sowohl bei der
Peptidsynthese als auch bei der Modifizierung von Proteinen hufig angewandten Methode [WIELAND,
BOISSONNAS, VAUGHAN] ist die Bildung von leicht abtrennbaren Nebenprodukten (CO2 und Ethanol).
R1 O
R1
HN
COOH
Cl
P(OC2H5)2
HN
OEt
O
P
OEt
326
327
11. Proteine
hnlich reagiert ein gemischtes Anhydrid aus der entsprechenden Aminosure und Phosphorigsurediethylester.
R1
HN
O
+
COOH
Cl
NtBu3
HN
OC2H5
R1 O
C OEt
C O
H2N
R2
[NCA,
LEUCHSsche Anhydride] aufzufassen, die aus Aminosure und Phosgen dargestellt werden. Durch
Zugabe von NCA zur wssrigen Lsung eines Salzes einer Aminosure lsst sich durch aminolytische
Ringffnung und Decarboxylierung eine Kettenverlngerung um eine Aminosure-Einheit erreichen.
hnliche Bedeutung haben die S-analogen N-Thiocarboxyaminosureanhydride [Thiazolidin-dione-(2,5),
NTA] und die 2-Acetonyliden-oxazolidin-5-one.
R2
HN
R1
O
H2N
R2 O
CH COO
HN
HN
CH COO
R
O
HN
O
HC
R1
O NTA
HN
O
O Acetonylidenoxazolidinon
11.9.3.5 Carbodiimid-Methode
Bei der Carbodiimid-Methode [SHEENAN und HESS 1955] bildet sich aus Dicyclohexylcarbodiimid
[DCC, DCHCD] und einer N-Acylaminosure ein reaktionsfhiger O-Acylisoharnstoff. Der reagiert
entweder direkt mit einer zweiten Aminkomponente oder zunchst mit einem weiteren Molekl
Carbonsure unter Bildung eines symmetrischen Anhydrids, das dann mit einem Amin zum Amid
reagiert. Als Nebenprodukt wird der entsprechende Harnstoff gebildet, der sich oft schwer abtrennen lt.
Unerwnscht ist die Umlagerung des O-Acylisoharnstoffs zum Acylharnstoff, der nicht mehr acylierend
wirkt.
327
328
11. Proteine
O
1
R
O
O
R1 O
N
H
Boc
HN
HC
HN
H
N
O
O-Acylisoharnstoff
DCHCD
O
H
N
unerwnscht
C
N
O
O
R1
HC
Boc
NH
R1
C
O
HC
Boc
NH
Acylharnstoff
O
H
N
CH
Boc
NH
NH R
H
N
R1
CH
Boc
NH
O
2
Anhydrid
Harnstoff
oder
N-Ethyl-N'-(3-dimethylamino-
propyl)carbodiimid-hydrochlorid verwendet.
R1
R1, R2 =
R2
Dicyclohexylcarbodiimid
H3C
R2 =
R =
H2C
H2C
N-Cyclohexyl-N'-[2-(N-methylmorpholino)N
Tos
ethyl]carbodiimid-p-toluolsulfonat
R1 =
C2 H 5
R2 =
N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)H2C
H2C
H2C
NH(CH 3)2
Cl
carbodiimid hydrochlorid
328
329
HC
C O
11. Proteine
C2H5
SO3
O
C
N
N
O
4
N
C2H5
N
N
Esterartige
Produkte
aminogeschtzter
Aminosuren
mit
N-Hydroxyphthalimid
10,
N-
OH
N
N OH
N OH
OH
OH
N
N
N
O
10
O
11
12
OH
13
14
N
OH
15
16
Unter der Taktik der Peptidsynthese versteht man die Auswahl der optimalen Schutzgruppen und
Kupplungsmethoden. Dabei dienen temporre Schutzgruppen zum vorbergehenden Schutz einer Amino- bzw. Carboxylgruppe und mssen nach jedem Kupplungsschritt wieder selektiv entfernt werden.
Daneben gibt es permanente Schutzgruppen, die funktionelle Gruppen whrend der ganzen
Peptidsynthese blockieren und erst am Ende entfernt werden. Dies mu unter Bedingungen mglich sein,
die eine Racemisierung oder Spaltung der Peptidbindung ausschlieen. So knnen z.B. surelabile
Gruppen als temporre Schutzgruppen fr die -Aminogruppe und surestabile Gruppen fr den
permanenten Schutz von -Aminogruppen eingesetzt werden. Bei der Orthogonaltechnik werden
Schutzgruppen eingesetzt, die selektiv unter jeweils anderen Bedingungen (z.B. durch milde
329
330
11. Proteine
surekatalysierte oder alkalische Hydrolyse, durch milde Reduktion oder photolytisch) abgespalten
werden knnen.
Unter den fr die Peptidsynthese entwickelten Stragien kann man zunchst zwischen einem stufenweisen
Aufbau der Peptidkette und einer Fragmentkondensation nach stufenweisem Aufbau dieser Fragmente
unterscheiden.
Stufenweise Synthese
A
A-B
A-B-C
A-B-C-D
A-B-C-D-E
A-B-C-D-E-F
Fragmentkondensation
A-B + C-D-E-F-G
oder
A-B-C + D-E-F-G
oder
A-B-C-D + E-F-G
.....
A-B-C-D-E-F-G
Oligopeptid
Die Synthese erfolgt dabei im Unterschied zur Biosynthese fast ausschlielich vom C-terminalen Ende
her. Die Synthese kann in homogener (konventionelle Synthese) oder in heterogener Phase
(Festphasensynthese, z.B. MERRIFIELD-Strategie) durchgefhrt werden. Eine bersicht ber die
wichtigsten Strategien gibt die Tab. 10.12. Die Abb. 10-27 zeigt in einer gebruchlichen schematischen
Darstellung a) eine stufenweise Synthese und b) eine Fragmentkondensation am Beispiel der Synthese
des Peptidhormons Oxytocin.
NH2
a)
H
Bzl
OEt
OEt
NH2
Bzl = Benzyl
Cbz = Benzyloxycarbonyl
Np= 4-NitrophenylBenzyl
NH2
Bzl
NH2
Bzl
NH2
Bzl
H
OBzl
Bzl
OBzl
Bzl
H
Bzl
NH2
NH2
Cbz
NH2
b)
Bzl
Cbz
Bzl
Cbz
Bzl
ONp
OMe H
ONp
NHNH 2H
Bzl
NHNH 2H
Bzl
NH2
NH2
Bzl
Cbz
NH2
Abb. 11-27. Schematische Darstellung a) einer stufenweisen Synthese (nach BODANSZKY und DU
VIGNEAUD) und b) einer Synthese durch Fragmentkondensation nach der Variante 3 + (3 + 3) (nach
BOISSONAS) des geschtzten acyclischen Oxytocin.
330
331
11. Proteine
Tab. 11-12. Wichtigste Strategien zur Synthese von Peptiden (nach WNSCH)
Strategie
Charakteristika
Vorteile
Nachteile
Bei der konventionellen Synthese nach der globalen Schutzgruppentechnik wird ein mglichst
umfassender Schutz [Maximalschutztaktik] angestrebt, um Nebenreaktionen an den funktionellen
Gruppen der Seitenketten einzuschrnken. Dabei treten mit steigender Kettenlnge der Peptide Probleme
aufgrund verringerter Lslichkeit und vermehrter Raumbeanspruchung auf. Aus diesem Grunde ist auch
die Gesamtausbeute nach der Fragmentkondensation hher als nach der stufenweisen Synthese. Die
Grenzen liegen beim stufenweisen Aufbau bei 20 - 30 Aminsuren und bei der Fragmentkondensation bei
40 - 50 Aminosuren. Bei der stufenweisen Synthese kommt erschwerend hinzu, dass die analytisch
erfabaren Unterschiede zwischen den einzelnen Peptidzwischenstufen mit steigender Kettenlnge immer
geringer werden. Die schrittweise Methode wird daher vor allem zur Synthese der fr die Fragment
kondensation erforderlichen Partialsequenzen herangezogen.
332
11. Proteine
HIRSCHMANN hat die Taktik des minimalen Schutzes der funktionellen Gruppen der Seitenketten
entwickelt, durch die die Lslichkeit der Fragmente erhht werden sollte. Es gelang nach dieser Methode
Ribonuclease S durch Fragmentkondensation (Abb. 10-28) zu synthetisieren.
Ala
Ala
Lys
Phe
Gln
His
Met
Asp
Ser
Ser
Thr
Ser
Ala
Ala
Ser
Ala
Ser
Thr
Glu
Gln
Thr
Asn
Cys
Lys
Gly
Asn
Lys
Cys
Thr
Asn
Asp
Tyr
Cys
Cys
Arg
Asn
Ala
Ala
Gln
Val
Asp
Gln
Glu
Ala
Cys
Glu
Val
Gly
Ala
Ile
Leu
Ser
Ile
Ser
Ser
Ala
Gln
Thr
Trh
Ala
Cys
Asn
Pro
Cys
Arg
Asp
Tyr
Lys
Met
Lys
Ser
Arg
Asn
Glu
His
Met
Thr
Gly
Val
Phe
Thr
Asp
Val
Pro
Lys
Lys
Thr
Leu
Abb. 11-28. Von HIRSCHMANN ausgewhlte Fragmente zur Synthese der Rinderpankreas-Ribonuclease S
(vgl. Abb. 10.30).
Die Synthese der Fragmente erfolgte weitgehend unter Einsatz der Aminosure-N-Carboxy-Anhydride
sowie der N-Hydroxysuccinimid-Ester. Die Verknpfung der Fragmente erfolgte nach der Azid-Methode.
Geschtzt wurden lediglich die -Aminogruppe des Lysins und die Mercaptogruppe des Cysteins. Der
sparsame Einsatz der Schutzgruppen und die Beschrnkung auf die Azid-Methode bieten allerdings die
Mglichkeit fr strende Nebenreaktionen.
Der Nachteil der konventionellen Methode besteht darin, dass nach jedem Syntheseschritt eine
aufwendige Abtrennung des Reaktionsprodukts von Ausgangs- und Nebenprodukten erfolgen mu und
sich die Synthese nicht automatisieren lt. Diese Probleme lassen sich umgehen, wenn der Aufbau des
Peptides an einem hochmolekularen unlslichen (10.9.4.2) oder lslichen (10.9.4.3) Trger vorgenommen
wird.
Die Festphasensynthese [solid phase method] wurde 1963 von MERRIFIELD [Nobelpreis 1984] in die
Peptidsynthese eingefhrt. Nach der MERRIFIELD-Technik wird zuerst die am Stickstoff geschtzte C332
333
11. Proteine
terminale Aminosure kovalent an einen unlslichen Trger gebunden. Nach Abspaltung der NSchutzgruppe wird schrittweise in heterogener Phase die nchste Aminosure gekuppelt. Die Kupplung
erfolgt gewhnlich mit Carbodiimid oder nach der Methode der aktivierten Ester. Nach jedem
Syntheseschritt wird das am Trger gebundene Peptidprodukt durch Filtrieren abgetrennt und gewaschen.
Zum Abschlu wird das Endprodukt durch Behandlung mit HBr in Trifluoressigsure vom Trger gelst.
Als klassischer Trger dient mit Divinylbenzol quervernetztes Polystyrol, zunehmend werden heute
Harze auf der Basis von Polyethylenglycol verwendet, die Reaktionsbedingungen erlauben, unter denen
Polystyrol nicht stabil ist. Das Harz wird chlormethyliert; die Bindung der Aminosure an den so
aktivierten Trger erfolgt durch lngeres Erhitzen mit der Acylaminosure in Gegenwart von
Triethylamin. Weitere Ankergruppen fr die Anbindung der ersten Aminosure an den Trger wurden
entwickelt, die vor allem ein vorzeitiges Ablsen des Peptids von Trger whrend der Abspaltung der
Schutzgruppen ausschlieen sollen.
MERRIFIELD hatte zuerst das Nonapeptid Bradykinin in 85 % Ausbeute und 27 Stunden synthetisiert, fr
die beiden Ketten des Insulins, die A-Kette (21 Aminosuren) und die B-Kette (30 Aminosuren) wurden
8 bzw. 11 Tage bentigt. 1969 gelang mit einem Syntheseautomaten innerhalb weniger Wochen in 18 %
Ausbeute die Totalsynthese des Enzyms Ribonuclease (124 Aminosuren und 369 chemische
Reaktionen).
Ein Vorteil dieser Methode basiert auf der Mglichkeit der automatischen Synthesefhrung, indem man
den Trger auf einem Filter vorlegt und die anzuknpfende Aminosure und die einzelnen Reagenzien
computergesteuert hinzufgt. Ein Nachteil liegt in der komplizierten Aufreinigung des synthetischen
Peptids. Bei nicht 100 %iger Umsetzung oder nicht vollstndigen Entschtzungs-Reaktionen kommt es
zur Bildung von Rumpf- und Fehlsequenzen. Die Gesamtausbeute hngt stark von der Einzelausbeute
nach jedem Reaktionsschritt ab, bei langen Peptidketten liefert die Festphasensynthese infolge
Fehlsequenzen keine sehr sauberen Produkte. Sie wird daher meist zur Synthese von Oligopeptiden
333
334
11. Proteine
eingesetzt, fr die nicht zu hohe Anforderungen an die Reinheit gestellt werden. Mit modernen
Peptidsynthesizern gelingt bei Kupplungsraten von 99 % und mehr pro Synthesestufe eine akzeptable
Verknpfung von bis zu 50 Aminosuren.
Im Unterschied zur Festphasen-Synthese werden bei der Flssigphasensynthese [liquid phase method]
lsliche hoch molekulare Trger eingesetzt [SEMJAKIN, BAYER]. Meist wurde mit Polyethylenglycolen
als Trger gearbeitet, an deren endstndigen Hydroxygruppen die Carboxylgruppe der C-terminalen
Aminosure gebunden wird. Die restlichen Hydroxygruppen des Polymers knnen blockiert werden. Zur
Kupplung wird meist Dicyclohexylcarbodiimid eingesetzt, die Entfernung berschssiger Komponenten
erfolgt durch Ultrafiltration oder Kristallisation des Polymer-Peptidesters. Anstelle der polymeren Trger
fr das aufzubauende Peptid wurden in die Peptidsynthese auch unlsliche polymere Reagenzien in Form
von Polymer-Estern oder Polymer-Carbodiimiden eingefhrt.
H2N
CH
Polymer
Polymer-Ester, Y = O, S
Polymer
Polymer-Carbodiimid
Ala Ala Lys Phe Gln His Met AspSer Ser Thr Ser Ala
Ala
Ala
Ser
Thr Asn Cys Tyr Gln Ser Tyr Ser Thr Met
Thr
Gln
Ser
Ser
Gly
Gly Asn Lys Cys
Ile
Ser
Ala
Lys
Thr Asn
Val
Asp Tyr
Val Cys Ser Gln Lys Asn
Ala
Cys Cys
Gln
Ala Cys Glu Gly
Arg Asn
Val
Val
Glu Gln
Asp
Ile
Thr Met
Ala
His
Gly Met
Leu Lys
Lys
Ser
Asn
Ser
Ser
Ala Gln Thr Thr Ala Cys Asn Pro Tyr Lys
Ser
Glu
Arg
His
Val Phe Thr Val Pro Lys Cys Arg Asp Lys Thr Leu Asn
Die reduktive Spaltung dieser 4 Disulfidbrcken unter vlliger Denaturierung des Enzyms und die
anschlieende Oxidation ergaben ein regenieriertes Produkt mit voller Aktivitt. Das bedeutet, dass von
den theoretisch mglichen 105 Paarungsmglichkeiten der 8 Mercaptogruppen zu den 4 Disulfidbrcken
nur eine realisiert wird.
334
335
11. Proteine
Im Unterschied zur Ribonuclease besteht Insulin aus zwei Ketten, die ber zwei Disulfidbrcken
miteinander verbunden sind. Die A-Kette enthlt zustzlich noch eine weitere Disulfidbrcke. In diesem
Falle erfolgt die Oxidation der 6 Mercaptogruppen statistisch. Neben Insulinisomeren mit falscher
Stellung der Disulfidbrcken entstehen intramolekulare Disulfide der A sowie der B-Kette (Abb. 10-30).
7
A
6
11
20
A
6
19
20
A
7
19
19
11
20
20
19
19
7
11
19
11
A
7
19
20
11
20
7
19
20
19
20
11
6
11
19
20
19
11
6
11
20
6
7
11
20
7
11
7
11
7
6
11
20
11
20
20
19
11
20
7
19
Abb. 11-30. Produkte der Oxidation einer quimolaren Mischung der A- und B-Kette des Insulins (nach
KLOSTERMEYER und HUMBEL). Das eingerahmte Produkt stellt das natrliche Insulin dar.
CH
CO
HN
OC
CH
CO
n CO2
335
336
11. Proteine
Eine Polykondensation der freien Aminosuren durch Erhitzen fhrt zu proteinhnlichen Verbindungen
(Proteinoide). Erste Sequenzpolymere wurden bereits von E. FISCHER
Tripeptid-alkylestern erhalten.
Eine der innovativsten Entwicklungen der letzten Jahre ist die Kombinatorische Synthese, die eine
drastische Verkrzung der Entwicklungszeiten fr neue Wirkstoffkanditaten darstellt. Gegenber dem
frheren beraus langsamen und kostenintensiven rationalen Planen, Synthetisieren und Austesten
einzelner Abkmmlinge von Leitstrukturen versucht man heute, eine groe Anzahl potentieller
Screeningsubstanzen gleichzeitig darzustellen und fr die Selektion der aktiven Komponenten als
Verbindungsbibliothek zur Verfgung zu stellen. Das Synthesekonzept sieht multiple Parallelsynthese
oder Kombinatorische Synthese vor und bedarf einer rumlichen Kompartimentierung und zeitlichen
Trennung der einzelnen Reaktionen, die durch mitsynthetisierte Codierung fr den spteren Bioassay
festgehalten bzw. bekannt sein mu. Kombinatorische Synthesen lassen sich auf Mikrotiterplatten
durchfhren und damit Bibliotheken mit 100 bis zu Tausenden von Verbindungen herstellen, whrend
Gemische an Trgern in Form von Polymerkgelchen oder polymeren Matrizenfeldern bis zu einer
Million Verbindungen umfassen knnen. Da in den Anfngen der kombinatorischen Synthese im
wesentlichen Festphasensynthesen eingesetzt wurden, ist verstndlicherweise gerade die Peptidsynthese
(neben der Polynucleotidsynthese) eine Domne der Kombinatorischen Chemie.
Anfang der 90er Jahre wurde ein Verfahren eingefhrt, bei dem der Trger nach jedem Reaktionsschritt
gemischt und fr die Folgeumsetzungen wieder auf die einzelnen Reaktionsgefe verteilt wird (Mix and
split-Verfahren, Abb. 12- ).
Die Parallelsynthese tausender Substanzen und die Durchfhrung verschiedenster Testverfahren auf
biologische Aktivitt erfordert die Enwicklung neuer Syntheseroboter, die die bertragung einzelner
Synthesevorgnge auf eine Vielzahl von Reaktionsrumen und eigenstndiger Syntheseschritte erlauben.
336
337
11. Proteine
10.9.9 Proteinsemisynthese
Unter Proteinsemisynthese versteht man die enzymatische oder chemische Insertion oder Excision kleiner
Peptidfragmente in oder aus bereits vorliegendem Protein. Dadurch kann z.B. eine nderung des aktiven
337
338
11. Proteine
Zentrums eines Enzyms oder eines Enzyminhibitors ermglicht werden und zu Verbindungen mit neuen
und anderen biologischen Eigenschaften fhren.
Im Mittelpunkt des Interesses steht heute die gentechnologische Expression von menschlichem Protein
durch Bakterien wie z.B. Escherichia coli, durch Hefezellen oder anderen Mikroorganismen, in die ein
menschliches Genom eingeschleust wurde [Clonierung]. Seit mehreren Jahren wird menschliches Insulin
gentechnologisch aus E. coli hergestellt und ist damit billiger und unbegrenzt verfgbar im Vergleich zu
Schweine- oder Rinderinsulin. Auerdem bringt ein solcherart produzierter Wirkstoff weniger
Applikationsprobleme
als
tierischen
Ersatzprodukte.
