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Dezember 2011 Biologie GK - OHG

Protokoll zur Proteinbiosynthese anhand der Haarbalgzelle

Joseph Choi

18.Dezember 2011 Biologie GK - OHG

A. Einleitung:
Die Proteinbiosynthese ist neben der Energiegewinnung einer der wichtigsten Prozesse im menschlichen Krper berhaupt.. Bisher haben wir gelernt, wie eine DNA aufgebaut ist, wie sie repliziert wird und was fr eine wichtige Funktion im Menschen und bei anderen Lebewesen hat. Anhand des Protokolls werde ich untersuchen, wie der Bauplan, also das Gen (Genotyp), sich phnotypisch zeigt. Sprich wie kann die genetische Information, entschlsselt werden werden und Teile des menschlichen Krpers ausbilden? Und wo genau laufen die Vorgnge ab? Am Beispiel der Haarbalgzelle wird erklrt, wie sich schwarze Haare bilden knnen und somit lsst sich die Proteinbiosynthese veranschaulichen.

B. Erklrung

1. Das Melaninsynthetase-Gen im Erbgut des Zellkerns

Die Erbinformation, in Form von DNA befindet sich in dem Zellkern einer Haarbalgzelle, die sich unter der Kopfhaut befindet, also dort wo das Haar gebildet wird. Relevant fr die Ausbildung des Melaninsynthetase-Gens ist jedoch nur dessen Gen, also nicht die komplette Dann, sondern lediglich ein Abschnitt, das die Bauanleitung fr das Enzym ist. Da dieser Abschnitt erst kopiert wird, muss man den Aufbau des Gens genauer unter die Lupe nehmen. Zuerst beginnt das Gen mit einer Folge von Basen, die regulative Sequenz genannt wird. Die RNA-Polymerase, welches ein Enzym ist, das die Synthese der RNA bei der Transkription der DNA katalysiert (in Punkt 2. folgt genaueres), orientiert sich an diese Sequenz am codogenen Strang, also des 3 5 Einzelstrangs. Dort binden sich Proteine (Enhancer, deu: Transkriptionsverstrker), de RNA-Polymerase die den Vorgang der Transkription beschleunigt, sodass sie schneller arbeiten kann. Danach folgen 20 Basen ohne Information, deren Funktion man noch nicht bewusst ist. Aber angesichts dessen, dass die Natur nicht verschwenderisch ist, sondern mglichst effizient, kann man die Vermutung aufstellen, dass diese Basensequenz eine bestimmte Rolle bernimmt und Wissenschaftler versuchen diese Rolle herauszufinden. Nun folgt die sogenannte TATA-Box, die ihren Namen ihrer Basenabfolge verdankt, da sie nur aus abwechselnd Thymin und Adenin besteht. Somit formt sie eine markante Struktur und dient ebenfalls als Bindungsstelle, so wie die regulative Sequenz. Diese beiden Sequenzen werden Promotor genannt, da sie zum einen die Andockstelle fr die RNA-Polymerase ist (Pro (lat.) : vor der eigentlichen Bauanleitung) und zum anderen wie ein Motor, die RNA- Polymerase antreibt und beschleunigt. Es folgt der eigentliche codierende Bereich, denn durch das Basentriplet TAC, das das sogenannte Start-Codon bildet, wird signalisiert, dass die RNA-

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Polymerase die DNA in RNA umschreiben soll, dabei ist es essentiell, dass das Start-Codon mit bersetzt wird. Daraufhin kommt eine Abfolge von Basen, das die eigentliche Bauanleitung fr das Protein ist (codierende Bereich). Am Ende des Bereiches hngt immer ein Stopp Codon (Nonsens Codon), das das Ende der Transkription bewirkt, denn fr die drei mglichen Triplets (ATT,ACT und ATC), gibt es keine komplementre t- RNA, also auch keine Aminosure. Die RNA-Polymerase lst sich ab und das Gen wurde vollkommen in m-RNA synthetisiert. Zuletzt folgt erneut die Basensequenz ohne Information. Wird jedoch zu viel oder genug vom Endprodukt, in diesem Fall Melanin, produziert, dann setzt sich das Melanin an die regulative Sequenz fr den Repressor und bildet eine Schleife zur TATA Box. Dann ist das Gen nicht mehr aktiv, denn die RNA-Polymerase ist nicht mehr fhig den Strang zu synthetisieren und somit entsteht auch kein Melanin mehr. Diese hausgemachte Regulation nennt man Endprodukthemmung.

