Planta (Bed.
) 132, 285-290 (1976)
Zur Induktion der Nitrat- und Nitritreduktase
in vollsynchronen Chlorella-Kulturen
Rudolf Tischner
Pflanzenphysiologisches Institut der Universitfit, Untere Karspfile 2, D-3400 G6ttingen, Federal Republic of Germany
On the Induction of Nitrate- and Nitrite-Reductase
in Synchronized Chlorella cultures
Summary. Nitrate- and nitrite-reductase (E.C. 1.6.6.1.
and E.C. 1.6.6.4.) activities were determined during
the light-dark changes in two completely syn-
chronized Chlorella strains. A sharp increase of both
enzyme activities during the first light hour was found
in Chl. vulgaris forma tertia, a smaller one in Chl. py-
renoidosa. The rise in enzyme activity could only be
inhibited by actidione but not by antibiotics which
inhibit plastidic protein synthesis. It can therefore
be concludet that light causes a de novo synthesis
of both enzymes on cytoplasmic ribosomes. It is
assumed that light effects a release of substances to
the cytoplasm, probably formed during CO2-fixation,
which can effect a cytoplasmic protein synthesis.
Einleitung
Die Verwertung von Nitrat in Pflanzen verlangt eine
Reduktion des Stickstoffes yon der Oxidationsstufe
+ 5 zur Stufe - 3. Dieser acht Elektronen ben6tigende
Weg wird in mehreren Schritten zurtickgelegt von
denen der erste eine Reduktion zur Oxidationsstufe
+ 3 darstellt und von der Nitratreduktase (NAR) ka-
talysiert wird. Die anschliel3enden Schritte sind nicht
v611ig aufgekl/irt; die Identifizierung von Zwischen-
produkten ist wegen des raschen Einbaus yon NH4 +
in e-Ketos/iuren erschwert (Czygan, 1965). Es ist je-
doch bekannt, dab im Anschlul3 an die erste Reaktion
die Nitritreduktase (NIR) den n/ichsten Schritt kata-
lysiert. Uber diese beiden Enzyme liegen etliche
Abkiirzungen: D C M U 3-(3,4 dichlorphenyl)-l,l-Dimethylharn-
stoff, DTE 2,3-dihydroxy-l,4-dithiolbutan, FMN Flavinmononu-
cleotid, GAP Glycerinaldehyd-3-phosphat, LDW Licht-Dunkel-
Wechsel, NAR Nitratreduktase, NIR Nitritreduktase, PGS 3-Phos-
phoglycerins/iure, RudPCo Ribulose-l,5-diphosphat Carboxylase,
7; 10 7 bzw. I0 Dunkelstunden
Planta
9 by Springer-Verlag 1976
Untersuchungen vor, die von Morris (1974) zusam-
mengefal3t wurden. Die vorliegende Arbeit teistet ei-
nen Beitrag zum Synthesebeginn und Syntheseort der
NAR und NIR in vollsynchronen Kulturen einzelliger
Grfinalgen.
Material und Methoden
Die Algen Chlorella pyrenoidosa und Chlorella vulgaris forma tertia
(Stamm 211-8b bzw. 211-8k der Algensammlung des Pflanzenphy-
siologischen Institutes der Universit~t G6ttingen) wurden wie bei
Lorenzen (1968) und bei Pirson et al. (1963) beschrieben, kultiviert.
Die eine wuchs im 14:f0 LDW, die andere im LDW 7:5. Beide
waren vollsynchron nach der Definition von Senger und Bishop
(1969) und produzierten durchschnittlich 20 bzw. 8 Autosporen
pro LDW.
Die Enzymtests wurden im zellfreien Extrakt durchgeffihrt.
Nach der Ernte (5 rain, 2000 g) und dem Waschen wurden die
Zellen in Kalium-Phosphat-Puffer (0,1 M pH 7,4) der 1 mM an
DTE war, aufgenommen und in einer Bfihler Zellmiihle mit Glas-
perlen yon 0,2 bzw. 0,1 mm Durchmesser quantitativ aufgeschlos-
sen. Das Homogenat wurde nach dem Abtrennen von den Glasper-
len zentrifugiert (15 rain 20000 g), der Uberstand in den Tests ver-
wendet.
Der NAR-Test wurde in Anlehnung an Liu und Hellebust
(1974) durchgeftihrt. Voruntersuchungen best/itigten das pH-Opti-
mum bei 7,4 (Oesterheld, 1971). Dabei fanden sich im Kaliumphos-
phatpuffer stets leicht h6here Aktivit/iten als im Tris-HC1-Puffer,
im Kalium-Natrium-Phosphatpuffer wurde keine Aktivit/it des En-
zyms festgestellt. Die Testreaktion war fiber 15 min streng linear
zeitabh/ingig und auch die Linearit/it yon Extrakt- und Substratab-
hfingigkeit war gegeben. Optimale Endkonzentrationen im Testan-
satz waren bei 30 ~ C wie folgt:
NADH 0,2 mM
MgSO4 9 mM
KNO a 1,8 mM
Extrakt 0,1 mg Protein/ml
Durch Einspritzen eines Aliquots des Testansatzes in 2,8 ml
des diazoniumsalzbildenden Reagenz wurde die Reaktion abge-
stoppt. Nach der Farbentwicklung (10rain 30~ wurde bei
540 nm photometriert und die gebildete NOE--Menge einer Eich-
kurve entnommen. Die jeweiligen Blindwertkorrekturen waren/iu-
gerst gering.
286 R. Tischner: Nitrat- und Nitritreduktase in vollsynchronen Chlorella-Kulturen