Plasminogen-Aktivator
ist
ein
weiterer,
Das gezielte Verndern von krpereigenen Proteinen mit dem Ziel, mageschneiderte Pharmaproteine mit
verbesserten Eigenschaften gegenber den natrlichen Proteinen zu erzeugen, ist Aufgabe des
Proteindesign. Hufig haben krpereigene Proteine Eigenschaften wie geringe Lslichkeit oder Stabilitt,
die bei einem Pharmawirkstoff unerwnscht sind. Mit der Information aus der Genomsequenzierung und
der Strukturaufklrung von Proteinen sowie den Fortschritten der Computertechnologie zur Analyse und
Visualisierung von biologischer Information ist es nun mglich, die spteren Eigenschaften solcher
vernderter neuer Proteine vorherzusagen.
Unter der chemischen Modifizierung versteht man Reaktionen bzw. Derivatisierung an den Seitenketten
der Aminosuren von Proteinen, durch die die physikochemischen Parameter und biologischen
Eigenschaften der Proteine verndert werden. Natrlich vorkommende chemisch modifizierte Proteine
entstehen z.B. durch Bindung von Cofaktoren an Proteine und liegen in verschiedenen konjugierten
Proteinen (Kap. 10.) vor. Durch den Einbau nichtnativer und ungewhnlicher Aminosuren knnen
Peptide mit vielfltigen biologischen Eigenschaften konstruiert werden.
338
339
11. Proteine
H2N
pH > 5
COOH
pH < 4
CO
R
NH
Durch Umsetzen mit Bernsteinsureanhydrid lassen sich die basischen Aminogruppen in saure
Carboxylgruppen umwandeln.
- H
Protein NH3
Protein NH2
O
Protein NH CO
- H
Protein NH CO
Die kovalente Bindung von Verbindungen mit besonderen physikalischen Eigenschaften (z.B.
Fluoreszenz beim Dansylrest, Radioaktivitt bei bestimmten Iodisotopen, Messungen bei Resten mit
Radikalcharakter wie bei stabilen N-Oxiden) ermglicht den Einsatz besonderer physikalischer
Untersuchungsmethoden, die bei nicht-modifizierten Proteinen nicht anwendbar wren (Label-Technik,
S.
).
Eine nderung der biologischen Eigenschaften kann die Vernderung der Immunogenitt von
Pharmaproteinen darstellen. Bei Applikation eines nicht-krpereigenen Proteins wird dieses als
Fremdsubstanz (vgl. S.
Immunreaktion ausgelst. Die Verhinderung der Immunreaktion bei der Behandlung mit Asparaginase
(z.B. bei Leukmie) wird durch Bildung eines Makromolekl-Protein-Konjugates erreicht. Die
Umsetzung des Proteins mit Monomethoxypolyethylenglykol (CH3OPEG, Molekulargewicht 5.000)
ergibt ein Konjugat, welches eine hohe Antitumoraktivitt zeigt, ohne mit Anti-Asparginase-Antikrpern
zu reagieren. Weiters wird keine Bildung neuer Antikrper induziert. Die Halbwertszeit dieses
339
340
11. Proteine
Konjugates ist in vivo etwa 20mal grer als die des Originalproteins. Zur Verknpfung wird 2,4,6Trichlortriazin verwendet. Zwei Chloratome werden durch das Polymer substituiert, ber das dritte
Chloratom erfolgt die Bindung der Asparaginase (In Tab. 10-14 sind beispielhaft Reaktionen fr die
Darstellung von Proteinkonjugaten beschrieben).
340
341
11. Proteine
Reagenz
O
R
Angriffspunkt
Derivat
O
O
O
Protein NH2
Protein NH
C R
O
Protein OH
Protein O
C R
O
Protein SH
Protein S
C R
O
Protein NH2
Protein NH
O
O
N
Protein C
Protein COOH
N
NH CH2 COOH
Protein CH2 NH
HN
NH
NH
NH2
N
O
H2C
O
H3C
Protein
N
N
O
Protein NH2
Protein NH
CH3
NO2
NO2
Protein OH
Protein O
C CH3
O
Protein SH
Protein S
Protein SH
Protein S
CH3
NO2
O
POCl3
Protein NH2
Protein NH
OH
OH
O
Protein OH
Protein O
OH
OH
O
Protein S
OH
O
OH
O
N CH2 CH3
Protein SH
Protein S
N
CH2 CH3
O
O
341
342
11. Proteine
Cl
N
Prot
CH3O
PEG OH
Cl
OPEGOCH3
N
Cl
H
N
NH2
Prot
N
OPEGOCH3
Cl
Prot
OPEGOCH3
Prot
Prot
O
O
O
OH
NaIO4
HO
O R
NH2
NaBH4
X
OH
NH
NH
NH2
HC
O
Prot
(CH2)3 CH
H2N
Prot
(CH2)3 CH
CH2 CH2 S
HC
O
O
Prot
OH
NHR
O
X
R
Prot
NH2
C O
Prot
Prot
NH
NH
NR
O
O
Prot
NH2
CH2 CH2 S
S
N
O
X
Prot
NH
CH2 CH2 S
SH
In zahlreichen Fllen wird das Protein nur als makromolekularer Trger fr biologisch aktive
Verbindungen wie Pharmaka oder Haptene bentigt. Grundlegende Erkenntnisse in der Immunologie
konnten z.B. mit Hilfe von DNP-Proteinen (vgl. S.
) gewonnen werden.
In den letzten Jahren haben immunologische Methoden eine immer grere Bedeutung fr die
quantitative Bestimmung krpereigener (z.B. Hormone) und krperfremder (Pharmaka) Stoffe erlangt.
Der Radioimmunoassay gehrt zu den empfindlichsten Bestimmungsmethoden in Krperflssigkeiten.
Fr die Bestimmung werden Antikrper gegen die zu erfassenden Verbindungen bentigt, die aufgrund
der meist zu niedrigen Molmasse dieser Verbindungen (S.
ein Protein ausgebildet werden. Als Methoden fr die Bindung der niedermolekularen Substanzen an das
Protein kommen besonders das Gemischte-Anhydrid-Verfahren (S.
(S.
) zum Einsatz. In vielen Fllen mu das Hormon oder Pharmakon erst in ein reaktionsfhiges
342
343
11. Proteine
OH
O
C
CH2 O
O
O
Cl
HOOC
CH2 O
OH
R; NR3
N
O
NH2
Protein HN
CH2 O
Besondere Einsatzgebiete erffnen bifunktionelle Reagenzien, die intra- und intermolekular reaktive
Gruppen der Aminosuren miteinander verbinden knnen. Der Einsatz solcher Reagenzien kann die
Tertirstruktur stabilisieren, Hinweise auf den Abstand zwischen den reaktiven Gruppen oder Modelle fr
das Studium von Protein-Protein-Wechselwirkungen liefern. Ein seit langem eingesetztes bifunktionelles
Reagens ist der Glutaraldehyd, der zu Quervernetzungen fhrt. Glutaraldehyd liegt im Sauren als Polymer
des cyclischen Halbacetals, im Neutralen in der polymeren Form vor, die durch Aldolreaktion gebildet
wird. Aldehydgruppen von 55 knnen mit Aminogruppen des Proteins SCHIFFsche Basen bilden.
H
OHC
CHO
HO
CHO
HO
OH
CHO
CHO
H2N
H2C
(CH2)2 CH
(CH2)2 CH
(CH2)2 CHO
CH
Protein
HC
Protein
(CH2)2
Die Molekulargewichte von Proteinen schwanken zwischen wenigen Tausend Daltons fr Oligopeptide
(ca. 100 Da/Aminosure), oberhalb von 10.000 Da fr aus 100 - 150 Aminosuren zusammengesetzte
Peptide und liegen bei mehreren Millionen fr aus mehreren Untereinheiten zusammengesetze Proteine.
So besitzt menschliches Insulin ein Molekulargewicht von 5.743 Da, das Enzym Ribonuklease eines von
13.500 Da. Die Verdauungsfermente Trypsin und Pepsin haben ein MG von 24.500 Da bzw. 35.000 Da,
das aus 4 Untereinheiten zusammengesetzte Hmoglobin, das Atmungsprotein in den roten
Blutkrperchen, eines von 64.500. Die Lactat-Dehydrogenase besitzt ein Molekulargewicht von 150.000,
M-Globulin ein solches von 900.000 Da. Eines der Spitzen-Molekulargewichte mit 41,000.000 besitzt der
Tabakmosaikvirus, ein Pflanzenvirus, der die Infektion von Tabak- und Tomatenpflanzen bewirkt.
343
344
Eine
der
klassischen
11. Proteine
Molekulargewichtsbestimmungen
beruht
auf
der
Bestimmung
der
Peptide kleinerer bis mittlerer Molekulargewichte lassen sich mittels Massenspektroskopie ermitteln.
Whrend konservative EI-Ionisation das Verdampfen des Analyten erfordert und daher nur fr sehr kleine
und derivatisierte Oligopeptide geeignet ist, sind neue Ionisier- und Trenntechniken gut bis sehr gut zur
Molgewichtsbestimmung
von
Peptiden
geeignet.
Mit
weicher
FAB-Ionisation
lassen
sich
Quasimoleklionen (M+H)
Sektorfeldgerten zur genauen Massenbestimmung hochauflsen. Die Kopplung LC-MS/MS erlaubt die
Molekulargewichtsbestimmung von Peptiden mit hoher Massengenauigkeit. Neben der Molekulargewichtsbestimmung gelingt mit LC-MS/MS die Zahl der Cysteineinheiten, der Disulfidbrcken und
freien SH-Gruppen in einem Protein festzulegen. Mit TOF-Spektrometern lassen sich Moleklmassen
ber 100.000 Da bestimmen, wenn eine fr Peptide geeignete Ionisationstechnik gewhlt wird. ESIIonisation erfolgt in einem Lsungsmittelplasma und ergibt nach Desolvatisierung vielfach geladene
Moleklionen. Da im Spektrometer das Masse/Ladungsverhltnis m/z gemessen wird, kann bei mehrfachgeladenen Moleklionen auch das Molgewicht bestimmt werden, wenn es weit auerhalb des
Mebereichs des Instrumentes liegt. Mit dieser Technik wurde das Molekulargewicht von Proteinen bis
zu 200.000 Da mit hoher Genauigkeit bestimmt.
Bei Biomoleklen erhebt sich oft die Frage nach dem eigentlichen Molekulargewicht, da viele Proteine in
der nativen und biologisch aktiven Form aus mehreren Untereinheiten bestehen und damit Dimere,
Trimere, etc., darstellen.
344
345
11. Proteine
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347
VITAMINE
348
12. Vitamine
Vitamine sind Stoffe, die im Krper eines Tieres oder Menschen nicht hergestellt werden knnen,
aber lebenswichtig sind und mit der Nahrung dem Krper zugefhrt werden mssen. Dieser
Definition entsprechen auch Verbindungen, die man den Vitaminen nicht zurechnet, etwa essentielle
Fettsuren oder Aminosuren. Im Gegensatz zu diesen werden Vitamine in einer viel kleineren
Maximaldosis aufgenommen, hchstens 100 mg pro Tag. Meist gengen wenige mg oder g, um die
Verwertung der Nahrung zu regulieren.
Viele Vitamine haben den Charakter von Coenzymen, d.h. sie sind an Eiwei gebunden. Manche
Vitamine sind artspezifisch. Viele Tiere knnen z.B. Vitamin C selbst herstellen, der Mensch ist auf
die Zufuhr von auen angewiesen, er ist also in dieser Hinsicht eine "Defektmutante". Tierversuche
sind daher nicht unbedingt geeignet, den Vitamincharakter einer Verbindung festzulegen. Die
meisten Vitamine werden in der Regel von Pflanzen synthetisiert und unverndert verwertet.
Ausnahmen sind das Vitamin A, das im tierischen und menschlichen Organismus aus Provitamin A,
-Carotin, entsteht, das Vitamin D, das aus Steroidvorstufen durch Lichteinwirkung gebildet wird,
die Vitamine B12 und K2, die nur von Mikroorganismen hergestellt werden knnen.
Geschichte
Um die Jahrhundertwende wurde die Beobachtung gemacht, da einseitig mit Proteinen, Fetten und
Kohlehydraten sowie Mineralstoffen ernhrte Tiere anormales Wachstum zeigen. Dieser negative
Effekt lie sich durch Zugabe geringer Mengen an Milch beseitigen. Die aktive Fraktion lie sich mit
Alkohol extrahieren und in eine fettlsliche Komponente A und eine wasserlsliche B teilen. Nach
diesem Schema teilt man noch heute die Vitamine in zwei Gruppen ein - fettlsliche und
wasserlsliche.
Die fettlsliche Komponente fand man spter auch in Butter und Lebertran. Man erkannte, da das
Fehlen dieses fettlslichen Faktors A Nachtblindheit zur Folge hat. Der in der wasserlslichen
Fraktion vorhandene Faktor B wurde auch in Reiskleie entdeckt. Er war fhig, die Beriberikrankheit
(Schwche, deme, Mdigkeit) zu heilen. Als man feststellte, da der Faktor B ein Amin ist, wurde
er "Vitamin" genannt, um zu kennzeichnen, da der Stoff ein zum Leben (vita) ntiges Amin ist. Diese
Bezeichnung gab der ganzen Stoffklasse den Namen, obwohl die meisten Vitamine keinen
Basencharakter zeigen.
Bald fand man, da der wrige Anteil des Milchextraktes mehrere Wirkkomponenten enthlt, so da
man zur Unterscheidung den B-Vitaminkomplex in B1, B2 usw. unterteilen mute. berdies fhrte
man neue Buchstaben ein. A blieb als Bezeichnung fr das Vitamin A. Der nchste Faktor (in
Fruchtsften enthalten) erhielt den Buchstaben C, weil der Buchstabe B schon vergeben war. Durch
Vitamin C wird Skorbut geheilt.
Die fettlslichen Komponenten des Extraktes von Milch enthielten neben Vitamin A den
antirachitischen Faktor D. Zwei weitere fettlsliche Faktoren wurden E (notwendig fr die
Fortpflanzung von Ratten) und K (wichtig fr die Blutgerinnung) genannt. Hierbei bersprang man
allerdings Buchstaben, weil man mit K die Funktion des Faktors, das Koagulieren des Blutes,
ausdrcken wollte.
VITAMINE
349
VITAMINE
350
Das gleiche Keton war schon frher bei der Ozonolyse von Phytol erhalten worden. Andererseits
entstand bei der Chromsureoxidation ein Lacton, das 21 C-Atome enthielt:
Diese Abbauergebnisse legten unter Bercksichtigung der Bruttoformel nahe,
da -Tocopherol die Struktur eines Chromans haben knnte:
VITAMINE
351
VITAMINE
352
Wirkung
Man setzt Tocopherole als Antioxidantien Nahrungsmitteln zu. Vitamin E schtzt ungesttigte Fette
vor Oxidation unter Bildung von Hydroperoxiden, it man viel ungesttigte Fettsuren, braucht man
mehr Vitamin E als bei Ernhrung mit gesttigten Fettsuren: Bei der biologischen Oxidation von
Vitamin E wird der Heterocyclus unter Chinonbildung geffnet:
Die ntige Tagesdosis wird mit 1 mg, an anderer Stelle mit 10-30 mg, angegeben. Aus diesen
Angaben sieht man am besten, wie wenig man ber die tatschliche Funktion wei. Man nimmt an,
da zur Hemmung der Peroxidbildung etwa 0.6 mg Vitamin E pro g ungesttigter Fettsure bentigt
werden. Dieser Wert liegt weit ber der angegebenen Tagesdosis von 1 mg.
Vitamin K
1929 wurde ein antihmorrhagischer Faktor in
grnen Pflanzen entdeckt, der die Blutgerinnungszeit verlngert. Vitamin K besteht wie Vitamin E
aus mehreren Verbindungen: Die Isomeren
unterscheiden sich durch den Bau der Seitenkette. Vitamin K ist sehr licht- und alkaliempfindlich.
Vitamin K1 hat eine vier Isopreneinheiten umfassende Seitenkette, whrend Vitamin K2 eine aus 35
C-Atomen bestehende isoprenoide Kette besitzt, in der noch alle Doppelbindungen enthalten sind.
Es wird unter Mitwirkung von Darmbakterien in K1 umgebaut. Der Ersatz der Methyl- gegen eine
Ethylgruppe in K1 desaktiviert die Substanz vllig, jedoch nicht der Verlust der ganzen Seitenkette.
Strukturaufklrung
Zur Ermittlung der Struktur der Seitenkette wurde Vitamin K1 in sein Dihydrodiacetat berfhrt und
dieses dann einer Ozonolyse unterworfen. Hierbei erhielt man das gleiche Keton, das man auch durch
Ozonolyse von Phytol erhlt, womit die Struktur der Seitenkette festlag. Der bei der Reaktion
entstehende Aldehyd gab Auskunft ber die Struktur des Aromaten.
VITAMINE
Synthese
Schlsselprodukt zur Synthese von Vitamin K1 ist
das Menadion 5, dieses entsteht durch Oxidation
aus Menadiol 4, 4 erhlt man aus dem Diamin 3,
das seinerseits aus 2-Methyl-1-naphthylamin 1
ber das 2-Methyl-4-nitro-1-naphthylamin 2
zugnglich ist. Menadion fehlt noch die Seitenkette,
die durch Umsatz mit Phytol unter BF3 Katalyse
eingebaut werden kann, zeigt aber bereits volle
Vitamin K1-Wirksamkeit.
Biosynthese
Die Biosynthese des Vitamins K ist noch nicht in
allen Stufen geklrt. Eine Vorstufe des aromatischen Teils des Molekls ist die Shikimisure 6,
die wahrscheinlich ber die Chorisminsure 7 2Succinylbenzoesure 8 bildet. Daraus knnte dann
die 1,4-Naphthohydrochinon-2-carbonsure durch
Ringschlu entstehen. Whrend es ber den Aufbau
des Aromaten nur Vermutungen gibt, wei man,
da die Seitenkette des Vitamin K1 ber Geranylgeranioldiphosphat zum Phytyldiphosphat erfolgt.
Dann tritt Kondensation mit dem Aromaten ein,
Oxidation und Methylierung des Aromaten finden
als letzte Schritte statt.
Menadion wird wahrscheinlich durch Darmbakterien in Vitamin K1 berfhrt.
353
VITAMINE
354
Wirkung
Vitamin-K-Mangel bedingt eine verlngerte Blutgerinnungszeit, weil vier Eiweikomponenten, die
fr die Blutgerinnung wichtig sind, nicht mehr im ausreichenden Ma gebildet werden - Vitamin K
ist also fr die Bildung dieser Eiweimolekle wichtig. Es sind dies der Faktor II (Prothrombin), VII
(Proconvertin), IX (Christmasfaktor) und X (Stuartfaktor).
Mit Hilfe von Vitamin K werden Glutaminsurereste im Prothrombin, aber auch in anderen
Eiweikomponenten carboxyliert. Blutgerinnung erfordert nicht nur die Gegenwart von Eiweimoleklen, sondern auch von Sauerstoff und KHCO3.
Prothrombin enthlt am Carbonylende 10 Glutaminsurereste, deren
Carboxylierung zur Bildung des aktiven Prothrombins ntig ist.
Vitamin K liegt dabei in der reduzierten Form vor, die Rckoxidation
verluft ber das Vitamin K-Epoxid. In diesen Mechanismus knnen
Cumarine und andere Stoffe strend eingreifen.
Die Hemmung der Blutgerinnung kann durch Cumarine erreicht
werden. Hemmstoffe fr Blutgerinnung sind auch Biscumarol und
das Marcumar. Letzteres wird zur Verhinderung einer Thrombose
eingesetzt. Mit Vitamin K-Gabe kann man auch Cumarin-Vergiftungen
entgegenwirken.
100 g Blumenkohl enthalten etwa 1.3 g an Vitamin K, das entspricht
in etwa dem tglichen Bedarf. An anderer Stelle wird ein Bedarf von
70-140 g angegeben. Daraus ist ersichtlich, da man noch zu wenig
ber das Vitamin wei.
Vitamin Q
Nahe verwandt zum Vitamin K sind die in Pflanzen, Mikroorganismen und Tieren vorkommenden
Ubichinone und Plastochinone, die als Elektronenbertrger in der Biochemie (in der Atmungskette)
eine Rolle spielen und ubiquitr (Name) in Zellen vorkommen. Sie sind keine Vitamine, da auch der
tierische Organismus diese Faktoren herzustellen vermag. Die Ubichinone werden je nach Zahl der
Isoprenseitenkette in Kurzform mit Qn bezeichnet, Q 9 ist also ein Ubichinon mit 9 Isoprenresten.