2. Transkription

Die Transkription (lat. umschreiben) luft im Zellkern ab und ist der Vorgang der Synthese der RNA anhand der DNA. Produkte sind jeweils die mRNA, tRNA und rRNA, wir betrachten aber zuerst die mRNA. Sie ist die exakte Kopie des DNA- Einzelstrangs auf dem sich das Gen befindet. Der Katalysator RNA-Polymerase klammert sich mithilfe von Proteinen (zusammen: Initiationskomplex) um den codogenen Strang und die Promotoren dienen als Bindestellen. Beim Start-Codon lst die RNA-Polymerase zunchst die Wasserstoffbrcken auf und entwindet die DNA, sodass sie sich blasenartig ffnet (Initiation). Nun kann die Basenfolge des Gens komplementr ergnzt werden (Elongation). Dabei ist zu beachten, dass mRNA als synthetisierter Strang produziert wird. Sie ist im Gegensatz zur DNA meistens einstrngig, statt Thymin, die es in der RNA nicht gibt, wird Uridin eingebaut (komplementr zu Adenin), das Zuckermolekl ist Ribose anstatt der Desoxyribose, auerdem ist sie auch viel krzer, da sie keine komplette Kopie ist. Die Basen fr die RNA heien Adenosin, Uridin, Cytidin und Guanosin. Trifft die RNA-Polymerase auf das Stopp-Codon in der Terminator-Region lst sie sich von der DNA (Termination). Ergebnis ist ein komplettes mRNA Trankskript des Gens. Diese pr-mRNA muss erst modifiziert werden und an ihrem 5Ende bildet sich eine Kappe, am 3Ende ein Poly A-Stck, sodass sie vor enzymatischem Abbau geschtzt ist. Dann erfolgt das Splicing der mRNA, da das Gen grundstzlich nicht in einem Stck vorliegt, da zwischen der codierenden DNA-Passagen (Extrons) nicht codierende und irrelevante Passagen vorhanden sind (Introns). Die mRNA besteht aus beiden Sequenzen, sodass durch Enzyme die Introns ausgeschnitten werden. Diesen letztendlich nicht vollstndig erforschten Vorgang nennt man Prozessierung. Die mRNA beinhaltet nun den Produktionsplan der DNA fr die Melaninsynthetase. Am Beispiel auf dem Blatt hat man die Basenfolge von: TAC GCT TAA GGC ATA ATT. 3

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Umgeschrieben in RNA wrde es heien: AUG (Start) CGA AUU CCG UAU UAA (Stopp) Natrlich ist diese Abfolge nur exemplarisch und nicht das gesamte Gen fr die Melaninsynthetase.

