Cours

d'Hémato-cytologie
DUT ABB

3- Frottis sanguins

Auteur : Bruno Flamand, IUT de Dijon

 LE FROTTIS SANGUIN
obtenir sur une lame de verre une couche unicellulaire
d'éléments figurés du sang répartis sur tout le frottis et
fixés dans l'aspect le plus proche de leur état
physiologique
 Appliquer un
mouvement de
Positionner la lame translation horizontale
de façon à prendre rapide en maintenant
la totalité de la la spatule d’un angle
goutte. de 45° environ sans
La laisser se répartir appuyer tout au long
de façon homogène de la lame.
le long du biseau. Sécher par agitation
pour fixer
temporairement les
cellules
Bon frottis: de bonne taille (½ à ¾ de la lame)
  

de bonne densité, goutte étalée en entier, distant

des bords de la lame donc accessible en tout point
à l’observation microscopique

Ce qu’il ne faut pas faire

 Coloration Frottis sanguin: May Grünwald Giemsa
L'action des ions acides et basiques obtenus après dissociation par de
l'eau neutre de deux colorants alcooliques (méthanoliques)
-le May Grünwald (éosine – bleu de méthylène)
-le Giemsa (éosine – azur de méthylène) sur les éléments cellulaires
complémentaires permet d'obtenir quatre affinités :
- trois orthochromatiques
Acidophile: du gris au légèrement rosé
Basophile: violet foncé au noir
Neutrophile: rose-violet
- une métachromatique
Azurophile: rose-rouge
Technique:
Eau neutre :eau dé ionisée (acide) neutralisée par quelques gouttes
d’eau du robinet (basique) en présence d’un indicateur coloré virant aux
alentours de 7,4 (par exemple : le Bleu de Bromothymol).
Plus rapide et suffit parfois eau du robinet ou comprimés eau neutre

•Fixer le frottis par le méthanol en l’immergeant dans le May Grünwald

pur pendant 3 minutes.
•Plonger la lame dans un bain de May Grünwald dilué au ½ en eau
neutre durant une minute.
•Plonger la lame dans un bain de Giemsa dilué au 1/10ième durant 20
minutes (Giemsa lent).
•Rincer doucement la lame à l’eau neutre ou du robinet.
•Essuyer le dessous de la lame. La laisser sécher verticalement.
L’examen du frottis sanguin
• faible grossissement (obj.x40) permet d’apprécier la qualité du
frottis
•Études Cytologiques: obj.x100 à l’immersion.
- observer les éventuelles anomalies morphologiques des
GR: anomalies de forme, de taille, de coloration, la présence
d’inclusions intra-érythrocytaires.
-observer les éventuelles anomalies morphologiques des
plaquettes (taille, forme), la présence éventuelle d’amas
plaquettaire, et confirmer la densité de la numération
plaquettaire.
-Effectuer la Formule Leucocytaire

-penser aussi aux Parasites sanguins intra

éryhthrocytaires (Plasmodium, Babésia) ou extra-érythrocytaires
(Trypanosomes, Microfilaires)
Parcours du frottis sanguin en vue de la réalisation d’une formule leucocytaire
La formule leucocytaire correspond à la distribution des différentes variétés
leucocytaires identifiées le long d’un parcours qui tient compte de la distribution
des globules blancs lors de l’étalement (les granulocytes et les monocytes sont
plus fréquemment rencontrés sur les bords et en bout de frottis). Cette
distribution doit être représentative de la répartition physiologique des
leucocytes.