Plastochinone sind hnlich gebaut,
sie tragen statt der Methoxygruppen
Methylgruppen. Plastochinone
werden mit dem Buchstaben PQ
abgekrzt.
VITAMINE
355
Wasserlsliche Vitamine
Wasserlsliche Vitamine sind mit Ausnahme des Vitamin C ausschlielich an Eiwei gebunden, sie
fungieren als prostetische Gruppen von Enzymen und sind nur in Gemeinschaft mit diesen wirksam.
Die meisten von ihnen enthalten ein heterocyclisches Ringsystem.
Vitamin B1
Schon 1630 beschrieb der Arzt BONITUS die in Java auftretende Beri-Beri-Krankheit: Beri-Beri
bedeutet in der Sprache der Einheimischen "Schaf": Patienten, die von Beri-Beri befallen wurden,
schritten wie ein Schaf steif mit schlotternden Knien herum. Es ist ein Krperzittern, das durch
Nervenstrungen bewirkt wird. Daher heit die Krankheit auch Polyneuritis (Polyneuritis hat also
Strungen im Bewegungsablauf zur Folge).
Der Arzt EIJKMAN, der die Beri-Beri-Krankheit in Indonesien studierte, fand um die Jahrhundertwende,
da in Gefngnissen, in denen die Insassen mit geschltem Reis ernhrt wurden, die Beri-BeriKrankheit etwa dreihundertmal hufiger auftrat als in Gefngnissen, in denen die Insassen ungeschlten
Reis bekamen. Daraufhin wurden Versuche an Hhnern gestartet. Mit geschltem Reis geftterte
Hhner zeigten eine der Beri-Beri-Krankheit entsprechende Polyneuritis. EIJKMAN schlo daraus, da
der Faktor, der die Beri-Beri-Krankheit verhindert, in Reiskleie enthalten ist.
In der wasserlslichen B-Fraktion, die auch aus Milch isoliert wurde, ist der gleiche Stoff enthalten,
der im Silberhutchen des Reises angereichert ist. Man fand diesen Faktor auch in der Hefe. Diese
wasserlsliche B-Fraktion aus Milch lie sich in thermolabile und thermostabile Fraktionen unterteilen.
Die thermolabile B1-Fraktion enthielt den Anti-Beri-Beri-Faktor.
5 bis 10 t Reishutchen - das ist die Menge, die man brauchte, um die Struktur zu bestimmen enthalten etwa 40 g des Faktors, davon sind etwa 20-25% gewinnbar.
Das Vitamin B1 wird auch Aneurin - in Erinnerung an den Namen Antineuritisvitamin - oder zufolge
seines Schwefelgehaltes - auch Thiamin genannt.
Strukturaufklrung
Das Vitamin B1 ist eine salzartige Verbindung. B1
enthlt einen Thiazolidinring, der ber den Stickstoff
mit einem Pyrimidinring, der in Stellung 4 eine
Aminogruppe und in Stellung 2 eine Methylgruppe
trgt, verknpft ist.
In der Natur liegt hauptschlich das Diphosphat (die OH-Gruppe ist mit Diphosphat verestert) vor.
Die Verbindung lt sich mit Na2SO3 beim Erhitzen spalten:
Der Pyrimidinkrper 1 lie sich mit Na/NH3 zu einem 2,5-Dimethyl-4-aminopyrimidin 2 entschwefeln.
Die Struktur von 2 ergab sich durch Vergleich mit einem Syntheseprodukt.
Der Thiazolteil 3 des Molekls konnte mit HNO3 zu einer ebenfalls synthetisch zugnglichen
Thiazolcarbonsure 4 oxidiert werden, der negative Ausfall einer Iodoformreaktion zeigte, da die
C2-Seitenkette am Heterocyclus nicht als -CH(OH)-CH3 vorliegt.
VITAMINE
356
Alternativ kann man bei der Synthese des Pyrimidinringes von einem formylierten -Ethoxypropionsureester ausgehen. Dieser wird durch Formylierung von -Ethoxypropionsureester erhalten,
der wieder durch Ethanolanlagerung an Acrylester darstellbar ist.
Zur Darstellung des Thiazolteiles von Vitamin B1 setzt man zunchst Natriumacetessigester mit
Ethylenoxid um. Dabei reagiert das Ethylenoxid unter Ringffnung, der gebildete Hydroxyester ist
nicht isolierbar, weil er gleich einen Lactonring bildet:
VITAMINE
357
Vitamin B1 ist die Wirkgruppe der Co-Carboxylase-2. Diese hat unter anderem die Aufgabe,
-Ketosuren, z.B. Brenztraubensure, zu decarboxylieren, damit in Folge CoA hergestellt werden
kann. Der Wasserstoff in Position 2 des Thiazolringes ist unter Bildung eines Anions abspaltbar. Das
Anion reagiert mit Brenztraubensure zu "aktiver Brenztraubensure". Das entstandene
Kondensationsprodukt erleidet Decarboxylierung, so da aktiver Acetaldehyd entsteht.
Der Wasserstoff an dem C-Atom, das die sekundre OH-Gruppe trgt, ist im aktiven Acetaldehyd
durch die benachbarte Doppelbindung aktiviert und daher abspaltbar:
VITAMINE
358
Wirkung
Viele Erkrankungen des Nervensystems werden durch Mangel an Vitamin B1 verursacht. Das Fehlen
von Vitamin B1 hat bei Menschen Appetitlosigkeit, Erbrechen, Muskelschwche, Depression etc. zur
Folge. Dem Vitamin B1-Mangelsyndrom wird abgeholfen durch "Vitaminisierung" von Brot. Je 1000
g verzehrte Nahrungskalorien bentigt der Erwachsene 0.4 mg Vitamin B1. In Asien wird Vitamin
B1 dem "polierten", also dem geschlten Reis zugesetzt. Mangelerscheinungen treten oft bei
Alkoholikern (sie sind oft unterernhrt, essen wenig Gemse) und whrend der Schwangerschaft auf.
Bei Schwangerschaft besteht erhhter Vitamin B1 Bedarf.
Eine zum Thiazolteil des Vitamins B1 analoge Verbindung, das Distraneurin,
dient dazu, die Entzugserscheinungen von Alkoholikern zu dmpfen.
Vitamin B2
Lactoflavin ist der thermostabile B2-Faktor. Da Vitamin B2 aus Milch isoliert wurde und gelb gefrbt
ist, wurde es Lactoflavin genannt. Als Synonym wird der Name Riboflavin verwendet, um die
Verwandtschaft mit Ribit anzuzeigen.
Dem Riboflavin liegt das Ringskelett eines
Benzopteridins zugrunde. Pteridin ist ein Heterocyclus, der aus einem Pyrimidinring und einem
ankondensierten Pyrazinring besteht:
Verbindungen mit Pteridinskelett sind relativ
hufig in der Natur. Derivate der Pteridine sind die
Pterine. Sie kommen z.B. als Farbpigmente in
Schmetterlingen vor, das Xanthopterin ist gelb,
das Leucopterin wei.
VITAMINE
359
In diesem Zusammenhang sei auch an die Harnsure erinnert, die einen Pyrimidinring und einen
Imidazolring in Form eines Purinsystem enthlt. Verwandt mit der Harnsure ist das Coffein:
Synthese
Zunchst verknpft man D-Ribose und 3,4-Xylidin zu einer Schiffbase, die C=N-Bindung wird dann
reduziert und die Verbindung mit Diazoniumsalz zu einer Azoverbindung umgesetzt. Nach der
reduktiven Spaltung der Azogruppe mit Natriumdithionit wird mit Alloxan umgesetzt, das seinerseits
aus Barbitursure erhltlich ist.
VITAMINE
360
Biogenese
Die Biogenese des Riboflavins ist noch nicht geklrt. Ausgangsprodukt der Biosynthese sind Purine,
die mit Ribosephosphat verknpft sind:
Aus dem Purinteil des Molekls wird das C-Atom 8 entfernt, so da der Pyrimidinring des Purins
erhalten bleibt. Die 2-stndige Aminogruppe wird dann gegen OH ausgetauscht. Der Aufbau des
Aromaten drfte ber einen C4-Zucker erfolgen.
Wirkung
Riboflavin ist ein in der Natur weit verbreiteter Redox-Katalysator, der an Eiwei gebunden ist.
Riboflavin kann an sein -N=C-C=N- System Wasserstoff addieren:
Riboflavin liegt meist in gebundener Form als "Flavinmononukleotid" FMN, als Lactoflavin-5'phosphorsure, und als "Flavin-adenin-dinukleotid" FAD vor.
VITAMINE
361
Folsure
Die Folsure ("Blattsure") enthlt wie Riboflavin ein Pteridingrundskelett. Sie ist fr Mikroorganismen
ein Wuchsstoff. Beim Menschen ist sie essentiell fr die Neubildung von Reticulozyten im
Knochenmark:
Strukturaufklrung
Bei der alkalischen Hydrolyse entstand p-Aminobenzosureglutamat, das durch Surebehandlung in
Glutaminsure und p-Aminobenzoesure gespalten werden konnte. Mit schwefeliger Sure wurde
Folsure zu 6-Formylpteridin gespalten, bei Behandlung mit Alkalihydroxid unter Luftausschlu
entstand 6-Methylpteridin. In diesem wurde durch NaOH-Behandlung der Pyrimidinring gespalten
und dann die 2-Amino-5-methylpyrazin-3-carbonsure zu einem 2-Amino-5-methylpyrazin
decarboxyliert. Tierische und pflanzliche Zellen enthalten Folsure in Form von Konjugaten mit
weiteren Glutaminsuremoleklen, die an die endstndige Carboxylgruppe mit ihrer Aminogruppe
geknpft sind.
Synthese
Schlsselverbindungen fr die Synthese von Folsure sind Pteridine, die in
Position 6 ein Kohlenstoffatom enthalten, also z.B. das 6-Formylpteridin.
Dieses wird aufgebaut durch Umsatz des 2,5,6-Triamino-4hydroxypyrimidins mit einer aus 3 C-Atomen bestehenden Komponente, z.B. 2,3-Dibrompropanol.
Bei der Kondensation entsteht auch das 7-Isomere, das jedoch instabil ist und daher abgetrennt
werden kann. Das Pyrimidinderivat stellt man durch Umsatz von Guanidin mit Cyanessigester dar,
wobei das primr entstehende Produkt zunchst nitrosiert wird, woran sich die Reduktion der
Nitrosogruppe zur Aminogruppe anschliet. Dann wird der Pyrazinring durch Umsatz mit 2,3Dibrompropionaldehyd aufgebaut. Das 6-Formyltetrahydropteridin kann dann mit p-Aminobenzoylglutamat zu einer Schiffschen Base verknpft werden, diese wird hydriert.
VITAMINE
362
Biosynthese
Folsure wird von Pflanzen und Mikroorganismen synthetisiert, wobei der Aufbau wie bei Riboflavin
beschrieben, zunchst mit einem Ribosederivat des Guanidins beginnt, aus dem das C-Atom 8
abgespalten wird.
Durch intramolekulare Umlagerung (Oxidation an C-2', Reduktion an C-1') entsteht daraus ein
Aminoketon, das sofort mit der Aminogruppe (ursprnglich N-7) einen Ring bildet, schlielich
erfolgt noch Abspaltung von Glycolaldehyddiphosphat im Zuge einer Retroaldolreaktion.
Wirkung
Folsure wird im Organismus zu 7,8-Dihydro- und
weiter zu 5,6,7,8-Tetrahydrofolsure hydriert. Die
Tetrahydro-Folsure ist Muttersubstanz fr
Cofaktoren, die C-1 Einheiten bertragen, wobei
die C-1-Gruppe an N-5 oder N-10 sitzen kann,
eventuell ist sie zwischen beide Stickstoffe
eingebunden.
So gibt es eine 5- und eine 10-Formyltetrahydrofolsure, ein 5-Methyl- und ein 5-Formimino-derivat
sowie ein 5,10-Methylen- und ein 5,10-Methenylderivat.
Tetrahydro-Folsurederivate sind wichtig zur
Bildung von Methionin, wobei auf Homocystein
eine Methylgruppe bertragen wird, aber auch fr
VITAMINE
363
In der Technik stellt man Nicotinsure durch Oxidation von 3-Methylpyridin her, das seinerseits
durch Gasphasenkondensation aus Acrolein und NH3 an einem Silicatkatalysator entsteht.
Biosynthese
Nicotinsure entsteht in der Regel aus Tryptophan. Der Indolring wird oxidativ zu N-Formylkynurenin
gespalten, aus dem dann Kynurenin entsteht, das hydroxyliert wird. Durch Seitenkettenabbau wird
3-Hydroxyanthranilsure gebildet, die Ringffnung erleidet. Durch Ringschlu zwischen Aldehydund Aminogruppe resultiert Chinolinsure, deren Decarboxylierung Nicotinsure liefert:
VITAMINE
364
Wirkung
Nicotinsure liegt meist in Form ihres Dinukleotids als NAD+ in gebundener Form vor:
Der Riboseteil, der an das Adenin geknpft ist,
kann in 2'-Stellung phosphoryliert sein, dann
liegt das NADP+ (P steht fr Phosphat) vor. Reich
an Nicotinsurederivaten sind Getreidemehl,
Erdnsse, Fleischwaren, besonders Leber.
NAD+ kann mit Milchsure, aber auch mit Ethanol und analogenen Verbindungen reagieren und
diese in Carbonylverbindungen berfhren, wobei es zu einer Hydridbertragung auf das Nicotinamid
kommt. Das NADH kann durch Riboflavin wieder zu NAD+ regeneriert werden.
Der tgliche Bedarf an Nicotinsure ist von der Menge der aufgenommenen Nahrung abhngig. Pro
1000 Kcal soll man etwa 6 mg Nicotinamid aufnehmen. Bei Mnnern liegt demnach der Tagesbedarf
bei 20 mg, bei Frauen bei 15 mg. Der Tagesbedarf wird bei uns voll durch die Nahrungsaufnahme
gedeckt, aber nicht in Lndern, in denen die Bevlkerung vorwiegend von Mais lebt, etwa in
Sdafrika. In Mais liegt die Nicotinsure in einer gebundenen Form vor, die nicht aufzubrechen ist.
Vitamin B6
Bei Vitamin B6 handelt es sich um eine Gruppe von Verbindungen, die Pyridinderivate darstellen.
Im Zusammenhang mit der Pellagra-Forschung wurde bei einseitig ernhrten Ratten, die eine an
Vitamin B freie Dit, zustzlich aber noch Vitamin B1 und B2 erhielten, pellagrahnliche Erscheinungen
- Acrodynie (Ausschlge, Haarausfall, Schuppen, Nagelbrchigkeit, Juckreiz) - beobachtet. Nach
Erarbeitung eines Tests konnten die B6-Vitamine aus Reiskleie bzw. Hefe isoliert werden. In den
wirksamen Formen sind die Hydroxymethylgruppen in Stellung 5 mit Phosphorsure verestert.
VITAMINE
365
Synthese
Eine der ersten Synthesen wurde von Merck ausgearbeitet. Man setzt Ethoxyacetylaceton mit
Cyanacetamid in alkoholischer Lsung unter Basenkatalyse (Piperidin) zu einem -Pyridon um.
Dieses wurde schonend nitriert und dann wurde die eingefhrte Nitrogruppe zum Amin reduziert (H2/
Pt). Danach wurde zur Entfernung der Carbonylgruppe mit PCl5/POCl3 ein 2-Chlorpyridinderivat
hergestellt, das katalytisch dechloriert wurde. Nach Spaltung des Ethers durch Erhitzen mit HCl
wurden die Aminogruppen durch Behandlung mit salpetriger Sure in Hydroxylgruppen berfhrt.
VITAMINE
366
Heute synthetisiert man Pyridoxin ber eine Diels-Alder-Reaktion aus einem Oxazol und dem
Acetonid des 1,4-Butendiols:
Die Dienkomponente erhlt man durch Chlorierung von Acetessigester und Umsatz des
Chloracetessigesters mit Formamid, woran sich die berfhrung der Ester in eine Nitrilgruppe
anschliet. Die Enkomponente wird aus Acetylen durch Umsatz mit Formaldehyd zum 1,4Butindiol, Partialhydrierung und Ketalisierung mit Aceton erhalten.
Biosynthese
Pyridoxal wird in der Natur aus Dihydroxyaceton bzw. Glycerinaldehyd synthetisiert.
3-Glycerinaldehydphosphat wird zur 3-Phosphoglycerinsure oxidiert, in 2-Phosphoglycerinsure
umgewandelt, bildet dann Phospho-enolbrenztraubensure und Brenztraubensure, die zu Acetaldehyd
decarboxyliert wird: Dieser kondensiert mit Dihydroxyacetonphosphat. Das entstehende Produkt
setzt sich mit Glycerinaldehydphosphat und NH3 zum Pyridoxin um.
VITAMINE
367
Wirkung
Vitamin B6-Mangel uert sich bei Erwachsenen meist in unspezifischen Phnomenen, wie z.B.
Depression, Konfusion, Schlfrigkeit. Bei Suglingen wurde dieser Mangel aber sehr ausgeprgt
beobachtet: Lange Zeit wurde - unbewut - bei der Herstellung von Suglingsnahrung das Vitamin
B6 zersetzt. Die so ernhrten Suglinge litten an zentralnervsen Krmpfen.
Der Bedarf an Vitamin B6 hngt von der Ernhrung ab. Fr jedes Gramm an zugefhrtem Eiwei soll
0.02 mg an Vitamin B6 verabfolgt werden. Damit ergibt sich ein Tagesbedarf von etwa 2 mg.
Schwangere Frauen, solche die Anticontraceptiva nehmen, und solche, die an prmenstruellen
Beschwerden leiden, brauchen etwa die dreifache Menge. Bei seltenen Stoffwechselerkrankungen
kann der Vitamin B6-Tagesbedarf auf ber 50 mg ansteigen. B6 kommt vor allem im Salat (100 g
enthalten 1 mg) in Paprika und Hefe vor.
Vitamin B6 ist Teil eines Enzyms, das die phospholytische Spaltung von Glycogen bewirkt. In diesem
Enzym ist Pyridoxal ber die Aldehydgruppe mit einem Lysinrest der Proteinkomponente in Form
einer Schiffbase verknpft.
Besonders wichtig sind die B6-Vitamine zur Transaminierung. Beispielsweise reagiert Alanin mit
Pyridoxalphosphat unter Bildung einer Schiffbase. Durch Prototropie verschiebt sich die C=NDoppelbindung, so da bei der Hydrolyse Brenztraubensure und Pyridoxaminphosphat entstehen:
VITAMINE
368
Strukturaufklrung
Beispielhaft war die Strukturaufklrung des Biotins durch DU VIGNEAUD: Durch Hydrolyse mit
Ba(OH)2 lt sich aus der Harnstoffgruppierung CO2 abspalten. Die gebildeten Aminogruppen
knnen durch Behandlung mit Dimethylsulfat und Lauge (Hoffmann-Eliminierung) entfernt werden,
so da eine Thiophencarbonsure entsteht.
Der Tetrahydrothiophenring lt sich durch Entschwefelung mit Raney-Nickel aufspalten, nach
ffnung des Harnstoffringes kann die Diaminogruppe durch Umsatz mit Phenanthrenchinon
nachgewiesen werden, das Molekl lie sich auerdem durch KJO4 zur Pimelinsure spalten:
Synthese
Es gibt eine groe Anzahl von Synthesen fr Biotin, von denen etliche auf chirale Naturstoffe, z.B.
Zucker, zurckgreifen. Besonders geschickt erscheinen Synthesen, die die sterischen Zentren
prformieren. Zuerst stellt man aus -Mercaptopropionsureester und -Brompimelinsure einen
-Ketosureester dar:
Dieser wurde ber das Oxim und dessen Isomerisierung in einen Aminothiophencarbonsureester
berfhrt, der zum Lactamring cyclisiert wurde. Mittels Curtius-Abbau wurde die -Aminogruppe
geschaffen. Bei der folgenden Hydrierung ergab sich durch den Sureamidring bedingt die richtige
Konfiguration der Substituenten an den C-Atomen beider Ringe, so da nur noch mit Phosgen unter
Reaktion der beiden Aminogruppen ein Ring unter Harnstoffbildung geschlossen werden mute.