3. Translation

Die Translation (lat. translatio) beschreibt den Vorgang, in der die Erbinformation in ein fertiges Protein bersetzt wird. Die transportable mRNA verlsst den Zellkern durch Transportproteine, die die mRNA durch die Kernporen schleust. Dort trifft sie auf das raue Endoplasmatische Retikulum, das sich am Zellkern befindet. Die mRNA gelangt in ein Ribosom, aus dem Nucleolus, das aus 50% rRNA besteht (ribosomaler RNA) und zu 50% aus Proteinen. Man nennt sie auch die Proteinfabrik der Zelle ist und sie besteht das aus 2 Untereinheiten: Die groe und kleine Untereinheit. Die Untereinheiten verfgen ber drei Regionen, an denen die tRNAs (transfer RNA) gebunden und Aminosuren zu Proteinen verknpft werden. Sie heien E (Ex: Ausgangspunkt), P (Proteinbildung) und A (Aminosure). Diese EPA-Stelle ist die Bindungsstelle fr die tRNA. Wenn sich die Untereinheiten um die mRNA zusammenklappen, so ist auch die EPA-Stelle zusammengefgt. Es gibt 20 verschiedene Aminosuren, die ein Protein bilden knnen. Wrde jedoch 1 Base auch nur fr 1 Aminosure stehen, gbe es nur 4 Aminosuren. Wenn 2 Basen 1 Aminosure bildet gbe es immer noch nicht genug, nmlich nur 16 Mglichkeiten. Bildet sich jedoch ein Triplet aus 3 Basen, das fr eine Aminosure steht dann kann es 4 hoch 3 Aminosuren geben, also 64 Aminosuren, was genug ist um ein Protein zu bilden. Der genetische Code liegt also in der Abfolge unterschiedlicher Basentriplets und jedes Triplet steht fr eine Aminosure. Um die Aminosure den Triplets zuzuordnen ist die tRNA notwendig, was hnlich wie ein Transportmolekl arbeitet. Ihre Sekundrform hnelt einer Kleeblattform und in der Tertirstruktur, liegt sie als Hakenform dar und besteht meistens aus 73 Nukleotiden. Die Form entsteht daraus, dass sich Wasserstoffbrcken innerhalb des Stranges bilden aufgrund der konjugierenden Basen. Am unteren Ende ist die Anticodon-Schleife an der die komplementren Basen zur mRNA vorhanden sind (Anticodon). Am oberen Bereich ist der Aminosuren-Stamm an der die korrespondierende Aminosure (es gibt insgesamt 20 wichtige) gebunden wird, wobei die beiden anderen Schleifen D und T nur dazu da sind, um sich an das Ribosom anzuheften. Die Aminosure gert in ein Enzym namens Aminoacyl-tRNA-Synthetase und wird unter ATP Verbrauch gebunden. Die tRNA lagert sich auch an das Enzym an und ist nun beladen. Danach dockt das Anti-Codon nach dem Schlssel-Schloss-Prinzip an das komplementre Triplet an, wobei die Anticodon-Schleife zum Abtasten der mRNA dient. Sie ist also Dolmetscher und Transporteur, denn sie bersetzen die Sprache der Basensequenz in die Sprache der Proteine. Whrend der bindet die sogenannte Initiator-t-RNA, mit dem f-Met Aminosure an das Start-Codon AUG. Das f ist insofern wichtig, da Ende der Aminosure formyliertes Methionin steht, welches vorgibt, dass die Peptidbindung nur an die 4

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Carboxylgruppe binden kann. Somit ist die Anordnung fr dich spteren Aminosuren festgelegt. Die Carboxylgruppe steht immer vorne. Dieser Vorgang lief in der A-Site ab. Nun folg die Elongation, bei der das Ribosom, entlang der mRNA, eine Stelle nach rechts wandert. Die nchste, mit Aminosure, beladene tRNA dockt mit dem Anti- Codon an das passende Codon, der mRNA, an der A-Site an. In der P-Site wird die Aminosure von der tRNA getrennt und an die nchste angelieferte Aminosure geknpft. An der E-Site verlsst die unbeladene tRNA das Ribosom um sich neu zu beladen. Diese Kette wird immer lnger und hrt auf zu wachsen wenn das Ribosom das Stopp Codon erreicht (Termination). Hier dockt keine tRNA mehr an, sondern der Release-Faktor. Der ganze Translationskomplex zerfllt und die Translation ist beendet und das Produkt in Form von einer langen Aminosurensequenz ist nun die Melaninsynthetase in ihrer Primrstruktur. Um effizient Proteine herzustellen knnen sogar mehrere Ribosomen hintereinander, die mRNA in das Protein transkribieren (Polysomen). Nach der Transkription wird die mRNA von der Exo-Nuclease abgebaut, sodass sie nicht mehr brauchbar ist. Zuletzt wird das Protein noch modifiziert und das f-Methionin meistens entfernt. Da meistens die letzte Base nicht immer ausschlaggebend fr die Aminosure ist, wurde das Risiko vermindert, dass eine Fehltranslation der letzten Base auch eine falsche Aminosure und somit ein falsches Protein zur Folge hat. Die mRNA, des Beispiels: AUG (Start) CGA AUU CCG UAU UAA (Stopp) wird in die Aminosuren (immer bei mRNA ablesen!) : Methionin Arginin Isoleucin Prolin Tyrosin Stopp-Codon translatiert und aus dem Gen entsteht diese Aminosurensequenz.