Die Charakteristika des NIR-Tests sind mit denen des NAR- wrnolNO~
Tests identisch. Die Aktivit~ten waren in Kaliumphosphat-Puffer mgProteinh
und in Tris-HC1-Puffer gleich. Beim pH-Optimum 7,4 zeigte sich NIR NAR ~~ o ~ ~
auch im Kalium-Natrium-Phosphatpuffer kein Aktivit~tsunter-
schied. Die Reaktion wurde durch die Oxidation des als Donor o/=
dienenden Dithionits gestoppt und der Testansatz verdtinnt. In
einem Aliquot wurde mit dem Farbreagenz das restliche NO2- 100 20 e y
nachgewiesen und bestimmt. Als gleichwertige Ubertr/iger zwischen
Dithionit und NO2 wurde entweder Methylviologen (Joy und
Hageman, 1966) oder F M N (Schrader et al., 1968) benutzt.
Die Proteinbestimmung erfolgte nach Lowry et al. (1951). Die
Zugabe yon Glukose orientierte sich an den Angaben von Andersag
(1972), die anderer Metabolite an denen von Klepper et al. (1971).
Die Verwendung yon Stoffwechselgiften erfolgte ftir Rifampicin
und Actidion in Anlehnung an Galling (1971); ftir Lincomycin
und Spectinomycin an Ellis (1970), Ellis und Hartley (1971).
Bei der Benutzung yon Farblicht wurden fiir Blau 2.104 erg/s/
cm 2 und ftir Rot 3,5.104 erg/s/cm 2 eingestrahlt, die Trockengewichts-
produktion ist dann fiir beide Lichtqualit~iten gleich (Steup, 1972). 1o 20 ~s 5; do
rnin
Abb. L Aktivit~itsanstieg yon NAR - o - und NIR - 9 - in der
ersten Lichtstunde des 7:3 LDW (211-8k)
Ergebnisse und Diskussion

Wenn man vollsynchrone Kulturen des Chlorella- pmolNO~ UmolNO~

Stammes 211-8k mit dem Beginn des LDW belichtet, mgProtelnh= mg Protein h
30 - o
"150
steigen die spezifischen Aktivitfiten der N A R und
N I R sehr stark an. Ahnlich wie von Hodler et al. NAR i~ ~ ,~ NIR