VITAMINE
369
Biosynthese
Mikroorganismen knnen aus 3 Moleklen Coenzym A ber drei Molekle Malonyl Coenzym A
Pimelyl Coenzym A herstellen. Dieses reagiert mit L-Alanin unter Decarboxylierung der zunchst
entstehenden Aminosure (-Ketosure) zu einer 7-Oxo-8-aminononansure:
Nun wird die Oxogruppe gegen eine NH2-Gruppe reduzierend ausgetauscht. Dann wird zwischen die
beiden Stickstoffatome HCO3-eingebaut:
Erst nach diesem Schritt erfolgt der ungewhnliche Einbau des Schwefelatoms in noch nicht
geklrten Reaktionen. Das Schwefelatom stammt wahrscheinlich von Cystein.
Wirkung
Biotin wird in Gegenwart von HCO3 und Mg++-Ionen am NH Stickstoff, der der Seitenkette
gegenberliegt, carboxyliert:
Biotincarboxylat bertrgt CO2 auf Brenztraubensure unter Bildung von Oxalessigsure, die im
Citronensurecyclus eine Rolle spielt:
VITAMINE
370
Bei Umsatz des Pantothensuremethylesters mit mit -Mercaptoethanolamin entsteht Pantothein (Wachstumsfaktor fr
Mikroorganismen).
Pantothein ist ein Bestandteil des Coenzyms A. In diesem ist die -stndige Hydroxylgruppe des
Pantotheins ber ein Diphosphat und einen phosphorylierten Riboseester mit Adenin verknpft.
Strukturaufklrung
Die Bestimmung der funktionellen Gruppen - Nachweis der Peptidbindung, Carboxylgruppe, der
Chiralitt und der primren und sekundren OH-Gruppe - wurde in blicher Weise durchgefhrt. In
saurer Lsung wurde Pantolacton erhalten. Bei dessen Oxidation mit Ba(MnO4)2 entstand Aceton, bei
der Behandlung mit Grignard-Lsung ein Triol, das mit PbTA zu Aceton und einem Aldehyd spaltbar
war, der zur Sure aufoxidiert wurde, die sich als 2,2-Dimethyl-3-hydroxypropionsure erwies.
VITAMINE
371
Synthese
Zur Synthese von Pantolacton geht man von
Isobutyraldehyd aus. Dieser reagiert mit Formaldehyd im Zuge einer Aldolreaktion zu -Hydroxy,-dimethylpropionaldehyd. Dieser lt sich mit
HCN zu einem Cyanhydrin umsetzen, das bei der
sauren Verseifung das Pantolacton liefert.
-Alanin lt sich durch Hydrierung von
Cyanessigsure darstellen, dessen Cu++ Salz bei der Umsetzung mit Pantolacton (nach Trennung der
Isomeren) Pantothensure ergibt.
Biosynthese
Die Biosynthese geht von 2 Moleklen Brenztraubensure aus, die "in komplexer Reaktionsfolge"
unter CO2 Verlust zu einer ,-Dihydroxyisovaleriansure verknpft werden. Durch Abspaltung der
-Hydroxygruppe entsteht ein Enol, das sofort zur 2-Oxoisovaleriansure isomerisiert wird. ber die
5,10-Methylentetrahydrofolsure erfolgt die Einfhrung der Hydroxymethylgruppe in die zur
Carbonylgruppe benachbarte und daher aktivierte CH-Bindung. Durch enzymatische Hydrierung
wird schlielich die Oxogruppe zur OH-Gruppe reduziert. Die so gebildete Pantoinsure setzt sich
mit -Alanin um, das z.B. durch Decarboxylierung von Asparaginsure erhalten werden kann.
Wirkung
Das Coenzym A ist entscheidend am Aufbau von Fettsuren beteiligt, es vermittelt die C-CVerknpfung von Essigsureresten und ist auch wichtig fr viele andere C-C-Verknpfungsreaktionen,
z.B. fr den Aufbau von Biotin (Verknpfung von Alanin mit einem Pimelyl-Coenzym A). Der
tgliche Bedarf betrgt 100 mg. In 100 g Leber sind 40 mg Pantothensure enthalten, in einem Eigelb
10 mg, in 100 g Bohnen nur 2 mg.
VITAMINE
372
Vitamin B12
1926 wurde entdeckt, da rohe Leber einen Faktor enthlt, der pernizise Anmie zu heilen vermag.
Erst 1948 gelang die Isolierung des Vitamins, 1956 die Strukturaufklrung und 1976 die Totalsynthese
(ESCHENMOSER und WOODWARD).
Porphyrine
Das Porphyrinsystem ist im Blutfarbstoff (Hmin) und Chlorophyll enthalten. Es besteht aus vier
Pyrrolringen, die ber Methingruppen miteinander verknpft sind.
Man entwickelt die Formel des Hmins, indem man zuerst ein Malteserkreuz zeichnet, in dieses dann
an den inneren Ecken die Stickstoff-Atome einfgt und den Aufbau des C-Skelettes durch Einzeichnen
der fehlenden C-Atome in Form von Pyrrolringen ergnzt.
Dann wird das Zentralatom eingefgt und dieses mit den Stickstoffatomen in Ring 1 und 3 verknpft.
Der Ring 1 wird nun zum Pyrrolring durch Einfgen von Doppelbindungen aromatisiert. Von diesem
Ring ausgehend legt man die weiteren Doppelbindungen so, da ein voll durchkonjugiertes System
entsteht. An dieses Ringsystem fgt man nun die Substituenten, wobei man am Ring 4 die
-Substituenten vertauscht. Zunchst fgt man die Methylgruppen an die Pyrrolringe, dann an die
Ringe 1 und 2 Vinyl und an die Ringe 3 und 4 Propionsurereste.
VITAMINE
373
Vier dieser Pyrroleinheiten knnen schon beim Stehen an der Luft Porphyrine bilden.
Das Chlorophyll unterscheidet sich vom Hmin durch Austausch des Eisens als Zentralatom gegen
Magnesium, Hydrierung am Ring 4, Veresterung von dessen Suregruppe mit einem Phytylrest
sowie Oxidation der Seitenkette in -Stellung des Ringes 3 und Ringschu des -stndigen C-Atoms
mit den Methinbrcken C-Atom zwischen Ring 3 und 4. Auerdem ist die Suregruppe in diesem
Ringteil mit Methanol verestert, im Ring 2 ist die Vinylgruppe durch den Ethylrest ersetzt.
Gallenfarbstoffe entstehen durch Oxidation des Blutfarbstoffes. Dabei geht die Methingruppe
zwischen den Ringen 1 und 2 verloren, die Konjugation zwischen den Ringen 3 und 4 ist durch Ersatz
der Methinbrcke gegen eine CH2-Gruppe aufgehoben:
Auch das Chlorophyll wird im biologischen Geschehen unter Verlust der Methinbrcke zwischen
Ring A und B abgebaut.
Phthalocyanine: Erhitzt man Phthalsuredinitril mit Metallsalzen, z.B. Cu++, auf 200C, so entsteht
ein blaues Pigment. Dieses Pigment kann man auch durch Erhitzen von Phthalsureanhydrid mit
Harnstoff bekommen. Bei Phthalocyaninen handelt es sich um Tetraazaporphyrine, die an den
-Stellungen der Pyrrolringe anstelle von Alkylsubstituenten ankondensierte Benzolringe tragen.
Phthalocyanine dienen als Pigmentfarben, zum Anfrben von Papier oder Textilien.
VITAMINE
374
Vitamin B12 enthlt anstelle des Porphyrinringsystems das Corrinringsystem, in dem die die Ringe
A und D verbindende Methinbrcke fehlt. Das Zentralatom ist dreiwertiges Cobalt, das sechsfach
koordoniert ist. Eine Koordinationsstelle ist mit einem Cyanidion, eine zweite mit einem
5,6-Dimethylbenzimidazolring (der auch relativ selten in der Natur vorkommt) verbunden. Die
restlichen Koordinationsbindungen gehen zu den 4 Stickstoffatomen der Pyrrolringe. Ungewhnlich
ist auch die 1-Amino-2-propanolgruppe.
Vitamin B12 ist vor allem fr die Blutbildung ntig, sowie fr die Funktion der Nervenzellen und fr
das Wachstum. B12 bildet mit dem sogenannten intrinsic factor, der in der Magenschleimhaut gebildet
wird, einen Komplex, der im unteren Teil des Dnndarms resorbiert wird. Bei Mangel an diesem
Faktor entsteht pernizise Anmie. Die roten Blutkrperchen entwickeln sich im Rckenmark nur bis
zur embrionalen Stufe. Bei perniziser Anmie hat man Zungenentzndungen, mangelhafte Bildung
von Magensure, versprt "Kribbeln", schlielich kommt es zu Lhmungserscheinungen.
Vitamin B12 wird ausschlielich von Mikroorganismen hergestellt, es ist vor allem in tierischer
Nahrung enthalten, nicht aber in Pflanzen. Besonders anmiegefhrdet sind daher Vegetarier.
Pernizise Anmie lt sich durch Behandlung mit Leberextrakten heilen (1926). Diese Krankheit
ist nicht nur auf den Mangel an Vitamin B12 zurckzufhren, sondern auch auf den Mangel an
Folsure, die wieder fr die Methioninbildung wichtig ist.
Der Gesamtvorrat des Krpers an Vitamin B12 betrgt 2-5 mg, davon sind etwa 0.8 mg in der Leber
gespeichert. Die gespeicherte B12 Menge deckt den Bedarf fr 3-8 Jahre, daher ist es schwierig,
Mangelerscheinungen zu entdecken. Zur Aufrechterhaltung des Vitamins B12-Spiegels reichen 2 g
pro Tag aus.
Vitamin B12 wird der Tiernahrung zugesetzt, es wirkt wachstumsfrdernd auf Jungtiere, weil es
bessere Ausnutzung des pflanzlichen Eiweies zur Folge hat.
Die Aufgaben von Vitamin B12 im Krper sind noch nicht geklrt. B12 spielt offenbar eine Rolle als
Katalysator fr Methylierungsreaktionen z.B. von Homocystein zu Methionin:
VITAMINE
375
Vitamin C
Vitamin C wird auch Ascorbinsure genannt. Der Name Ascorbinsure leitet sich aus dem Englischen
"antiscorbutic vitamine" ab, weil ein Mangel an Vitamin C Skorbut hervorruft. Diese Krankheit war
schon im Altertum bekannt. Im Mittelalter erkannte man, da der Ausbruch von Skorbut bei
Seefahrern verhindert werden konnte, wenn Frischgemse und Zitronensaft oder Sauerkraut verabfolgt
wurde.
Skorbut uert sich in erhhter Kapillardurchlssigkeit der Zellwnde und fhrt so zu groflchigen
Blutungen in Haut, Muskulatur, Zahnfleisch und inneren Organen.
Die Ascorbinsure wurde 1932 isoliert; sie besitzt ein hohes Vermgen, selbst reversibel oxidiert zu
werden. Darauf beruht ihre Bestimmungsmethode: Farbstoffe werden unter Bildung ihrer
Leucoverbindungen entfrbt, Ascorbinsure gleichzeitig zur Dehydroascorbinsure oxidiert. Diese
reduktive Eigenschaft ist auch fr die biologische Wirkung verantwortlich.
Schon aus der Bezeichnung Ascorbinsure ist der saure Charakter der Verbindung ableitbar. Diese
sauren Eigenschaften werden durch die Endiolgruppierung bedingt. In der Regel schreibt man die
Formel cyclisch:
VITAMINE
376
Synthese
Die technische Synthese der L-Ascorbinsure geht von D-Glucose aus, die zu D-Sorbit reduziert
wird. Der Mikroorganismus Acetobacter suboxidans ist imstande, nur das C-Atom 5 des ursprnglichen
Glucosemolekls zu oxidieren. Es entsteht eine Sorbose, wobei wir beachten mssen, da die
Numerierung im Vergleich zur Glucose nun zu ndern ist. Zur Synthese von Vitamin C ist nur noch
eine Oxidation zur Sure am C-1-Atom notwendig. Dies geschieht entweder mit O2 am Platinkontakt
oder ber das Acetonid-Derivat, die Sure wird dann in das Lacton berfhrt.
Biosynthese
Glucose wird zu Glucuronsure oxidiert. Die Glucuronsure wird zur L-Gulonsure reduziert, die als
Gulonsure--lacton in Position 2 von dem Enzym L-Gulono--lactonoxidase aufoxidiert wird.
Durch Enolisierung entsteht spontan L-Ascorbinsure:
VITAMINE
377
378
13. Antibiotika
Antibiotika sind von Mikroorganismen erzeugte Stoffe, die imstande sind, das Wachstum anderer
Mikroorganismen (Bakterien) zu hemmen. Zur Bildung von Antibiotika sind neben einigen Pilzen
vor allem die Aktinomyzeten, eine vorwiegend im Boden beheimatete Gruppe von Mikroben,
befhigt. Hier ist es insbesondere die Gattung Streptomyces, die eine Flle derartiger Substanzen zu
produzieren vermag. Wenn man die chemische Struktur von Antibiotika betrachtet, findet man
keinerlei bereinstimmung zwischen den Vertretern verschiedener Verbindungsklassen: Antibiotika
enthalten oft sehr ungewhnliche und manchmal instabile Strukturelemente - z.B. einen -Lactamring
(in Penicillin und Cephalosporin), eine Nitrogruppe oder Halogene (in Chloromycetin), andere sind
teilweise aus Propionsureresten an Stelle von Essigsureresten aufgebaut (Makrolide). Man findet
Antibiotika, die Zucker ungewhnlicher Struktur enthalten (Streptomycin) oder Aminosuren
ungewhnlicher Konfiguration (Actinomycin). Eine Einteilung der Antibiotika kann nach chemischen
Gesichtspunkten, nach dem zu bekmpfenden Keimtyp oder nach dem Wirkmechanismus erfolgen,
wobei berschneidungen unausweichlich sind. Ein bestimmtes Antibiotikum kann verschiedene
oder die gleiche Keimart nach verschiedenen biochemischen Mechanismen schdigen (z.B.
Tetracycline). Eine Einteilung nach dem Wirkmechanismus wrde etwa unterscheiden zwischen
Antibiotika, die
als "oberflchenaktive Stoffe" auf die Zellwand schdigend einwirken; z.B. Polyenmacrolide
(Nystatin), Griseofulvin, Peptid-Antibiotika wie Colistin.
die Bildung oder Funktion von Bakterienenzymen beeintrchtigen; dies kann durch Eingriff in
die Enzymbiosynthese zu verschiedenen Stadien erfolgen, oder durch Inhibierung der fertigen
Enzyme. Beispiele: Tetracycline, Streptomycin, Chloramphenicol, Erythromycin.
bereits die Biosynthese von Nukleinsuren von Bakterien und somit sehr frhzeitig deren
Proteinbiosynthese hemmen; z.B. Hemmung der DNA-abhngigen RNA-Polymerase
durch das Makrolid-Antituberkulotikum Rifampicin.
auf die Mitochondrien einwirken (wie Gramicidin S), wodurch die oxidative Phosphorylierung entkoppelt wird.
Obwohl eine riesige Zahl von Antibiotika auf ihren mglichen Einsatz zur Bekmpfung von
Krankheitserregern getestet wurde, sind nur etwa 100 Antibiotika pharmazeutisch nutzbar, alle
anderen erwiesen sich zwar oft als sehr wirksam, aber auch als zu toxisch.
Zur Unterscheidung verschiedener Bakteriengruppen bedient man sich der Gram-Reaktion: Bakterien
werden zuerst mit Gentianaviolett (Kristallviolett) angefrbt, danach wird mit verdnnter KJ/J2Lsung gebeizt. Dann wird mit 96%igem Alkohol gewaschen, mit Kristallviolett einige Sekunden
nachgefrbt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Staphylokokken, Milzbrandbakterien,
Diphteriebakterien u.a. werden dabei dunkelblau bis blauschwarz gefrbt (grampositiv). Gonokokken,
Typhus-, Ruhr- und Pest-Bakterien u.a. bleiben rot (gramnegative Bakterien).
1.
379
1.1 -Lactamantibiotika
1.1.1 Penicillin
ALEXANDER FLEMING beobachtete 1928 bei einem Staphylokokken-Stamm die Hemmung des
Wachstums durch einen Schimmelpilz. Das wirksame Prinzip nannte er bereits Penicillin. Die
Publikation dieser Entdeckung fand jedoch keine Resonanz. Erst 1939 wurde das Problem von
FLOREY, CHAIN, ABRAHAM u. a. in der sog. Oxford-Gruppe aufgegriffen, denen schon 1940 die
Isolierung von Penicillin aus Kulturen von Penicillium notatum gelang. Die Strukturaufklrung war
wegen der Instabilitt der Penicilline extrem schwierig. Je nach Schimmelpilz und Substrat konnten
weitere Penicilline erzeugt werden, die sich in der Acylkomponente R unterscheiden. Damit beginnt
im eigentlichen Sinn die Antibiotika-ra. Die grotechnische Gewinnung von Penicillin erfolgte
whrend des 2. Weltkriegs in den USA. Erst nach Kriegsende wurde es fr die Therapie allgemein
zugnglich. Die Isolierung (1959) des Grundkrpers aller Penicilline, der 6-Aminopenicillansure,
aus dem Kulturmedium von Penicillium chrysogenum hat fr die Entwicklung der neuen,
halbsynthetischen Penicilline groe Bedeutung erlangt.
Chemie
Alle Penicilline weisen als gemeinsamen Grundkrper ein kondensiertes -Lactam-ThiazolidinRingsystem auf, die sog. 6-Aminopenicillansure. Der Lactamring wird aus -Alanin gebildet und
wird sehr leicht durch Sure und Base aufgespalten, z.B. von Salzsure im Magensekret, wodurch die
Wirksamkeit verlorengeht. Die saure Hydrolyse ffnet dazu auch den Thiazolidinring, der ein
maskiertes Aldehydderivat darstellt.
380
Aufgrund ihrer Surenatur bilden Penicilline eine Reihe von Salzen, wovon die Na- und K-Salze und
die mit einigen organischen Basen gebildeten die grte praktische Bedeutung erlangt haben. Die
Alkali-Salze erhlt man in kristalliner Form, sie sind praktisch alle wasserlslich. In trockenem
Zustand weisen sie eine gute Bestndigkeit auf.
Die verschiedenen Penicilline unterscheiden sich durch die Substitution der 6-stndigen Aminogruppe.
Bei den Substituenten handelt es sich um organische Suren mit in der Regel aromatischem
Charakter, die ber eine Sureamidbindung mit der 6-APS verbunden sind. Die Ausbeute an
Penicillin lie sich durch Zugabe der dem Acylrest -CO-R entsprechenden Sure zu den Nhrmedien
bedeutend steigern. Man konnte so versuchen, ob andere Acylreste Penicilline mit besserem
Wirkspektrum bilden und fand, da die Aufspaltung des Lactamringes durch rumlich anspruchsvolle
Gruppen behindert wird. So fand man oral wirksame Penicilline. Durch Zugabe von Phenoxyessigsure
zum Nhrmedium erhielt man z. B. das erste oral anwendbare Penicillin, Penicillin V.
381
R
O
S
N
Internat. Freiname
oral
parenteral
PenicillinaseFestigkeit
Benzylpenicillin
(Penicillin G)
CH2
Penicillin V
OCH2
OCH
(+)
CO2H
Phenethicillin
CH3
OCH
Propicillin
C2H5
OMe
Methicillin
OMe
Ph
Oxacillin
N
O
Ampicillin
Me
CH
NH2
Carbenicillin
CH
CO2H
Wirkungstyp
Die Penicilline wirken bakterizid. Da sie die Zellwand-Biosynthese hemmen, knnen sie ihre volle
Wirkung nur bei proliferierenden Keimen entfalten. Das Absterben ist ein sekundrer Vorgang, in
dem die so geschdigten, osmotisch labilen Zellen lysieren. Ruhende Keime werden durch Penicillin
im Zustand der Bakteriostase gehalten. Aber auch in einer proliferierenden Kultur werden nicht alle
Keime abgettet, da sich nicht alle Bakterien in einem synchronen Stoffwechselzustand befinden.
Einzelne Keime proliferieren nicht. Sie sind in diesem Zustand penicillin-unempfindlich (sog.