4. Dictyosom
Das Protein in seiner Primrstruktur wandert nun vom Ribosom in das Dictyosom (Golgi-Apparat), welches ein Organell ist, das aus mehreren Hohlrumen besteht, die durch Zellmembranen umschlossen werden (Zisternen). Die Seite, die dem rauen ER zugewandt ist besitzt eine Polaritt, man nennt sie die konvexe cis- Seite, sodass man vermuten kann, dass das Protein durch Anziehung oder hnlichem in das Dictyosom gelangt. Einmal angekommen wird die Primrstruktur, also eine Aneinanderreihung von Aminosuren, in die Tertirstruktur gebracht, die Polypeptidkette wird also in eine rumliche Anordnung gebracht, durch zwischenmolekularer Krfte, wie Wasserstoffbrcken oder Van-der-Waals Krfte. Da die Melaninsynthetase ein komplexeres Protein ist, bentigt es dabei die Hilfe von den sogenannten Chaperons. Das sind Enzyme, die die Entfaltung der Primr- in die Tertirstruktur ermglicht und beschleunigt. Nun ist die Melaninsynthetase vollkommen und kann nun aus 2 Moleklen Tyrosin, das aus der Nahrung gewonnen wird und fr viele Zwecke genutzt wird, 1 Molekl Melanin umformen, da es ein Enzym mit solcher Funktion ist. Aus der, von dem Zellplasma abgewandten trans-Seite, wird eine Golgi-Vesikel mit diesen Melanin abgeschnrt. 5

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Da dieses Blschen mit vielen Pigmenten gefllt ist erscheint sie schwarz, man nennt sie Melanosomen. Es gelangt in die benachbarte Tochterzelle, die verhornende Haarbildungszelle, die durch Mitose entstanden ist, also durch einfach Replikation. Nach diesem Stofftransport befindet sich die schwarze Farbe in der Haarbildungszelle. Sie bildet Membranenstapel in denen die Farbpigmente eingelagert werden. Je mehr eingelagert wird, desto dunkler ist nachher das Haar. In diesem Fall wird das Haar schwarz, das liegt daran, dass das Gen sehr gut funktioniert, aufgrund des gut funktionierenden Enhancer. In vielen Fllen wird die Haarfarbe vererbt, doch das ist wiederum eine andere Geschichte.

5. Strungen und Anpassung

Zuerst kann man erkennen, dass die Haarfarbe den Umwelteinflssen unterliegt, zum Beispiel der Sonneneinstrahlung. Verschiedene Haarfarben knnen gebildet werden, indem man Eumelanin (Schwarz-Braun-Pigment) und das Phomelanin (Rot-Gold Pigment) in ein bestimmtes Mischverhltnis setzt. Dabei ist das Eumelanin grsser und von der Struktur her strker, sodass schwarze Haare vom Umfang her dicker ist. Blonde Menschen haben jedoch ein weniger gut funktionierenden Enahncer oder ein guter Repressor, sodass nicht viel Melanin produziert wird und das Haar heller wird. Das Phnomen des Ergrauens hat ihren Ursprung, dass mit dem Alter zunehmend pigmentlose Haare gebildet werden (graue Haare gibt es nicht). Das liegt daran dass der alternde Krper nicht mehr genug Tyrosin produziert, welches das Baustein fr das Melanin ist. Die Vesikel bestehen also nur aus Luft und enthalten keine Farbe (Hypopigmentierung). Bei der knstlichen Haarfrbung werden durch Chemikalien die Schuppen der Haare aufgerichtet, zum Beispiel mit Ammoniak. Danach geben Nuanceure dem Haar eine farbliche nderung. Der Albinismus ist eine Strung der Proteinbiosynthese des Melanins, worauf der Krper berhaupt kein Melanin mehr produziert. Das kann daran liegen, dass einer der Enzyme nicht funktioniert, die notwendig fr die Herstellung von Melanin ist, wie zum Beispiel die Melaninsynthetase. Aufgrund einer Mutation des Erbguts, also des Gens fr die Melaninsynthetase, ist die Bauanleitung fehlerhaft und somit entsteht berhaupt keine Melaninsynthetase.

6. Anmerkung
Manchmal faellt es mir schwer die abstrakte, nicht sichbare Welt, der Biologie zu verstehen. Dieses Thema fand ich jedoch interessant, da man nicht nur gelernt hat, wie ein Protein von einer Bauanleitung entsteht, sondern wie auch die Haarfarbe entsteht und warum man mit dem Alter grau wird, es war also auch ein Bezug zur visuellen Welt vorhanden.