(1972) berichtet, betrug der Anstieg in der ersten

Stunde ffir die N A R das 28 x und ffir die N I R das
33 x des Dunkelwertes.
Der zeitliche Verlauf dieses Aktivit/itsanstieges
1/il3t eine lag-Phase yon 10 min ffir beide Enzyme deut-
lich werden. Nach 20 rain Lichteinwirkung ist der Ak-
tivit~itsanstieg am gr613ten (Abb. 1), der sich dann
deutlich gegen Ende der ersten Stunde abflacht. Diese
Verringerung des Anstieges deutet auf ein Aktivitfits-
optimum in der ersten Hfilfte der Lichtzeit des LDW
hin. Tatsfichlich liegt nach zwei Stunden die h6chste
spezifische Aktivitfit des nitratreduzierenden Systems
vor (Abb. 2).
Danach fallen die Enzymaktivitfiten deutlich ab,
obwohl sich an den Kulturbedingungen nichts ver~in-
dert hat. Trotz der ansteigenden Dichte der Kultur
wird der Bereich der Lichtsfittigung nicht verlassen;
die Aktivitfit dieser beiden Enzyme wird somit nicht
allein durch das Einsetzen bzw. Abschalten der Be-
leuchtung reguliert, sondern auch durch Einflfisse des
intrazellul/iren Stickstoffhaushaltes (Oaks, 1974;
Smith und Thompson, 1971). Die erstgenannte Regu-
lationsm6glichkeit (Hodler et al., 1972) tritt zusfitzlich
am Ende der Lichtzeit auf, was sich durch ein be-
schleunigtes Absinken der spezifischen Aktivit~iten
dokumentiert. Ffir den Chlorella-Stamm 211-8b ergibt
sich im Prinzip der gleiche Verlauf (Abb. 3).
Das Optimum der spezifischen Aktivitfiten liegt
in der 4. Stunde des LDW und damit in dem Bereich,
der von Tischner und Lorenzen (1975) und Nelle et al.
(1975) als im Lebenszyklus besonders evident charak-
20 100
10 50
i
1 2 4~5 7 7,5 12Std
Abb. 2. Spezifische Aktivitfit von NAR - o - und NIR - 9
wiihrend des 7:3 LDW des Chlorella-Stammes 211-8k
terisiert wurde. Der Verlauf beider Enzyme fiber den
Zyklus ist invers dem der NAD-Glutamat-DH, die
von Tischner und Lorenzen (1974) bestimmt wurde.
Dieser Befund deckt sich mit dem von Sahulka et al.
(1975), die fanden, dab diese Regulation fiber den
Gehalt an Zucker in den Pflanzen erfolgt.
Vergleicht man die Aktivit~itsverfinderungen von
N A R und NIR in beiden Chlorellastfimmen, so ffillt
die gr613ere Sensibilitfit des Stammes 211-8k auf. Der
Grund daffir ist nicht allein die h6here Anzuchttem-
peratur (39 ~ C gegenfiber 32 ~ C bei 211-8b), sondern
vor allem dernur halb so lange Zyklus. Dieser Orga-
nismus ist endogen auf eine 12sttindige kfirzest m6g-
liche Generationszeit (Lorenzen und Schleif, 1966)
R. Tischner: Nitrat- und Nitritreduktase in vollsynchronen Chlorella-Kulturen
umotNO~ WmotNO}
mgProtein h mgProteinh
NAR /~ NIR
10
i
1 /, 7 10 lZ, 17 20 24 Std
Abb. 3. Spezifische Aktivit~t yon N A R - - o -und N I R - 9
w/ihrend des L D W 14:[0 des Chlorella-Stammes 211-8b
eingestellt und reagiert somit wesentlich schneller auf
Verfinderungen der Aul3eneinflfisse.
In den bisher beschriebenen Untersuchungen
wurde stets die Nettoaktivitfit bestimmt. Im folgenden
sollte der turnover erfal3t werden, der bei einem so
schnellen Anstieg der Aktivit/iten m6glicherweise
hoch sein kann. Dazu wurden die Kulturen, nachdem
sie ffir eine Stunde belichtet waren, verdunkelt