Persister).Sie knnen sich nach einer mehrstndigen Erholungsphase in Abwesenheit von Penicillin
erneut vermehren und sind dann wieder voll penicillinempfindlich. Daraus wird verstndlich, da
sich unter klinischen Bedingungen nur selten ein voller bakterizider Effekt erzielen lt. Es ist nicht
sinnvoll, Penicillin mit Wirkstoffen zu kombinieren, die ber eine bakteriostatische Eigenwirkung
verfgen. Proliferierende Keime wrden dadurch der bakteriziden Penicillin-Wirkung entzogen.
Wirkungsmechanismus
Das sog. Murein (ein Peptidoglykan) stellt das
Grundgerst der Zellwand von Bakterien dar und
umgibt als in sich geschlossenenes Makromolekl
die Zelle. Die Bausteine sind zwei Aminozucker
(N-Acetylmuraminsure und N-Acetylglucosamin)
sowie mehrere Aminosuren. Die Synthese des
Mureins verluft in mehreren Teilschritten. Durch
Aneinanderreihung der niedermolekularen Bausteine wird in der Bakterienzelle zunchst ein lineares
Polymer gebildet, das im letzten Schritt auerhalb
Me
NH
OH
O
O
O
NH
OH
O
Peptid
NAcGA
Me
NAcMur
382
der Zytoplasmamembran (im sog. periplasmatischen Raum) vernetzt wird, wodurch das Murein
seine Festigkeit und Starrheit erhlt. Diese Vernetzung wird durch Penicilline verhindert.
Die fehlende Toxizitt von Penicillinen wird damit erklrt, da eukaryontische Zellen keine
mureinhnlichen Strukturen aufweisen. Der Angriffspunkt der Penicilline liegt in der dritten Stufe
der Mureinsynthese. Sie reagieren mit der Murein-Transpeptidase, die die Quervernetzung vermittelt.
Unter Aufspaltung des -Lactamringes und Ausbildung einer kovalenten Bindung entsteht ein
Penicilloyl-Enzym-Komplex, der eine irreversible Inaktivierung der Transpeptidase zur Folge hat.
NAc
L
D
L
D
D
Mur NAc GA
Ala
Glu
Lys (Gly)4 Gly
Ala
Ala
NAc
L
D
L
D
D
Mur NAc GA
Ala
Glu
D-Ala
Lys (Gly)5
Ala
Transpeptidase
Ala
NAc
L
D
L
D
D
Mur NAc GA
Ala
Glu
Lys (Gly)4 Gly
Ala
Ala
NAc
L
D
L
D
Mur NAc GA
Ala
Glu
Lys (Gly)5
Ala
Penicilline
Cephalosporine
Me H
COO
COO
Me
Me
O
N
H
H
H
NH
H
O
Me
383
2.
Oralpenicilline
Die Gruppenbezeichnung Oral-Penicilline bezieht sich nur auf solche, die in ihrem Wirkungsspektrum
dem von Penicillin G entsprechen. Man fat darunter nicht alle diejenigen Penicilline zusammen, die
heute per os verabreicht werden knnen. Die wichtigsten Oral-Penicilline sind Penicillin V
(Isocillin), Phenethicillin (Pen200) und Propicillin (Baycillin). Die Anwendung erfolgt bei
leichteren Infektionen mit (hoch-)empfindlichen Erregern, insbesondere solchen durch -hmolysierende Streptokokken der Gruppe A: Angina, Scharlach, Rheumatisches Fieber und Erysipel. Ihr
zweiter Indikationsbereich liegt in einer Ergnzung der parenteralen Penicillin G - Therapie im
Verlauf schwerer Infektionen.
3.
Penicillinasefeste Penicilline
In der ersten Hlfte der 60er Jahre gelang es, einen weiteren Nachteil von Penicillin G, seine
Penicillinase-Empfindlichkeit, durch die neuen halbsynthetischen penicilline Methicillin (Cinopenil)
und Oxacillin (Stapenor, Cryptocillin) auszugleichen. Unter Anwendung des Prinzips der sterischen
Hinderung konnte der -Lactamring so geschtzt werden, da er fr Penicillinase kaum noch
angreifbar war. Dies wurde durch Einfhrung sperriger Seitenketten mit mglichst polarem Charakter
erreicht.
Oxacillin ist am wirksamsten und wird vor allem gegen penicillinasebildende Staphylokokken
eingesetzt (Sepsis, Meningitis). Die penicillinasefesten Penicilline besitzen die unangenehme
Eigenschaft, die Bildung von Penicillinase in Bakterien zu induzieren. Ihre unkritische und
unsachgeme Anwendung kann daher dazu beitragen, da sich die Zahl hochresistenter,
penicillinasebildender Staphylokokken weiter vermehrt. Auerdem werden in zunehmendem Mae,
vor allem in Krankenhusern, Staphylokokken gefunden die auch gegen diese Penicilline resistent
sind (bis zu 25%!).
4.
Breitspektrum-Penicilline
Geringfgige Vernderungen am Penicillinmolekl haben zu
halbsynthetischen Derivaten gefhrt, deren Wirkungsspektrum
gegenber dem vom Benzylpenicillin sowohl im grampositiven wie
auch im gramnegativen Bereich erweitert ist. DieseEntwicklung wurde
Anfang der 60er Jahre mit Ampicillin eingeleitet, dessen Seitenkette
sich von der im Penicillin G nur durch eine zustzliche Aminogruppe am Benzylrest unterscheidet.
Spter kam Carbenicillin hinzu. Es ist erstaunlich, wie nachhaltig deren zustzliche polare Gruppen
das Wirkungsspektrum beeinflussen. Ampicillin, das eine groe therapeutische Bedeutung erlangt
hat, ist surestabil und kann oral verabreicht werden. In Erweiterung des Wirkungsspektrums von
Penicillin G ist Ampicillin auch aktiv gegen Enterokokken, Listerien, E. coli, Proteus mirabilis,
Salmonellen, Shigellen, Hmophilus influenzae und Bordetella pertussis. Allerdings ist es im
allgemeinen gegen Keime gegen die auch Penicillin G wirkt schwcher aktiv als dieses (bis zu 75%!).
Penicillin-Synthesen
Grundstzlich kann jedes Antibiotikum, dessen Struktur bekannt ist, auch synthetisch dargestellt
werden. Darber hinaus besteht die Mglichkeit, natrlich vorkommende Antibiotika chemisch zu
modifizieren. Bisher ist allerdings eine grotechnische Produktion von Antibiotika wirtschaftlich nur
384
auf biologischem Weg mglich, d. h. durch Fermentation der entsprechenden Mikroorganismen und
anschlieende Isolierung der antibiotischen Substanzen. Derivate der natrlichen Antibiotika werden
in der Regel halbsynthetisch hergestellt, d. h. in einer Kombination biologischer und synthetischer
Reaktionsschritte. Dennoch waren gerade die ungewhnlichen Strukturen der Penicilline eine
Herausforderung fr die prparativen organischen Chemiker. Zur historischen Wrdigung dieser
Anstrengungen findet sich im Anhang C eine vergleichende Darstellung der ersten Totalsynthesen
von Penicillin.
1.1.2 Cephalosporine
Eine zweite Klasse von -Lactamantibiotika mit
gleichem biologischen Wirkspektrum wie Penicillin
stellen die in Kloakenabwssern enthaltenen
Cephalosporine dar, in denen der Thiazolidin-5Ring zum 6-Ring erweitert ist. Sie sind antibakteriell
weniger wirksam, jedoch gegen Sure und
Penicillinase bestndiger.
Durch Abspaltung des Acylrestes R und nachfolgende Acetylierung wird aus Cephalosporin C die
viel wirksamere Acetylverbindung erhalten.
Die Biosynthese der Cephalosporine beginnt durch Verknpfung der drei Aminosuren LAminoadipinsure, L-Cystein und L-Valin zu einem Tripeptid, das als Zwischenstufe in dem
Schimmelpilz Cephalosporium nachgewiesen wurde. Dann erfolgt enzymatische Dehydrierung,
Oxidation der Methylgruppen des Valins und schlielich der oxidierende Ringschlu, bei dem das
die SH-Gruppe tragende C-Atom formal aufoxidiert wird:
385
OH
OH
H
H
N
R
S
N
O
NH2
N
O
CO2H
Thienamycin
CO2H
Norcardicin
H
O
OH
N
O
CO2H
Clavulansure
Tetracycline
R1 R2 R3 R4
NMe2
OH
NHR5
OH
OH
OH O
Internat.
Freiname
R1
R2
R3
R4
R5
Tetracyclin
Me
OH
Chlortetracyclin Cl
Me
OH
Oxytetracyclin
Me
OH
OH
DemethylchlorCl
tetracyclin
OH
Rolitetracyclin
Me
OH
Methacyclin
CH2=
OH
CH2
Doxycyclin
H
H
Me
H
OH
Chemie
Tetracycline enthalten, wie der Name sagt, ein
H
H
H
Me2N H
Minocyclin
tetracyclisches, linear anelliertes Ringsystem
Tab.: Tetracycline in klinischer Anwendung
(Naphthacen), das hoch substituiert ist. Es sind
gelbe, meist kristalline und in Wasser wenig lsliche Verbindungen. Aufgrund der beiden sauren
Hydroxygruppen und der basischen Dimethylaminogruppe zeigen sie amphotere Eigenschaften.
Von ihren Salzen haben die Hydrochloride die grte Bedeutung. Die in der Tabelle vier erstgenannten
Tetracycline werden heute fermentativ, die brigen auf halbsynthetischem Weg - aus Tetracyclin gewonnen.
386
Mittel der Wahl darstellen. Bei manchen besitzen sie nur eine mittlere bis schwache Wirkung (z.B.
fr Mykobakterien oder Typhuserreger). Tetracycline knnen wegen ihrer Surestabilitt oral
angewendet werden. Die orale Applikation bewirkt allerdings Darmstrungen, weil durch diese
Antibiotika auch die Darmbakterien angegriffen werden.
Wirkmechanismus
Tetracycline verdanken ihre bakteriostatische Wirkung zwei deutlich verschiedenen Wirkmechanismen. Einerseits stren sie die bakterielle Zellwandbildung durch Hemmung des Einbaues von
D-Glutaminsure und Chelatisierung von Spurenmetallionen, die fr Enzymbildung bentigt werden.
Zum anderen hemmen sie die ribosomale Proteinbiosynthese durch Eingriff in die Elongationsphase
(dieser Effekt wird unter 13.3.1, Seite 389, beschrieben).
2.
2.1
Polyenmacrolide
Chemisch handelt es sich hier um makrocyclische Lactone mit sechs oder sieben konjugierten C=CDoppelbindungen, etlichen sekundren Alkoholfunktionen und vielen Chiralittszentren. Ein weiteres
Merkmal ist der mit dem Lactonring glykosidisch verbundene Aminozucker Mykosamin. Wegen
ihres ungesttigten Charakters sind die Polyenmacrolide licht- und oxidationsempfindlich. Die
wichtigsten Vertreter sind Amphotericin B, Nystatin (aus Kulturen von Streptomyces noursei
isoliert) und Pimaricin. Polyenmacrolide werden heutzutage vor allem als Antimykotika (Mittel
gegen Pilze und Hefen) eingesetzt. Sie ergnzen in idealer Weise die beiden anderen klinisch
verwendeten Klassen von Antimykotika, die Griseofulvine und das vollsynthetische Fluorcytosin.
Insbesondere Amphotericin B verfgt ber ein sehr breites Wirkspektrum gegen praktisch alle
menschenpathogenen Pilze. Es kann oral und i.v. gegeben werden. Nystatin wirkt excellent gegen
hartnckige Infektionen mit Candida albicans, kann aber wegen seiner Toxizitt nur lokal angewendet
werden.
Biosynthese
Die Anzahl un d Abfolge der OH-Gruppen
in Polyenmacroliden lt auf eine Biogenese aus Essigsuremoleklen schlieen.
Durch Eliminierung von OH entstehen dann
die konjugierten Doppelbindungen. Die
Methylgruppen am Kettenende weisen auf
den Einbau von Propionsureresten hin. Interessant ist der Ringschlu zwischen den C-Atomen 13
und 17 (im abgebildeten Nystatin A1) ber ein halbketalisches Strukturelement.
Wirkmechanismus
Polyenemacrolide sind oberflchenaktiv. Ihr Wirkmechanismus und ihre hohe Spezifitt gegen Pilze
erklrt sich aus der Mglichkeit der Wechselwirkung der Polyen-Einheiten mit den lipophilen
Sterolen in der Oberflche der Zytoplasmenmembranen von Pilzen. Nur diese besitzen solche
Zellwandstrukturen. Wie in der Abbildung gezeigt, entstehen durch diese Wechselwirkung zwischen
387
hydrophile Pore
Sterol
Phospholipid
OH
OH
Me
HO
Me
OH
HO
OH
HO
OH
HO
OH
HO
OH
HO
S
S A
A
S A
S
OH
H2N
O
O
O
HO
Phospholipid
NH2
Sterol
OH
S
A S
A
A S
S
Abb.: Komplexbildung zwischen Amphotericin B (rot) und Sterol en in der Zytoplasmamembran vonPilzen.
Ausbildung einer hydrophilen Pore.
Sterol und Polyen Komplexe mit hydrophilen Kanlen oder Poren in der Membran, durch die nach
"innen" gerichteten OH-Gruppen der Antibiotika gebildet werden. Insgesamt wird dadurch die
Zellpermeabilitt drastisch erhht und es treten zytoplasmatische Bestandteile aus der Zelle aus. Bei
Bakterien, gegen die Polyenmacrolide unwirksam sind, ist ein solcher Mechanismus nicht mglich.
2.2
Griseofulvin
OMe
O O
Me
O
MeO
Cl
O
Me
2.3
388
Polypeptid-Antibiotika
Die antibiotisch wirksamen Polypeptide bestehen aus Aminosuren, einige enthalten daneben auch
noch andere Bausteine. Sie besitzen mit einer Ausnahme eine cyclische Struktur. Sie lassen sich
aufgrund ihrer therapeutischen Anwendung in drei Gruppen einteilen.
Polymyxine (z.B. Polymyxin B, Colistin) sind basische, schwer wasserlsliche Dekapeptide, die
1947 aus verschiedenen Bazillusarten isoliert wurden. Sie bestehen aus einem cyclischen Heptapeptid
und einem Tripeptid als Seitenkette, an deren Ende sich eine Fettsure befindet. Sie sind wirksam
ausschlielich gegen gramnegative Bakterien, die sie durch Schdigung der Zytoplasmamembran im
Wachstum hemmen (Strung der osmotischen Barriere)
Nur lokal anwendbare Polypeptide, z.B. Tyrothricin (1939 aus Bacillus brevis isoliert), Bacitracin
(aus Bacillus subtilis), Amphomycin, haben ein dem Penicillin G sehr hnliches Wirkungsspektrum.
Therapeutisch werden sie zur Behandlung oberflchlicher Haut- und Schleimhautinfektionen
eingesetzt. Die Wirkmechanismen sind innerhalb dieser Untergruppe verschieden. Tyrothricin
schdigt wie die Polymyxine die Zytoplasmamembran, whrend Bacitracin in die Biosynthese der
Zellwand eingreift, aber an einer anderen Stelle als Penicillin. Whrend letzteres die Quervernetzung
(3. Stufe) des Mureins verhindert, inhibiert Bacitracin, genauso wie Vancomycin, bereits die lineare
Polymerisation des Murein-Vorlufers (2. Stufe). Die Abbildung zeigt Bacitracin:
Nach dem "zentralen Dogma" der Molekularbiologie (Crick) kann man im Ablauf der Proteinsynthese
bekanntlich zwei grundlegende Abschnitte unterscheiden, Transskription (DNA => RNA) und
Translation (RNA => Protein). Die meisten Antibiotika dieser Klasse greifen in der Translationsphase
an, die man wiederum in drei Abschnitte unterteilen kann (siehe Abb.).
In der Initiationsphase wird ein Startkomplex gebildet, der sich aus m-RNA, N-Formylmethionylt-RNA (fmet-t-RNA) und einer ribosomalen 30 S-Untereinheit zusammensetzt. Das komplette 70 SRibosom entsteht durch Anlagerung einer 50 S-Untereinheit. Auf jedem Ribosom existieren zwei
unterschiedliche Bindungsorte fr t-RNA: die Akzeptor- (bzw. Aminoacyl-) sowie die Donor (bzw.
Peptidyl-) Stelle. Die fmet-t-RNA wird zunchst an die Akzeptorstelle gebunden und dann auf die
Donorstelle bertragen.
389
t-RNA
fmet
m-RNA
Aminoglykoside
aa
30 S
30 S
fmet
fmet
50 S
aa
fmet
fmet
t-RNA
t-RNA
Erythromycin
aa
t-RNA
aa
fmet
P
Chloramphenicol
Lincomycine
fmet
fmet a a
Aminoglykoside
Tetracycline
In der Elongationsphase erfogt der Aufbau der Peptidkette. Dazu lagert sich an der freigewordenen
Akzeptorstelle die nchste Aminoacyl-t-RNA an. Ihre Aminogruppe wird unter Vermittlung einer
Peptidyltransferase, einem Strukturprotein der 50 S-Untereinheit, mit der Carboxylgruppe des
Formylmethionins verknpft. Die hierbei an der Donorstelle freigesetzte t-RNA kehrt in den
Kreislauf zurck. Die entstandene Peptidyl-t-RNA wandert von der Akzeptorstelle zur Donorstelle
(Translokation). Weitere Cyclen mit Anlagerung von Aminoacyl-t-RNA und Peptidverknpfung
folgen, entsprechend der in der m-RNA enthaltenen Information.
'
Die Reaktionsfolge wiederholt sich so lange, bis in der Terminationsphase das Endcodon der m-RNA
an der Akzeptorstelle erscheint. Das fertige Protein wird nun vom Ribosom agelst. Dieses dissoziiert
in seine beiden Untereinheiten, die in einen pool zurckkehren.
Bei jedem der geschilderten Reaktionsschritte sind verschiedene Proteinfaktoren sowie GTP als
Energiequelle beteiligt.
Im Prinzip knnen alle Einzelschritte dieser Proteinbiosynthese in Bakterien durch entsprechenden
Eingriff von Antibiotika gehemmt oder unterbunden werden. In der Tat hat sich gezeigt, da die
verschiedenen Subklassen wie Tetracycline, Aminoglykoside, Macrolidantibiotika vom ErythromycinTyp und Chloramphenicol an unterschiedlichen Stellen dieses Synthesecyclus ansetzen.
390
N-MethylStreptose
Glucosamin
Streptidin
3.2.1 Streptomycin
Streptomycin wurde1943 von S. A. WAKSMAN aus StreptoNH
NH
myces griseus isoliert. Es wird vorwiegend zur Bekmpfung
NH2
NH
der Tuberkulose eingesetzt. Die Verbindung ist ein gut H2N NH
HO
OH
wasserlsliches, basisches Trisaccharid. Die Bausteine sind
Streptidin, Streptose und N-Methylglucosamin. Streptidin ist
OH
O
wegen seiner Guanidinreste stark basisch. Es ist mit der OHCHO
O
Gruppe am C-Atom sechs mit Streptobiosamin, einem
Disaccharid, verknpft. Dieses Disaccharid setzt sich aus
Me
OH
L-Streptose, einem Dialdehyd, und N-methyl-glucosamin in
O
O
unnatrlicher L-Konfiguration zusammen. Die Streptose
OH
MeNH
besitzt eine freie Aldehydgruppe, die leicht zur entsprechenden
HO
Alkoholgruppe hydriert werden kann. Man erhlt dann
OH
Dihydrostreptomycin. Mit Suren bilden die beiden Streptomycine Salze, von denen vor allem die Sulfate therapeutische Anwendung finden.
Schonende saure Hydrolyse spaltet aus Streptomycin nur das Streptidin ab. Im Glucosaminanteil des
Streptomycins ist die 2-stndige OH-Gruppe der Glucose durch eine NH2-Gruppe ersetzt. Solche
Aminozucker kommen auch im Chitin, allerdings in der blichen D-Form vor.
391
Wirkmechanismus
Streptomycin greift wie alle Aminoglykosid-Antibiotika in die Proteinsynthese ein. Es bindet
irreversibel an die ribosomale 30 S-Untereinheit und verursacht dort eine Konformationsnderung.
