Bakterienidentifizierung

Aufgabenstellung: Die Identifizierung zweier Bakterienproben mittels einer selbst zusammengestellten bunten Reihe aus originaler Literatur, welche aus 6 verschiedenen Reaktionen besteht. Prinzip: Autoklavieren, Steriltechnik Aufgrund von Stoffwechsel positiven und negativen Tests kann mit dem Vergleich einer Referenztabelle dieser Tests und eines schon bekannten Bakteriums eine durchschnittliche Identifizierung erreicht werden. Material: Medium Katalase-Test, KOH-Test, Aminopeptidasetest: Flssiges LB-Medium
Substanz Trypton Hefeexktra kt NaCl 1mol/L NaOH EW/ fr 100mL 1,0g/100 mL 0,5g/100 mL 0,5g/100 mL 0,1 mL Chargennr. 42682614 K40340204 932 Hersteller Roth Merck -

Medium Gelatineverflssigungs-Test: Modifiziertes Fleischextrakt Medium( Merk-Katalog)

Substanz Pepton Fleischextr akt NaCl 1mol/L NaOH Gelatine EW/ fr 100mL 1,0g/100 mL 0,5g/100 mL 0,5g/100 mL 0,1 mL 12g (12%) Chargennr. 42682614 737 V478179 K40340204 932 8614326 Hersteller Roth Merck Merck Merck

Medium fr Schwefelwasserstoff-/ Indolnachweis:

Substanz SIM Nhrboden EW/ fr 100mL 3g/100mL Chargennr. VM38777050 8 Hersteller Merck

Eisenngel(Schwefelwasserstoffnachweis), Aminopeptidase Teststreifen, KOH, H2O2 (3%ig), Teststamm 1 und 2, Bunsenbrenner, Objekttrger, Eppis, 70%iger Ethanol, Schttelbrutschrank 37C, Kolbenhubpipette 1000L, sterile Spitzen, Vortexer, Seite 1 von 3

sterile Eprouvetten, 2 Platten mit LB-Agar, 3x 100mL Erlenmeyerkolben, SIM Nhrboden= Pepton aus Fleisch,Pepton aus Casein, Ammoniumeisen(III)citrat, Natriumdisulfit

Durchfhrung: Es wurden die Medien fr den Katalesetest (KOH- und Aminopeptidasetest), den Gelatineverflssigungstest, den Schwefelwasserstoffnachweis und den Indolnachweis hergestellt(siehe oben). Die Menge jedes Mediums war 50mL, welche alle in je einem 100mL Erlenmeyerkolben zubereitet und in Eprouvetten abgefllt wurden (jeweils eine fr Stamm1, eine fr Stamm2 und eine fr die Negativkontrolle). In die Eprouvetten mit dem Medium des Schwefelwasserstoffnachweises wurde je ein Eisennagel hineingegeben. Anschlieend wurde alles autoklaviert. Am Mi 13.4.11 erhielten wir die Stmme von Hr. Prof. Neumann, wurden ausgestrichen und bei 37C 1Tag lang bebrtet. Am Do den 14.4.11 wurden die Medien fr den Katalasetest, Schwefelwasserstoffnachweis, den Gelatineverflssigungstest und den Indolnachweis mit beiden Teststmmen beimpft und einen Tag im Schttelbrutschrank bei 37C inkubiert. Der Katalase-Test wurde durchgefhrt, indem die beiden (o/n) Kulturen der beiden Teststmme(LB Medium) auf einen Objekttrger pipettiert und mit H2O2 versetzt wurden. Da Blschen zu sehen waren (H2 und O2 steigen auf) war dieser Test bei beiden Stmmen positiv. Beide Teststmme wurden einem Aminopeptidase-Test unterzogen. Dabei wurden die beiden (o/n) Kulturen in je ein Eppendorfgef pipettiert, abzetrifugiert und das pellet in sterilem H2O gelst und mit einem Teststreifen fr 20 min in den Schttelbrutschrank gegeben. gelbe frbung bei beiden Stmmen =positiver Nachweis Alle Ergebnisse der einzelnen Tests wurden im Labor mit einer Unterschrift im Laborjournal besttigt. Auswertung: Schwefelwasserstoffnachweis: Positiv: Schwarzfrbung Cystein von CysteinDesulfurase reduziert Entstandene H2S reagiert mit Eisen(Nagel) Bildung von Eisensulfid schwarze Frbung Negativ: keine Schwarzfrbung Katalasenachweis: Positiv: Bakterium besitzt Katalase Enzym spaltet H2O in H2 und O2 Blschenbildung Negativ: Bakterium besitzt kein Katalase Enzym keine Blschenbildung Gelatineverflssigungsnachweis: Besitzen Bakterien Gelatinasen knnen diese Gelatine zersetzen. Positiv: Sind Gelatinasen vorhanden wird die zuvor erstarrte Gelatine wieder flssig Negativ: Sind keine Gelatinasen vorhanden, bleibt diese fest. Indolnachweis: Positiv: Versetzt man die Bakteriensuspension mit Indol, so kommt es zur Bildung einer roten Phase, oberhalb der Suspension. Negativ: wenn keine rote Frbung auftritt.

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KOH-Nachweis: Durch Zugabe von KOH zur Bakterien Suspension, wird die DNA freigestetzt, diese zieht Fden. positiv (=gram negativ) Negativ: Kein Faden (=gram positiv)

Aminopeptidase-Nachweis: Man taucht einen Teststreifen in die Bakteriensuspension(Eppi) und inkubiert diese ca. 20 min. Bei Gelbfrbung des Streifens Positiv. Keine gelb Frbung Negativ Ergebnisse:

Stam m A(1) B(2) negati v

Indol + -

Katalas e + + -

H2S -

Gelatin e -

KOH + + -

Aminopeptida se + + -

Identifizierung: Stamm Ind ol Fr Stamm 1 Salmonell a (paratypi A, thypi) oder Enterobac ter (aerogene s) Fr Stamm 2 E. Coli

Katalas e +

H2S

Gelatin e -

KOH Aminopeptida se + +

Diskussion Stamm 1 bildete Blasen im SIM- Nhrboden. Die ON-Kulturen beider Stmme stanken nach Fkalien.

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Katalase- und KOH-Test wurden zuerst mit nur einem Tropfen on- Kultur auf einem Objekttrger gemacht (negativer NW), nach positiver Aminopeptitasetest wurden diese Tests mit den Pellets der zentrifugierten o/n Kulturen in einem Eppi wiederholt positiver Test Literatur Mikrobiologisches Grundpraktikum: Ein Farbatlas Verlag: Pearson Studium 2006 von Steve K. Alexander und Dennis Strete bersetzt von Hans W. Kothe und Erika Kothe Bergeys Manual of Determine Bacteriology 9th Edition von John G. Holt, Noel R. Krieg, Peter H. A. Sneath, James T. Staley, Stanley T. Williams

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