(Abb. 4); ein rasches Absinken der Aktivit/iten war
die Folge. Schon nach 1,5 h ist der auf Extraktprotein
bezogene Umsatz beider Enzyme um 50% gesunken.
Der turnover ist dabei nicht an die Synthese eines
abbauenden Enzyms gebunden (Aslam et al., 1973);
denn versetzt man die Kulturen nach einstfindiger
Belichtung mit Actidion (0,02 mg/ml Endkonzentra-
tion) und bel/il3t sie im Licht, so ergibt sich eine identi-
sche Halbwertszeit. Das gilt prinzipiell ftir beide En-
zyme, wobei der turnover der NIR noch etwas schnel-
ler erscheint. Morris und Syrett (1965) fanden bei
Entzug yon Nitrat oder Austausch gegen Ammonium
in der N/ihrl6sung ebenfalls bei Chloretta einen h6he-
ren turnover bei der NIR und der N A R als beim
Proteingehalt. An Chlamydomonas reinhardii fanden
Thacker und Syrett (1972), dab der turnover des nitrat-
reduzierenden Systems erfagbar wird, wenn man die
Photosynthese auf verschiedene Weise ausscha|tet.
In vielen Untersuchungen (Kessler und Bficker,
1960; Ullrich-Eberius, 1973 ; Ullrich, 1974) wurde auf
die Verbindung der Nitratreduktion mit der Photo-
synthese hingewiesen. Vor allem die N I R soll, wegen
des Elektronenbedarfs des von ihr katalysierten
Schrittes eng an m6glicherweise Ferredoxin gekoppelt
287
umolNO~ i~,
Proteinh
rn9
20 "~
10 ~'~,
"Q,-za:=
pmotNO} 0
Std
100 14,
- - -"-'c - -
50- ~o k
',:.~.
1' o.~...
1 3 5
Std
Abb. 4. Aktivitfitsabfall von N A R ( 9 und N I R (unten) w/ihrend
der Verdunkelung .... und Actidionzugabe - - nach 1 h i m Licht
(211-8k)
sein, das wegen seines negativen Redoxpotentials als
Donor geeignet w/ire (Kessler und Czygan, 1968 ; Lo-
sada et al., 1970; Cardenas et al., 1972). Auch der flu-
13erst rasche Anstieg der beiden Enzymaktivit/iten in
diesem Objekt scheint photosynthetisch reguliert zu
werden. Nach Zugabe verschiedener Konzentrationen
an D C M U und einer halbstiindigen Inkubation im
Dunkeln, die 02-Entwicklung ist gehemmt, aber die
zyklische Photophosphorylierung m6glich, wurden
die Kulturen ffir eine Stunde belichtet. Es zeigte sich
(Abb. 5) eine Abnahme der spezifischen Aktivit/iten
beider Enzyme mit steigender DCMU-Konzentra-
tion. Die Konzentration bei der gerade noch die halb-
maximale Aktivit/it erreicht wird, liegt mit 4-10- 4 M
in der Gr613enordnung, die ffir 50% Hemmung der
Photosynthese bei Autosporen ben6tigt wird (Frickel-
Faulstich, 1974; Nelle, 1976). Ffir eine Lichtwirkung
fiber den photosynthetischen Apparat spricht auch,
dal3 bei der Anwendung yon Rot- und Blaulicht keine
Unterschiede gefunden wurden (Tabelle 1).
Demgegenfiber erh/ilt man bei Begasung mit CO2-
freier Luft im Licht keinen Aktivit/itsanstieg und auch
bei N2-Begasung im Licht erfolgt keine Zunahme (Ta-
belle 2). Diese Befunde decken sich mit denen von
Aslam et al. (1973) an Hordeum-B1/ittern, wohingegen
288 R. Tischner: Nitrat- und Nitritreduktase in vollsynchronen Chlorella-Kulturen

pmolNO}
mg Protein h
150 30-

-o- o ~ I
100 20-

50' 10

r T i , , i
10 -B 107 3.10-' 10 6 105 3.10-(D CM U] 10"~1

Abb. 5. Spezifische Aktivit/it von NAR - o - und NIR - 9 in Abhfingigkeit von verschiedenen DCMU-Konzentrationen (211-8k)