Dies hat eine Reihe von Konsequenzen, die sich sowohl auf die Initiation als auch auf die Elongation
auswirken. DieBindung von N-Formylmethionyl-t-RNA an die 30 S-Partikel wird gehemmt und so
die Bildung des Startkomplexes verhindert. Bereits bestehende Komplexe zerfallen. Weiterhin wird
die Anlagerung nachfolgender Aminoacyl-t-RNA an die Akzeptorstelle inhibiert und damit die
Verlngerung schon initiierter Peptidketten unterbrochen. Ein besonderes Merkmal der StreptomycinWirkung ist das Auftreten von Fehlablesungen des genetischen Codes von der m-RNA (misreading),
was die Synthese von Proteinen mit falscher Aminosuresequenz ("Nonsens"-Proteine) zur Folge
hat. Die ribosomalen Proteine, die als Haupt bindungskomponenten fr Streptomycin fr Streptomycin
fungieren, konnten genau charakterisiert werden. Bemerkenswert ist, da eine Mutation, die den
Austausch nur einer Aminosure zur Folge hat, den Verlust der Bindungsfhigkeit bewirken kann.
Es resultiert auf diese Weise eine hochgradige Streptomycin-Resistenz.
3.2.2 Lincomycin
Lincomycin wurde 1962 aus Streptomyces lincolnenH7C3 CH3
N
CH3
sis isoliert. Chemisch handelt es sich um ein
HO
substituiertes L-Prolin, das ber eine Amidbindung
N
mit einem Aminozucker, einer Aminooctose, verbunO
H
O
OH
den ist. Ersetzt man in der Zuckerkomponente eine
OH
Hydroxylgruppe durch ein Chloratom, so erhlt
SCH3
OH
man Clindamycin, das in seiner dem Erythromycin
vergleichbaren Wirkintensitt um ein Mehrfaches ber der von Lincomycin liegt. Beide wirken in
grampositiven Bereich wie Penicillin G (Ausnahme: Listerien) sowie gegen gramnegative Anaerobier
(Bacteroidaceae).
Wirkungsmechansimus
Der Wirkmechanismus gleicht dem des Chloramphenicols (siehe 3.3): es erfolgt eine Hemmung der
Peptidyltransferase. Die Bindung erfolgt reversibel an die ribosomalen 50 S-Untereinheiten.
3.3 Chloramphenicol
Chloramphenicol (im Namen steckt die Bezeichnung Amphetamin)
wurde bereits 1947 aus Streptomyces venezuelae isoliert und als eines
der ersten Antibiotika eingefhrt. Es ist ein Breitspektrum-Antibiotikum
mit fast gleichem Wirkungsbereich wie die Tetracycline. Der wesentliche
Unterschied besteht in der ausgezeichneten Wirkung gegen Salmonellen, insbesondere bei S. typhi
und S. paratyphi. Infolge der potentiellen Knochenmarksschdigungen wurde seine Anwendung in
den letzten Jahren allerdings stark eingeschrnkt. Chloramphenicol ist eine farblos kristallisierende
Substanz von bitterem Geschmack, die ber Jahre haltbar und in Wasser schwer lslich ist. Fr die
parenterale Anwendung nimmt man den Na-Monosuccinatester, der als solcher unwirksam ist, und
erst im Organismus hydrolysiert wird. Es ist eines der wenigen Antibiotika, die durch Totalsynthese
herstellbar sind. Trotz weiter synthetischer Variationen konnte bisher keine verwandte Verbindung
392
gefunden werden, die Chloramphenicol an Wirksamkeit bertrifft. Wichtig ist der stereochemische
Bau, nur die D-threo-Verbindung ist wirksam. Essentiell ist auch der Dichloressigsurerest. Die
Verschiebung der Nitrogruppe in m- oder o-Stellung vermindert die Wirksamkeit, ebenso ihr Ersatz
durch eine andere funktionlle Gruppe.
Synthese
p-Nitrobenzaldehyd wird mit Glycin in einer Art Aldolkondensation in Gegenwart von Ca(OH)2
kondensiert. Nach Veresterung erfolgt Racematspaltung. Dann wird die Aminogruppe mit
Dichloressigsure acyliert, darauf der Methylester in das Surehydrazid verwandelt, dieses gibt bei
der Behandlung mit NaNO2/H+ das Azid, das mit NaBH4 zu Chloramphenicol reduzierbar ist.
Wirkungsmechanismus
Chloramphenicol greift in die Elongationsphase der Proteinsynthese ein. Es hemmt selektiv die
Peptidyltransferase, wodurch die Peptidverknpfung verhindert wird. Die Bindung erfolgt an der
ribosomalen 50 S-Untereinheit. Genauere Kenntnisse ber den Wirkort lieen sich durch Spaltung
und partielle Rekonstitution der 50 S-Partikel erhalten. Danach liegt das Protein, welches die
Peptidyltransferase-Aktivitt trgt, in enger Nachbarschaft zu einem zweiten Protein, an das
Chloramphenicol hauptschlich bindet. Dieser Vorgang ist reversibel und findet nur in Gegenwart
von Mg2+- und K+-Ionen statt. Eine Hemmung der Proteinsynthese in Eukaryontenzellen ist aufgrund
der geringeren Empfindlichkeit des Systems im therapeutischen Dosierungsbereich nicht zu erwarten.
3.4 Macrolid-Antibiotika (non-Polyen-Typ)
Neben den unter 2.1 (Seite 386) besprochenen
Desosamin
O
antimykotischen Polyen-Macroliden gibt es eine
HO
O
zweite Gruppe von antibiotisch aktiven Verbindungen mit makrocyclischem Lactonring, deren WirkHO
Cladinose
O
HO
mechanismus und -spektrum allerdings vllig
Erythromycin
verschieden ist. Sie zeichnen sich strukturell durch
einen in der Regel 12- bis 16-gliedrigen Ring, viele Chiralittszentren und nur wenige C=CDoppelbindungen aus. Fast immer ist der Lactonring (das "Aglykon") mit ein oder zwei Aminozuckern
glykosidisch verknpft. Ein weiterer neutraler Zucker kann dann entweder direkt mit dem Lactonring
oder einem der Aminozucker glykosidisch verbunden sein. Die Hauptvertreter sind Erythromycin,
Oleandomycin, Spiramycin und Niphimycin. Das letztere ist ein typisches Beispiel eines Antibiotikums
393
HO2C
H
HO
OAc
H
HO
Wirkmechanismus
Beruht auf einer Hemmung der Proteinbiosynthese, die sowohl in Bakterien wie auch in Eukaryonten
erfolgen kann. Der Angriffspunkt liegt wie bei Erythromycin im Translokationsschritt. Allerdings
bindet Fusidinsure nicht an Strukturproteine des Ribosoms, sondern an einen der Elongationsfaktoren.
dadurch wird die Ablsung der deacylierten t-RNA von der Donorstelle verhindert.
4.
Hier sind relativ wenige natrliche Vertreter bekannt. Rifampicin ist sicher das wichtigste
halbsynthetische Antibiotikum dieser Art. Es gehrt strukturell zu den Makrolidantibiotika, vom
Wirkungsmechanismus her zu den RNA-Polymerase-Hemmern und pharmakologisch gesehen zu
den Antimykotika mit excellenter Wirkung gegen Turberkelbakterien sowie einzelen gramnegative
Bakterien und sogar Viren. Allerdings sind die Nebenwirkungen nicht unwesentlich.
5.
394
Auch dies ist eine recht kleine Gruppe natrlicher Antibiotika. Am bekanntesten sind die Gramicidine.
Strukturell sind Gramicidine Polypeptidantibiotika. Sie wurden ursprnglich aus Kulturflssigkeiten
von Bacillus brevis isoliert und sind besonders gegen grampositive Bakterien wirksam. Am
wichtigsten ist Gramicidin S, ein Cyclopeptid, das aus zwei identischen Pentapeptiden zusammengesetzt
ist:
6.
Sideramine (Eisen, sideros) sind eisenhaltige Komplexe, die das Wachstum frdern oder auch
hemmen knnen. Ihre Isolierung erfolgte aus Actinomyceten durch ZHNER, in dessen Labor
zahlreiche Antibiotika entdeckt wurden. Ein Vertreter der Sideromycine ist auch Albomycin, das aus
Streptomyces subtropicus isoliert wurde. Es enthlt sieben Aminosuren und ist ebenfalls eisenhaltig.
Es wirkt 10 mal strker als Penicillin.
7.
Cytostatische Antibiotika
Cytostatica sind Verbindungen, mit deren Hilfe Tumore bekmpft werden, sie sind in der Regel
entweder alkylierende Wirkstoffe, die die Zellteilung inhibieren oder Stoffe, die in die DNA
interkalieren, also in diese eingeschoben werden. Zu den Verbindungen, die in der DNA-Helix durch
ihren planaren Bau eingeschoben werden knnen, zhlen Verbindungen des Antracyclintyps,
Actinomycine und En-diine. Wichtigster Vertreter der Antracycline ist das Adriamycin, das aus
Streptomyceten gewonnen wird. Es besitzt wie Tetracycline ein System von vier Ringen, von denen
drei einen Antrachinonring formen (daher der Name Antracyline). Das Ringsystem ist mit
Sauerstoffsubstituenten versehen. berdies trgt eine der OH-Gruppen in acetalischer Bindung einen
Desoxyaminozucker. Adriamycin wirkt stark kardiotoxisch, greift also das Herz an. Prparate mit
395
396
En-diine: Calicheamycin
bersicht: K. C. NICOLAOU et al., Angew. Chem. 1991, 103, 14531481; Acc. Chem. Res. 1992, 25, 497.
Endiine kommen in einigen cytostatischen Naturstoffen vor, wie etwa
Calicheamycin. Ihre Wirksamkeit beruht ebenfalls auf der Mglichkeit
sich in die DNA-Helix einzuschieben (zu interkalieren).
Fr die biologische Aktivitt sind drei Funktionszentren im Molekl von
Bedeutung:
a)
b)
c)
2.
Intramolekulare Addition
eines Thiolats an das Michaelsystem bewirkt Umwandlung
eines sp2- in ein sp3-hybridisiertes C-Atom. Dadurch
wird der Abstand c-d verkrzt
und die BERGMANN-Cyclisierung erleichert. Diese ist
eine spontane Umlagerung
der Endiin-Einheit in ein 1,4Phenyl-diradikal:
3.
397
Das benzoide Diradikal abstrahiert ein H-Atom aus der C-5'-Stellung von Desoxycytidin und
ein weiteres H-Atom von einer Ribose des anderen Stranges der Doppelhelix; die so entstandenen
DNA-Radikale reagieren nun mit Sauerstoff und spalten letztendlich die DNA:
Gute Literaturbersicht ber minor groove binders: J. W. LOWN, Chemtracts - Organic Chemistry
1993, 6, 205-237: Targeting the DNA Minor Groove for Control of Biological Function: Progress,
Challenges, and Prospects.
398
399
ALKALOIDE
14. Alkaloide
1.
Alkaloide sind stickstoffhaltige Basen, die vorwiegend in hheren Pflanzen, gelegentlich auch in
Tieren gefunden werden. In Pilzen sind sie eher selten (z.B. Lysergsure, Ergotamin). Sie sind weit
verbreitet (> 4000 isolierte Naturstoffe) und meist relativ leicht durch Extraktion zu gewinnen. Die
Alkaloide sind allesamt Sekundrmetabolite von Aminosuren. Die meisten drften als
Stoffwechselend- oder Abfallprodukte anzusehen sein. Sie werden meist in stoffwechselaktiven
Pflanzenteilen gefunden (Bltter, Blten, Samen, Rinde). Mit Sure bilden sie Salze, so da sie von
Beimengungen leicht abtrennbar sind. Wird dann Alkali zugefgt, werden die Basen aus den Salzen
in Freiheit gesetzt und sind oft in groer Reinheit wieder mit Ether rckextrahierbar. Diese
Eigenschaft hat der gesamten Verbindungsklasse den Namen - Alkaloide - gegeben. Einige Alkaloide
waren wegen ihrer einfachen Gewinnung schon frhzeitig in reiner Form bekannt, wie etwa Chinin
(Malaria- und Fiebermittel), Nicotin (Tabak), Strychnin (Gift), Colchicin (Mitosehemmer,
antitumoraktiv, Gichtmittel), Atropin (pupillenerweiternd => Kosmetikum!; beliebtes Gift im
Mittelalter), Mescalin (Halluzinogen aus dem Peyote-Kaktus). Besonders hufig findet man Alkaloide
in Nachtschatten-gewchsen, Mohnarten, Schmetterlingsbltlern und Hanhnenfugewchsen. Viele
Alkaloide zeigen ausgeprgte physiologische Wirkung. Alkaloide liegen in der Pflanze meist als
Salze, z.B. mit Citronensure, Essigsure, Chinasure, Meconsure oder Oxalsure vor.
Die Klassifizierung der Alkaloide, die eine extrem umfangreiche und strukturell heterogene
Verbindungsklasse bilden, ist nach mehreren Kriterien mglich und kaum ohne berschneidungen
durchfhrbar. Sie kann erfolgen entweder nach
N
CO2Me
N
H
OCOPh
Tropan: Cocain
Piperidin: Coniin
Pyrrolizidin: Retronecin
10
8
14
13
6
5
15
Pyridin: Nicotin
N
N
11
12
HO2C
3
4
HO
HO
N
Me
N
H
N
H
N
16
Isochinolin: Morphin
Chinolizidin: Spartein
(Goldregen)
N
H
Chinolin: Lysergsure
H
H
H
MeO2C
Indol: Yohimbin
OH
400
ALKALOIDE
HO
OH
CH3O
CH3O
N
CH3O
NH
CH3O
OCH3
HO
N
O
N
CH3O
Papaverin
Hmanthamin
Morphin
Pellotin
OCH3
NH2
NH2
N
H
Tryptophan
Phenylalanin
CO2H
CO2H
NH2
HO
Tyrosin
NH2
HO
3,4-Dihydroxy-phenylalanin
CO2H
NH2
NH2
NH2
NH2
Ornithin
Lysin
Abb. 14.3: Aminosure-Vorlufer, von denen sich fast alle Alkaloide ableiten
Diese Klassifizierung ist berdies in weiten Teilen deckungsgleich mit der Einteilung nach
Stammheterocyclen, da aus bestimmten Aminosuren hufig nur bestimmte Heterocyclen gebildet
werden. Ausnahmen sind allerdings nicht selten. So werden zwar die meisten Piperidineaus Lysin
gebildet, Coniin aber wird aus C2-Einheiten aufgebaut ("Polyketid-Weg") und auch Chinin entsteht
nicht wie die meisten anderen Chinolin-Alkaloide aus Lysin sondern aus Tryptophan.
Trotz der groen Zahl natrlicher Alkaloide ist nicht nur die Anzahl der bentigten Ausgangsverbindungen sehr berschaubar, auch die zum Aufbau der teils komplexen Strukturen angewendeten Reaktionen sind wenige und einfacher Natur ! Die Grundreaktionen der Alkaloid-Biosynthese
(laut in vivo tracer-Experimenten) sind im wesentlichen folgende:
Reaktion von Imin / Immoniumsalz mit C-Nucleophilen (z.B. Enolen, Phenolen) unter
Bildung neuer CC Bindungen
401
ALKALOIDE
CHO
NH
CH
C CH N
C
z. B.:
CH3O
HO
NH2
HO
CH3O
OCH3
CHO
OH
OCH3
OH
+ NH2Me +
RT, pH 7
CHO
3d
CO2H
O
In der Natur tritt allerdings keine Acetondicarbonsure auf. Statt dessen werden normalerweise
Acetoacetat-Einheiten (als C-Nucleophile und Elektrophile) verbaut. So zeigte die "Verftterung"
von Na-[1-14C]-Acetat an Schierlingspflanzen und nachfolgender systematischer Abbau des
gebildeten Coniins eine Gleichverteilung der Markierung ber alle geradzahligen C-Atome:
O
4 CH3CO2H
CO
O
3
2
N
H
Auch Isopren-Untereinheiten sind in vielen Alkaloiden (z.B. Lunacrin) zu finden, ebenso Monoterpene (z.B. Actinidin), Diterpene (Atisin) und Steroide (z.B. Solanidin), d.h. allgemein MevalonatDerivate ! Letztlich stammen damit alle Alkaloide aus Carbohydraten her (via Shikimi-Weg ber
ShikimatPrephenat).
ALKALOIDE
2.
402
2.1
Offenkettig-aliphatische Amine
Das vegetative Nervensystem, das Herzschlag, Atmung, Verdauung, Wasserhaushalt etc. steuert, ist
vom Willen unabhngig. Es umfat im wesentlichen zwei Gruppen von Nerven, die bezglich ihrer
Funktion Antagonisten sind: Sympathicus und Parasympatikus. Wird der Sympatikus gereizt, so
beschleunigt sich der Herzschlag, die Blutgefe kontrahieren, die Herzkranzgefe dilatieren,
ebenso die Bronchien, die Magen- und die Darmttigkeit werden verlangsamt, die Schilddrse und
die Nebennieren schtten Hormone aus. Die gegenteilige Wirkung hat der Parasympatikus.
An der Leitung der Reize sind Neurotransmitter wesentlich beteiligt. Die Nervenbahnen sind durch
"synaptische" Spalten unterbrochen. Zu ihrer berwindung werden bei einem Nervenreiz aus der
prsynaptischen Membran "Neurotransmitter" freigesetzt.
Biogene Amine
Neurotransmitter entstehen durch Decarboxylierung von Aminosuren. Dazu zhlen vor allem
Acetylcholin, Tryptamin, Serotonin und Histamin.
Neurotransmitter diffundieren durch den synaptischen Spalt zur postsynaptischen Membran und
bertragen den Reiz indem sie an Rezeptoren "binden". Der Botenstoff wird durch Enzyme rasch
unwirksam gemacht, z.B. wird Acetylcholin durch Cholinesterase entacetyliert. Acetylcholin ist der
Neurotransmitter fr den Parasympaticus.
Bestimmte Alkaloide (Muscarin) knnen die gleiche Wirkung wie
Acetylcholin ausben, andere Alkaloide wirken in gleicher Weise durch
Hemmung der Cholinesterase: z.B. Physostigmin. Wieder andere Alkoloide
hemmen die Wirkung von Acetylcholin, indem sie die Rezeptorstellen am
postsynaptischen Spalt besetzten (Atropin) oder am Weiterleitungssystem
am Muskel angreifen (Curare). Im Gegensatz zu Acetylcholin greift Adrenalin am Sympaticus an;
es erweitert coronare Blutgefe und erhht die Alarmbereitschaft. Adrenalin wird im Organismus
aus L-Phenylalanin synthetisiert: ber Tyrosin entsteht L-Dopamin, dessen Decarboxylierung Dopa
liefert, das ber Noradrenalin zu Adrenalin methyliert wird:
ALKALOIDE
403
404
ALKALOIDE
bemerkenswert, als es durch nachtrgliche Hydroxylierung von Phenylalanin und nicht aus Tyrosin
entsteht. Dies ist fr hhere Pflanzen ungewhnlich und wird dort berwiegend bei den Grsern
(Getreide!) gefunden. Ephedrin ist nur unwesentlich schwieriger aufzubauen als Hordenin. Lediglich
ein zustzlicher Methylierungsschritt ist erforderlich. Ephedrin ist gefverengend und
blutdrucksteigernd. Es wird als Muskelrelaxanz (glatte und Bronchial-Muskulatur) und Asthmamittel
eingesetzt. Ephedrin liegt in D-Erithroseform vor.
CO2H
NH2
NH2
HO
NMe2
HO
Hordenin
O
O
C-Alkylierung
mit Me-Donor
PHE-ALA
Me
NHMe
NH2
OH
Me
NHMe
Red
405
ALKALOIDE
2.2
Isochinolin-Alkaloide sind weit verbreitet, sie kommen vor allem in Papaveraceen (Mohn) und
Cactaceen (Kakteen) vor. Viele haben wertvolle pharmakologische Eigenschaften. Ihr IsochinolinGerst lt sich in wenigen Biosynthese-Schritten aus Phenylalanin bzw. Tyrosin oder 3,4-Dihydroxyphenylalanin aufbauen. Der Schlu des Heterocyclus (Tetrahydroisochinolin) erfolgt dabei durch
Bildung eines Imins/Immoniumions mit einem externen Aldehyd, gefolgt von einer Mannich-artigen
CC Verknpfung zwischen dem elektronenarmen C-Atom der Schiffbase/Immoniumion und der
ortho-Position des Phenylrings. Je elektronenreicher diese o-Position ist, desto leichter verluft der
Ringschlu. Praktisch erfordert er das Vorhandensein einer OH-Gruppe in p-Stellung, meist ist
auerdem ein OH-Substituent in m-Stellung vorhanden, wie z.B. bei der Laborsynthese von Salsolin:
HO
O
NH2
MeO
NH
NH
MeO
MeO
CHO
CH3
CH3
CH3
HO
NH
MeO
Salsolin
CH3
Groe Bedeutung haben Alkaloide dieses Typs, die sich formal von einem Phenylacetaldehyd
ableiten, die also einen - hufig substituierten - Benzylrest in 1-Stellung des (Tetrahydro-)Isochinolins
tragen ("Benzylisochinolin-Alkaloide"). Hierzu gehren so wichtige Vertreter wie die Hauptalkaloide
des Schlafmohns (Laudanosin, Papaverin, Morphin) oder des Bambus-Curare (Tubocuarin).