Identifier ainsi 100 (ou 200) leucocytes minimum et calculer le pourcentage

des différentes variétés
Calculer à l’aide de la numération des leucocytes les valeurs absolues
indispensables à l’interprétation de la formule leucocytaire
Remarques :
•Des leucocytes immatures (ou anormaux) peuvent être identifiés lors du
parcours. Exemple: myéloblastes, promyélocytes, myélocytes,….
ils sont à inclure dans le pourcentage et à introduire dans le % de la formule
leucocytaire.
•Des érythroblastes  (souvent Erythroblastes acidophiles ou
polychromatophiles) peuvent être également rencontrés ; Ils sont à compter au
cours de la formule leucocytaire, mais ne sont pas inclure dans le % de la formule
leucocytaire.
Exemple de FL avec éléments immatures: Polynucléaires Neutrophiles
75%,Lymphocytes 15%,Monocytes 5 %,Promyélocytes 2%, Myélocytes 5%, et
Erythroblastes 5 pour cent GB rencontrés.

Cependant les éryhthroblastes ont été dénombrés lors de la numération

automatisée des GB, comme des cellules nuclées, et il est nécessaire d'effectuer
une correction de cette numération, si %age d’Erythroblaste est très élevé, et
nombre GB faible, afin qu’elle ne corresponde uniquement qu’à celle des
leucocytes.
GB réels =(Num GB automate x100) / (100 + % Erythroblaste)
Atlas d’images cytologiques en Hématologie

http://bioimage.free.fr/
http://www.med.univ-tours.fr/fmc/Pages/hemato.html
http://www.med.univ-angers.fr/discipline/lab_hema/
Formule automatisée:
Les automates réalisent une analyse en flux d'une quantité
beaucoup plus grande de cellules selon différents critères
physiques (diffraction lumineuse avec mesure à différents
angles, conductance de signaux électriques...). L'étude
informatique des éléments obtenus permet dans de nombreux
cas de rendre la formule leucocytaire.
Mais la présence d'anomalies cytologiques érythrocytaires,
leucocytaires et/ou thrombocytaires nécessitera l'analyse
microscopique d'un frottis sanguin coloré
 Présence d’éléments médullaires dans le sang périphérique

Erythroblastes : souvent E. acidophile et E. polychromatophile

A compter au cours
de la FL, mais ne
pas inclure dans le
%
Ex: PN 80%, L 15%,
M 5 %, et
Erythroblastes 5%

Si % Erythroblaste très élevé, et nombre GB faible: correction

de la numération automatisée des GB:
N GB =(Num GB automate x100) / (100 + % Erythroblaste)
 Aspect général :
Globules rouges
taille 7,3 µm
en moyenne,
forme ronde

Noyau :
absent

Cytoplasme :
affinité acidophile, gris
rosé à centre décoloré,
sans granulations
 Aspect général :
Plaquettes
taille 1 à 3 µm plus
grosses sur anticoagulant
forme irrégulière

Noyau :
absent

Cytoplasme :
affinité basophile clair,
granulations fines
indiscernables nombreuses
azurophiles
 Aspect général :
Granulocyte ou polynucléaire
taille 12 à 14 µm
neutrophile (PN)
forme arrondie

Noyau :
taille N/P = 1
deux à six (le plus souvent
deux ou trois lobes)
chromatine dense à
mottes allongées

Cytoplasme :
affinité acidophile clair
granulations très
nombreuses, fines,
irrégulières dispersées et
neutrophiles
 Aspect général :
Granulocyte ou polynucléaire
taille 12 à 14 µm
eosinophile (PE)
forme arrondie

Noyau :
taille N/P = 1
le plus souvent deux ou
trois lobes
chromatine dense à
mottes allongées

Cytoplasme :
affinité acidophile clair
granulations moyennes,
rondes, nombreuses,
parsemant le cytoplasme
 Aspect général :
Granulocyte ou polynucléaire
taille 11 à 13 µm
basophile (PB)
forme arrondie

Noyau :
taille N/P > 1
deux ou quatre lobes
ronds se recouvrant
chromatine dense à
mottes allongées

Cytoplasme :
affinité acidophile clair
granulations peu
nombreuses, recouvrant
partiellement le noyau,
parsemant le cytoplasme,
violet-noir
 Aspect général :
Petit Lymphocyte
taille 9 à 11 µm
forme arrondie