TaSelle 1. Farblichteinflul3 auf die spezifischen Aktivit/iten yon Tabelle 2. Spezlfische Aktwlditen von NAR und NIR bei verschie-
NAR und NIR. Io =Energie siehe Methodenteil denen Kulturbedingungen (211-8k)

Rot Blau Ansatz NAR NIR

Spez,Aktiv. Spez.Aktiv.

NAR NIR NAR NIR Dunker 0,94i 3,36

Io 23,1 118,4 17,3 98,4
1 Std Licht 26,8 110,7
1o/2 11,6 67,7 8,0 48,1 Dunkel + Glukose 25,5 103,8
1Std Licht - CO2 0,5 5,7
1Std Licht - CO2 +Glukose 24,3 10/-,,0
Canvin und Atkins (1974) bei CO2-freier Begasung 1 Std Licht -CO2+DCMU 0,7 3,5
desselben Objekts nur einen geringen Effekt bemerk-
1 Std Licht - CO2 +DCIVlU+Gluk. 21,4 74,0
ten. Der Grund kann in d e r n u r 1/2stfindigen Mel3-
dauer liegen, w/ihrend der vermutlich das CO2 noch ] Std Licht + N2 0,4 2,6
nicht v611ig verdrfingt war. Wir begasten die Kulturen 1Std Licht . N2 +Glukose 15,7 61,2
vor dem Versuch mindestens 2 h mit CO2-freier Luft
bzw. N2.
Bei Verwendung C02-freier Luft und dem Zusatz konnte durch die Anwendung verschiedener Gifte ge-
von Glukose im Licht, werden die bisherigen Aktivi- zeigt werden (Abb. 6), die an unterschiedlicher Stelle
tfiten erhalten; bei N2-Begasung und Glukosezusatz in die Proteinsynthese eingreifen. So verhindert Acti-
sind sie sehr stark abgeschw~tcht. Begast man mit dion die Translation an 80 S-Ribosomen und damit
COz/Luftgemisch, lfiBt die Kulturen im Dunkeln und die cytoplasmatische Proteinsynthese. Spectinomycin
setzt Glukose zu, findet man den vollstfindigen An- und Lincomycin hemmen die chloroplastidfire
stieg der Aktivitfiten (Tabelle 2). Ein fihnlicher Befund Proteinsynthese indem sie die Translation unterbin-
liegt von Sluiters und Scholten (1975) vor, die eine den. Ebenfalls im Chloroplasten wirkt Rifampicin,
Steigerung der Aktivitfiten in Bohnenblfittern nach das durch Hemmung der RNA-Polymerase die Tran-
Saccharosezusatz beobachteten. Das Licht bzw. die scription verhindert.
Photosynthese scheint fiber Zwischenprodukte der Die Induktion der beiden Enzyme in Zellen, die
CO2-Fixierung, die z.T. auch beim Abbau yon Glu- ffir eine Stunde Licht ausgesetzt wurden, war nur
kose in der Zelle vorliegen, den Anstieg der spezifi- durch Zugabe von Actidion zu verhindern. Demge-
schen Aktivitfiten zu veranlassen. genfiber wirkte keines der Gifte, die die Proteinsyn-
Dieser Anstieg beruht in jedem Fall tats/ichlich these im Chloroplasten hemmen. Die Enzyme werden
auf einer de novo Synthese beider Enzyme. Das also vollstfindig im Cytoplasma synthetisiert und sind
R. Tischner: Nitrat- und Nitritreduktase in vollsynchronen Chlorella-Kulturen
spez.Aktiv.
100%
NIR
50%
K D A Li Sp Rif K-Na-P
spez.Aktiv.
100% ] I r m-1
NAR
50%
K D A Li Sp Rif K-Na-P
Abb. 6. Wirkung verschiedener Gifte auf NIR (oben) und NAR
(unten). Ernte nach l h Belichtung. 9 211-8b, [] 211-8k. A Acti-
dion; Sp Spectinomycin; Li Lincomycin; RifRifampicin; K-Na-P
Kalium-Natriumpuffer; K Kontrolle ohne Gift; D Dunkel
im Kern der Zelle codiert, wie das Ergebnis der An-