2.2.1 Einfache Schlafmohn-Alkaloide
Dies sind Alkaloide, deren Biosynthese auer Schiffbasen-Bildung und Mannich-Ringschlu nur
wenige zustzliche Redoxprozesse, (De-)Methylierungen oder Ringffnungen beinhaltet. Insbesondere
treten in dieser Reihe keine oxidativen Phenolkupplungen unter CC-Bindungsbildung auf. Zu dieser
Gruppe, deren zentrales Intermediat Norlaudanosolin ist, gehren Laudanosin und Papaverin:
HO
HO
MeO
NH
NH2
HO
CHO
HO
HO
NMe
HO
MeO
4H+
HO
MeO
4e-
HO
MeO
Norlaudanosolin
Laudanosin
MeO
MeO
MeO
H-
MeO
MeO
Scoulerin
Me
N
MeO
OH
OH
MeO
OMe
OMe
MeO
Papaverin
ALKALOIDE
406
Papaverin hat eine gewisse Bedeutung als Spasmolytikum, wirkt muskelentspannend, und ist daher
in Asthmamitteln enthalten. Es kann auch bei Magen- und Darmkrmpfen verwendet werden. Die
Struktur des Papaverins wurde durch Oxidation ermittelt: Bei der Oxidation mit KMnO4 entstehen
folgende Suren:
407
ALKALOIDE
MeO
NMe
MeO
MeO
MeO
o,o-Kupplung
MeO
Laudanosin
NMe
HO
MeO
Glaucin
NMe
o,p-Kupplung MeO
MeO
Bulbocapnin
Morphin
Im Morphin, das sich vom Dimethylderivat Reticulin ableitet, ist der Phenylrest des Benzylteiles mit
dem Isochinolinteil ber eine ArylAryl-Bindungen zwischen der (substituierten!) para-Position des
A-Rings und der ortho-Position des C-Rings verbunden. Dies kann am besten nachvollzogen werden,
indem vorher der Isochinolinteil um die gezeigte Achse gedreht wird:
O
O
MeO
A
HO
HO
NMe
drehen
MeO
MeO
MeO
Reticulin
NMe oC,pA-Kupplung
NMe
MeO
MeO
OH
MeO
MeO
Red
HO
MeO
NMe
O
HO
MeO
Thebain
NMe
O
HO
MeO
NMe
O
NMe
HO
Codein
Morphin
408
ALKALOIDE
erhitzt und Ammoniumchlorid zugegeben, die "Morphinbase" fllt aus, pro kg Rohopium gewinnt
man etwa 100-150 g Morphinbase. Acetylierung ergibt Heroin. Preise: 1 kg Rohopium kostete etwa
40.-- DM (1971), 1 kg Rohopium im Grohandel 4000.-- DM, 1 kg Heroin 60000.-- DM, nach
Verdnnung mit Milchpulver 1 Million DM. Morphin wurde schon in vorchristlicher Zeit verwendet.
Die erste Isolierung gelang 1805 Sertrner. Der Name stammt von "Morpheus" (Name des Gottes des
Schlafes bei den Griechen). 1-2 Spritzen Heroin gengen, um einen Menschen schtig zu machen.
Entziehungskuren werden mit Methadon versucht. Der Erfolg der Kuren ist fragwrdig. Stndiger
Gebrauch von Morphin fhrt zur Morphinvergiftung, sein Entzug verursacht belkeit, Schlaflosigkeit,
Erregung. Bei einer Morphinvergiftung kommt der Tod durch Atemstillstand. Heroinschtige leiden
unter Blutstauung, Spritzenhepatitis, Pilzinfektion der Herzklappe, Lhmungen, Lungeninfektionen
sowie Hautabszessen.
N
CH3
CH3
HO
CH3
O
O
O
HO
HO
Morphin
Ph
Ph
Ph
CH3
HO
Pentazocin: sehr gutes Analgetikum;
keine Nebenwirkungen; ()-Isomer ist
2x so aktiv wie Racemat
Methadon: ()-Isomer 4x
strker, Racemat 2x strker
wirksam als Morphin; keine
Suchtgefahr; verhindert
Entzugserscheinungen
409
ALKALOIDE
Thebain (mit damals unbekannter Struktur) lieferte bei Umsetzungen mit Phenylmagnesiumbromid
zwei diastereomere sog. "Phenyldihydrothebaine", die sich einfach trennen lieen. Jedes dieser
Diasteromere (A und B) lieferte beim Erhitzen das Enantiomer des jeweils anderen Diastereomers.
Vollends unverstndlich war zunchst das Verhalten der "Phenyldihydrothebaine" unter Bedingungen
des Hofmann-Abbaus: jedes der reinen Diastereomere gab ein und das selbe N-freie Diolefin und
dieses war optisch aktiv! Die Lsung fand sich schlielich in der Labilitt der Etherbrcke des
Furanrings. Die Grignard-Verbindung wirkt hier zunchst als Lewissure (Mg+), die die Furanffnung
einleitet. Nach umfangreichen Umlagerungen wird schlielich ein Paar von tricyclischen 9-Ringen
gebildet (die diastereomeren "Phenyldihydrothebaine"), die axiale Chiralitt des Biphenylteils und
zentrale Chiralitt des neuen stereogenen Zentrums aufweisen. Letzteres wird unselektiv gebildet,
deshalb entstehen zwei Diastereomere (RaxialRzentro und RaxialSzentro). Beim Erwrmen der reinen
Diastereomere erfolgt Rotation um die Biphenylachse, d.h. Racemisierung der axialen
Chiralittseinheit. So entsteht aus RaxialRzentro das SaxialRzentro und aus RaxialSzentro das SaxialSzentro. Der
Hofmann-Abbau vernichtet zwar das stereogene Zentrum unter Bildung eines o,o-Divinyl-bipenylens,
das aber seine axiale Chiralitt (d.h. optische Aktivitt) beibehlt:
Thebain
(unbekannte Struktur)
Phenyldihydrothebaine
A+B
(2 Diastereoisomere!)
Phenyl-Grignard
erhitze B
erhitze A
B+ ent-A
A+ ent-B
2 Hofmann-Abbau
MeO
MeO
+
NMe
MeO
NMe
NMe
[MgBr+]
MeO
MgBrO
MgBrO
MgBrO
MeO
MeO
MeO
MeO
MeO
PhHO
+
NMe
NMe
Ph
MeO
axial und zentrochiral (2 Diast.)
Hofmann
HO
Ph
MeO
axial chiral; opt. aktiv
Abb.14.7: Grignardierung von Thebain Befunde und Erklrung des ungewhnlichen Verlaufs
Totalsynthesen von Morphin versuchen in der Regel, die Biosynthese nachzuahmen, was die Bildung
des Furanrings und die ArylAryl-Kupplung von Isochinolin-Phenyl und Benzyl-Phenyl-Ringen
anbetrifft. Letztere wird aber meist nicht oxidativ durchgefhrt, sondern durch Reaktion des
o-C-Atoms einer Phenoleinheit und eines -C-Atoms eines Michaelsystems. Das folgende Schema
zeigt eine konomisch kurze Morphin-Synthese nach diesem Verknpfungsprinzip:
410
ALKALOIDE
MeO
MeO
MeO
1)BischlerNapieralski
NH2
Na/tBuOH
NMe
MeO
2)Reduktion
3)Methylierung
MeO
10% HCl,
NMe
NH3,fl
OH
HO
(Birch)
MeO
MeO
MeO
Br
HO
O
NMe
NMe
HO
HO
MeO
MeO
3 Br2, HOAc
NMe
Br
RNHNH2
HO
MeO
Br
Dihydrothebainon
RNHN
HO
NMe
NMe
1)Me2CO/H
pyH+Cl-
Morphin
2)LiAlH4
MeO
Br
MeO
NH2
HO
CO2H
HO
NH2
H
N
o,p-Kupplung
HO
HO
Norbelladin
MeO
p,p- Kupp.
o,p-Kupp.
OH
MeO
Me
N
MeO
O
HO
Belladin
HO
HO
HN
HO
H
HN
HO
H
N
Lycorin
OMe
O
O
OH
N
Haemanthamin
OH
O
MeO
Me
Galanthamin
411
ALKALOIDE
durch intramolekularen Angriff des Stickstoffs oder einer Phenoleinheit an geeignet positionierten
Michaelsystemen an. Im wesentlichen leiten sich alle diese Alkaloide ber das zentrale Intermediat
Norbelladin von einem der drei folgenden Typen ab: Lycorin, Hmanthamin und Galanthamin.
2.3
Bambus-Curare
Man unterscheidet zwei Arten von Curare: Topf-, Tuba. oder
Bambuscurare und Calebassencurare. Die Inhaltsstoffe von
Topfcurare sind Isochinolinalkaloide, die von Calebassencurare
Indolalkaloide. Curare ruft Lhmungserscheinungen hervor. Es wird
in der Chirurgie als Langzeit-Muskelrelaxanz verwendet. In Curarealkaloiden auf Isochinolinbasis sind zwei Isochinolinmolekle
miteinander verknpft, z.B. sind im Tubocuarin zwei Benzylisochinoline ber O-Brcken:
Michellamine
In der zentralafrikanischen Liane Ancistrocladus korupensis findet
man Michellamine, dimere Naphthyltetrahydroisochinolinalkaloide,
die als Mittel gegen HIV-1- und HIV-2-Viren, also gegen Aids,
einsetzbar sind.
3.
Mannich-Kondensations-Produkte:
-Kondensation zu -Carbolinen
-Kondensation zu Indoleninen
NH
-Kondensation
NH2
-Carbolin
N
H
+ RCHO
NH
N
H
R
-Kondensation
Indolenin
je nach Art des C9/C10-Aldehyds mit dem Tryptophan kondensiert wird, resultieren
CorynanthIbogaAspidosperma-Alkaloide
412
ALKALOIDE
NH2
NH2
CHO
N
H
CHO
CHO
N
H
NH2
N
H
HO2C
HO2C
CO2H
O
N
H
H
H
N
H
CO2H
H
OAc
MeO
N
Me
OH
CO2H
HO2C
Corynanth-Alkaloide: z.B. Ajmalicin
3.1
Einfache Tryptamine
Wird Indolylethylamin, ein Abbauprodukt von Tryptophan, mit Acetaldehyd kondensiert und
dehydriert, erhlt man das Harman, das das Grundgerst des -Carbolins enthlt, in dem ein Indol
und ein Pyridinrest miteinander verknpft sind. Ein Derivat des Harmans ist das natrlich vorkommende
Harmin. Harmin ruft LSD-artige Rauschzustnde hervor, es kommt in der ungarischen und
sdrussischen Steppenraute neben anderen Alkaloiden vor. Man findet es auch in Lianen.
Sdamerikanische Indianer verwenden Extrakte der Banisteriopsis-Arten zur Bereitung von Yage,
einem Zaubertrank. In der Biosynthese drfte Brenztraubensure als Acetaldehyd-quivalent dienen
413
ALKALOIDE
3.2.1 Corynanth-Alkaloide
Zwei Serien (- und -Kondensationsprodukte) leiten sich ab von Tryptamin und dem gezeigten C9/
C10-Aldehyd. So fhrt die Mannich--Kondensation in wenigen weiteren Schritten (Oxidationen,
CC- und CN-Bindungsspaltungen/-knpfungen) zu typischen Idolalkaloiden wie Cinchonamin,
Ajmalin, Yohimbin (in der Veterinrmedizin als Aphrodisiakum verwendet!), Serpentin und dem
formalen Chinolinalkaloid Chinin (alle von Rauwolfia serpentina produziert):
NH2
N
H
CHO
N
H
OH
MeO2C
MeO2C
Serpentin
Yohimbin
HO2C
O
HO
MeO
N
H
N
H
HO2C
Chinin
OMe
HO2C
OH
HO
N
N
Ajmalin Me
OH
N
H
Cinchonamin
NH2
OH
414
ALKALOIDE
NH2
CHO
N
H
N
N
HO2C
Caracurin
OH
OH
OHC
CHO
NMe
HO
NMe
HN
O
Strychnin
OH
MeN
Toxiferin
Gelsemin
415
ALKALOIDE
NH
N
H
Vincosid
OGlucose
NH
N
H
H
MeO2C
CHO
N
H
H
H
CHO
H
MeO2C
MeO2C
N
OH
N
2
H
N
H
CH2OH
MeO2C
Geissoschizin
Prakuammicin
H
MeO2C
16
OH
N
H
H
H
NH
N
H
N
H
CO2Me
Akuammicin
(Corynanth-Typ)
CO2Me
Tabersonin
(Aspidosperma-Typ)
CO2Me
Catharanthin
(Iboga-Typ)
N
H
Ajmalicin MeO2C
Abb. 14.11: Umwandlung von Vincosid in die drei Hauptklassen von Indol-Alkaloiden
Einige Vinca-Alkaloide haben
Bedeutung zur Tumorbekmpfung erlangt, wie z.B. das
Vinblastin. Es wirkt als Mitosegift, weil es die RNA-Synthese
hemmt. Es ist ein dimeres
Indolalkaloid. In Vinca minor ist
das als Sedativum verwendete
Vincamin enthalten.
416
ALKALOIDE
3.3
Mutterkorn- (Ergot-)Alkaloide
Mevalonat ist auch der Precursor der Ergot-Alkaloide, die von Pilzen produziert werden, welche
Getreidehren und -halme befallen, z.B. von Claviceps purpurea. Dieser Pilz wchst in feuchten
Sommern auf Getreide besonders gut. Mutterkornvergiftungen sind oft tdlich. Allerdings haben
einige Alkaloide dieser Gruppe wegen ihrer pharmakologischen Eigenschaften erhebliche medizinische
Bedeutung erlangt (Wehen- und Migrnemittel). Frher kam es zu Massenvergiftungen, weil man
noch keine Fungizide kannte. Ergotalkaloidvergiftungen sind bekannt als St. Antonius Feuer: Die
Extremitten sterben ab, Brand entwickelt sich, die Leute leiden unter Krmpfen und Gangrn, sie
werden vom Wahnsinn befallen. Im Jahr 822 gab es 40000 Tote, noch am 13. August 1951 erkrankten
200 Personen in Pont St. Esprit an der Rhone am St. Antonius Feuer. Es gab auch damals Todesflle.
Der Surerest der Lysergsure ist in den Ergotalkaloiden
amidartig mit drei Aminosuren verknpft, die je nach
Alkaloid verschieden sind. Im Ergotamin sind dies Prolin,
das alle Ergotalkaloide als Baustein enthalten, sowie
Phenylalanin und formal ein Aldehydammoniakderivat der
Brenztraubensure, das mit dem Phenylalaninteil ein
Carbinolamin bildet. Bei der Untersuchung von Lysergsurederivaten wurde das Lysergsurediethylamid LSD hergestellt.
Es erwies sich als strkstes bisher bekanntes Halluzinogen,
das schon in winzigen Mengen wirksam ist. Offenbar ist im
Lysergsurediethylamid das fr die halluzinogene Wirkung
notwendige Strukturelement durch entsprechende Bindungen
genau festgelegt, whrend in analogen halluzinogenen
Verbindungen nur das Grundskelett vorhanden ist. Durch die
Beweglichkeit der C-Ketten wird offenbar nicht volle
Wirksamkeit als Halluzinogen erreicht.
Biosynthese der Mutterkornalkaloide
Die Annelierung ber die 4-Position der Indoleinheit in der Lysergsure ist ungewhnlich und wird
biosynthetisch ber eine interessante Dominosequenz zweier hochselektiver [3s,3s]-sigmatroper
Umlagerungen bewerkstelligt, einer Thia-CLAISEN- und einer COPE-Umlagerung:
CO2H
CO2H
NH2
NH2
Tryptophan
SR
OPP
N
H
S
N
H
HO
CO2H
NH2
ThiaClaisen
CO2H
Cope
NH2
NMe
NHMe
H
S
N
H
N
H
N
H
N
H
417
ALKALOIDE
4.
N
R
Pyrrolidin
Me
N
NH2
H2N
CO2H
Tropan
Pyrrolidin-Alkaloide
ALKALOIDE
Tropan-Alkaloide
418
ALKALOIDE
419
4.3
Pyrrolizidin-Alkaloide
420
ALKALOIDE
5.
N
Me
OH
Pyridin-Alkaloide
(Nicotin)
Me
N
N
Chinolizidin-Alkaloide
(Lupinin)
O
CO2H
NH2
NH2
O
Granatapfel-Alkaloide
(Pseudopelletierin)
MeO
5.1 Piperidin-Alkaloide
(CH2)7
OMe
N
Piperidinalkaloide sind relativ
OMe
H
hufig. Ein Vertreter ist das O
O
Coniin, das im gefleckten
Schierling Conium maculatum
(CH2)7
N
O
N
vorkommt. Es wird allerdings
H
Piperidin-Alkaloide
Chinolin-Alkaloide
nicht aus Lysin sondern aus C2(Carpain)
(Galipin)
Einheiten
(Polyketidweg)
biosynthetisiert ! Coniin ist sehr giftig, 1 g reicht aus, um einen Erwachsenen zu tten. Der Tod erfolgt
durch Atemlhmung. Die erste Coniin-Synthese gelang LADENBURG aus -Picolin und Acetaldehyd.
Die Wasserstoffatome der Methylgruppe sind durch basische Katalyse abspaltbar. Das Anion greift
in einer Aldolkondensation die Carbonylgruppe des Acetaldehydes an. Das Reaktionsprodukt lt
sich zu Coniin hydrieren:
In Alkaloiden, die in Lobelia-Arten vorkommen, sind beide -Kohlenstoffatome substituiert. Das Lobelin wird bei Atemwegserkrankungen zur
Untersttzung der Atmung eingesetzt, weil es Krmpfe in den Bronchien
lst. Eine Synthese unter physiologischen Bedingungen von Lobeliaalkaloiden geht von Glutardialdehyd und Benzoylessigester, sowie
Methylamin aus. Es handelt sich wieder um eine Mannichreaktion.
ALKALOIDE
421
5.3 Chinolizidin-Alkaloide
Wie bei den Pyrrolizidinalkaloiden ist auch bei den Chinolinzidinalkaloiden ein Stickstoffatom als
Ringglied zwei Ringen gemeinsam, in diesem Fall handelt es sich aber um zwei 6-Ring-Systeme.
Chinolizidinalkaloide werden vor allem in Leguminosen gefunden. Das einfachste Chinolizidinalkaloid
ist das Lupinin (lupinus lutens), das in Lupinien vorkommt:
ALKALOIDE
422
Goldregen enthlt als giftige Wirkkomponente Cytisin. Daneben enthlt Goldregen Spartein, das bei
Reizleitungsstrungen des Herzens eingesetzt wird. Die moderne enantioselektive Synthese verwendet
das natrliche ()-Spartein gerne als chirale Base zur selektiven Entfernung eines von mehreren
enantiotopen Protonen oder als chirales Auxiliar (Ligand etc) zur Induktion neuer stereogener
Zentren:
5.4 Pyridin-Alkaloide
Alkaloide mit einem Pyridinring kommen seltener vor, zu dieser Klasse zhlt man das im Tabak
enthaltene Nicotin. In diesem ist ein Pyridinring mit einem Pyrrolidinring verknpft. Die Struktur
wurde durch Abbau ermittelt: Bei direkter Oxidation entsteht Nicotinsure, whrend bei Oxidation
nach Quarternisierung des Pyridinring-N-Atoms der Pyrrolidinteil erhalten bleibt und Hygrinsure
liefert:
Die Synthese des Nicotins geht auf SPTH und BRETSCHNEIDER zurck: Nicotinsureester wird mit NMethylpyrrolidon kondensiert.