Noyau :
taille N/P >> 1
rond, chromatine dense

Cytoplasme :
mince couronne
périnucléaire, affinité
basophile clair,
sans granulations
 Aspect général :
Grand Lymphocyte
taille 10 à 15 µm
forme arrondie mais
déformable, souvent des
côtés plats
Noyau :
taille N/P >= 1
rond, chromatine légère,
mais d’aspect lisse

Cytoplasme :
affinité basophile clair,
presque transparent,
renforcement basophilie
périphérique
sans granulations ou avec
quelques granulations
azurophiles
Monocyte Aspect général :
taille 18 à 21 µm
forme arrondie mais très
déformable,

Noyau :
taille N/P < 1
forme très variable,
souvent encoché,
chromatine légère et
filamenteuse

Cytoplasme :
affinité basophile clair,
avec granulations
indiscernables azurophiles
mais très nombreuses
donnant un aspect de
cytoplasme gris sale,
vacuolé parfois
 ANOMALIES MORPHOLOGIQUES DES GR
•Anomalies de Taille
Macrocytose

Microcytose

Anisocytose
•Anomalies de forme
Dacryocytes, poires

Ovalocytes

Schizocytes

Sphérocytes Drépanocytes
•Anomalies de coloration

Hypochromie Hématies cibles

Polychromatophilie
•Inclusions
Ponctuations basophiles Corps de Jolly

Faux-ami:
Trophozoïte
de
Plasmodium

Anneau de Cabot
 ANOMALIES MORPHOLOGIQUES DES PLAQUETTES

Plaquette géante Agrégat plaquettaire

Éléments cellulaires médullaires de la lignée granulocytaire
A compter lors de la formule leucocytaire et à inclure dans le %

Métamyélocytes N

Myélocytes N

Promyélocyte N
Myéloblaste
Myéloblaste
Aspect général :
taille  20 à 25 µm
forme arrondie ou ovalaire

Noyau :
taille : N/P >>1 
forme : arrondie (un peu
aplati)
aspect de la
chromatine: légère et
uniforme avec présence de
nucléoles

Cytoplasme :
affinité basophile
avec parfois, quelques
granulations moyennes et
azurophiles
Promyélocyte Aspect général :
neutrophile taille 18 à 22 µm
forme ovalaire

Noyau :
taille : N/P > 1
forme : ovalaire (voire
aplatie même encochée)
aspect de la
chromatine : légère et
nucléolée avec possibilité
de quelques masses de
condensation
Cytoplasme :
affinité basophile soutenue
présence de nombreuses
granulations moyennes et
azurophiles (quelques
granulations spécifiques
possibles)
 Myélocyte Aspect général :
neutrophile taille 15 à 18 µm
forme ronde à ovalaire

Noyau :
taille : N/P = 1
forme : ronde, ovalaire
aplatie, même encochée
aspect de la
chromatine : assez dense
avec masses de
condensation

Cytoplasme :
affinité acidophile ou basophile
très clair
présence de nombreuses
granulations spécifiques
neutrophiles de taille
irrégulière, et encore quelques
granulations azurophiles
Métamyélocyte Aspect général :
neutrophile taille 13 à 15 µm
forme arrondie à ovalaire

Noyau :
taille : N/P = 1
forme : incurvé ou droit,
sans rétrécissement, pas
de lobulation
aspect de la chromatine :
dense avec masses de
condensation

Cytoplasme :
affinité acidophile avec
présence de nombreuses
granulations spécifiques
neutrophiles de taille
irrégulières
 Lymphocyte
Plasmocyte hyperbasophile

A inclure dans le % de la FL

Lymphocytes hyperbasophiles
apparaissent dans des infections
virales ou parasitaires :
syndromes mononucléosiques,
souvent l’hyperlymphocytose est
Lymphocyte
polymorphe
hyperbasophile