wendung des chloroplastid/iren Transcriptionshem-
mers zeigt. Die Ergebnisse von Sluiters und Scholten
(1973) sowie yon Knypl und Fergusons (1975) lassen
ebenfalls diesen Schlul3 zu. Prfift man die Wirkungs-
weise der Gifte w/ihrend der Enzyminduktion mit
Glukose im Dunkeln, so erhfilt man das gleiche Er-
gebnis, was die Gleichartigkeit der beiden Induktio-
nen unterstreicht. Die Versuche mit dem Chlorella-
Stature 211-8b verliefen den aufgezeigten Befunden
parallel.
Bei der Enzyminduktion im Licht mug aus den
Chloroplasten eine Substanz ins Cytoplasma gelan-
gen, die mittelbar oder unmittelbar eine Proteinsyn-
these induziert. Wegen der schlechten Permeabilitfit
durch die Zellmembranen zeigt die Zugabe der am
Chloroplastenshuttle beteiligten Substanzen (PGS/
GAP und Malat/Oxalacetat) keine Wirkung. Versu-
che in dieser Richtung wurden von Klepper et al.
(1971) an Blattstficken von Ipomoea durchgeffihrt. Sie
konnten zeigen, dab nicht nur mit Hexosephosphaten,
sondern auch mit GAP und PGS eine Induktion der
N A R m6glich ist. Mit der doppelten Konzentration
von GAP wird ann/ihernd die gleiche Steigerung wie
mit der einfachen Konzentration von FDP erreicht.
Nicht gekl/irt werden konnte, ob die Beeinflussung
289
der NAR fiber die Zncker oder z.B. fiber NADH2, das
bei der Oxidation von GAP entsteht, erfolgt.
Viele Indizien deuten darauf bin, dab zumindest
die NIR im Chloroplasten lokalisiert ist (Miflin,
1974). Das wfirde nach den hier aufgeffihrten Ergeb-
nissen bedeuten, dab das im Cytoplasma syntheti-
sierte Enzym durch die Chloroplastenmembran gelan-
gen mug. Prinzipiell ist das m6glich, da wie Bovarnick
eta!. (1974) zeigen konnten, Untereinheiten der RudP
Co im Cytoplasma gebildet, in den Chloroplasten ge-
langen und dort zum fertigen Enzym vervollst/indigt
werden. Somit ist die Frage nach der exakten Lokali-
sation der beiden Enzyme in der Chlorella-Zelle nicht
befriedigend zu beantworten. Eine weitere Klfirung
k6nnte mit Untersuchungen an anderen Organismen
erreicht werden, bei denen, im Gegensatz zu Chlorella,
eine Fraktionierung der Zellkompartimente leichter
durchfiihrbar ist.
Literatur
Andersag, R.: Uber die Verarbeitung von Glukose durch Chlo-
rella-Kulturen im blauen und roten Spektralbereich. Diss. G6t-
tingen (1972)
Aslam, M., Huffaker, R.C., Travis, R.L. : The interaction of respira-
tion and photosynthesis in induction of nitrate reductase activ-
ity. Plant Physiol. 52, 137-141 (1973)
Bovarnick, J.G., Schiff, J.A., Freedman, Z., Egan, J.M.: Events
surrounding the early development of Eugtena chloroplasts. Cel-
lular origin of chloroplast enzymes. J. Gen. Microbiol. 83, 63 -
71 (1974)
Canvin, D.T., Atkins, C.A. : Nitrate, nitrite and ammonia assimila-
tion by leaves. Effect of light, carbondioxide and oxygen.
Planta (Berl.) 116, 207 224 (1974)
Cardenas, J., Rivas, J., Paneque, A., Losada, M.: Effect of iron
supply on the activities of the nitrate reducing system from