Durch hydrolytische ffnung des Lactamringes entsteht eine -Ketosure, die decarboxyliert wird
und neuerlich Ringschlu erleidet. Bei Behandlung mit Iodwasserstoffsure entsteht Nicotin:
Beim Rauchen wird etwa 30-90% des Gehaltes an Nicotin im Tabak aufgenommen. Je schneller man
raucht, umso schdlicher ist Nicotin, da dann pro Zeiteinheit mehr Nicotin aufgenommen wird. Etwa
1 mg Nicotin pro kg Krpergewicht ist tdlich, das ist die Menge, die in 10 Zigaretten enthalten ist,
ALKALOIDE
423
5.5 Chinolin-Alkaloide
Alkaloide, die einen Chinolinring enthalten, sind selten. Sie sind in Rinden der Cinchona-Arten
(Rutaceen) enthalten. Von alters her bekannt ist das Chinin. Der Chinolinring mit einer Methoxygruppe
(fehlt im Cinchonin, dem der Menge nach bedeutendsten Cinchona-Alkaloid) ist ber eine (eine OHGruppe tragende) C-Brcke mit einem Piperidinring verknpft. Damit ist die Voraussetzung fr eine
Hydraminspaltung gegeben.
424
I.
425
C8H12O4
C8H12
C8H18
-------H6 : 2 = 3 DBE
Danach enthlt die Verbindung drei DBE in Form von C=C- oder C=O-Doppelbindungen oder eine
entsprechende Zahl von Ringen. Analoges gilt fr schwefelhaltige Verbindungen.
Enthlt die Verbindung Stickstoff, so ergibt sich die Zahl der DBE, indem man die enthaltenen
Heteroatome mit Ausnahme von N vernachlssigt, ein Wasserstoffatom pro N abzieht und dann die
Differenz zum gesttigten KW bildet.
Beispiel:
C8H8N2O4
Vernachlssigung von O:
C8H8N2
Abzug von 2 H fr 2 N:
-H2
---------C8H6
gesttigter KW:
C8H18
-C8H6
---------H12 : 2 => 6 DBE
In einer N-haltigen Verbindung knnen Doppelbindungsquivalente auch in Form von C=N- und
CN-Bindungen enthalten sein.
Halogene (auch diese knnen in Naturstoffen enthalten sein!) knnen Wasserstoffatome ersetzen,
dementsprechend wird ihre Zahl der Zahl der Wasserstoffe zugefgt. Die Zahl der DBE errechnet
sich also allgemein nach der Formel:
C= Anzahl der C-Atome; H= Anzahl der H-Atome; Hal= Anzahl der Halogenatome; N= Anzahl der
N-Atome. Die Formel ist nur gltig, falls keine Atome im Molekl enthalten sind, die zur
Oktettaufweitung befhigt sind (z.B. S,P)!
426
Aus der Zahl der DBE ergeben sich bereits wichtige Schlsse: So kann eine Verbindung, die weniger
als 4 DBE enthlt, keinen Phenylring enthalten, eine DBE-freie Verbindung kann kein Ester sein
(Ester enthalten eine C=O-Gruppe) usw.
III. Bestimmung der Art der Doppelbindungsquivalente
Um die Art der DBE zu bestimmen, d.h. um zu sehen, ob diese als C=C-Doppelbindungen, als
carbocyclische Ringe oder C=O-Doppelbindungen vorliegen, unterwirft man die Substanz einer
katalytischen Hydrierung, bei der nur C=C-Bindungen angegriffen werden und vergleicht die
Bruttoformel des Ausgangsmaterials mit der des Reaktionsproduktes.
Man mu dabei bercksichtigen, da tetrasubstituierte Doppelbindungen bei der Hydrierung nicht
angegriffen werden und unter Umstnden eine Hydrierung unter Aufspaltung von Ringen (z.B.
gespannten Dreiringen) oder von Esterbindungen (Hydrogenolyse) erfolgt:
Besonders einfach ist dieses Verfahren, wenn die Masse der Ausgangsverbindung und des Produktes
mittels MS bestimmt wird. Solche Reaktionen kann man mit g-Mengen ausfhren.
Der Nachweis vorhandener C=O- und C=N-Doppelbindungsquivalente lt sich - abgesehen von
der Anwendung spektroskopischer Methoden (Carbonyl-Bande im IR-Spektrum) - durch Reduktion
mit LiAlH4 fhren: Aldehyde und Ketone werden zu den entsprechenden Alkoholen hydriert, pro
vorhandene Carbonylgruppe erfolgt eine Wasserstoffaufnahme von formal einem Molekl H2
[(Massenzunahme um 2 Masseneinheiten (ME), bzw. mu (molecular units)] , erkennbar an der
Zunahme des Molekulargewichtes (MG), z.B. bei Aufnahme eines Massenspektrums.
Ester werden zu den entsprechenden primren Alkoholen reduziert:
427
Nitro- oder Nitrosoverbindungen liefern Amine, allerdings kommen solche Verbindungen kaum in
der Natur vor.
Sind mehrere mit LiAlH4 angreifbare Gruppen vorhanden, so kann man mit LiAlD4 anstelle von
LiAlH4 in einer zweiten Hydrierung (eigentlich Deuterierung) feststellen, wieviele H- bzw. Daufgenommen werden. Eine Kombination der LiAlH4- und der LiAlD4-Reduktionsresultate erleichtert
zu erkennen, welche und wieviele durch LiAlH4 angreifbare Gruppen ursprnglich vorlagen.
IV. Erkennen funktioneller Gruppen
An die Bestimmung der DBE schliet sich eine Bestimmung vorhandener funktioneller Gruppen an.
Aus der Bruttoformel lt sich ablesen, ob Heteroatome (O,N etc.) vorhanden sind.
A. Stickstoff enthaltende Substituenten
Bei Gegenwart von N wird man zuerst auf N-haltige Substituenten prfen. Oft bedingt Stickstoff
basische Eigenschaften. Diese werden durch Lslichkeitsprobe (Verbindung ist in Sure lslich, bei
Zugabe von Alkali entsteht Trbung oder Niederschlag) bestimmt [Vorsicht bei wasserlslichen
Aminen, z.B. Quartrsalzen].
Quartrsalze sind auf diese Weise nicht fabar. Sie knnen aber als Reineckate
(Chromrhodanidkomplexsalze) ausgefllt werden (wichtige Methode zur Erfassung wasserlslicher,
oft physiologisch aktiver Alkaloide).
1)
Amine
NH-Gruppen zeigen im IR-Spektrum charakteristische Banden zwischen 3300 und 3200 cm-1. Dann
wird unterschieden, ob es sich um primre, sekundre oder tertire Amine handelt.
Primre Amine sind durch Isonitrilreaktion erkennbar: Das Amin wird mit CHCl3 und Alkali erhitzt.
Das dabei entstehende Dichlorcarben setzt sich mit dem Amin zum Isonitril um; das Isonitril wird an
seinem sehr blen Geruch erkannt:
Quantitativ sind aliphatische primre Amine durch die van Slyke-Bestimmung fabar, bei der das
primre Amin in Gegenwart von Sure mit NaNO2 nitrosiert wird und das im Verlauf der Reaktion
entstehende Diazoniumsalz letztendlich in N2 zerfllt, das gemessen wird.
Sekundre Amine geben bei der gleichen Reaktion die stark giftigen N-Nitrosamine, die gefrbt sind;
Tertire Amine reagieren nicht (Hofmann-Eliminierung anwenden!):
428
2) Sureamide
Sureamide zeigen im IR-Spektrum neben den NH-Banden (je nach Substituenten ca. 3100 cm-13500 cm-1) auch eine Carbonylbande (je nach Substituenten ca. 1600 cm-1 -1700 cm-1). Fr sie ist auch
das typische Signal bei etwa 170 ppm im 13C-NMR-Spektrum typisch. Sureamide sind neutral und
lassen sich nicht mit Sure extrahieren. Ihr Nachweis gelingt durch hydrolytische Spaltung mit
NaOH.
NH3 ist mit Hilfe von Lackmuspapier oder durch Geruchsprobe nachweisbar. Schwieriger ist das
Erkennen eines substituierten Sureamides, weil hhere Amine meist nicht flchtig sind. Nach
Spaltung mu man Sure und Amin einzeln charakterisieren.
3)
Peptide
Peptide sind mit der "Biuret"-Reaktion nachweisbar: Erhitzen der Peptide mit Alkali, Zugabe von
Cu++ ergibt eine violettblaue Farbe des Komplexes. Der Name "Biuret"-Reaktion ist irrefhrend,
da in Biuret eine andere Atomanordnung als in Peptiden vorliegt.
Peptide werden durch Hydrolyse in -Aminosuren gespalten, die durch die Ninhydrinreaktion
nachweisbar sind:
429
B.
430
cm-1; Ketone: ca. 1660-1750 cm-1. Das Signal des Carbonyl-C-Atoms der Aldehyde und Ketone
findet man im 13C-NMR-Spektrum in besonders hohem Feld, die Signale der Aldehyde liegen
zwischen 190 und 210 ppm, die der Ketone bei 190 bis 230 ppm. Ketone und Aldehyde werden an
ihrer Reaktion mit 2,4-Dinitrophenylhydrazin erkannt. Aldehyde sind zu Suren oxidierbar, Ketone
reagieren nur bei verschrften Oxidationsbedingungen unter Gerstspaltung.
Eine Unterscheidung zwischen Aldehyden und Ketonen ist mit Fehlings'scher Lsung und Tollens
Reagenz mglich, da nur Aldehyde damit zur Sure oxidierbar sind. (Vorsicht: Acyloine des Typs
-CO-CH2OH epimerisieren zu -CHOH-CHO).
4)
Phenole
Phenole zeigen im IR-Spektrum die typische OH-Bande zwischen 3500 und 3390 cm-1, im 1H-NMRSpektrum sind meist charakteristische Signale fr aromatische C-H-Gruppen (6,8-8,2 ppm) zu
erkennen. Phenole lsen sich in Alkali - nicht aber in Hydrogencarbonat - und fallen bei Zugabe von
Sure wieder aus. Alkohole sind dagegen nicht in Alkali lslich.
5)
Alkohole
Alkohole zeigen im IR-Spektrum wie Phenole die charakteristische OH-Bande zwischen 3500 und
3300 cm-1, im 13C-NMR-Spektrum wie Phenole ein Signal um 60 ppm, jedoch im 1H-NMR-Spektrum
keine aromatischen CH-Signale.
Alkohole und Phenole, aber auch Suren, tauschen beim Stehen mit D2O das acide Wasserstoffatom
der OH-Gruppe gegen D aus. Das entsprechende Signal verschwindet daher im NMR-Spektrum. OHGruppen zeigen ferner im IR eine typische Bande bei 1260-1410 cm-1 (Deformationsschwingung).
Alkoholische und phenolische OH-Gruppen sind quantitativ in Abwesenheit von Aminen und Suren
durch die Zerewitinoff-Reaktion bestimmbar.
Alkohole lassen sich mit Acetanhydrid verestern oder durch Trimethylsilylierung verethern. Untersucht
man die Reaktionsprodukte in der Kombination GC-MS, so sieht man ein entsprechendes Anwachsen
der Molekulargewichte der Derivate im Vergleich zum Ausgangsmaterial je nach Zahl der vorhandenen
OH-Gruppen.
6)
Ether
Methoxyl- und Ethoxylgruppen sind im Gegensatz zum chemischen Nachweis sehr leicht durch
NMR-Spektroskopie erkennbar (1H-NMR-Singulett bei = 3,60 ppm fr eine Methoxylgruppen,
13
C-NMR-Signal um 60 ppm).
Die Ethergruppe ist chemisch nicht leicht nachweisbar. Am besten sind die in der Natur hufig
vorkommenden aromatischen Methylether durch die Zeisel'sche Alkoxybestimmung fabar.
Das sehr leicht flchtige CH3I destilliert in eine Vorlage ab und reagiert dort mit AgNO3 zu AgI.
431
Chromsure, gemischt mit H2SO4 (4:1), versetzt. berschssiges Oxidationsmittel wird nach der
Oxidation mit Hydrazinhydrat zerstrt. Methylverzweigungen liefern Essigsure, geminale CH3Gruppen allerdings Aceton, das nur teilweise zu Essigsure aufoxidiert wird, so da auf diese Weise
nur der Mindestgehalt an CH3-Verzweigungen zu ermitteln ist.
Heute werden Methylverzweigungen durch NMR festgestellt, eine Isopropylgruppe ist beispielsweise
432
Bei Fehlen anderer funktioneller Gruppen ist das Mittel der Wahl die Oxidation mit KMnO4 in
wssriger saurer Lsung.
Bei Anwendung von Permanganat als Oxidationsmittel in wssriger Lsung zur Ermittlung von
Doppelbindungen lt sich der Zwischenzustand des Glycols nicht festhalten, die Reaktion schreitet
bis zur Bildung der Dicarbonsure fort.
Permangant greift aber auch viele andere funktionelle Gruppen an, z.B. Alkohole, Phenole oder
Mercaptane. Die Permanganatoxidation ist daher nur anwendbar, wenn diese Gruppen fehlen.
Fr die Bestimmung der Lage einer Doppelbindung ist in diesen Fllen die chemische Umformung
des Molekls notwendig. Zunchst wird ein Reagenz an die Doppelbindung angelagert, dann wird
eine Spaltungsreaktion ausgefhrt.
Besonders bewhrt hat sich als Anlagerungsreagenz das teure und sehr giftige OsO4, das nach
Anlagerung durch Hydrolyse das cis-Diol liefert:
Mittels Peressigsure ist ber das Epoxid als Zwischenstufe das trans Diol erhltlich.
Das vicinale Glycol lt sich durch Einwirkung von Pb(OAc)4 (Bleitetraacetat, PbTA), HIO4
(Periodsure) oder von Phenyliodosodiacetat spalten:
433
Mit Pb(OAc)4 fhrt man die Reaktion in Eisessig aus, wobei zuerst an einer Hydroxylgruppe eine
OPb-Bindung entsteht. Dann erfolgt Spaltung:
Mit Periodsure kann man in wriger Lsung arbeiten, was vor allem in der Zucker-Chemie Vorteile
bringt. Beispiel:
Als besonders wirkungsvolle Methode zur Lokalisierung von Doppelbindungen - auch in Gegenwart
anderer funktioneller Gruppen - hat sich die Ozonolyse erwiesen, z.B. wird eine phenolische Gruppe
nicht angegriffen. Bei vorsichtiger und dosierter Anwendung reagieren die Doppelbindungen des
Benzolringes nicht!
Die Ozonolyse wurde z.B. bei der Strukturaufklrung des Naturkautschuks mit Erfolg angewandt
(Harries):
434
2)
Abbau von Diolefinen unter Erhalt von Doppelbindungen, die von quartren C-Atomen
ausgehen
Abbau mit KMnO4/NaIO3 in t-Butanol:
Mit KMnO4 und NaIO3 in Butanol knnen quartre Doppelbindungen vor einer Oxidation verschont
werden, so da man nur solche oxidiert, die von CH-Doppelbindungskohlenstoffen ausgehen.
Ein Beispiel dafr ist der Lanosterin-Abbau (nach Habermehl):
3)
435
a) Barbier-Wieland-Abbau
Der Barbier-Wieland-Abbau ist nur auf Ester anwendbar und folgt nachstehendem Schema:
Beispiel:
Ermittlung der Struktur von Seitenketten in Gallensuren.
Der Abbau lt sich durch Allylbromierung des entstandenen Olefins und nachfolgende HBrAbspaltung so modifizieren, da gleich drei C-Atome des ursprnglichen Molekls entfernt werden.
b)
Oxidative Decarboxylierung
Eine wichtige Rolle zum Abbau aliphatischer Seitenketten spielt die oxidative Decarboxylierung, die
auch in der Natur erfolgt. Dieses Abbauverfahren ist am Beispiel des Abbaus einer Terpencarbonsure
demonstriert:
436
Die entstehende Doppelbindung kann durch Behandlung mit Ethylendiamin/Li isomerisiert werden.
Sie wandert dabei durch die Kette bis sie auf ein "tertires" C-Atom trifft.
Durch Oxidation kann so die Kette, durch die die Doppelbindung wanderte, abgespalten werden.
c)
2. Curtius-Abbau
3. Schmidt-Abbau
Hunsdiecker-Abbau
Mechanismus:
Der Hunsdiecker-Abbau erfordert die Vermeidung jeder Spur von Feuchtigkeit. Eine Variante, die
weniger heikel durchfhrbar ist, ist der Cristol-Abbau. Bei dieser Reaktion setzt man die Sure in
CCl4 mit HgO und Br2 um. Der Nachteil dieser radikalisch verlaufenden Reaktion ist die Bildung
relativ groer Mengen von RCl als Beiprodukt.
437
e)
Abbau von -Hydroxysuren
-Hydroxysuren werden bei Einwirkung von starker Schwefelsure unter Decarbonylierung in
Aldehyde berfhrt:
5)
b) Ruff-Abbau:
c) Weermann-Abbau:
6)
438
7)
Abbaureaktionen von Seitenketten an Aromaten
Aromatische Verbindungen sind gegenber Permanganat bestndig, am Aromaten gebundene OHoder NH-Gruppen ermglichen allerdings auch einen oxidativen Angriff und mssen daher durch
Methylierung abgeblockt werden.
8)
a)
b)
439
3)
Zuerst Hydrierung von Doppelbindungen, dann Entfernung der OH-Gruppen mit HI/P, oxidative
Spaltung an den Verzweigungsstellen:
440
b.
Entfernung von Substituenten, die Schwefel enthalten:
C-S-Bindungen lassen sich durch Behandlung mit Raney-Nickel und H2 bei erhhter Temperatur und
erhhtem Druck in C-H-Bindungen berfhren.
Z.B.: Umwandlung einer Carbonylfunktion in ein Thioacetal und dann Entfernung des S-Substituenten
durch Behandlung mit Raney-Nickel/H2:
c.
.
.
von Braun-Abbau
Anlagerung von Bromcyan an tert. Amin:
.
Emde-Abbau
fr NH-Gruppen, die an Aromaten gebunden sind; solche Verbindungen spalten bei der HofmannEliminierung Methanol ab.
441
VII. Dehydrierung
Verbindungen, die Sechsringe mit Doppelbindungen enthalten, z.B. Terpene, lassen oft kaum
erkennen, in welcher Stellung Alkyl-Substituenten stehen. Ein wichtiges Verfahren zu deren
Ermittlungen ist die Dehydrierung zu einer aromatischen Verbindung. Bei der Dehydrierung fgt
man der Probe Schwefel zu (wirkt nicht sehr selektiv, die Reaktion gelingt jedoch bereits bei tiefer
Temperatur) oder Se (erfordert hohe Temperatur, ist aber selektiver als S) oder Pd/C, wobei die Probe
in Lsung erhitzt oder durch ein mit Katalysator beschichtetes Rohr geleitet wird.
Beispiele:
Angulre Alkylgruppen (meist CH3) gehen bei der Reaktion berwiegend als Alkan verloren (siehe
-Selinen), es kommt aber auch zur Skelettumlagerung, d.h. zur Wanderung einer angulren
Alkylgruppe an ein benachbartes C-Atom (siehe Cholesterin); Carbonsuren erleiden bei der
Reaktion oft Decarboxylierung (siehe Marrianolsure).
Eine wichtige Mglichkeit, um zu entscheiden, ob eine Doppelbindung in einem 6-Ring oder einer
angefgten Seitenkette vorliegt, bietet die Dehydrierung mittels SeO2: SeO2 dehydriert Alicyclen, die
einen Cyclohexenring haben, zu einem Benzolderivat. Doppelbindungen in einer Seitenkette werden
weder angegriffen noch in Richtung auf den Kern verschoben.
442
Bei Dehydrierung mit Pd/C hingegen werden auch Cyclohexanringe dehydriert. Die Kombination
von Dehydrierung mittels Pd/C und SeO2 ist also sehr aufschlureich.
Zink-Staub-Destillation: Die Probe wird mit einer bis hundertfach greren Menge an Zn-Staub zur
Rotglut erhitzt. Bei diesem Verfahren gehen Phenole in ihre Stammkohlenwasserstoffe ber. Dies ist
zwar eine sehr alte, aber wichtige Reaktion zur Ermittlung von Ringskeletten. Wahrscheinlich wird
der Sauerstoff als Zn-Oxid entfernt.
Beispiel:
KOH-Schmelze:
Die ebenfalls sehr frh angewendete Methode zur Spaltung komplexer C-Skelette, die Flavone oder
Anthocyane sind, ist die KOH-Schmelze
443