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Strkeverzuckerung
Material und Methoden:
Material:
Lsungen:
Strkesuspension: 15g native Kartoffelstrke ad 50 ml 20mmol/L
Triethanolamin- Acetat- Puffer/ 5mmol/L Ca Cl2 pH 7,0
Benedict-Reagenz: 34,6 g Na-Citrat und 18 g wasserfreies
Natriumcarbonat unter Erwrmung in 160 ml H 2 O lsen und filtrieren;
3,5 g Kupfersulfat in 30 ml H 2 O lsen, alles langsam unter Rhren
mischen, auf 200 ml auffllen.
Iod/KI Lsung: 0,1 g Iod , 0,2 g KI ad 30 ml
H2 O
-Amylase
Amyloglucosidase
Methoden:
Strkeverkleisterung:
2,5 ml Strkesuspension wurden in ein Reagenzglas pipettiert. Danach
wurden dann 2 Tropfen je 50 l Iod/KI Lsung dazugegeben und in ein 95
Celsius Wasserbad gestellt.
Es fand eine berprfung der Viskositt statt und nach 15 Minuten wurde
die Lsung abgekhlt und wieder wurde ein Tropfen Iod/KI Lsung
hineinpipettiert.
Ergebnisse:
Strkeverkleisterung:
Nach Zugabe der Iod/KI Lsung war die Strkesuspension visks und
nahm eine blaue Farbe an. Whrend der Inkubation verblasste diese
wieder und die Lsung wurde noch viskser und gelartiger.
Nachdem die Lsung abgekhlt war, blieb ein fast festes durchsichtiges
Gel ber, wo in der Mitte eine weiliche Kugel zu sehen war.
Zum Schluss war nach erneuter Zugabe der Iod/KI Lsung eine bluliche
Frbung im
Zeit
10 Minuten
20 Minuten
30 Minuten
oberen
Bereich des
Iod Probe
Dunkle lila
Dunkle lila
Gels zu
Farbe
Farbe
sehen.
Leerwert:
Leerwert:
Leerwert:
hellgelb
hellgelb
hellgelb
Reduktions
Probe
Blau grne
Farbe, trb
Rotes Pellet
Leerwert:
trkis
Braune
Farbe,
Trb,
Rotes Pellet
Leerwert:
trkis
Strkeverflssigung:
Unter 3 mintigem Rhren im 95 C Wasserbad bei vorheriger Zugabe von
-Amylase
war festzustellen, dass die Strkelsung dickflssiger war als zuvor.
Die 5 mintigen Viskosittsmessungen ergaben, dass die Strkelsung
schon nach 5 Minuten flssig war. Nach 20 Minuten waren auerdem
Schlieren in der Lsung zu erkennen und die Lsung war leicht klebrig.
Zur Iodprobe und der Reduktionsprobe die alle 10 Minuten durchgefhrt
wurden, wurde eine Tabelle erstellt.
Tabelle 1: Beobachtungen der Iod- und Reduktionsprobe der Strkelsung. (Die
Reduktionsprobe wurde
zuerst 5 Minuten inkubiert.)
Strkezuckerung:
Nach der Inkubation im 95 C Wasserbad wurde die Strkelsung mit NaAcetat-Puffer und Amyloglucosidase versetzt und fr eine halbe Stunde im
60 C Wasserbad inkubiert. Je nach 15 und nach 30 Minuten wurde wieder
eine Iod- und Reduktionsprobe durchgefhrt.
Zeit
Iodprobe
15 Minuten
Rotbraune Farbe
Trb
Leerwert: hellgelb
Orange rot
Reduktion Trb,
s
Roter
probe
Niederschlag
Leerwert: trkis
30 Minuten
Rotbraune Farbe
Trb
Leerwert: hellgelb
Orange rot
Trb,
Roter Niederschlag
Leerwert: trkis
Diskussion:
Bei der enzymatischen Analyse von Strke fiel bei der Strkeverkleisterung
auf, dass durch das Erhitzen einer Strkelsung diese sehr visks wurde
oder auch verkleisterte.
Dies ist abhngig von dem Glucan Amylopectin, welches bei steigender
Temperatur mehr Wasser aufnehmen kann. Beim Abkhlen der Lsung
kann Amylopectin nicht in seine Ausgangsstruktur zurckkehren und die
Verkleisterung bleibt erhalten.
Die Blaufrbung durch die Iod/KI Lsung wird vom Zusammenspiel des
Iods und einem weiteren Glucan der Strke Amylose hervorgerrufen.
Hierbei wird das Iod von der Amylose in seine schraubenfrmige Struktur
aufgenommen und die Farbe der Lsung ndert sich. Durch das Erhitzen
wird allerdings die Struktur der Amylose verndert, was durch das
Entfrben der Lsung zu beobachten war. Khlt die Lsung nun wieder ab
geht die Amylose wieder in ihre Ursprungsform und das Iod wird wieder in
die Struktur mit aufgenommen.
Betrachtet man nun die Strkeverflssigung ist festzustellen, dass diese
vom Enzym -Amylase abhngig ist. Diese Endoglucanase spaltet die 1,4-Verknpfungen der Amylose und es entstehen Dextrine unter
Verflssigung der Strke. Somit kann die Lsung auch nicht mehr blau
gefrbt werden, da die Struktur der Amylose zerstrt wurde.
Cu
Cu
reduziert, welches die rote Farbe hervorruft.
Um nun die maximal mgliche Glucosemenge zu berechnen, die aus der
enzymatischen Spaltung von Strke entsteht, muss man die
Packungsangaben und die Molmassen von Glucose und Strke kennen.
Die Packung, die wir fr die Strkebestimmung genommen haben, enthielt
300,4 g/L Kohlenhydrate von denen pro 100 g Kohlenhydrate je 83 g
Strke enthalten waren. Bei einer molaren Masse von Strke bei 162
g/mol und Glucose bei 180 g/mol kann man nun die Glucosemenge fr 1
Liter berechnen.
g/ L180
Glucose max=0,83300,4
g
mol
g
162
mol
=277,0355 g / L