Chlorella. Arch. Mikrobiol. 81, 260-263 (t972)
Czygan, F.C. : Zur Frage der Zwischenprodukte der Nitratreduk-
tion bei Grfinalgen. Planta 64, 301-311 (1965)
Ellis, R.J. : Further similarities between chloroplast and bacterial
ribosomes. Planta (Berl.) 91, 329-335 (1970)
Ellis, R.J., Hartley, M.R. : Sites of synthesis of chloroplast proteins.
Nature (Loud.) New Biol. 233, 193-196 (1971)
Frickel-Faulstich, B. : Vergnderungen im photosynthetischen Elek-
tronentransport einzelliger Gr/inalgen w~hrend des Entwick-
lungszyklus. Diss. Marburg (1974)
Galling, G. : Einflug yon Rifampicin, Chloramphenicol und Cyklo-
beximid auf den Uridineinbau in chloropIastid~ire Ribosomen-
vorstufen von Chlorella. Planta (Berl.) 98, 50-62 (1971)
Hodler, M., Morgenthaler, J.J., Eichenberger, W., Grob, E.C.:
The influence of light on the activity of nitrate reductase in
synchronous cultures of Chlorelta pyrenoidosa. FEBS letters
28, 19-21 (1972)
Joy, K.W., Hageman, R.H.: The purification and properties of
nitritereductase from higher plants and its dependence on ferre-
doxin. Biochem. J. 100, 263-273 (1966)
Kessler, E., Czygan, F.C. : The effect of iron supply on the activity
reduktion, Atmung und Photosynthese von Grfinalgen. Planta
(Berl.) 55, 512--524 (1960)
Kessler, E<, Czygan, F.C. : The effect of iron supply on the activity
of nitrate and nitrite reduction in green algae. Arch. Mikrobiol.
60, 282-284 (1968)
290 R. Tischner: Nitrat- und Nitritreduktase in vollsynchronen Chlorella-Kulturen
Klepper, L., Flesher, D., Hageman, R.H. : Generation of reduced
NAD for nitrate reduction in green leaves. Plant Physiol. 48,
580-590 (1871)
Knypl, J.S., Ferguson, A.R.: pH-dependent induction of nitrate
reductase in Cucumber cotyledons by citric acid and other com-
pounds. Z. f. Pflanzenphysiol. 74, 434-439 (1975)
Liu, M.S., Hellebust, J,A. : Utilization of aminoacids as nitrogen
sources, and their effects on nitrate reductase in the marine
diatom Cyclotella cryptica. Can. J. Bot. 20, 1119-1125 (1974)
Lorenzen, H. : Aspects of synchronous culturing of ChIorella. Phy-
cos. Vol. 7, 50-57 (1968)
Lorenzen, H., Schleiff, J. : Zur Bedeutung der kiirzest m6glichen
Generationsdauer in Synchronkulturen yon Chlorella. Flora (A)
156, 673-683 (1966)
Losada, M., Paneque, A., Aparicio, P.J., Vega, J.M., Cardenas,
J., Herrera, J.: Inactivation and repression by ammonium of
the nitrate reducing system in Chlorella. Biochem. Biophys.
Res. Commun. 38, 1009-1015 (1970)
Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L., Randall, R.J. : Protein
measurements with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem.
193; 265-275 (1951)
Miflin, B.J. : Nitrite reduction in leaves, studies on isolated chloro-
plasts. Planta (Berl.) 116, 187-196 (1974)
Morris, J. : Nitrogen assimilation and Protein synthesis. In: Algal
physiology and biochemistry. Ed. W.D.P. Stewart. Oxford,
London, Edinburgh, Melbourne: Blackwell (1974)
Morris, J., Syrett, P.J. : The development of nitrate reduetase in
Chlorella and its repression by ammonium. Arch. Mikrobiol.
47, 32-41 (1963)
Nelle, R. : Der K/ilteschock bei synchroner Chlorella: Charakteri-
sierung, seine Folgen und die Bedingungen einer Regeneration.
Diss. Grttingen (1976)
Nelle, R., Tischner, R., Harnischfeger, G., Lorenzen, H. : Correla-
tion between pigment systems and photosynthetic activity du-
ring the developmental cycle of Chlorella. Biochem. Physiol.
Pflanzen 167, 463-472 (1975)
Oesterheld, H. : Das Verhalten yon Nitratreduktase und Nitritre-
duktase, Hydrogenase und anderen Enzymen von Ankistrodes-
mus bei N-Mangel. Arch. Mikrobiol. 79, 25-43 (1971)
Oaks, A. : The regulation of nitrate reductase in suspension cultures
of Soybean cells. BBA 372, 122-126 (1974)
Pirson, A., Lorenzen, H., Ruppel, H.G. : Der Lieht-Dunkel-Wech-
sel als synchronisierendes Prinzip. In: Studies on Microalgae
and photosynthetic bacteria. Jap. Soc. Plant Physiol. (ed.), Ta-
miya Festschrift 127-139 (1963)
Sahulka, J., Gandinova, A., Hadacova, V. : Regulation of gluta-
mate dehydrogenase and nitrate reductase levels in excised Pea
roots by exogenously supplied sugar. Z.f. Pflanzenphysiol. 75,
392-404 (1975)
Schrader, L.E., Pitenour, G.L., Eilrich, G.L., Hageman, R.H.:
Some characteristics of nitrate reductase from higher plants.
Plant Physiol. 43, 930-940 (1968)
Senger, H., Bishop, N.J. : Changing in the photosynthetic apparatus
during the synchronous life cycle of Scenedesmus obliquus. In
Progress in photosynthesis research I, 425-434 (1969)
Sluiters-Scholten, C.M.Th. : Effect of Chloramphenicol and Cyclo-
heximide on the Induction of nitratreductase and nitritereduc-
tase in beanleaves. Planta (Berl.) 113, 229-240 (1973)
Smith, F.W., Thompson, J.F. : Regulation of nitratereductase in
Chlorella vulgaris. Plant Physiol. 48, 224-227 (1971)
Steup, M. : f2ber Beziehungen zwischen Kohlenhydrat-, Protein-
und Phosphatstoffwechsel bei Chlamydomonas reinhardii Dan-
geard im blauen und roten Spektralbereich. Diss. Grttingen
(1972)
Thacker, A., Syrett, R.J.: Disappearance of nitrate reductase
activity from Chlamydomonas reinhardii. New Phytol. 71,435 -
441 (1972)
Tischner, R., Lorenzen, H. : Effect of high growth temperature
on cell compounds and enzymes in synchronized Chlorella. New
Botanist 1, 72-88 (1974)
Tischner, R., Lorenzen, H. : Physiologische Auswirkungen yon Hit-
zeschocks auf synchrone Chlorellen im empfindlichsten Ent-
wicklungsstadium. Biochem. Physiol. Pflanzen 168, 233-245
(1975)
Ullrich-Eberins, C.J. : Beziehungen der Aufnahme von Nitrat, Ni-
trit und Phosphat zur photosynthetischen Reduktion von Nitrat
und Nitrit und zum ATPpool bei Ankistrodesmus. Planta (Berl.)
115, 25-36 (1973)
Ullrich, W.R. : Die Nitrat- und Nitrit-abh/ingige photosynthetische
Oz-Entwicklung in N 2 bei Ankistrodesmus braunii. Planta (Berl.)
116, 143-152 (1974)
Eingegangen am 22. Mai; angenommen am 15. Juni 1976